药用真菌桑黄的液体发酵培养基的配方优化筛选研究_傅海庆
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养 一、菌种冻存液的制备 含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。 二、培养基制备 LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4） 液体培养基 胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 水 1000ml pH 7.4 固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂 三、平板的制备 1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。 2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。 5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。 四、接种大肠杆菌 1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。 3）因实验一般都要求挑取单菌落，故涂平板适应考虑冻存液内细菌数量，若菌量过大应适当稀释。一般方法一获得单菌落的可能性比较大。涂平板应在酒
真菌培养基
真菌培养基 一、沙保罗琼脂培养基 [用途] 供真菌及酵母样真菌的分离培养用。 [配法] 麦芽糖40g,蛋白胨10g,琼脂20g，蒸馏水1L。 将上述成分溶于水，加热溶解，调pH至6.0±0.2，分装三角瓶或试管中，118℃灭菌15mi n，倾注平板或置斜面，无菌试验后备用。 [用法] 将标本接种培养基，如系血液标本，则采取1～2ml，与冷却至45℃左右沙保琼脂混合，倾注接种平板。分别置35℃和25℃恒温箱内同时培养。35℃培养48h,25℃需连续培养5天,逐日观察结果。发现真菌及酵母样可疑菌落，转种沙保菌斜面，获得纯培养后进行鉴定。 [质量控制] 白色念珠菌和新型隐球菌生长良好。 注： ⑴本培养基如不加入琼脂，即为沙保罗液体培养基，供真菌及念珠菌的增菌培养用。 ⑵增加氯霉素0.05～0.125mg/ml或放线菌酮0.5mg/ml，可抑制细菌和污染的霉菌及隐球菌生长。此二种药均耐热，可直接加入培养基内高压灭菌。 ⑶添加酵母浸膏5mg/ml，可促进皮肤癣菌生长。增加维生素B 0.1mg/ml，可促进紫色癣菌和断发癣菌生长。 ⑷将麦芽糖减少到20g/L，为沙保罗20g/L麦芽糖琼脂培养基，可供诱导真菌产生孢子用。 ⑸该培养基呈酸性，应提高20%的琼脂用量。 二、玉米粉琼脂培养基 [用途]
鉴定酵母样真菌用。白色念珠菌在该培养基上25℃24h培养可长出假菌丝，顶端有典型的厚壁孢子，可与其它念珠菌鉴别。 [配法] 玉米粉4g，琼脂粉8g，蒸馏水1L （pH6.0±0.2）。 将细米粉加水浸泡数分钟，扎紧瓶口，浸入60℃水浴4h，取出后用沙布过滤，除去粗渣，补足水分。无须调整pH。加入琼脂，煮沸溶解，有沉淀物再过滤1次，分装试管，121℃灭菌15min备用。 用玻璃片法点种后，置平皿内，保持一定湿度，置23～26℃下培养24～48h。取出玻片培养物，用高倍镜观察真假菌丝和有无厚壁孢子。 [质量控制] 白色念珠菌（ATCC 26790）厚膜孢子阳性；新型隐球菌（ATCC 9763）厚膜孢子阴性。注： ⑴玉米粉可用糯米粉或可溶性淀粉代替,效果相同。 ⑵该培养基加入10ml/L Tween-80，制成玉米粉Tween-80琼脂，用途相同，效果更好。
细菌真菌放线菌培养基配方
。 细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的一． 培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。 肉膏蛋白胨培养基 1.药品比例： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL， PH7.4～7.6 2.实验器材： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡
萄糖、孟加拉红、链霉素、 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO、NaCl、K HPO·3HO、MgSO·7HO、222434 FeSO·7HO、4.5mL 无菌水6 管，10%酚液，49.5mL 无菌水( 带玻璃珠)124 瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3.配置方法 （1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 （2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至．
所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中， 再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补 足所失的水分。 （3）调pH：检测培养基的pH，若pH 偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH 范围。若偏碱，则用lmol/L HCl 进行调节。pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 （4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4 层纱 布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般
微生物发酵培养基的优化方法
工业发酵进展
