~(125)I粒子肝肿瘤组织间植入治疗诱导凋亡的研究

?简报?

125I 粒子肝肿瘤组织间植入治疗诱导凋亡的研究赵泉　罗开元　时德

作者单位:650021昆明,云南省第二人民医院普外科(罗开元、赵泉);重庆医科大学附属第一医院普外科(时德) 手术是原发性肝细胞癌(HCC )治疗的首选。125I 粒子组织间种植是治疗肿瘤的一种新方法[1]。本研究旨在探讨125I 粒子对诱导肿瘤细胞凋亡的作用。一、材料和方法1.动物模型制备:人肝癌细胞系BEL 27402由北京中国医学科学院分子肿瘤学国家重点实验室提供。雄性BALB/c 裸鼠30只,16～18g ,由中国医学科学院肿瘤研究所动物室提供。随机分为5组,每组6只,A 为对照组、B 为125I 粒子空白剂量(0Bq )、C 为低剂量(7.39×106Bq )、D 为中剂量(1.48×107Bq )和E 为高剂量组(2.96×107Bq )。瘤源裸鼠腋下取出肿瘤,选取生长良好的瘤组织,剪成大小均匀的1mm 3小块,裸鼠腋部皮下植入。瘤体直径达8～10mm 时,用18号植入针经皮每瘤体中心处植入一粒125I 粒子。不同剂量组植入相应剂量粒子。植入后每3d 测量肿瘤长径(a )及宽径(b ),肿瘤体积=a ×b 2/2。28d 后处死裸鼠,剥出瘤块并称重。肿瘤抑制率=(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100%。2.125I 粒子:由上海欣科医药公司提供,其物理及放射生物学特性:(1)125I 粒子生物半衰期为59.43d ,厚0.8mm ,长(4.5±0.5)mm ,短棒的中间活性部位3.25mm 。它辐射27.4～31.4kev 的X 射线和35.5kev 的γ射线。(2)半价层为0.25mm 的铅,组织中为20.0mm ,即0.25mm 的铅或是20.0mm 的人体组织可以抵消超过99%的射线辐射。(3)若活度低于1.85×103Bq ,则认为已经失去活性。粒子活度剂量随时间而自然衰减,1～100d 的衰减系数均可通过衰减表查出。3.原位末端标记(TUN EL )法检测原位凋亡:参照TUN EL 试剂盒内说明书。

4.免疫印迹法检测p53蛋白的表达:参照分子生物学第3版。

5.统计学方法:SPSS 统计软件,采

用单因素方差分析法。

二、结果

1.各组裸鼠皮下移植瘤体积不同时间点比较(表1):125I 粒子植入前,各组间平均瘤体积差异无统计学意义。植入后第8天,中、高剂量组瘤体体积未出现明显增长,高剂量组有一定程度的降低。中、高剂量组与对照组相比,平均瘤体积组间差异有统计学意义(P <0.01)。第16、24天时,低、中、高剂量组的平均瘤体积与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.01)。

2.不同剂量组的瘤重抑制率:空白、低、中、高剂量组的瘤重抑制率分别为

3.52%、1

4.59%、30.53%、41.31%。3.p53与内对照的灰度比值:空、低、中、高剂量组p53蛋白表达量分别为对照组的1.24、1.98、3.22、3.20倍。4.TUN EL 法结果:对照组棕黄色染

色的细胞数量少。高剂量组棕黄色染色细胞明显增多,且染色加深,表明肿瘤细胞的凋亡明显增多。

5.电镜结果:对照组、空白剂量组标

本中难以找到凋亡细胞,低剂量组中也少见,中、高剂量组标本中有较多、较典型的凋亡细胞。高剂量组标本中可以清楚的看到细胞浓缩,核集聚、核碎裂、核边聚等凋亡细胞的特征性形态改变。三、讨论

近几年对原发和继发性肝癌采用了一系列基因治疗[2]。p53基因的点突变及缺失不仅参与了肿瘤发生,而且对肿

瘤的治疗结果也产生一定的影响[3]。

p53在多种细胞进程中起到轴心作用,如

细胞生长调控、DNA 修复和程序性细胞死亡。包括放、化疗在内所至的损伤,诱导p53过量表达以调控增殖能力受损细

胞的比例,因此启动误配修复或凋亡程序。p53突变后不能触发p53依赖的细胞程序性死亡,这常意味着更糟糕的预后和放、化疗抗拒性,故p53状态和辐射敏感性间的关系引起广泛关注[4]。电离辐射所致凋亡最重要的分子步骤是腺粒体细胞色素C 释放进入胞浆中。p53及癌基因ras 、raf 、c 2myc 影响着该过程中的不同阶段[5]。细胞周期中有丝分裂期和G 2后期与S 前期及G 1/G 0期相比对辐射更敏感。而且,辐射导致有丝分裂期迟滞[6]。实验结果显示鼠p53基因突变表达增强了各种类型血细胞对γ辐射的抵抗能力[7]。本实验结果证实125I 粒子组织间植入治疗肝癌有效。电镜观察和TUN EL 法检测原位凋亡表明,125I 粒子肝癌组织间植入后,可以诱发凋亡,且凋亡程度和粒子活度有关。免疫印迹法发现,高、中、低剂量组瘤体组织中p53蛋白表达量明显高于对照组和空白剂量组。我们认为,在低能射线辐射和肿瘤细胞凋亡间,p53是一条重要途径。我们还需进一步研究其他参与基因。参考文献1罗开元,毛文源,李波,等.125I 粒子组织间植入治疗恶性肿瘤的疗效观察.中华外科杂志,2003,41:1222124.2Havlik R ,Jiao L R ,Nicholls J ,et al.G ene therapy for liver metastases.Semin Oncol ,2002,29:2022208.3K astan MB ,Zhan QM ,Ei 2Deiry WS.A mammalian cell cycle checkpoint pathway u 2tilizing p53and G ADD45is defective in Ataxia 2Telangiectasia.Cell ,1992,71:5872597.4Weber K J ,Wenz F.p53,apoptosis and ra 2diosensitivity 22experimental and clinical da 2ta.Onkologie ,2002,25:1362141.5Peltenburg L T.Radiosensitivity of tumor cells.Oncogenes and apoptosis.Q J Nucl Med ,2000,44:3552364.6Lee J M ,Bernstein A.p53mutations increase resistance to ionizing radiation.PNAS USA ,1993,90:574225744.(收稿日期:2004205213)?211?中华实验外科杂志2005年1月第22卷第1期　Chin J Exp Surg ,January 2005,Vol 22,No.

1

? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.