大白菜-结球甘蓝异附加系的SRAP鉴定

大白菜-结球甘蓝异附加系的SRAP鉴定

摘要：以8个结球甘蓝品种和7个大白菜品种为试材,利用23对SRAP引物,筛选结球甘蓝相对于大白菜特异的SRAP引物。结果表明,18对引物在大白菜和结球甘蓝间表现多态性,可以区分大白菜和结球甘蓝不同品种。利用筛选出的18对SRAP引物对部分大白菜-结球甘蓝异附加系进行了鉴定,结果表明,其中6对引物P53、P86、P93、P121、P123和P142可以鉴定异附加系AA＋2C1、AA＋C3、AA＋C5、AA＋C7和AA＋C8。大白菜-结球甘蓝异附加系特异SRAP标记的建立,为开展大白菜-结球甘蓝易位系的鉴定奠定了基础。

人类输卵管上皮永生化细胞系的建立及鉴定

《中国癌症杂志》2013年第23卷第4期 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.4 241 人类输卵管上皮永生化细胞系的建立 及鉴定 高雯1,2　臧荣余1　王雁2　杨丽娜2　刘杨1　亓子豪2　尹胜1　杨恭2 1.复旦大学附属肿瘤医院妇科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032； 2.复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032 ［摘要］　背景与目的：最近研究表明卵巢高级别浆液性癌可能起源于输卵管上皮。本课题通过基因沉默和端粒酶导入技术将原代输卵管上皮细胞永生化，为以后建立恶性转化细胞系和卵巢癌动物模型奠定基础。方法：分离并培养输卵管上皮细胞，导入p53和pRb shRNA结合hTERTcDNA，建立p53和pRb基因同时沉默并过表达hTERT的永生化细胞系，并对永生化细胞系进行连续传代、沉默基因的蛋白质印迹法(Western blot)测定、SA-β-gal染色和非停泊生长实验及体内致瘤活性鉴定。结果：我们建立了稳定表达p53、pRbshRNA和hTERT的永生化输卵管上皮细胞系：FTE248116/p53i+pRbi+hTERT及FTE312249/p53i+pRbi+hTERT。结论：可以通过导入端粒酶基因及敲除抑癌基因p53和pRb来建立永生化细胞系,并有望于构建恶性转化细胞系和人类高级别浆液性卵巢癌动物模型。 ［关键词］　输卵管上皮细胞；p53；pRb；hTERT；永生化 DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.04.00X 中图分类号：R737.32 文献标志码：A 文章编号：1007-3639(2013)04-0241-07 Immortalization of human fallopian tube epithelial cells GAO Wen 1,2, ZANG Rong-yu 1, WANG Yan 2, YANG Li-na 2, LIU Yang 1, QI Zi-hao 2, YIN Sheng 1, YANG Gong 2 (1.Departements of Gynecological Oncology, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China; 2.Cancer Research Laboratory, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China) Correspondence to: YANG Gong E-mail: yanggong@https://www.sodocs.net/doc/0218032424.html, ［Abstract ］ Background and purpose: Recent researches indicate that high grade serous ovarian carcinoma is derived from fallopian tube epithelial malignancy. In this study, we used primary fallopian tube epithelium to establish the immortalized cell lines by silencing of tumor suppression genes and introduction of hTERT, in order to further build malignant cell lines and ovarian cancer animal models. Methods: Primary fallopian tube epithelia were isolated and transfected with a plasmid containing pRb and p53 shRNAs combined with hTERT to establish immortalized cell lines. The resulting cells were validated through examining cell population doublings, p53 and pRb expression, SA-β-gal activity; anchorage-independent growth and in vivo tumorgenesis. Results: We successfully established two immortalized fallopian tube epithelial cell lines: FTE248116/p53i+pRbi+hTERT, FTE312249/p53i+pRbi+hTERT through silencing of p53 and pRb and introduction of hTERT simultaneously. Conclusion: The establishment of immortalized cell lines can be accomplished by introduction of p53 and Rb shRNA and overexpression of hTERT, and these cells may be used to establish the transformed cell lines and ovarian cancer animal models. ［Key words ］ Human fallopian tube epithelia cells; p53; pRb; hTERT; Immortalization 基金项目：国家自然科学基金项目(No: 81171911)。通信作者：杨恭　E-mail:yanggong@https://www.sodocs.net/doc/0218032424.html, 卵巢癌(ovarian cancer)是致死率最高的妇科恶性肿瘤。在原发性卵巢癌中，75%～90%是上皮性癌。目前越来越多的证据表明：高级别浆液 性卵巢上皮性癌起源于输卵管上皮，卵巢只是继发受累。无论从形态学分析还是经过蛋白组学分析都证实高级别浆液性卵巢癌起源于输卵管上皮［1］。正常上皮细胞在体外连续传代6～15