微生物发酵培养基的优化方法 对于微生物的生长及发酵，其培养基成份非常复杂，特别是有关微生物发酵的培养基，各营养物质和生长因子之间的配比，以及它们之间的相互作用是非常微妙的。面对特定的微生物，人们希望找到一种最适合其生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最大发酵产物的目的。发酵培养基的优化在微生物产业化生产中举足轻重，是从实验室到工业生产的必要环节。能否设计出一个好的发酵培养基，是一个发酵产品工业化成功中非常重要的一步。以工业微生物为例，选育或构建一株优良菌株仅仅是一个开始，要使优良菌株的潜力充分发挥出来，还必须优化其发酵过程，以获得较高的产物浓度（便于下游处理），较高的底物转化率（降低原料成本）和较高的生产强度（缩短发酵周期）。设计发酵培养基时还应时刻把工 实验室最常用的优化方法是单次单因子法，这种方法是在假设因素间不存在交互作用的前提下，通过一次改变一个因素的水平而其他因素保持恒定水平，然后逐个因素进行考察的优化方法。但是由于考察的因素间经常存在交互作用，使得该方法并非总能获得最佳的优化条件。另外，当考察的因素较多时，需要太多的实验次数和较长的实验周期[3]。所以现在的培养基优化实验中一般不采用或不单独采用这种方法，而采用多因子试验。 2.多因子试验 多因子试验需要解决的两个问题: (1)哪些因子对响应具有最大(或最小)的效应，哪些因子间具有交互作用。 (2)感兴趣区域的因子组合情况，并对独立变量进行优化。
3.正交实验设计 正交实验设计是安排多因子的一种常用方法，通过合理的实验设计，可用少量的具有代表性的试验来代替全面试验，较快地取得实验结果。正交实验的实质就是选择适当的正交表，合理安排实验的分析实验结果的一种实验方法。具体可以分为下面四步： （1）根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平，列出因子水平表； （2）根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验； （3）根据正交表给出的实验方案，进行实验； （4）对实验结果进行分析，选出较优的“试验”条件以及对结果有显著影响的因子。 正交试验设计注重如何科学合理地安排试验，可同时考虑几种因素，寻找最佳因 次 报道。CastroPML报道用此法设计20种培养基，做24次试验，把gamma干扰素的产量提高了45%。 6.部分因子设计法 部分因子设计法与P1ackett-Burman设计法一样是一种两水平的实验优化方法，能够用比全因子实验次数少得多的实验，从大量影响因子中筛选出重要的因子。根据实验数据拟合出一次多项式，并以此利用最陡爬坡法确定最大响应区域，以便利用响应面法进一步优化。部分因子设计法与Plaekett-Burman设计法相比实验次数稍多，如6因子的26-2部分因子设法需要进行20次实验，而Plackett-Burman设计法只需要7次实验。 7.响应面分析法
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作 一．实验目的 学习并掌握蛹虫草固体一级菌种培养基、液体菌种培养基的制作方法 二．实验原理 蛹虫草（Cordyceps militaris），又名北冬虫夏虫，属于子囊菌门中的大型真菌，自然界中生长于昆虫的蛹体上，为虫生真菌。20世纪30年代，有学者用昆虫蛹接种获得了具有成熟子囊壳的蛹虫草，之后人们用米饭培养基培养除了蛹虫草，用家蚕和柞蚕接种蛹虫草菌种培养出了批量的蛹虫草子实体。 蛹虫草作为一种食药用真菌，其生长所需要的营养物质包括碳源、氮源、维生素、矿物质元素等。其各种培养基质的配置原则都要包含以上几种营养物质。试验表明：适宜蛹虫草的碳源有蔗糖、葡萄糖、麦芽糖等；氮源有牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出物、各种蚕蛹粉以及硝酸盐、铵盐等无机氮；维生素有维生素B1；矿物质盐有磷酸二氢钾、硫酸镁、磷酸氢二钠等。 三．仪器设备与实验材料 1.主要仪器设备：电子台秤，高压蒸汽灭菌锅、电热炉等。 2.实验材料与试剂：玻璃棒，、脱脂棉、纱布、烧杯，漏斗，漏斗架，去皮刀，牛皮纸，量筒，马铃薯，葡萄糖，琼脂，水，蛋白胨，维生素B1，磷酸二氢钾等。 四．实验方法与步骤 1.固体一级培养基的制作 （1）配方一：改良PDA培养基：1000ml培养基包括200g马铃薯、20g葡萄糖、15-20g琼脂，2g蛋白胨、1g磷酸二氢钾，0.5g硫酸镁 操作流程： 马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加琼脂融化→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面 （2）配方二：大米培养基 大米50g，磷酸二氢钾0.05g，葡萄糖10g，维生素B1 0.5g，水50ml 操作方法： 大米用清水浸泡5至6小时，沥水。 将0.05g磷酸二氢钾，10g葡萄糖，维生素B1 溶于50ml水中。 ●将配置好的水溶液和大米共同装入罐头瓶中，瓶口用聚丙烯薄膜扎封。 ?高压灭菌1h 2.液体菌种培养基制作 培养基配方：1000ml液体培养基磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，葡萄糖30g，蛋白胨3g，维生素B1 50mg，马铃薯20g 操作流程： 马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、生素B1 50mg→分装→加棉塞→包扎→灭菌 注：250ml摇瓶中中加入液体培养基120ml 五．实验注意事项。 1.灭菌锅操作时务必先将高压锅内的冷空气排干净。 2.注意避免培养基黏附在试管塞上，造成污染。 六．思考题 1.如果高压锅内冷空气排放不彻底，会对灭菌效果有什么影响，为什么？ 2.为什么摆斜面时试管上面盖纱布可以避免试管里面产生冷凝水？
常见食用菌液体菌种培养基配方大全
常见食用菌液体菌种培养基配方大全 大家对食用菌的培养基配方都非常熟悉，但是却没有将培养基配方统一归纳出来，在此跟大家一起分享常见的10种食用菌液体菌种培养基配方。 (1)平菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (2)金针菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (3)白灵菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (4)香菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (5)杏鲍菇培养基配方
