LeicaSP8激光扫描共聚焦显微镜快速操作手册2013-5-13

Leica激光扫描共聚焦显微镜

快速操作手册

制作：徕卡显微系统（上海）贸易有限公司

2013年3月

目录：

1 系统的组成

系统组成 (3)

光路示意图 (4)

2 系统的使用

2.1 开机顺序 (5)

2.2 软件界面简介 (7)

2.3 在显微镜下观察样品 (8)

2.4 采集共聚焦图像 (9)

2.5 XYZ三维扫描（Z-Stack） (11)

2.6 时间序列扫描（Timeseries or xyt Scan） (15)

2.7 波长扫描（xyλScan） (16)

2.8 HyD检测器 (17)

2.9 图像的保存及输出 (18)

2.10 关机 (20)

3 系统的维护 (21)

Leica SP8 系统组成图

1可见波长激光或白激光15UVIS, HIVIS或VISIR的光路镀膜

2声光调制器（AOTF）16扫描视场旋转镜（Abbe-Konig 旋转）* 3红外激光（IR）* 17在NND位置上的反射光检测器（RLD）* 4电光调制器18物镜（可提供各种选择）*

5紫外激光* 19在NND位置上的透射光检测器（TLD）* 6 AOTF或直接调制器（DMOD）20正方型针孔

7STED 激光* 21Fluorifier盘*

8Setlight监控二极管22X1出口接口*

9AOBS, 及其他选配件23外置检测器*

10用于FRAP的光束增强镜* 24色散棱镜

11红外激光耦合25分开的荧光光谱

12与CS2紫外光路耦合的紫外激光26最多5个光电倍增管或4个HyD检测器

13STED激光耦合*选配组件

14全视野扫描镜及串行高速扫描镜选件

2系统的使用

2.1 开机顺序 （硬件标号请参考前面的系统组成图）

（1）因为FSU 和CSU 硬件的电源控制 ）不同，请分别按照如下步骤开机：

FSU

系统

CSU 系统

依次打开“PC Microscope

”、“Scanner Power ”、“Laser Power ”三个按钮，将“Laser Emission ”上的激光开关钥匙旋至“On-1

注意：显微镜控制器的开关 一般是常开的，在打开“PC Microscope ”按钮后指示灯应该点亮，如果不亮，请打开其开关。

先按电脑主机上的电源按钮启动电脑，再打开显微镜控制器 的开关，然后依次打开 “Scanner Power ”、“Laser Power ”两个按钮，将“Laser Emission ”上的激光开关钥匙旋至“On-1

（2）打开荧光激发光源

（按绿色的Power 按钮，如右图）

光源亮度调节旋钮 光闸 Power 按钮

（3）电脑进入操作系统界面后，双击电脑桌面“LAS AF”图标启

动共聚焦操作软件。

（4）进入配置选择界面后，在

“Configuration”下拉菜单中选择需要的

配置；（其中带有“simulator”字样的为模

拟方式，该方式不控制显微镜硬件，不能

拍摄图像，适合处理数据）“Microscope”

菜单中选择显微镜型号；（图中“Resonant”

选项为快扫功能，可按需要打开或关闭，

只有配备了快扫功能的系统才会显示该

选项），点击“OK”，系统继续启动。

（5）在“Initialize Stage”提示界面选择是

否初始化载物台（如果选择“No”，则Tile scan、

Mark&Find和Matrix功能不能使用）。

注意：如果配置的是手动载物台，则不

会跳出该提示界面。

（6）系统自检完后，进入LAS AF操作界面，

点击界面最上方“Configuration”按钮进入配置界面→点击左边“Laser Config”按钮→打开所需激光（OFF→ON），Argon激光还需拖动右方滑块以调节激光输出功率

2.2软件界面简介

功能界面切换：参数设定（Configration）、扫描取图（Acquire）、图像处理（Process）、定量测量（Quantify）

工具和文件管理界面切换：Experiments界面下显示当前拍摄和打开的图片，Acquisition下显示的是当前功能界面的功能按钮和参数

拍摄参数：包括图像像素Format、扫描速度speed、图像放大Zoom factor、视野旋转Rotation等。

三维扫描工具组，用于设定和显示三维扫描的Z轴范围，及其他辅助设定

光路显示及设置区域，从上向下直观显示了从激发到荧光检测的光路细节和关键设置图像显示窗口预设光路选择按钮

激光控制栏分光镜选择按钮

物镜选择按钮预览按钮，可用于开始和停止预览拍摄图像按钮

叠加图像显示按钮，在使用两个或以上数量通道拍摄多色图像时，用于显示所有通道叠加后的图像

界面缩放调节滑块，左右拖动可以调节界面项目的显示比例

界面调整栏，左右拖动可调整光路设置区域与图形显示窗口的范围

2.3在显微镜下观察样品

2.3.1选择物镜：可通过显微镜主机右侧的物镜转换按钮，或软件中的“Objectives”按钮进行选择（如下图）。（在显微镜设置软件Leica AF Hardware Configurator 中可设定最下方的红圈中的按钮为干/油镜转换，在干/油镜之间切换时需要先按一下此按钮才能完成转换）