结球甘蓝高效栽培及病虫害防治技术

结球甘蓝高效栽培及病虫害防治技术 摘要结球甘蓝种植经济效益较高，应注重品种选择，突出施用腐熟的有机肥，应用高肥水管理措施，采用高效低残留药剂防治病虫害。 关键词甘蓝；高效栽培；病虫害防治； 近年来江苏省淮安地区农业产业结构进一步优化，为了策应农业供给侧改革，提高种植业经济收入水平，结球甘蓝（简称甘蓝）在我区栽培面积逐步扩大，种植效益稳步提高。甘蓝是一种产量高，可鲜食可加工及下部脚叶可作饲料的用途广泛的大宗蔬菜。甘蓝可在夏、秋季及越冬栽培，下面将我们淮安地区甘蓝丰产栽培技术介绍如下。 (一)品种选择： 选择京丰1号、铁头4号、苏甘21等品种，结球紧实，亩产可达4000多公斤。 1．、铁头4号甘蓝：高圆球型，单球重1.3-1.6KG，定植后48-55天即可正常采收，植株开展度40-48CM，叶色嫩绿，叶片呈椭圆形，叶面蜡粉少，叶球紧实，故称“铁头”系杂交一代品种。 2．京丰1号：表现为早中熟，较耐热，耐寒、耐肥、忌渍水和干旱，叶球紧实，中平头型，成熟一致，品质好，是近年来广为推广的秋栽甘蓝杂交一代良种，为脱水加工用品种，亩产4000公斤左右。 (二)育苗管理： 1．播种期：铁头4号甘蓝， 7月上旬-8月下旬都可播种；京丰一号秋甘蓝7月中旬播种；越冬甘蓝苏甘21等在10月下旬至11月上旬播种。每亩用种量50—75克。 2．育苗：采用基质育苗、播前将基质充分吸水，采用100孔穴盘，一孔一粒播种，播种时用手指按压基质放入种子，然后覆一层基质，拱棚覆盖遮阳

网，做到晴天盖遮阳网，阴天掀起遮阳网，并做好早晚补水，出苗后喷施噁霉灵防苗期猝倒病，苗龄：在25—30天移栽喷施代森锰锌和啶虫脒和康宽药剂防治病虫害，做到带药下田。 (三)田间管理： 1．施肥，移栽前15天左右，施入基肥，每亩撒施腐熟有机肥2500KG，45%硫酸钾复合肥40KG，尿素7.5KG，旋耕整地，移栽：移栽前亩喷72%异丙甲草胺乳油70ML封闭除草。选择健壮、长势一致秧苗，进行移栽。栽植密度为：京丰1号，株行距40*45厘米；铁头4号35*40春丰越冬春甘蓝，株行距35*40厘米。移栽后每株苗打足安根水，有利成活。 2．追肥：成活后，10—15天进行第一次追肥，每亩追施尿素10KG。以后于盘棵期、结球前追肥2次，第一次追每亩42%硝硫基复合肥20KG，第二次亩追尿素20KG。如果是春甘蓝，在气温回暖后生长迅速时，此时宜亩追尿素30KG，在结球前每亩施尿素15KG左右。 3田间配套喷滴灌设施：气温高、太阳大、久晴不雨，可及时补水抗旱保苗。用滴灌时避开晴天中午应早晚进行。 (四)病虫害防治：。 病害有：霜霉病、病毒病、灰霉病、软腐病、黑腐病等。虫害有：夜蛾、菜青虫、蚜虫等。 1、甘蓝霜霉病 1、甘蓝霜霉病除危害甘蓝外，还危害大白菜、萝卜、白菜（油菜）及薹菜等。 （1）危害症状：甘蓝霜霉病主是危害叶片。病斑多角形，初为淡绿色，以后变为黄褐色、紫褐色或暗褐色。天气潮湿时，叶背面产生白色霉层，有时叶正面也产生霉层，即病菌的孢子囊及孢子梗。发生严重时，病斑连成片而干枯。（2）防治方法：①用适乐时500倍液拌种晾干备用。②实行轮用，避免与

甘蓝

一、品种简介 9G-04最新育成早熟夏秋甘蓝品种。夏季定植到采收55天，秋季定植到采收65天。植株开展度55厘米左右，外叶13片，叶形倒宽椭圆形，叶色翠绿，叶面蜡粉中等，叶球紧实、厚扁圆形，单球重1.2千克。球叶叶脉细，球色嫩绿，商品性极佳。适合我国各地基地化生产。在长江流域可在6月下旬到8月初播种。也可在1～3月播种，5～6片真叶定植，定植后60天采收。 9G-05最新育成夏秋甘蓝新品种。植株开展度60厘米左右， 二、中国栽培的主要甘蓝类型 1. 极早熟圆球形品种 品种特点 生育期：从定植到采收45-55天 球形：正圆球形，要求球形稳定 （不会因季节、地区或环境的变化而成为高圆等其它形状。 颜色：颜色常绿或墨绿 （山西、西北等地对颜色的要求较低，张家口，云南对颜色敏感） 耐抽苔：主要是在北方早春栽培及南方越冬季节栽培对耐抽性有要求。 抗黑腐病：北方夏秋季节及南方春季、夏季、秋季。 抗根肿病（云南、四川、广西等个别地区） 主流品种 中甘11号，中甘15号，中甘21号――中国农科院蔬菜花卉研究所品种 美味早生（大连米可多品种） 春光珠（大连米可多品种） 迎春：本司引进极早熟45－50天，球形圆正，颜色绿，结球紧实，心柱短，可适合北方大部分地区春季及南方冬季栽培。 绿珠：本司引进极早熟45－50天，球形圆正，颜色绿，结球紧实，心柱短，可适合北方大部分地区春季及南方冬季栽培。 种植区域及季节 北方：春季 福建、广东等南方地区冬季 东北、西北等高寒地带：春夏、早秋季节 云南：四季均有栽培，冬季以美味早生为主，要求球形稳定，耐抽苔能力强。其它季节需要有抗热、抗黑腐病强的品种。 典型生产区的农时 云南通海冬季：10月－来年2月主栽选择美味早生，春光珠，迎春和绿珠 云南通海、玉溪除冬季外季节：3月到9月主栽品种可选择东京超早，春秋早熟，绿优。 云南根肿病发生地区：10月－来年2月主栽选择美味早生，春光珠，思唯公司的迎春和绿珠，3－9月可选择思唯公司碧玉。 河北张家口、固源、秦皇岛：2－3月播种，主要栽掊希望、夏强品种，春秋早熟，绿优。 陕西太白：11－1月播种，品种希望，春秋早熟，绿优，迎春，绿珠均可栽培。 山西榆次、寿阳：2－3月播种，要求比较抗病，抗旱性强的品种，春秋早熟，绿优适宜当地种植。