马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (6)鸡腿菇培养基配方 马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (7)黑木耳培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (8)猴头菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸45克，蛋白胨2.5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (9)双孢菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2.0克，酵母膏1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然; (10)灰树花培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖15克，麦麸45克，蛋白胨3.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然;
各种培养基配方
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
芽孢杆菌常用培养基配方
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
146种细菌-真菌-酵母培养基配方
146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇ Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)
第五章 微生物的营养和培养基习题整理
第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%
液体菌种的几种接种方法
液体菌种的几种接种方法 刘益清(415900) 湖南忠食农业有限公司 液体菌种具有方便快捷菌龄短而一致纯度高活力强等优点，越来越受科研工作者和广大食用菌生产者的重视，但如何正确使用液体菌种尚未见系统报道．液体菌种培养好后接种方法直接影响液体菌种优势的发挥，甚至关系到生产的成败．我们在规模应用液体菌种接种中使用过多种接种方法，各有特点，下面就几种成功的方法介绍给大家． 一料表面接种法：这是目前采用比较多的方法,采用这种接种方法时多为瓶装或袋装培养料，上端有一定的空间，如生产金针菇茶薪菇黑木耳杏鲍菇菌包以及生产香菇鸡腿菇平菇等各种菌种，接种时尽量将料表面喷淋上菌种，液种萌发生长快，封面早杂菌污染的机会很小，除破袋外菌袋污染的机会极低，甚至以万袋计算可以达到零污染．这种方法的菌球处于氧气充足的条件下生长很好． 二表面加枪头插入式接种法：因表面接种法接种时菌球易被培养料的过滤作用阻滞在料的上半部分，菌丝生长需要从上往下生长，不能在料内上下同时生长．如果将接种枪枪头做成管状插入料内接种，菌球在料内同时生长，可以缩短发菌时间一半左右，甚至更多．这种方法一要注意料内氧气的供应（不适应扎口袋），二要注意接种环境的无菌要求，避免菌种不萌发或枪头带入杂菌造成污染，成品率在98-100%,比固体菌种袋口接种缩短时间一半以上. 三袋表面扎孔接种法：长菌棒从两端接种不能缩短养菌时间，从袋的表面一面或两面）用枪头扎入３－５cm深并同时接种，扎孔间隔根据需要确定，如香菇每棒扎３－５个孔，这种方法调节接种量和孔间距离可以达到缩短养菌时间和减少杂菌污染的目的，缺点是用种量大，每个孔的接种量不少于１０ml,接种后不封口的应达到每孔２０ml以上．这种方法2007年大量生产香菇出菇菌棒,成品率高达99%以上 四袋壁内喷射接种法：长菌棒还可以采取从两端一则用枪头分别扎入到袋薄膜内，从料与塑料薄膜之间喷射菌种（要求液体压力达到１kg/cm２以上），喷射后用手按压分散菌种，使菌棒一则布满菌种，待菌丝生长１－３cm后可以扎孔增氧．这种方法可以覆盖较大的料表面，发菌快袋面微孔污染小，缺点是用种量大，每喷射一次用种多在１００ml左右．而且在配料时就要注意减少培养料的含水量．这种方法在香菇生产上应用比较成功．是我们在第三种方法的基础上改进的方法,期望今后适应开放接种的需要. 五接种后摇动接种法：颗粒菌种培养基接液体菌种最能发挥快速发菌的优势，液体菌种接入玻璃瓶后旋转或摇动使液体流动粘到每粒颗粒上，在适合温度下三天即可长满菌丝，继续培养几天让菌丝深入颗粒内部后即可用于生产．这种方法可以在急需用种时使用．六接种机接种法：食用菌瓶栽工厂化企业使用的方法，接种速度一般7000-8000 瓶／小时，菌液喷射在料面及孔洞中。 液体菌种对不良环境的抵抗力不如固体菌种（如耐缺氧能力不强），采用发酵料，生料栽培或塑料袋熟料开放式拌料栽培往往不易成功.液体菌种生产技术与食用菌栽培技术的很好结合才能发挥液体菌种的优势
培养基配方
1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）： 马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）： 牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。115℃，20min 灭菌。 3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0； 4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0； 5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0； 6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g， 8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 9、BGDM培养基：牛肉膏3 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g ，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 10、镰刀菌酸配制：10 mM标准品FA储存液（40 μg/mL）的配制：精密称取0.1792 g定溶于18%（v/v）谱纯甲醇100L，用1N NaOH 调节pH到6.5。