2.3.2明场观察：将样品置于载物台上，按显微

（因

镜左侧的TL/IL按钮打开明场光路（如右图）

显微镜所处状态不同，有时候需要按两次才能

打开），在明场条件下选择合适的视野。通过

调焦按钮或旋钮调节至合适的z轴平面，通过

显微镜主机左侧的“INT”功能键调节光强。

如果是电动载物台，需通过遥控手轮调节

载物台的运动以选择合适的视野（如下图）。

2.3.3按显微镜前面板的荧光滤块选择按

钮切换至荧光观察光路（如右图所示），其

上的标注与荧光颜色的对应关系为：I3 -

绿色，N2.1--红色，A—蓝色，有些配置的

显微镜按钮对应的荧光颜色可能会有所不

同，请以实际情况为准。

再按荧光光闸按钮（SHUTTER）打开

荧光，进行样品的荧光观察。

2.3.4观察完毕后，按显微镜前面板上的

“SHUTTER”按钮以保护样品

2.4采集共聚焦图像

2.4.1光路设置：

调用已有的设置：选择“Load/Save single

setting”下拉菜单中已有的设置，激光波长及

其输出功率、分光镜、检测波长范围、检测器

gain 及offset都会自动设置，包含几种最常用

的荧光染料。选择某一设置后，可按样品的实

际情况对参数进行优化（如后述），并以新的

名称保存。（如右图）

修改已有设置：可改变所选激光、调节激

光输出功率、改变分光镜、改变所选PMT、调

节PMT 检测范围、调节PMT 的gain 或offset

等。如下图。

建立新的设置：也可从零开始建立新的设置。选择所需激光及其功率、适宜的分光镜、检测器及检测波长范围。

分光镜选择原则：根据所用激光

波长来选择合适的分光镜。

○1405激光选择Substrate；○2其

他可见波长的激光根据其波长选择分

光镜，如488激光可选择DD488/552、

TD488/552/638分光镜。○3RT 15/85分

光镜所有波长激光都可用，但是会损

失85%的激光能量和15%的荧光能量，一般在进行光谱扫描的时候选用。

Sequential Scan:若染料的发

射光谱有重叠，为减少串色，成像

时每种染料要单独激发，或者说，

每次只用一种激发光激发，并只检

测一种染料。可用Sequential Scan

来实现。（如右图）激活Sequential

Scan功能，可在下面的Seq中分别

设置各个染料的激发和检测光路。

2.4.2选择扫描模式

默认模式为xyz 扫描，是最常

用的扫描模式，可用于xy 扫描和

z 轴层切（xyz 扫描）。还可在下拉

菜单中选择由x，y，z，t （时间）

以及λ（波长）组合而成的多维扫

描模式，如xzy，xyt，xyλ，xyzt，

xyzλ，xyzλt 等。

2.4.3设置扫描参数

包括分辨率（format）、扫描速

度（speed）、针孔大小（pinhole）、

线平均（line average）、面平均

（frame average）、累加

（accumulation）及放大倍数（Zoom）

等。（如右图）

分辨率：默认值为512×512。也可选择更低或更高分辨率。分辨率越高，所获取的图像文件越大，采图所需时间也越长。

扫描速度：默认值为400Hz。活细胞或运动的样品成像可能需要更快的速度。可选择双向扫描（Bidirectional X）来达到更高速度，这时可能需要进行相位校准（Phase correction）。

针孔大小：默认值为1AU。如果增大针孔直径，可增加信号强度，但是所获取图像的共聚焦效果会降低，光切厚度也会随之增加。

平均：用于降低背景噪音。分为线平均（Line average）和面平均（Frame average），可在下拉菜单中选择平均的次数。

累加：仅用于荧光非常弱的样品

2.4.4预览图像

点击软件Acquire界面左下方的“Live”按钮以预览图像（下图），图像将显示在右侧的显示屏上。

预览开始后，“Live”按钮变为“Stop”，点击“Stop”按钮可停止预览。

注意：一旦预览开始，激光开始照射样品，为减少对样品的伤害，应快速操作，尽量减少预览的时间。

建议：点击Live按钮之前，可调节format至512×512，speed至600Hz 以获得较快的刷新频率。

预览应达到以下目的：○1找到最适合观察的焦平面；○2使图像亮度动态范围达到最佳。

可通过调节控制面板的“Z Position”旋钮找到最适合观察的焦平面（如下图）；或者调节遥控手轮或显微镜镜体上的调焦旋钮（见第8页图）。

图像亮度动态范围可通过调节激光输出功率（见第9页图）、Smart Gain和Smart Offset（见上图）。

参数的调整原则：

（1）Smart Gain的调节：增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。一般情况下，Gain值的正常范围为500—1000；

（2）Smart Offset的调节：可扣除背景噪音，但标本信号也有一定程度的扣除。原则上，在保证图像质量的前提下，Digital Offset值越接近于0越好；

（3）另外，对于每个通道，需要灵活调节激光的强度：激光强度越高，则信号越强，同时标本更容易被漂白或淬灭。当PMT gain值高于800或HyD gain值大于100%时荧光图片亮度还是不够时，可以考虑适当增加激光强度。在做活细胞或者光切时，应尽量减少激光强度，原则上，在保证图像质量的前提下，激光强度越低越好。

图像亮度动态范围的判断方法：

理想的荧光图像中应该只有少数像素点达到饱和，可通过位于图像左侧的LUT按钮进行观察。。LUT 按钮（下图红圈）可在LUT（即指定的荧光颜色，也称伪彩）、“Glow Over Under （GlowOU）”和灰度图三档之间切换。在GlowOU 模式中，灰度值达到饱和的像素点显示为蓝色，而灰度值为0的像素点显示为绿色。调节Smart Gain使图像中仅少数像素点呈蓝色，调节Smart Offset来降低图像的背景。荧光图像Smart Offset的默认值为0%，通常应将其调为负值以使图像背景呈绿色。下图中B图亮度及背景值设置均未达最优化值，调节Smart Gain和Smart Offset后，达到C图中的效果，部分信号呈蓝色，而背景呈绿色。

对于HyD检测器，其背景噪声很低，无需通过调节Smart Gain来降低背景。

对透射光图像，同样可以调节透射光PMT 的电压和偏移值来进行优化，有时可将Smart Offset调至高于0%以增加对比度。

如果启用了Sequential Scan，在应该在每个扫描序列（Seq）分别通过预览来调整图像亮度。

2.4.5采集图像

对于单通道染色，或多通道染色同时扫描，单击“Capture Image”按钮采集图像。对于序列扫描，或多维图像扫描，单击”Start”按钮进行图像采集。（见下图）在此之前可改变扫描分辨率、线/面平均次数等扫描参数。

扫描分辨率的设置原则：

通常情况下，采集图像时，为充分利用物镜的分辨能力，可直接点击“Optimize xy Format”按钮（如下图），由系统自动设置最佳分辨率。

根据Nyquist 采样原则，像素点大小（Pixel Size）应为物镜侧向分辨率（即

xy 平面分辨率）的2/5~1/2。物镜分辨率可点击物镜参数表按钮从弹出的界面读取，像素点大小可在采图参数设置界面获得。像素点随扫描分辨率增大和放大倍数（zoom）增加而减小。与高倍物镜相比，低倍物镜需要更高的扫描分辨率。

2.5 XYZ三维扫描（Z-Stack）

xyz 扫描模式为默认采图模式，加上Z轴扫描多个层面，

适合观察样品中目标的空间分布。

现有的LAS AF软件3.0和3.1版本Z-Stack的设置界面不同

（如下图所示），但是基本采图流程类似。

2.5.1选择Z轴驱动方式

根据不同的系统配置，可以点击Z轴驱动方式按钮选择“z-Galvo”或者“z-Wide”方式：

“z-Wide”：使用显微镜固有的Z轴调节方式，倒置显微镜调节物镜的升降，正置显微镜调节载物台的升降，可通过显微镜镜体的调焦旋钮和遥控手轮的调焦旋钮控制。

“z-Galvo”：使用选配的SuperZ进行精细的Z轴调节，只能通过控制面板的“Z Position”旋钮控制。

2.5.2设置光路参数，方法同前。

2.5.3 设置Z轴范围

点击“Live”进行图像预览，调节z 轴至层切所需的起点，点击扫描起始设

置按钮定义层切起点，调节z 轴至层切所需的终点，点击扫描结束设置按钮定义

层切终点，点击“Stop”终止图像预览。

2.5.4 Z轴参数调整

此时xyz 层切菜单中显示的“z-step size”（相邻两个光切面的间距）和“Nr. of steps”（层切数目）为系统的优化值（“system optimized”）。也可点击“Nr. of steps”左侧的按钮，然后对相邻光切面间距或层切数目进行自定义。

