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高效液相色谱法测定食品中山梨酸_苯甲酸_糖精钠样品前处理方法

【实验室检测】

高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、

糖精钠样品前处理方法

张宗辉

[摘要]目的

探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。方法

不同样品用不同前处理方法,用二极管阵列管检测品(HPLC -DAD )分析测定,外标法定量。结果该前处理方法线性关系良好,相对标准偏

差分别为山梨酸3.18%、

苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%,加标回收率均在90% 100%之间。结论该方法稳定性好、准

确可靠、简单快速,适用于食品添加剂的测定。

[关键词]高效液相色谱法;食品;山梨酸;苯甲酸;糖精钠[中图分类号]O657.7[文献标识码]

A

[文章编号]

1006-4028(2011)06-0480-03

作者单位:南充市疾病预防控制中心(四川南充637000)

作者简介:张宗辉,男,副主任技师,医学检验

Pretreatment Methods for Simultaneous Determination of Sorbic Acid ,Benzoic Acid and Saccharin Sodium in Different Foods by High

Performance Liquid Chromatography

ZHANG Zong -hui

Nanchong Municipal Center for Disease Control and Prevention ,

Nanchong 637000,Sichuan Province ,China.

Abstract Objective To establish pre -treatment methods for the simultaneous determination of sorbic acid ,benzoic acid and saccharin sodium in different foods by high performance liquid chromatography (HPLC )with DAD detection.Methods Different samples were pre -treated with different methods and detected by HPLC with the external standard quantification.Results There was a good linear relationship ,the relative standard de-viations were 3.18%for sorbic acid ,2.74%for benzoic acid and 2.15%for saccharin sodium.The recoveries ranged from 90%to 100%for the targeted components.Conclusion The method is simple ,rapid ,reliable and accurate ,which is suitable for the determination of food additives.Key words

high performance liquid chromatography ;food ;sorbic acid ;benzoic acid ;saccharin sodium

高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠,方便简单快捷。各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定,但是还不够便捷。因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索,

主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠,在碱性条

件下提取钾盐或者钠盐更为简单,

其方法准确可靠,简便快速,便于推广。并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。1材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1

仪器戴安U -3000高效液相色谱仪,水浴锅,超声清洗器。1.1.2

试剂

色谱纯甲醇;超纯水;分析纯正己烷;

分析纯乙醚;分析纯乙酸铵;0.1mol/L氢氧化钠;

10.6%亚铁氰化钾;22%乙酸锌;pH7.2磷酸盐缓冲溶液。1.0mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。

1.1.3色谱条件色谱柱:Agela-Cl8柱(250mm ?4.6mm?5μm);柱温:30?;紫外检测波长:230 nm;流动相:甲醇:0.02mol/L乙酸铵(5?95);流速:1.0ml/min;进样体积:10μl。

1.2前处理方法汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0g于50ml容量瓶中,加入20 30ml纯水后超声脱气10min,用1+1氨水调pH=7,稀释至刻度,经0.45μm滤膜过滤后上机[1,2]。

配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品,放入小烧杯中,水浴加热出去乙醇,用氨水(1+1)调pH 约7,加水定容至50.0ml,经0.45μm滤膜过滤后上机[1,2]。

乳饮料、酱油、醋等基体复杂的液体样品和酱及酱制品类称取2.00 3.00g样品于50ml容量瓶中,加入20 30ml纯水混匀,加入氢氧化钠1.0ml、亚铁氰化钾和乙酸锌各2.0ml,加水至刻度混匀,静置15min后用滤纸过滤,滤液再经0.45μm滤膜过滤后上机。

氢化植物油、蚝油、虾油以及含油量较高的样品类称取1.00 2.00g样品于100ml的分液漏斗中,加入24.0ml纯水,加入氢氧化钠1.0ml,剧烈振摇2min,然后加入正己烷20ml,继续剧烈振摇2min,静置15min后取下层清液经0.45μm滤膜过滤后上机。

含胶基的果冻样品类和凝胶、胶基糖果类称取粉碎的样品1.00 2.00g加1ml乙醚分散均匀,然后加氢氧化钠1.0ml,用水定容至25.0ml,剧烈振摇后于60? 70?水浴30min,冷却后上清液经0.45μm滤膜过滤后上机。