换算的质量浓度（w/v）=1792 μg /mL。 11、LB培养基：胰蛋白胨1 g，酵母提取物0.5 g，NaCl 1 g，琼脂1.5 g，水100 mL，pH7.0, 121℃20 min。 24、PCR产物的电泳 主要仪器： 电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、微波炉、离心机等。 主要实验试剂： 1、50×TAE （2 M Tris，1M 醋酸，50 mM EDTA（pH8.0）） 2、10×上样缓冲液（loading buffer） 3、分子量标准DNA Marker 4、琼脂糖 5、EB （溴化乙锭）（黑暗保存） 25、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA 三羟甲基氨基甲烷（Tris）、硼酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、溴酚蓝、蔗糖、琼脂糖、溴化乙锭、DNA marker（λHindIII digest，自带6×loading Buffer，在103房间海尔冰箱中存放）
真菌的培养及形态观察
题目：真菌的培养及形态观察 动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师：邹玲 摘要：了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现，还有真菌的分离培养方法和载片培养，学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养，酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上，观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。 关键词：酵母菌霉菌形态观察分离培养 引言：真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形，无性繁殖为出芽生殖，可以形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体，较大，分为基内菌丝和气生菌丝，不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子，细胞易收缩变形，孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰，完整，保持自然状态的霉菌形态。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种：酵母菌，青霉，根霉的斜面培养菌种 1.1.2试剂：沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等 1.1.3其他：解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等 1.2方法 1.2..1真菌的划线分离培养 培养基：将沙堡琼脂培养基融化后，冷却至45摄氏度，注入无菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板备用。 接种：取待分离的材料少许，投入无菌水试管中，振荡，使分离菌悬浮于水中，将接种环火焰灭菌后冷却，取上述悬液，进行平板划线分离。 培养与观察：划线完毕后，置于28摄氏度温箱培养2~5天，待形成子实器官后，取单个菌落部分，制片镜检。若只有一种菌，既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液，用作划线分离，有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察，用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝，在平板上分离培养，即可得到真菌的纯培养物。 1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现： 酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈现粉粒状，粗糙或褶皱，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d，可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。 1.2.3真菌的形态观察 1.2.3.1酵母菌水浸片的制备：将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央，用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许，均匀涂于液滴中，染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡，然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式，注意酵母菌的形态、大小和芽体，同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。 1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液，用灭菌滴管吸取
真菌培养常用培养基