2.5.4 采图

选择合适的分辨率和扫描线速度，点击”Start”进行xyz 图像的采集。

采图完毕后，3.1版本的点击清除已设位置按钮，3.0版本的分别点击扫描起始和结束位置设置按钮，使其变为灰色，使Z轴位置重新处于未定义状态，以免

影响下次采图。

2.5.5 3D展示

拍摄完3D图像之后，在图像显示窗口右侧会多出3个用于3D图像显示的按钮：最大亮度投影按钮（Maximum projection）: 将所有Z平面的图像信息选取最亮的点集中显示在一层，相当于将多层图像压成一层，多用于集中显示跨越多个层面的结构信息。

正交剖面方式按钮（Orthogonal section）: 分别以XY、YZ、XZ三个方向显示指定位置的剖面信息，如下图，多用于观察结构在3D空间内的定位。

3D立体模式按钮（Open in 3D viewer）: 打开3D可视化模块，以直观方式展

示3D结构，如下图，该模块功能强大，有多种参数可以调整显示方式，亦可以将所观察到的图像输出成视频。

2.6时间序列扫描（Timeseries or xyt Scan）

时间序列扫描多用于活细胞成像，记录动态过

程。

2.6.1在“Acquire”菜单栏的“Acquisition”中

选择xyt 扫描模式后，将出现xyt 扫描菜单，如右图。

2.6.2设置光路参数，方法同前。

2.6.3定义“Time Interval”，即采集相邻两帧图

像所需的时间间隔，也可选择最小值“Minimize”。

2.6.4 按采图需要选择“Acquire until stopped”、

“Duration”或“Frames”。

若选择“Acquire until stopped”，则图像将持续

采集，直至手动终止。

若选择“Duration”，可定义采图所需的总时间。

若选择“Frames”，可定义所需的图像帧数。

2.6.5选择合适的分辨率和扫描线速度，点击

“Start”进行时间序列图像的采集。

2.7波长扫描（xyλScan）

波长扫描常用于自发荧光或新染料发射

光谱的检测，如果有串色严重的标本需要进行“Spectrum Dye Seperation”，必须进行波长扫描。

2.7.1在“Acquire”菜单栏的“Acquisition”中选择xyλ扫描模式后，将出现波长扫描菜单，同时检测通道变为如下方式：

2.7.2 选择合适的激发光和分光镜，分光镜一般选择RT 15/85。

2.7.3定义“Detection Begin”（需检测的发射谱起点）和“Detection End”（需检测的发射谱终点）。起点所在波长应大于激发波长。

2.7.4定义“Detection Band Width”（接收的带宽），通常为10nm。如果图像较暗，可以增加带宽，但是光谱数据的精度会降低。

2.7.5定义“No. of Detection steps”（采集的帧数）或“λ-Detection Stepsize”（波长步进）。波长步进不应大于接收带宽。

2.7.6选择所用PMT检测器（或HyD检测器）。

2.7.7选择合适的分辨率和扫描速度，点击“Start”进行发射波长图像的采集。

2.7.8扫描结束后，可保存发射光谱信息。操作路径为：

“Quantify→Tools→Stack Profile”，如下图：

在图像窗口的右下角，拖动波长λ滑块，显示的图像会随之变化，选取有典型结构的一张；

在图像窗口上方选项画图工具，圈一个典型区域，中间的Graphs窗口即显示出该区域的发射光亮度随波长变化的曲线（上图中的绿色曲线）；

在上图所示位置点击鼠标右键，弹出的选项中有一个“Export to Dye Data Base”的选项，点击，弹出命名新染料的对话框；

输入染料名称、激发波长（最大发射波长系统会自动计算出，也可以自己修改）、备注信息等，点击“OK”，新染料数据即被存入系统的染料数据库。

可以通过“Configuration/Dye Database”去查看，加入数据库的染料可用于以后采图的参考。

2.8 HyD检测器

HyD检测器是高性能的检测器，比PMT更灵敏响应速度更快，

并且有更多的功能。HyD检测器有三种操作模式可供选择：

Standard：标准模式，跟PMT一样，检测到的信号直接显示

为图像，可通过调节SmartGain来调节图像亮度。

Counting：光子计数模式，以每个像素点所检测到的光子数

显示为该像素点的亮度，此时检测器的Gain为一个定值，通过长

时间的检测使图像显现出来。常用于非常弱的荧光样本的成像。

使用此模式采图时，需使用累加（accumulation）功能来使采集

到的图像达到合适的亮度。

BrightR：如果视野中有非常亮的结构，但是又需要将较暗的结构显示出来时，

适合用此模式，此模式会在较为暗

的部分使用稍多一些的动态范围，

如右图。

注意：HyD检测器非常灵敏，

如果收集到过强的光信号会影响

其寿命，系统有一个安全机制对此

进行保护，如果信号过强，会先有

声音报警，如果操作者未采取措施，

会自动关闭检测器，同时弹出如下

的提示窗口：

此时应点击“Stop”停止预览，降低激光功率，调低SmartGain值，重新预览。

特别注意：

○1使用HyD成像时，一开始激光功率不要设置太高，应从低开始慢慢增加；

○2不要用HyD检测反射光，因为一般情况下，反射光亮度要大大强于荧光。

2.9图像文件的保存及输出

2.9.1图像文件的操作：

“Acquire”的”Experiment”下显示采集的所有图像文件名称，默认本次开机后采集的所有图像都放在一个文件夹下，右键点击文件名，可进行多种操作。如下图：

选择“Save Experiment”即可将当前文件夹下的所有图片保存为一个文件，文件保存格式为*.lif 原始文件，只能通过Leica LAS AF、LAS AF Lite 或其他专业图像数据处理软件打开。