甘蓝栽培技术

甘蓝栽培技术 （一）育苗移栽 1、品种选择 春甘蓝选用抗逆性强、冬性强、耐抽薹、商品性好的早熟品种；夏秋甘蓝选用抗病性强、耐热的品种。 2、栽培季节的划分 春甘蓝：春季直播或育苗移栽，夏季收获。 夏秋甘蓝：春夏育苗，夏定植，秋收获。 3、育苗 （1）育苗土配制：育苗土的好坏与蔬菜秧苗的生长发育有很大的关系。良好的床土必须肥沃，含有丰富的营养物质，具有良好的物理性状，通气性好，保水力强，这样的床土称营养土，为了达到上述要求，营养土应人工配制。营养土按此配制：土壤、腐殖质、肥料按4：4：2的比例配。土壤最好选用没有种过十字花科蔬菜的大田土，取土时要用13～17厘米内的表层土。 肥料用充分腐熟的有机肥，最好是厩肥，又叫圈粪，它的有机物含量高，不但有丰富的营养物质，而且有疏松土壤作用，包括：如牛粪、马粪、驴粪、羊粪等，以牛粪最好。也可用腐殖质或经过沤制的树叶或桔杆等，有营养且能疏松土壤的物质。需要注意的是厩肥必须充分腐熟发酵，一是有利于作物吸收，二是发酵时产生的高温可杀死虫卵、病原微生物等有害物质，减少苗期病害。配制营养土的速效肥有草木灰，人粪尿，化学肥料等草木灰中含钾并能加深土壤颜色，多吸收阳光，提高地温，尤其对早春育苗有利，其用量约占营养土的5～10%。人粪尿的营养元素全面，使用前应充分腐熟，施用量占营养土的5%～10%，如果营养土中速效肥料不足，应施入0.1～0.2%的过磷酸钙或0.1%的复合肥。一般不能使用氮素肥料以免造成氨害，营养土配好后要过筛。 （2）育苗土消毒： 药剂消毒：①50％多菌灵按每100公斤营养土需2.5～3克多菌灵，将其配成水溶液后向土上喷洒，边喷边翻，将药和土充分拌匀，用塑料薄膜覆盖，2～3天后揭去塑料膜，晾2天便可播种了。②用50%多菌灵可湿性粉剂与50%福美双

甘蓝类蔬菜常见病害农药防治方法

甘蓝类蔬菜常见病害农药防治方法 甘蓝类蔬菜常见病害农药防治方法如下： 甘蓝类蔬菜包括芥蓝、花椰菜、结球甘蓝、球茎甘蓝等。甘蓝类蔬菜常见病害有霜霉病、黑根病、黑斑病等。 霜霉病病叶上病斑初为淡绿色，以后病斑逐渐变为黑色至紫黑色，稍凹陷，因受叶脉限制而呈多角形或不规则形。空气潮湿时，叶背病斑上产生白色霜状毒层。发病严重时病斑连片，叶片变黄枯死。当气温在15～24摄氏度上下波动而湿度又较高、天气阴晴交替时，最有利于病害的发生。其防治方法如下： 1、种子消毒：可用种子重量0.1％的35％甲霜灵可湿粉，或保种灵（甲霜灵、福美双、甲基托布津按8：2：1比例混合）拌种，或用种子重量0.4％的50％福美双可湿粉拌种。 2、农业防治：选用抗病品种。与非十字花科蔬菜隔年轮作，有条件的可实行水旱轮作。 3、药剂防治：发病初期喷药防治，可选用64％杀毒矾500倍液，或75％百菌清600倍液，或65.5％普力克水剂600倍液，或72％克露可湿粉600倍液～800倍液，或58％瑞毒霉锰锌可湿粉600倍液交替喷施2次～3次，间隔7天～10天喷1次。 黑斑病也称黑霉病，多为害外叶或外层叶，叶斑近圆形，褐色，病斑上有同心轮纹，斑外常围有黄色晕圈，斑面现黑色霉状物，病斑常互相连合为大斑块，致使叶片变黄早枯。叶柄和茎受害，病斑呈长梭形凹陷，有明显的轮斑和黑霉。温暖多湿季节，有利于病害的发生。

其防治方法如下： 1、种子消毒：用50摄氏度温水浸种20分钟～30分钟，或用50％福美双可湿粉（按种子重量0.4％），或50％扑海因可湿粉（按种子重0.3％）进行拌种，或用40摄氏度0.1％汞液浸15分钟或50％福美双500倍液浸20分钟。 2、农业防治：合理密植，实行配方施肥，避免过施、偏施氮肥，合理排灌，注意田间卫生。 3、药剂防治：发病初期喷施75％百菌清＋70％托布津可湿粉（1：1）1500倍液，或50％扑海因可湿粉1000～1500倍，或用50％速克灵1500倍液，或3％农抗120水剂100倍液～150倍液喷施，或50施保功可湿粉1000倍液，隔7天～10天喷1次。采收前10天～15天停止用药。 黑腐病该病主要为害叶部，但叶球及球基也可受害。叶片受害，常从叶缘开始向内形成“V”字形、黑褐色病斑，病斑边缘具黄色晕环。根茎部受害时维管束变黑，内部干腐以致全株萎蔫死亡。病株虽腐烂，但无臭味，这有别于软腐病。高温多雨的气候条件或菜地连作，低洼高湿，有利于本病的发生和流行。其防治方法如下： 1、种子消毒：播种前可用50摄氏度温水浸种20分钟，或用45％代森铵水剂300倍液浸种20分钟，或用金霉素1000倍液浸种2小时，或用50％DT可湿粉（按种子重量0.4％）拌种。 2、农业防治：加强田间管理，特别是水肥管理，合理密植，注意田间卫生，及时清除病残物，减少菌源。