[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA] （一）组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0～15.0g 蒸馏水1000ml （二）制法 上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。（三）目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。 [沙氏液基，SDB] （一）组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 蒸馏水1000ml （二）制法 上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic] （一）组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0～15.0g
蒸馏水1000ml （二）制法 上述混合后加入200mg氯霉素。250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA] （一）组成 葡萄糖20.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0～15.0g 蒸馏水1000ml （二）制法 上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。 （三）目的 保存菌种培养基。 [马铃薯葡萄糖琼脂，PDA] （一）组成 马铃薯200.0g 葡萄糖20.0g 琼脂12.0～15.0g 蒸馏水1000ml （二）制法 先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤
液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。 （三）用途 此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。 [玉米吐温80琼脂，CMA with T w80] （一）组成 玉米粉40.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml 吐温80 10ml （二）制法 先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。 （三）用途 用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。 [米饭培养基rice grain medium] (一)组成 大米300.0g 蒸馏水1000ml （二）制法 将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。
液体菌种培养基
(1)平菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (2)金针菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (3)白灵菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (4)香菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (5)杏鲍菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (6)鸡腿菇培养基配方 马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (7)黑木耳培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (8)猴头菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸45克，蛋白胨2.5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (9)双孢菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2.0克，酵母膏1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然;
真菌的分离及常用培养基
真菌的分离及常用培养基 关键词：真菌抗生素念珠菌白假丝酵母菌北纳创联北京标准物质网 医学真菌形态学观察是认识真菌的第一步，但仅通过光学显微镜对其进行观察并不能直接鉴定为真菌，需要对疑似相关病变部位的标本进行采集及分离，然后在合适的培养基进行培养。 一、病变部位标本的采集分离 通常采集疑似病变部位的皮肤附属物、分泌物、血液、痰液、脑脊液等体液，注意标本的新鲜度、无菌性、充足性，而且要对所采集标本进行正确消毒，杀死其中混有的杂菌。标本为脑脊液时，需进行离心，收集沉淀物进行培养，标本为血液时，需要先行增菌培养后再分离，这样可增加阳性率，未增菌培养的阴性结果并不能排除阳性结果。 二、真菌培养常用的培养基 目前商品化的真菌培养基多为干燥脱水的形式，可以按照配制说明书进行配制，值得注意的是，使用后的装培养基的瓶盖须拧严，防止受潮，以各下次使用。 1.沙保弱培养基及含抗生素的沙保弱培养基沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基，绝大多数的真菌均可以在其上生长，沙保弱培养基还可以添加抗生素，从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养，但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。 2.玉米粉（厚膜孢子）培养基多用于鉴别念珠菌属，培养基中的吐温可以促进白假丝酵母菌产生厚膜孢子，同时可以加入1％葡萄糖促进红色毛霉菌生长，并抑制须毛霉菌的生长。 3.土豆葡萄糖培养基土豆培养基中需将土豆切成小于1cm。的小块，常用于诱导真菌形成孢子或产生色素。 4.脑-心浸液琼脂培养基是一类营养丰富的真菌培养基，人工配制过程较为烦琐，一般通过商品化的培养基按照说明书进行配制。BHI多用于室温培养致病真菌，也可用于35～37℃培养致病真菌的酵母相。