2.9.2图像文件的输出：

右键点击图像文件名，选

择”Export”进行图像输出，可输出成

图片（.tiff 或.jpeg），三维或多维图

像还可输出成电影（QuickTime、.avi、

MPEG-4、WMV等）。如右图。所得

文件可用普通图像浏览软件打开。

选择”As Tiff”或”As JPEG”，出现如下图的对话框，可选择输出路径、所需标尺及位置等。确定后，点击”OK”，即可将图像输出至指定路径。

2.9.3图像采集参数的观察及恢复：

右键点击图像文件名，选择”Properties of…”，即显示该图像采集时的所有参数设置信息，如图8-5。

点击”Apply Settings”，即可恢复该图像采集时的参数设置。点击”Save as...”，可将所有参数信息输出成.xml文件并存至指定路径。

2.10 关机

（1）保存已采集的图像。

（2）在LAS AF软件Configuration”→“Laser Config”界面关闭所有激光。

（3）关闭显微镜荧光电源。

（4）若使用过油镜，需用无水乙醚与无水乙醇混合液（体积比7：3）或无水乙醇清洁镜头。

（5）关闭LAS AF 软件。

（6）将电脑桌右侧“Laser Power”按钮右侧的激光开关钥匙（Laser Emission）逆时针旋转90度至“On-0”位置。

（7）关闭“Scanner Power”按钮。

（8）在电脑上进行图像数据的输出。

（9）关闭电脑后，关闭“PC Microscope”按钮（CSU系统需关闭显微镜控制器开关）。

Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明

Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明 操作步骤： 本显微镜的荧光光路与明视场（相差、DIC也属明视场）光路相对独立。当使用明视场时，无需打开荧光光源，进打开总电源即可。当使用荧光观察时，可同时打开总电源和荧光电源。 明视场观察： 1.开机：按动总电源开关“1”处接通电源，此时开关和指示灯点亮，打开显微镜底座左侧的透射照明器开关，从小到大调节照明器开关下方的亮度调节旋钮，使照明亮度适当。 2.首先将聚光器模板A放入光路，用10×物镜对样品进行对焦，调节目镜的屈光度调节环，然后换用40×物镜观察样品。 3.关机：将亮度调节旋钮旋至亮度最暗位置，关掉显微镜底座左侧的透射照明器开关，然后按动总电源开关“0”处关闭电源。 DIC微分干涉观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的DIC模板N1及起偏器、检偏器，将其放入光路后，再使用专用的银白色DIC物镜对焦观察。在观察过程中可旋转起偏器，达到最佳的观察效果。 相差观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的相差模板PH1。 荧光观察： 1.开机：先打开荧光灯电源开关，然后按住电源开关上方的荧光灯激发按钮3秒钟后松开，即可见荧光灯点亮。 2.打开荧光转盘上的荧光拨杆至“0”位置，此时荧光光路打开。旋转荧光转盘，转入所对应的滤光片位置即可进行荧光观察；在观察过程中可插入位于荧光灯源前方的减光片，以改变荧光强度，减弱对活细胞样品的损伤。 3.关机：直接关掉荧光灯电源开关即可。 注意事项： 1.短时间内频繁开关荧光灯电源，将极大的缩短荧光灯寿命。 2.荧光光源打开后即可使用，但必须使用20分钟才可以关闭；关闭30分钟以后才可以再次打开，否则会导致荧光灯损坏。 3.不要同时反方向转动显微镜左右两侧的调焦钮，否则会导致显微镜损坏。 4.粗动调焦钮达到限定位置后，如果继续向同一方向旋转会引起显微镜故障。请不要旋转过度。 5.显微镜光源在工作时会产生高温，因此小心不要接触光源以防烫伤，也不要将易燃品如纸张、布、塑料和酒精等放置于光源附近。

显微镜的使用方法

显微镜的使用方法： 1、实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿 6～7 cm左右。 2、打开光源开关，调节光强到合适大小。 3、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1～2cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至最大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。 4、将所要观察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片。 5、先用低倍镜观察（物镜10X、目镜10X）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近玻片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合（要养成睁开双眼用显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图），并转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。 6、如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。 7、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高倍物镜应可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动微动调焦手轮进行调节。 8、在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。 9、观察完毕应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至最大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤，特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净，检查处理完毕后即可铺上防尘布。 购买显微镜之前，首先先了解自己所要做的实验目的，针对选择合适的显微镜，因显微镜种类多。 普通光学显微镜的使用方法 使用方法：（一）显微镜的主要构造 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。 1.机械部分 （1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。 （2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。 （3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。 （4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。 （5）物镜转换器(旋转器)：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有3－4个圆孔，是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。 （6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，

一显微镜的构造及使用方法

实验一显微镜的构造及使用方法 一、目的要求 1.了解显微镜的构造、性能及成像原理。 2.掌握显微镜的正确适用及维护方法。 二、实验器材 1.显微镜、纱布、绸布 2.酵母菌示教标本 三、普通光学显微镜简介 微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。 显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。光学显微镜包括：明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜都是在此基础上发展而来的，基本结构相同，只是在某些部分作了一些改变。明视野显微镜简称显微镜。 （一）显微镜的构造 普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。 图1-1 显微镜构造 1.目镜 2.镜筒 3. 转换器 4. 物镜 5. 载物台 6. 聚光器 7. 虹彩光圈 8. 聚光镜调节钮9.反光镜10. 底座11. 镜臂12. 标本片移动钮 13. 细调焦旋钮14. 粗调焦旋钮15.电源开关16.光亮调节钮17.光源 1.机械系统： （1）镜座Base：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。 （2）镜臂Arm：连接镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形，作为移动显微镜时的握持部分。 （3）镜筒Tube：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式和斜筒式； 有单筒式的，也有双筒式的。 （4）旋转器Nosepiece：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4个孔，用于安

显微镜测量使用说明

WT-1000GM操作手册 上海微图仪器科技发展有限公司上海巍途光电技术有限公司

相机及操作软件介绍 上海微图仪器科技发展有限公司上海巍途光电技术有限公司专业开发显微镜数字相机CMOS系列(TCA-1.3C,TCA-1.3B/W,TCA-3.0C,TCA-5.0)及CCD 系列(TCC3.3MP、TCC-1.4HICE）广泛应用于显微镜成像、凝胶成像、化学发光成像等众多科研质检生产领域。 WT-1000GM 为通用相机操作、图像处理、图像测量软件，该软件操作方便，功能专业，性能稳定，界面友好，是您工作科研的得力助手。

相机安装及软件操作介绍 1.1 操作系统要求 本公司相机及软件支持windows XP, vista, 2000, 操作系统，但要求系统安装Directshow 9.0 components. 1.2Hardware requirement 1.2.1电脑要求配置 CPU: Intel Pentium 4－2.6G； 内存RAM: 512 MB 硬盘HDD: 10GB USB: USB2.0 interface 安装相机驱动 2.1安装相机 2.1.1. 自动安装 1．打开光盘内TCA-1.3驱动Driver文件夹，运行安装程序 。 2．出现下面窗口，选择下一步。

3．出现该窗口选择，仍然继续4．TCA-1.3已经成功安装到计算机内

5. 安装完毕右下角任务栏会提示硬件安装完成，选择设备管理器可以看到如下 位置有该相机的属性显示。 2.1. 3. 安装软件 直接运行WT-1000GM文件夹里的Sutup.exe文件就可以将软件安装到指定的位置了 1. 双击“setup.exe”