大棚甘蓝种植技术

大棚甘蓝种植技术 1茬口安排 莴笋12月中下旬在大棚内育苗，次年1月下旬至2月上旬移栽，4月下旬收获;甘蓝3月下旬育苗，5月上旬移栽，7月收获上市;蒜 苗7月下旬播种，可在冬前收获，也可扣棚保温到年底供应春节市场。 2大棚莴笋栽培要点 2.1品种选择选用耐寒，适应性强，抽薹迟的品种，如耐寒白叶、耐寒二白皮等品种。 2.2育苗12月中下旬育苗。播种前先将种子在清水中浸泡24h 左右，然后洗净保湿催芽。种子出芽达80%左右，即可将种子掺在 少量的细土中拌匀撒播。播后育苗床浇足底水，待水下渗后，覆土0.5～1cm，盖上薄膜。苗期控制浇水，以免幼苗徒长。 2.3定植与管理定植前每公顷施腐熟有机肥7.5万kg、复合肥1500kg作基肥。定植垄宽120cm，高15cm，垄沟宽30cm，扣上大棚 棚膜。苗龄40d左右时进行定植，株行距35cm×30cm，定植后浇缓 苗水。定植初期注意通风降湿，当茎部开始膨大至收获前，棚温控 制在15～20℃，大于20℃时可摘去棚膜，并浇水追肥，保持土壤湿润。 2.4病虫害防治大棚莴笋病害主要有霜霉病、灰霉病和菌核病， 在发病初期用25%甲霜灵锰锌可湿性粉剂800～900倍液，50%速克 灵可湿性粉剂1500倍液或与50%多菌灵胶悬剂500～600倍液喷2～ 3次。隔7d防治1次。2.5收获莴笋收获的最适时期是主茎顶端与 最高叶片的叶尖相平时。为了提早上市，可适当早采，收大留小， 分批上市，以提高产量。 3甘蓝栽培技术要点

3.1品种选择选用中熟品种，如京丰1号、中甘8、夏光等。 3.2育苗3月下旬育苗。播种前将种子用55%温水处理15min， 然后常温条件下浸种3小时左右，捞出甩干置于22～24℃条件下催芽，待80%左右种子出芽即可播种。将育苗床浇透底水，待水下渗 后撒播种子。播种后均匀覆土1cm左右。为防止立枯病发生，可用50%多菌灵可湿性粉剂对土壤杀菌，每平方米7～10g拌于覆土中。 3.3苗期管理出苗前白天温度20～25℃，夜间温度13～15℃。 幼苗出土后开始适当放风，降温降湿蹲苗。白天12～15℃，夜间 5～8℃，然后再逐渐提高温度，白天15～20℃。夜间8～10℃。当 幼苗长到2叶1心时进行移苗。 3.3整地施肥及定植定植土每公顷施腐熟有机肥6.0万kg，过磷酸钙750kg。5月上旬定植，定植前5～7d对苗进行低温锻炼，使之 适应外界条件。定植后浇缓苗水，缓苗后及时通风，降温管理，防 止徒长。定植株行距40cm×40cm。 3.4肥水管理莲座期进行1次追肥，施尿素225kg/hm2。及时中 耕除草，莲座末期适当控制灌水，防止田间积水。 3.5病虫害防治软腐病可用农用链霉素200mg/kg浓度的药液灌根。黑腐病发病初，用60%抑霉灵或35%瑞毒霉，加50%福美双1:1 混合拌匀，加水配制500倍药液。蚜虫可用50%抗蚜威可湿陛粉剂1500倍液喷雾。菜青虫用20%杀灭菊酯乳油1500倍液喷雾防治。一 般6～7d喷雾1次。连喷2～3次。 3.6收获7月上中旬当叶球基本包实时就可收获。 4蒜苗栽培要点 4.1播前处理选用优良早熟多瓣蒜种，栽种前将蒜苗盘分开，按大、中、小瓣进行分级，放入冷水中浸泡12～14h，打破蒜种休眠。 4.2适期播种，合理施肥7月下旬至8月上旬播种。播种前每公 顷施腐熟农家肥22.5万kg，尿素300kg，过磷酸钙750kg，钾肥 225kg。每隔30om开1条30～40cm宽的垄沟。在垄沟内按行距 10cm、株距5cm点播蒜种，然后覆盖1～1.5om细土，播完浇透水1

甘蓝类蔬菜常见病害防治

甘蓝类蔬菜常见病害防治 甘蓝类蔬菜常见病害防治 甘蓝类蔬菜包括芥蓝、花椰菜(菜花、椰菜花)、结球甘蓝(椰菜)、球茎甘蓝(芥蓝头)等。甘蓝类蔬菜常见病害有霜霉病、黑根病、黑斑病、菌核病、灰霉病、黑胫病、黑腐病、软腐病、细菌性黑斑病等。 霜霉病 病叶上病斑初为淡绿色，以后病斑逐渐变为黑色至紫黑色，稍凹陷，因受叶脉限制而呈多角形成或不规则形。空气潮湿时，叶背病斑上产生白色霜状毒层。发病严重时病斑连片，叶片变黄枯死。当气温在15-24摄氏度上下波动而湿度又较高、天气阴晴交替时，最有利于病害的发生。其防治方法如下： 1、种子消毒：可用种子重量0.1%的35%甲霜灵可湿粉，或保种灵(甲霜灵、福美双、甲基托布津按8:2:1比例混合)拌种，或用种子重量0.4%的50%福美双可湿粉拌种。 2、农业防治：选用抗病品种。与非十字花科蔬菜隔年轮作，有条件的可实行水旱轮作。 3、药剂防治：发病初期喷药防治，可选用64%杀毒矾500倍液，或75%百菌清600倍液，或65.5%普力克水剂600倍液，或72%克露可湿粉600-800倍液，或58%瑞毒霉锰锌可湿粉600倍液交替喷施2-3次，间隔7-10天喷1次。 黑斑病