乳脂糖果类称取粉碎的样品1.00 2.00g、调味糖浆类称取2.00 3.00g样品,加氢氧化钠1.0 ml、亚铁氰化钾和乙酸锌各2.0ml,用水定容至25.0 ml,剧烈振摇后于60? 70?水浴30min,冷却后取上清液经0.45μm滤膜过滤后上机。

风味冰、冰棍类直接自然融化后称取10.00g样品于50ml容量瓶中,定容至刻度后振摇提取4h,静置15min后过滤取滤液经0.45μm滤膜过滤后上机。

复合调味料类称取样品2.00 3.00g于25ml 容量瓶中,加10ml磷酸盐缓冲液振摇提取4h,再用磷酸盐缓冲液定容至刻度并混匀,静置15min后过滤取滤液经0.45μm滤膜过滤后上机[3]。

2结果与分析

2.1样品前处理氢氧化钠有沉淀蛋白质的作用。而且不管样品中含的是不是苯甲酸、山梨酸的钠盐都可以先加氢氧化钠将溶液碱化,作用是将山梨酸、苯甲酸转化为水溶性的钠盐和糖精钠一起容易用水提取的方法处理[4]。一般油脂含量较高的样品都可以先用水提取后再用正己烷除去油脂。蛋白质含量高的样品都需要加入亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质[5]。二氧化碳和乙醇含量高的液体样品都可以先加热除去。最终的提取液都为碱性,一般可在定容前用0.1mol/L硫酸溶液调pH为7左右[6]。最后的处理液都必须过0.45μm 的滤膜后上机,以免对仪器损害。

2.2标准曲线用1.0mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准储备液稀释成含量分别为0、0.010、0.020、0.050、0.100和0.200mg/m1混合标准使用液。保留时间定性,峰面积定量。山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准曲线的线性良好,r值均在0.999以上。混标分离度好且互不干扰测定,结果见图1。样品干扰少,峰形好(图2)

图1

混标的色谱图

图2样品散装酱腌菜中的苯甲酸和糖精钠

2.3方法检出限根据仪器的4倍信噪比所对应浓度作为仪器的检出限,则称样量为10g液态食品,山梨酸、苯甲酸、糖精钠的检出限分别为1.2、1.0、1.5

mg/kg;称样量为1.0g的半固体和固体食品,山梨酸、苯甲酸、糖精钠的检出限分别为6.0、5.0、7.5mg/kg。

2.4方法的精密度测定6个不同浓度且均含有3种成分的样品,每个浓度重复测定6次,得到3种成分测定的标准偏差分别为山梨酸

3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%,测定结果的偏差均在允许范围内,说明该方法处理后测定的重现性较好。

2.5方法的准确度分别取不同种类的样品,并分别加入一定浓度的山梨酸、苯甲酸、糖精钠,然后各自进行加标回收试验,测得回收率为91.7% 98.8%(表1)

2.6干扰实验在模拟样品中加入常见的食品添加剂,如甜蜜素、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄以及柠檬酸、酒石酸、草酸、咖啡因等不干扰测定[7](图3)

图3干扰试验

2.7样品测定结果试验采集了覆盖南充3个城区的60份样品,其中密封包装的和散装的各占一半。山梨酸超标的样品有6份,均为散装样品;苯甲酸超标的样品有8份,散装的占7份;糖精钠超标的样品有5份,散装的占4份。结果显示散装食品样品中3种成分超标率远远高于密封包装的同类产品,因此必须重点监控小作坊生产的自制散装产品,以保护广大消费者的食品安全。

3参考文献

[1]GB/T5009.28-2O03食品中糖精钠的测定[S].

[2]GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的测定[S].

[3]GB/T23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱[S].

[4]王坤,唐洪.用反相高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠[J].江苏预防医学,2010,21(1):51-52.

[5]张春玲.高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠[J].中国卫生检验杂志,2007,17(5):936-937.

[6]吴燕.高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠方法的探讨[J].中国卫生检验杂志,2007,17(3):465-467.

[7]李惠彬.反相高效液相色谱法测定9种食品中乙酰磺胺酸钾、苯甲酸、山梨酸、糖精钠方法的研究[J].中国卫生检验杂志,2007,17(7):1173-1174.

(收稿日期:2010-11-05)

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