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册 目录: 1 系统得组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明 2 系统得使用 2、1 开机顺序 2、2 软件得快速使用说明 2、3 显微镜得触摸屏控制 2、4 关机顺序 3 系统得维护 1 系统得组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。 系统组成及光路示意图: 电脑工作站 激光器 电动荧光显微镜扫描检测单元 实物照片说明: 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO2 培养系统控制器 激光器 电脑工作站 2 系统得使用 2、1 开机顺序 (1)打开稳压电源(绿色按钮) 等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关 (2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON” 电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON” 扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON” (3)打开[ 电动显微镜开关] 打开[ 荧光灯开关] (注:具有5 档光强调节旋钮) (4)Ar 离子激光器主开关“ON” 顺时针旋转钥匙至“—” 预热等待约15分钟, 将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至 “Laser run”状态,即可正常使用 (5)打开[ 电脑开关],进入操作系统

注:键盘上也具有[ 电脑开关] 2、2 软件得快速使用说明 (1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标 (2)进入ZEN 界面,弹出对话框: “Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、 分析等。 “Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已 存图像数据得处理、分析。 (3)软件界面: 1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用) 2 动作按钮; 3 工具组(多维扫描控制); 4 工具详细界面; 5 状态栏; 6 视窗切换按钮; 7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块 动作按钮: Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。 Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。 Stop ——暂停/结束扫描。 New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。 激光连接状况检查 眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角): Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。) Camera ——光路切换至相机。 LSM ——共聚焦扫描成像光路。 显微镜设置: “Ocular”——> “Light Path”——> 点击物镜图标,选择物镜——> 样品聚焦。 透射光控制(Transmitted Light Control) 反射光光闸控制(Reflected Light Shutter) 荧光激发块选择(Reflector) 共聚焦LSM 扫描设置 点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路: 光路设置: Smart Setup ——自动预设光路 选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法, 应用“Apply”。 (注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫 描。Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺 序扫描。Best promise 为兼顾速度与信号得折

S4800扫描电镜操作说明书

冷场发射扫描电子显微镜S4800操作说明（普通用户） 燕山大学材料学院材料管A104（场发射，钨灯丝） 编写人：李月晴吕益飞 普通用户在熟练操作1个月后，如无不良记录，可申请高级用户培训。 高倍调清晰：局部放大(Red) →聚焦Focus→消像散 一、日常开机 1，开启冷却循环水电源。 2，按下Display开关至，PC自动开机进入用户界面并自动运行PC_SEM程序，以空口令登入。 3，打开信号采集开关，位置打到1，为打开。 4，打开电源插排的开关。 5，打开装有EDS软件的主机电源。 6，记录仪器运行参数(右下角Mainte)，即钨灯丝真空度。如：IP1：0.0×10-8Pa；IP2：0.0×10-8Pa； IP3：9.6×10-7Pa。PeG-1，<1×10-3；PeG-2，<1×10+2。 注意：PeG≤1×10-3Pa时才能加高压测量。记录的参数：①点Flashing时会显示：In2(Ie)Flashing时电流最大值，如32.9μA；②加上高压后会显示，V ext=3.4kV。 二、轰击（点flashing，即在阴极加额外电压） 目的：高温去除针尖表面吸附的气体 1，最好在每天开始观察样品前一时做flashing； 2，选择flashing intensity为2 ； 3，若flashing运行时Ie小于20μA，则反复执行直至Ie值超过20μA且不再增加。 4，若flashing后超过8个小时仍继续使用，重新执行flshing 。 三、加液氮 容积不要超过1L，能维持4~6h。 四、样品制备及装入 样品制备简单，对样品要求较低，只要能放进样品室，都可进行观察。 1，化学上和物理上稳定的干燥固体，表面清洁，在真空中及在电子束轰击下不挥发或变形，无放射性和腐蚀性。 2，样品必须导电，非导电样品，可在表面喷镀金膜。 3，带有磁性的样品，由于物镜有强磁性，制样必须非常小心，防止在强磁场中样品被吸入

显微镜的使用方法与步骤

WORD格式 附：显微镜的使用方法与步骤 一、取镜和安放 1．右手握住镜臂，左手托住镜座。 2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘 7 厘米左右处）。安装 好目镜和物镜。 二、对光 3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔( 物镜的前端与载物台要保持 2 厘米的距离 ) 。 4．把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内( 右眼睁开，便于以后同时画图) 。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以看到白亮的视野。 三、观察 5．把所要观察的玻片标本（也可以用印有“ 6”字的薄纸片制成）放在载物台上， 用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。 6．转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以 免物镜碰到玻片标本）。 7．左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清 物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 8．高倍物镜的使用：使用高倍物镜之前，必须先用低倍物镜找到观察的物象， 并调到视野的正中央，然后转动转换器再换高倍镜。换用高倍镜后，视野内亮度变暗， 因此一般 选用较大的光圈并使用反光镜的凹面，然后调节细准焦螺旋。观看的物体数目变少， 但是体积变大。 四、整理 8．实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器，把两个物镜偏到两旁， 并将镜筒缓缓下降到最低处，反光镜竖直放置。最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。 《注意事项》： 1、严忌单手提取显微镜。 2、若须移动显微镜，务必将显微镜提起再放至适当位置，严忌推动显微镜（推动时造 成的震动可能会导致显微镜内部零件的松动，切记!! ），使用显微镜请务必小心轻放。 3、使用显微镜时坐椅的高度应适当，观察时更应习惯两眼同时观察，且光圈及 光源亮度皆应适当，否则长时间观察时极易感觉疲劳。 4、转动旋转盘时务必将载物台降至最低点，以免因操作不当而刮伤接目镜之镜头。 5、标本染色或其它任何操作皆应将玻片取下，操作完成后再放回载物台观察， 切勿在载物台上操作，以免染剂或其它液体流入显微镜内部或伤及镜头。 6、观察完一种材料，欲更换另一种材料时，务必将载物台下降至最低点，换好 玻片后再依标准程序重新对焦，切勿直接抽换标本，以免刮伤镜头或玻片标本。 7、用毕显微镜应将载物台下降至最低点，并将低倍镜对准载物台中央圆孔处， 将电源线卷好，盖上防尘罩，并收入存放柜中。 专业资料整理