也称黑霉病，多为害外叶或外层叶，叶斑近圆形，褐色，病斑上有同心轮纹，斑外常围有黄色晕圈，斑面现黑色霉状物，病斑常互相连合为大斑块，致使叶片变黄早枯。叶柄和茎受害，病斑呈长梭形凹陷，有明显的轮斑和黑霉。温暖多湿季节，有利于病害的发生。其防治方法如下： 1、种子消毒：用50摄氏度温水浸种20-30分钟，或用50%福美双可湿粉(按种子重量0.4%)，或50%扑海因可湿粉(按种子重0.3%)进行拌种，或用40摄氏度0.1%汞液浸15分钟或50%福美双500倍液浸20分钟。 2、农业防治：合理密植，实行配方施肥，避免过施、偏施氮肥，合理排灌，注意田间卫生。 3、药剂防治：发病初期喷施75%百菌清+70%托布津可湿粉(1:1)1500倍液，或50%扑海因可湿粉1000-1500倍，或用50%速克灵1500倍液，或3%农抗120水剂100-150倍液喷施，或50施保功可湿粉1000倍液，隔7-10天喷1次。采收前10-15天停止用药。 菌核病 主要为害茎基部、叶片、叶球及种荚。受害部位呈湿腐状，紫褐色。在潮湿环境下，病部迅速腐烂，并产生白色棉絮状菌丝体和黑色鼠粪状菌核。高湿环境有利发病，偏施过施氮肥加重发病。其防治方法如下： 1、种子消毒：播种前用10%盐水或20%硫酸铵水源种两次，去除浮在水面上的菌核和秕粒，下沉的种子用清水冲洗干净后播种。

2016年甘蓝品种抗根肿病筛选试验

2016年甘蓝品种抗根肿病筛选试验 1 材料与方法 1.1 供试品种 针对本地的根肿病生理小种特性，经过调查研究，从各地育种商，收集了20个甘蓝品种，见表1。 1.2试验方法 2016年8月10日—2017年4月，在郫县安德镇泉水村试验田B-2、B-3进行，对20个甘蓝品种进行了抗根肿病的筛选试验。采用随机区组排列，设1次重复的分期播种，各试验品种田间栽培均按单畦双行排列，株行距46cm×75cm，小区长方形，宽1.5m，长22m，面积33㎡（表2）。由于当地为甘蓝、大白菜主产区域，常年十字花科根肿病发病严重，试验田发病株及病情指数高，因此对各批次品种只在定植时用枯草芽孢杆菌进行灌根处理，试验期间不再浇灌杀菌剂，之后田间管理均按照当地传统栽培管理。在甘蓝幼苗期、莲座期、采收期定期观察、测定、记录各批次甘蓝品种生物性状特性和根肿病感病情况。采用棋盘4点采样，每小区取20株植株调查根肿病感病情况，调查发病株数，计算发病率，通过发病率计算病情指数。 1.2.1 甘蓝根肿病田间单株分级标准及群体抗性分级标准 甘蓝根肿病分级标准采用国家“九五”甘蓝育种攻关项目制定的甘蓝材料根肿病田间自然诱发抗性鉴定方法。 1）单株病情分级标准： 0级：根系生长正常、无肿瘤； 1级：根系的主根不发病，部分侧根、须根上有较小的肿瘤； 2级：根系的主根发病较轻，微微膨大，部分侧根、须根上有明显的肿瘤； 3级：根系的主根发病较重，异常膨大，龟裂，大部分侧根、须根有明显的肿瘤； 4级：根系上几乎无须根，主根异常膨大、龟裂。 2）群体抗性分级标准： 免疫：无症状；高抗：0＜病情指数≤5；抗病：5＜病情指数≤20；耐病：20＜病情指数≤30；感病：病情指数＞30。 病情指数=100×∑（各级发病株数×各级代表值）/(调查总株数×最高病情级数)。

甘蓝种植

甘蓝种植 （一）植物学特征:甘蓝为二年生草本植物，根系主要分布在30CM以内土层中。茎短缩，又分内、外短缩茎，外短缩茎着生莲痤叶，内短缩茎着生球叶。甘蓝的叶片包括子叶、基生叶、幼苗叶、莲痤叶和球叶，叶片深绿至绿色，叶面光滑，叶肉肥厚，叶面有粉状蜡质，有减少水分蒸腾的作用，因而甘蓝比大白菜的较强的抗旱能力。花为总状花序，异花授粉，甘蓝所有的变种和品种之间相互杂交。果实为长角果，种子圆球形，红褐或黑褐色，千粒重4G左右。 （二）生长发育:在正常情况下，北方以秋作甘蓝采种，第一年形成叶球，完成营养生长，经过冬季低温完成春化，第二年春通过长日照完成光周期而开花结实。它的生长过程所经过的各个生长时期和大白菜基本相同。但各生长时期所需日数较长，发芽期需8 ——10天；幼苗期需25——30天；莲座期，早熟品种需20——25天，中、晚熟品种需30——35天；结球期，早熟品种需20——25天，中、晚熟品种需3 0——50天。 甘蓝是冬性较强的作物，由营养生长转为生殖生长对环境条件要求严格，要求幼苗长到一定大小以后才能接受低温感应，在0——12°C下，经50——90天可完成春化。关于光周期，尖头型和平头型品种要求不很严格，圆珠笔头型品种则较严格的要求长日照。进入生殖生长时期后，一般经历抽薹期、开花期和结果期。开花期需30——40天，结果期需40——50天。 甘蓝在未结球以前，如遇低温条件，或在幼苗期就满足了它的春化要求，栽植后一旦遇到长日照条件，就可能出现“未熟抽薹”现象，叶球形成受阻生成减产。近几年来，春甘蓝采用改良阳畦或塑料温室育苗，既避免了低温，又大大缩短了育苗期，对防止未熟抽薹，保证早熟丰产有良好效果。 （三）对环境条件的要求:甘蓝姨环境投机倒把的要求和大白菜基本相同，但比大白菜适应性更广，抗性也更强一些。 甘蓝喜温和气候，能抗严霜和较耐高温。结球期适宜的温度为15——20°C，但适应温度范围为7——25°C，幼苗能忍耐-15°C低温和35°C的高温。甘蓝要求土壤水分充足和空气湿润，若土壤干旱会影响结球，降低产量。甘蓝为长日性作物，对光强适应性较宽，光饱和点为30000——50000lx。甘蓝为喜肥和耐用肥作物，吸肥量较多，在幼苗期和莲座期需氮肥较多，结球期需磷、钾肥较多，全生长期吸收氮、磷、钾的比例约为3:1:4。每生产1000KG叶球，吸收氮4.1——4.8KG、磷0.12——0.1 3KG、钾4.9——5.4KG。在施足氮肥的基础上，配合施用磷、钾肥，有明显的增产效果。 [编辑本段] 类型和品种 结球甘蓝依叶球形状和成熟期的迟早，可分为三个基本生态型： （一）尖头类型:叶球顶部尖，近似心脏形，多为早熟和早中熟品种，定植到叶球成熟需50——70天。代表品种有鸡心甘蓝、牛心甘蓝等。

稳定表达核仁素的H9C2细胞株的建立和鉴定

中的作用提供细胞模型。方法：将含有核仁素全长的质粒pCMV-Tag2B-Nuc用脂质体转染技术导入H9C2细胞，使核仁素在细胞内表达，用G418筛选出稳定表达核仁素的细胞株；用双酶切、DNA测序鉴定质粒，用RT-PCR及Western blot检测核仁素基因在靶细胞中的整合与表达。结果：经G418反复筛选的H9C2细胞株中，核仁素基因在mRNA及蛋白质水平表达均较野生型细胞及转空载体细胞升高。结论：用含核仁素全长的质粒转染H9C2大鼠心肌细胞，经筛选后可稳定表达核仁素。 【关键词】核仁素；H9C2细胞；基因转染 Abstract Objective:To establish H9C2 cell line that can stably express the nucleolin,whi ch can provide a cell line with which we can analyze the function of nucleolin in apopto sis of cardiomyocytes.Methods:The pCMV-Tag2B-Nuc plasmid was transfected into H9C2 cells with lipofectin,the stable transfectants screened by G418 and the expression of nucleo lin was identified and analyzed by RT-PCR and Western blot.The pCMV-Tag2B-Nuc plas mid was confirmed by double-enzyme digestion and sequencing.Results:After G418 screeni ng, compared with the control group,the mRNA and protein of nucleolin in transfected cel l line were highly expressed, as demonstrated by the RT-PCR and Western blot analysis.C onclusion:The rat H9C2 cell line stably expressing nucleolin was successfully constructed. Key words Nucleolin; H9C2 cell line; Gene transfection 近年来的研究表明，越来越多的心血管疾病发生发展与细胞增殖和凋亡有关。细胞凋亡的发生机制十分复杂，至今仍未完全阐明。核仁素（又称C23）是真核细胞核仁中最主要的一种蛋白质，具有多种生物学功能，它不但直接参与核糖体的生物合成与成熟，还直接或间接参与细胞增殖、生长、胚胎发生、胞质分裂、染色质复制与核仁的发生等过程［１］。另有研究表明，核仁素蛋白的断裂和转位改变与细胞凋亡的发生相关［２，3］。因此，本研

18种甘蓝病虫害

18种甘蓝病虫害

1.甘蓝霜霉病 气温忽高忽低，日夜温差大，白天光照不足，多雨露天气，土壤黏重，低洼积水，大水漫灌，连作菜田和生长前期病毒病较重的地块，霜霉病为害重。 症状特点： 主要为害叶片，严重时也为害叶球。 初期在叶面出现淡绿或黄色斑点，扩大后为黄色或黄褐色，受叶脉限制而呈多角形或不规则形。 空气潮湿时，在相应的叶背面布满白色至灰白色霜状霉层。 药剂防治： （1）种子处理 可用霜霉威盐酸盐或烯酰吗啉浸种； 也可用甲霜灵·锰锌可湿或甲霜灵、恶霜灵·代森锰锌拌种。 （2）发病初期 烯酰·丙森锌；甲霜·霜霉威；丙森·霜脲氰；恶酮·霜脲氰等药剂。 （3）发病普遍 霜霉威盐酸盐·氟吡菌胺；烯酰吗啉＋百菌清；吡唑醚菌酯；烯肟菌酯＋百菌清；丙森·异丙菌胺等药剂。 2.软腐病 主要发生在生长中后期，多在包心期发病。 症状特点：

多从外叶叶柄或茎基部开始侵染，形成褐色水渍状不规则病斑。后迅速发展，使根茎、叶柄、叶球腐烂变软。 有时可以看见茎基部有乳白色菌脓，而且有恶臭味。 药剂防治： （1）种子处理 播前用中生菌素拌种 （2）发病初期 氧化亚铜、氢氧化铜、代森铵、松脂酸铜、络氨铜、叶枯唑、噻菌铜等。 （3）发病普遍 噻唑锌、水合霉素等。 3.黑腐病 症状特点： 幼苗 子叶呈水浸状，逐渐枯死或蔓延至真叶，真叶的叶脉上出现小黑点或细黑条。 成株 多为害叶片，呈“V”，字型病斑，淡褐色，边缘常有黄色晕圈，病部叶脉坏死变黑。 向两侧或内部扩展，致周围叶肉变黄或枯死。 药剂防治： （1）种子处理