Nikon 80i荧光显微镜使用说明

Nikon 80i荧光显微镜使用说明 △荧光显微镜属贵重仪器，未经保管人员同意请勿擅自使用。 △严格按照操作步骤进行，在使用过程中如发现问题应及时向保管人员反映。 △因违反操作规程，而导致仪器损坏，根据本中心《损坏仪器赔偿制度》进行赔偿。 △使用者在使用完毕后应进行登记. 维护和保养 本仪器应定期进行维护和保养。 ●防止镜头霉变，定期除湿。 ●为防止损坏荧光灯泡，荧光光源关闭后，15分钟内不得再重新开启。 ●荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，如发现荧光强度明显降低应更换荧光灯泡。 荧光显微镜操作步骤 △显微镜系精密仪器，务请不要碰击，要仔细耐心使用。 △荧光光源关闭后，15分钟内不得再开启。 △荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，因此每次使用时请尽量缩短时间。 1.插上电源插座，打开主机电源开关。 2. 将待检标本置于载物台上。 3. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。 4. 调节光圈及灯光强度至合适位置。 5. 调节粗调和微调使标本至最清晰。 6. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。 7.保存图象至电脑中。 8. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。 ●荧光光源操作 1.插上荧光光源电源插座，打开荧光光源电源开关。 2. 打开光栅。 3. 根据使用荧光素的不同选择不同的荧光滤光片。 4. 将待检标本置于载物台上。 5. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。 6. 调节粗调和微调使标本至最清晰。 7. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。 8. 保存图象至电脑中。 9. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。 10. 登记使用情况。 Nikon 80i主要技术参数：放大倍数40-1000，CFI60无限远光学系统，内置滤色镜，数字成像头。明场、暗场、简单偏光、荧光/明场、荧光/暗场。波长：330-380，450-490，510-560。主电压90~250V。频率：50~60HZ。功率消耗：最大160W。周围环境温度：10~36℃。相对湿度：0~80%。污染级别：2。 应用范围：正置明场、相差及荧光，主要用于细胞及细菌等的观察及荧光摄影。

显微镜成像系统操作指南

显微镜成像系统操作指南 1开机遵循先开硬件再开软件原则。依次开启CBH显微镜电动部件控制器、液晶屏操作器、LED光源、CCD成像系统（MYO和HQ2）。 2等待显微镜电动部件以及LED光源自检完毕后点击桌面“MetaMorph”图标打开软件。 3点击软件左上角“Illum”图标，选择实验需要的观察方式（荧光或者DIC）。4从屏幕右侧的快捷菜单点击“Eyepiece MYO”或者“Camera”选择光路。5点击快捷菜单中“HQ2”或者“MYO”选择相机。 6点击“Illum”图标右边光圈标志，打开所设观察方式的光闸，获取光源，并通过显微镜电动控制部件相应按钮调节至合适光强。 7更换观察方式之前，先点击“Illum”图标右边光圈标志关闭光源，再从“Illum” 下拉菜单中选择需要的观察方式，重复步骤4。 8点击软件“Acquire”打开下拉菜单，点击“Acquire”打开拍照界面。 9点击“Show Live”打开相机显示界面。 10选择合适的物镜后调节显微镜调焦旋钮聚焦后，先通过自动曝光选最合适的曝光时间，然后通过调节光强或曝光时间以获得最佳成像效果。 11点击“Acquire”拍摄图像并保存成适当格式。 12关机遵循先关软件再关硬件原则。关闭“MetaMorph”软件后依次关闭各硬件。 13图片处理： （1）打开MetaMorph-file中的open选中需要处理的照片并打开，选择Overlay Images,在出现的窗口中选择所需模块，点击NONE选择对应颜色的图片，点击apply，即可得到merge后的图片。 将merge图片放大至100%，选择file-save as,命名并保存。 选择Edit-duplicate---as displayed,然后关闭图片，按照提示进行保存。 （2）如若不需要merge,则将图片放大至100%，选择Edit-duplicate---as displayed,然后关闭图片，按照提示进行保存，此时保存的图片可以直接看到，（若此时选择save as，打开的图片则必须在MetaMorph才能看到）。 Notice:桌面上的offline图标为离线图片处理软件，若只需图片处理，只开电脑，不开硬件，双击此图标即可应用。

荧光显微镜操作手册簿

荧光显微镜操作手册 Olympus BX51 物镜： 4 ×0.16 （无DIC） 10×0.40 20×0.75 40×1.00 oil 100×1.40 oil 荧光滤色块转盘： 1. WU 蓝 2. WIB 绿（长通） 3. WIBA 绿（带通） 4. WIG 红 5. CFP 青 6. YFP 黄 操作步骤：（注意：样品须在低倍镜下放置和取下） DIC观察：

1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 3.将起偏器、检偏器、DIC棱镜推入光路，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜应 与相应的物镜倍数相匹配 4.先选用低倍物镜（“10×”） 5.调节透射光的强度，调节焦距，找到视野 6.换到高倍镜头，观察样品 7.DIC观察时，光路选择拉杆拉到中间位置，既可观察，也可拍照 荧光观察： 1.打开明场电源开关 2.打开汞灯电源开关 3.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 4.检偏器、DIC棱镜在光路外 5.将荧光光路shutter打开（“○”为开，“●”为关），需保护样品时关闭shutter 6.光路选择拉杆推至最里边 7.根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置 8.通过两组减光滤片调节激发光强度 9.从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野， 10.依次换到高倍镜头，观察样品 11.拍照时光路选择拉杆完全拉出 普通明场观察： 1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 3.起偏器、检偏器、DIC棱镜在光路外，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜拨到 明场（BF）位置 4.先选用低倍物镜（“4×”） 5.调节透射光的强度，调节焦距，找到视野 6.依次换到高倍镜头，观察样品 7.光路选择拉杆拉到中间位置既可观察，也可拍照 关机： 1.关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次 开启） 2.将透射光调到最小，关闭明场电源开关 3.将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头 4.确认数据已经保存，关闭软件 5.使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据） 6.关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况