播种前，可用琥珀肥酸铜、络氨铜、代森铵浸种。 （2）发病用药 水合霉素；春雷霉素；中生菌素、叶枯唑；噻唑锌；三氯异氰尿酸、春·氧氯化铜等药剂。 4.黑斑病 症状特点: 主要为害叶片。 初期在叶面产生水渍状小点，逐渐变成灰褐色近圆形小斑，边缘常具暗褐色环线。 后向外发展形成浅色或浸润状暗绿色晕环。 随病害的发展，病斑呈同心轮纹，最后发展成略凹陷较大型斑。 空气潮湿，病斑两面产生轮纹状的布黑色霉状物，严重时，叶片枯萎死亡。 药剂防治： （1）种子处理。 用异菌脲、腐霉利拌种。 （2）发病时 恶霜·锰锌、福·异菌、丙森·多菌、苯醚甲环唑＋百菌清；春雷霉素·氧氯化铜、琥胶肥酸铜＋代森铵；苯菌灵＋代森联、溴菌腈＋恶酮·锰锌等药剂。 5.黑胫病 主要危害叶及幼茎。

有机甘蓝种植操作规程

有机甘蓝种植规程 一、立地条件 1、气候条件 甘蓝为半寒性蔬菜，喜温和冷凉的气候。 2、土壤条件 甘蓝对土壤的适应性较强，以中性和微酸性土壤较好，且可以忍耐一定的盐碱性。甘蓝是喜肥和耐肥作物，对于土壤营养元素的吸收量比一般蔬菜作物要多，栽培上除选择保肥保水性能较好的肥沃土壤外，在生长期间还应施用较大量的肥料。 二、种子及其处理 1、品种选择 有机转换期内第一年可使用未经禁用物质处理的常规种子，以后年份必须使用有机种植区内繁育的种子。 2、种子质量 种子在播前进行发芽试验，种子质量应符合GB16715、3——1999中二级以上要求。 3、种子处理 将选好的种子先用冷水浸湿，再用45℃热水不断搅拌浸烫10分钟。

三、栽培技术措施 1、选地及整地 选择排水良好，土质肥沃的土壤。秋深耕，春耙糖，改善土壤耕作层的理化性质，提高地温。达到土质疏松、平坦，耕后耙平作畦，要求畦平埂直，每1.7米开厢起沟。 2、施肥 春季播种或定植前每亩撒施有机肥料300Okg。 3、播种 将处理好的种子用温水淘洗干净，在室温下浸种4小时后拌细土均匀撒播，播种后盖lcm厚细土，以不见种子为宜。每亩用种5Okg。 4、中耕 生育期内可以根据生长情况进行中耕，中耕可以保墒以提高地温。 5、浇水 甘蓝应变保持田块湿润，灌水后及时排除余水叶球包心后，气温下降少灌水。以防止叶球开裂。 6、追肥 进入保心期是甘蓝生长最快的时期，要求肥料充足，避免脱肥、干旱。莲座生长期和结球前中期应追施肥料。做到小肥提苗、中肥促叶、大肥功球。 7、病虫害防治 病虫防治应以预防为主，结合物理生物治疗为辅的方法进行。不能使用化学药剂和基因工程制品。 黑腐病：叶片边缘呈“v”字形黄色干枯。预防方法主要是加强管理，减少伤口，适时播种，与非十字花科轮作，亦可用Bt乳剂700倍液。

ERGIC3的稳定表达细胞株的建立与鉴定

ERGIC3的稳定表达细胞株的建立与鉴定 郑翔，刘兴宇，李学英，吴明松* （遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室，贵州遵义563000） [摘要] 目的构建ERGIC3基因的真核表达载体，通过将载体转染支气管上皮细胞株BEAS-2B，筛选并建立ERGIC3稳定表达的细胞株，为进一步研究ERGIC3在肺癌中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR方法获取人类ERGIC3基因的ORF 框的DNA序列；构建逆转录病毒载体pLXSN-ERGIC3，用PT-67细胞包装后获得病毒颗粒；用病毒颗粒感染BEAS-2B细胞；通过G418筛选获取整合了外源基因ERGIC3的细胞；单克隆化成为稳定转染ERGIC3细胞株；然后用定量RT-PCR和Western blot进行鉴定后，用划痕实验研究稳定转染细胞株的迁移能力和形态学变化。结果获得了4个ERGIC3稳定表达细胞株，这些细胞株的ERGIC3表达量远高于对照组细胞。稳定转染细胞株的迁移能力显著增强（P<0.05）。结论成功的构建了ERGIC3基因的真核表达载体pLXSN-ERGIC3；筛选出ERGIC3基因稳定转染支气管上皮细胞株且其迁移能力明显增加。 [关键词] ERGIC3；稳定转染；真核表达；肺癌 [中图分类号] Q782[文献标志码] A Construction and identification of cell lines with ERGIC3 gene stable transfection ZHENG Xiang, LIU Xing-yu, LI Xue-ying, WU Ming-song (Department of Cell Biology and Genetics, Zunyi Medical University, Guizhou Zunyi 563000, China) [Abstract]Objective To construct a eukaryotic expression vector carrying human gene ERGIC3 and to obtain human bronchial epithelial cell line stably transfected with ERGIC3, which provides the foundation of ERGIC3 in lung cancer. Methods The pLXSN retroviral vector was inserted the DNA fragment of open reading frame sequence (ORF) of gene ERGIC3 which obtained by PCR method. After the constructed pLXSN vector was transfected into the packaging cell, PT67 cell line for 48 hours, the replication-incompetent retroviral particles were harvested and infected the BEAS-2B cells. Screened with G418，the single cell clones were sought out and cultured which were stable transfection cell lines. Then the migration of the cell lines was tested by wound healing scratch assay. Results The vector carrying ERGIC3 was successfully constructed and 4 stable transfection cell lines were obtained, as well as the ERGIC3 expressions were higher than the control by real-time PCR and Western blot. The ability of the stable transfected cell line with ERGIC3 was significantly faster than the control cell (P<0.05). Conclusion The stable cell lines with expression [基金项目] 贵州省科学技术基金（黔科合J字[2013]2319号）；遵义医学院博士启动基金（F-655）。 [通讯作者] 吴明松，男，博士，研究方向：肿瘤细胞分子生物学，E-mail： hanyue4187@https://www.sodocs.net/doc/0218032424.html,。