显微镜使用方法步骤

显微镜使用方法步骤 (一)实验时要把显微镜放在桌面上，镜座应距桌沿6～7cm左右，打开底光源开关。 (二)转动转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。然后用双眼注视目镜内，调整光源强度，把聚光镜上升，把虹彩光圈调至最大，使光线反射到镜简内，这时视野内呈明亮的状态。 (三)将所要观察的装片放在载物台上，使被观察的部分位于通光孔的正中央。 (四)先用低倍镜观察(物镜10×、目镜10×)。观察之前，先转动粗准焦螺旋，使载物台上升，使物镜逐渐接近切片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。并转动粗准焦螺旋，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。 (五)如果在视野内看到的物像不符合实验要求(物像偏离视野)，可慢慢移动左右移动尺。移动时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节细准焦螺旋，直至物像清晰为止。6 (六)如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央(将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多)。一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高信物镜应该可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动细准焦螺旋进行调节。7 (七)在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节光圈或聚光器，使光线符合要求般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱)。8 (八)观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将显微镜复原。并检查零件有无损伤(特别要注意检查物镜是否沾水，如沾了水要用镜头纸擦净)，检查处理完毕后即可放回原处。 注意事项 ? 1.必须熟练掌握并严格执行使用规程。 ? 2.取送显微镜时一定要一手握住镜臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。取送显微镜时要轻拿轻放。 ? 3.观察时，不能随便移动显微镜的位置。 ? 4.凡是显微镜的光学部分，只能用特殊的擦镜头纸擦拭，不能乱用他物擦拭，更不能用手指触摸透镜，以免汗液玷污透镜。 ? 5.保持显微镜的清洁，避免灰尘、水及化学试剂的玷污。 ? 6.转换物镜镜头时，不要搬动物镜镜头，应转动转换器。 ?7.切勿随意转动粗准焦螺旋。使用细准焦螺旋时，用力要轻，转动要慢，转不动时不要硬转。 ?8.不得任意拆卸显微镜上的零件，严禁随意拆卸物镜镜头，以免损伤转换器螺口，或螺口松动后使低高倍物镜转换时不齐焦。 ?9.在使用高倍物镜时，不要用粗准焦螺旋调节焦距，以免移动距离过大，损伤物镜和玻片。 ?10.保持显微镜的干燥。 ?11.用毕后，必须检查物镜镜头上是否沾有水或试剂，如有则要擦拭干净，并且要把载物台擦拭干净，按规定放好。

显微镜的使用步骤

显微镜的使用步骤 1.低倍镜的使用方法： 1）取镜和放置：显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2 寸为宜，便于坐着操作。 2）对光：用拇指和中指移动旋转器(切忌手持物镜移动)，使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时，说明物镜光轴已对准镜筒中心)。打开光圈，上升集光器，并将反光镜转向光源，以左眼在目镜上观察(右眼睁开)，同时调节反光镜方向，直到视野内的光线均匀明亮为止。 3）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位调到通光孔的正中。 4）调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。然后，两眼同时睁开，用左眼在目镜上观察，左手顺时针方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适，可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节，如果在调节焦距时，镜台下降已超过工作距离(>5.40mm)而未见到物象，说明此次操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目地上升镜台。 2.高倍镜的使用方法： 1）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。 2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。 3）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.5－1圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须顺时针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。 使用高倍镜观察的步骤和要点是：（1）首先用低倍镜观察，找到要观察的物像，移到视野的中央。（2）转动转换器，用高倍镜观察，并轻轻转动细准焦螺旋，直到看清楚材料为止。 显微镜使用步骤的流程：

倒置荧光显微镜操作说明

显微镜及数码成像系统操作简要 第一部分观察方法步骤 1、明场观察方法步骤 2、相差观察方法步骤 3、荧光观察方法步骤 第二部分使用IPP拍摄图像流程(相差观察、荧光观察) 第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程(明场观察)

1、明场观察方法步骤 步骤 涉及部件 主开关拨到“I ” 准备工作：柯勒照明光轴中心调节 第一次观察须完成此调试，完成后不需要再调节，直至装卸过部件后，使用过程中请不要扭动聚光镜中心调节旋钮。 ① 聚光镜升高到最高位置 聚光镜高度升降旋钮 ② 用10X 物镜聚焦至清晰 ③ 视场光阑打至最小 视场光阑 ④ 逐步下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像 聚光镜升降旋钮 ⑤ 调节聚光镜中心调节旋钮，使正多边形移至视场中心 聚光镜中心调节旋钮 ⑥ 逐步打开视场光阑，使正多边形与视场边缘内切 视场光阑 ⑦ 稍加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即可 视场光阑

步骤 涉及部件 I ” 载物台、标本夹 3、荧光观察方法步骤 准备工作：高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 步骤 涉及部件 主开关拨到“I ” CD+或CD-钮

主开关拨到“I ” ND 片插槽 /孔径光阑 准备工作： 高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 调整完成后，请不要触动对中部件，如汞灯对中旋钮，视场光阑对中钮等。 ，待弧 载物台

观察筒 视场光阑中心调节钮 第二部分使用IPP 拍摄图像流程 1. 在桌面点击以下图标打开IPP。 2. 在菜单栏中，（采集）Acquire 菜单下点击（视频/数字图像采集）Video/Digital Capture，或点击工具栏中，即出现控制CCD 拍照的对话框。

2020年生物中考考点复习巩固训练(03) 显微镜的构造与使用

课时训练(三)显微镜的构造与使用 (限时:40分钟) |基础达标| 1.[2018·湘潭]在“观察洋葱鳞片叶内表皮细胞”的实验操作考试中,小明在显微镜视野内只能看清细胞壁和细胞核,看不清液泡。为了能让细胞质与液泡的界面更明显,此时可() A.改用凹面镜反光,放大光圈 B.改用平面镜反光,缩小光圈 C.改用凹面镜反光,缩小光圈 D.改用平面镜反光,放大光圈 2.[2018·娄底]小敏同学在使用显微镜的过程中出现的问题与对应的解决方法,正确的是() A.物像不清晰——调节光圈 B.物像偏右下方——向左下方移动玻片 C.视野较暗——用平面镜反光 D.物像太小——换高倍目镜或高倍物镜 3.[2019·绵阳]在练习使用显微镜的实验课上,某些同学对调节镜筒进行了下列操作,正确的是() A.先转动细准焦螺旋,再转动粗准焦螺旋 B.转动细准焦螺旋时,会使镜筒快速升降 C.逆时针转动粗准焦螺旋,会使镜筒缓缓下降 D.镜筒下降时,要从侧面看物镜和玻片的距离 4.[2019·衢州]在用显微镜观察洋葱表皮细胞时,下列镜头组合中观察到细胞最大的是() A.目镜5×、物镜4× B.目镜10×、物镜4× C.目镜5×、物镜10× D.目镜10×、物镜10× 5.[2019·衡阳]图K3-1是某同学在显微镜下观察到的人体细胞图像,若要把该物像移到视野中央,载玻片应向移动() 图K3-1 A.左下方 B.右下方 C.左上方 D.右上方

6.人类对细胞的认识得益于显微镜的发明。如果在显微镜视野中的图像是“b”,请问玻片上应为() A.q B.b C.p D.d 7.[2018·广东]使用显微镜时,可用图K3-2快速判断“污物”的位置,图中①②分别为() 图K3-2 A.装片、目镜 B.装片、装片 C.目镜、目镜 D.目镜、装片 8.[2019·临沂]图K3-3中甲是不同放大倍数的目镜(5×、16×)和物镜(10×、40×),乙是在甲中选用的一组能放大160倍的镜头组合所观察到的物像。欲将乙视野中的物像移至视野中央并放大到640倍进一步清楚地观察。下列操作中错误的是() 图K3-3 A.将装片向左上方移动,使细胞位于视野正中央 B.目镜不需要换,转动转换器将物镜换成镜头③ C.将显微镜的光圈调小,反光镜调成平面镜 D.物镜换成高倍镜后,如果视野模糊,应调节细准焦螺旋 9.[2019·绵阳]小张在制作人的口腔上皮细胞临时装片时,需要用碘液对细胞染色,为了让碘液浸润标本全部,图K3-4所示操作正确的是() 图K3-4