我国结球甘蓝育种研究的现状及展望

我国对结球甘蓝地育种研究很重视，在年代就开展了结球甘蓝地杂优利用研究.江苏省农科院、旅大市农科所、西安市农科所等单位先后报道结球甘蓝品种间杂种一代在产量、抗逆性等方面具有明显地杂种优势，上海市农科院在年代初于黑叶小平头上获得了和两个自交不亲和系材料.年，中国农科院蔬菜所和北京市农林科学院蔬菜所合作，育成了我国第一个结球甘蓝Ｆ品种京丰一号，并迅速在生产上大面积推广应用.在进行杂种利用地同时，各科研单位对结球甘蓝地经济性状及其遗传力进行了研究，同时开展了制种技术地研究.年代末，我国甘蓝地杂优利用研究得到了迅猛地发展.北京、上海、江苏、黑龙江、吉林、辽宁、山东、山西、陕西、内蒙古、四川、云南、贵州、湖北以及浙江等省、市、自治区地蔬菜科研及教学单位先后选育出多个类型地自交不亲和系材料，育成了一大批优良地Ｆ品种，如中国农科院蔬菜所和北京农林科学院蔬菜所合作育成地京丰一号、报春、园春、庆丰、双金、秋丰等早、中、晚熟配套地甘蓝杂种一代，上海农科院园艺所育成地抗病、耐热地夏光甘蓝，陕西省农科院蔬菜所育成地秦菜号、秦菜号甘蓝.这些Ｆ品种整齐度好，较普通地方品种增产～,所以逐渐取代了生产上使用地地方品种.据年底不完全统计，我国甘蓝地杂种一代品种覆盖面积已达到栽培面积地. 年代中期以后，我国把抗病育种工作提到日程上来.年，甘蓝新品种选育技术研究被列入"六五"国家攻关项目.对育种目标提出了较高地要求：所选育地新品种除了需丰产、优质以外，要求抗～种病害.我国主要采用苗期人工接种鉴定和田间自然诱发鉴定相结合地方法来筛选抗源材料，并利用其来配制新组合，育成了一批抗病、优质、丰产地新品种.据统计，在年代，我国新育成各类型地结球甘蓝新品种共个.由于这些新品种在抗病性、抗逆性等方面均明显优于原有同类品种，很快得以推广应用.据年底地不完全统计，这些品种已累计推广应用九千多万亩，有些品种已成为生产上地主栽品种，如江苏省农科院蔬菜所选育地"春丰"甘蓝、上海农科院园艺所选育地"争春"甘蓝成为长江中下游地区露地越冬栽培地春甘蓝主栽品种，取代了鸡心、牛心等尖头型甘蓝品种.中国农科院蔬菜花卉所选育地"中甘号"""占我国北方早熟春甘蓝种植面积地～.这一时期，在进行品种选育同时，对结球甘蓝地遗传生理，育种技术等进行了深入地研究，对不同类型地结球甘蓝栽培技术也进行了研究和总结.到了年代，我国结球甘蓝育种地研究在各方面又有了长足地进步.文档收集自网络，仅用于个人学习新品种选育 在"八五"期间，我国新选育地不同类型地春秋甘蓝新品种十多个，其中国家"八五"甘蓝育种攻关组选育出新品种及新组合个：春甘蓝新品种"春雷"、""，新组合"延春"、""、""，秋甘蓝新品种"西园号"、"东农"，新组合""、""."春雷"和""都属圆头型品种，抗干烧心病，不易先期抽薹，叶质脆嫩，不易裂球，较对照品种增产以上.春雷适于长江中下游以南地区露地越冬栽培，也适于黄河以北地区春季保护地或露地种植""适于黄河流域及以北地区春季种植或保护地种植，两品种均表现了良好地适应性."东农"是国内首次育成地可抗三种病害（黑腐病、、）、丰产、优质地中晚熟秋甘蓝."西园号"是国内首次育成地耐根肿病地品种，它比原来品种抗性更强，适应性好，在几年时间内就推广应用了万亩，将逐渐成为生产上地主栽品种.文档收集自网络，仅用于个人学习 育种技术研究 方智远等对甘蓝自交不亲和基因型进行了深入地研究，认为治田辰夫遗传分类可作为分析甘蓝不亲和基因型地一种依据，但对制种地不亲和性标准和遗传分析时地标准是否统一提出质疑.方智远、鲁玉妙等分别对良种繁育技术提出了具体地要求，并在甘蓝雄性不育系选育工作中有了突破性进展，选出了几份不育株率达地受一对显性核基因控制地雄性不育材料.大连市农科所育成亮叶甘蓝自交系，刘玉梅等发现了一隐性基因控制地白花甘蓝材料.沈思宁、李成琼、秦智伟等分别对不同甘蓝自交系杂交组合地杂种优势进行研究，进一步明确了中心柱、帮叶比、开展度等地配合力及杂种优势，认为维生素Ｃ等主要品质性状都存在细胞