荧光显微镜 倒置荧光显微镜

致测维产品用户： 感谢您明智地选择了测维-里万光电的产品。 从您开始使用测维产品的那一刻起，测维便与您结下了不解之缘，无论何时，无论何地，您将享受测维切实和认真的服务。 测维更希望把您的要求作为我们的追求，以使测维产品的质量、性能、服务日臻完善。因此，您的任何建议和意见，我们都将予以充分的重视。 测维的信箱是：cwsh@https://www.sodocs.net/doc/1d5930003.html, 如果您想更多地了解测维的产品，欢迎登陆测维的网站：https://www.sodocs.net/doc/1d5930003.html,/或拨打我们的全国客服热线：400-711-6930。 手册导读 请您在使用仪器前务必仔细阅读本手册。 特别提示： 在操作前，务必把仪器左侧粗微动内侧的限位圈松开。 用途： LWD300-38LFT型倒置荧光显微镜是由倒置显微镜和落射荧光显微镜组成。倒置显微镜具有在培养瓶或培养皿内进行显微观察的特点；落射荧光显微适用于荧光显微术。仪器配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、双目观察，还配有特长或长工作距离聚光镜、同时配有相衬装置及相衬物镜，可以观察不经染色的透明活体；落射荧光显微镜采用落射光激发，荧光图象清晰。该仪器特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学，细胞学，肿瘤学，遗传学，免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、医疗、防疫和农牧等部门使用一、规格1.目镜 2.物镜

3.总放大倍数 4.聚光镜：特长工作距离聚光镜（带相衬装置）：工作距离75mm； 5.大台面载物台：移动范围: 75mm×50mm； 6.带限位和调节松紧装置的同轴粗微动调焦系统；微动手轮格值为: 0.002mm； 7.瞳距调节范围：53mm~75mm； 8.照明系统: A.透射照明光源12V30W卤素灯（亮度可调）； B.落射荧光光源100W超高压直流汞灯； 9. 电源电压：110V（60Hz）或230V（50Hz） 10.激发滤色片组： 紫外光(UV)：激发光谱区域：330-400nm；可见荧光起始光谱：425nm. 紫光(V)：激发光谱区域：395-415nm；可见荧光起始光谱：455nm. 蓝光(B)：激发光谱区域：420-485nm；可见荧光起始光谱：515nm. 绿光(G)：激发光谱区域：460-550nm；可见荧光起始光谱：590nm. 11.防霉。

扫描电镜实验报告要求

扫描电镜实验报告要求 第一部分：实验预习报告 一、实验目的、意义 1、了解扫描电镜的基本结构与原理 2、掌握扫描电镜样品的准备与制备方法 3、掌握扫描电镜的基本操作并上机操作拍摄二次电子像 4、了解扫描电镜图片的分析与描述方法 二、实验基本原理与方法 1、扫描电镜的基本结构构造 2、扫描电镜的工作原理 3、扫描电镜成像原理 三、主要仪器设备及耗材 1、JSM-5610 LV扫描电镜 2、JFC-1600离子溅射仪（样品喷涂导电层用） 3、银导电胶、双面胶（制样用） 4、粉末样品、块状样品 四、实验方案与技术路线 1、介绍扫描电镜的基本情况与最新进展（场发射扫描电镜、环境扫描电镜的特点及应用） 2、结合具体仪器介绍扫描电镜的构造与工作原理； 3、重点介绍扫描电镜样品的准备与制备方法，并要求每位同学动手制样，掌握扫描电镜样 品的准备与制备方法； 4、了解扫描电镜的操作过程，掌握二次电子像的观察过程，要求每位同学上机操作，并在 2-4个样品上拍摄2-4张二次电子像图片，要求图片清晰有代表性； 5、仔细观察和分析现场给出的200多张图片，并对某类或某几张自己感兴趣的图片进行描 述（要求总字数150字以上）。 第二部分：实验过程记录 一、实验原始记录 按实验过程进行记录： 1、样品的准备与制备过程 2、仪器操作过程与照片的拍摄过程。 第三部分：结果与分析 一、实验结果与分析 1、现场没描述照片的同学，对“附件二、扫描电镜图片”进行微观形态描述（要求：写清 楚图片或样品名称，不需要打印照片，描述图片张数自己确定，总字数要达到150字以上）； 2、将2-4张自己拍摄的照片打印并粘贴到实验报告上，写上样品名称。 3、总结对扫描电镜实验课的体会。

显微镜的使用方法与步骤

显微镜的使用方法与步骤 实验目的 1练习使用显微镜，学会规范的操作方法。 2能够独立操作显微镜 3能够将标本移到视野的中央。并看到清晰的图像 一、取镜和安放 1．右手握住镜臂，左手托住镜座。 2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处）。安装好目镜和物镜。 二、对光 3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离)。 4．把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于以后同时画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以看到白亮的视野。 三、观察 5．把所要观察的玻片标本放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。 6．转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。 7．左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 四、整理 1实验完毕，用纱布把显微镜的外表擦拭干净。 2转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜筒缓缓下降到最低处，反光镜竖直放置。 3最后把显微镜放进镜箱里，送回原处。 《注意事项》： 1、严忌单手提取显微镜。 2、若须移动显微镜，务必将显微镜提起再放至适当位置，严忌推动显微镜，使用显微镜请务必小心轻放。 3、使用显微镜时坐椅的高度应适当，观察时更应习惯两眼同时观察，且光圈及光源亮度皆应适当，否则长时间观察时极易感觉疲劳。 4、转动旋转盘时务必将载物台降至最低点，以免因操作不当而刮伤接目镜之镜头。 5、标本染色或其它任何操作皆应将玻片取下，操作完成后再放回载物台观察，切勿在载物台上操作，以免染剂或其它液体流入显微镜内部或伤及镜头。 6、用毕显微镜应将载物台下降至最低点，并将低倍镜对准载物台中央圆孔处，收入存放柜中。

显微镜操作步骤和注意事项

操作步骤和注意事项 （一）正置显微镜 1、安放 右手握住镜臂,左手托住镜座,使镜体保持直立.桌面要清洁、平稳,要选择临窗或光线充足的地方.单筒的一般放在左侧,距离桌边3～4厘米处. 2、清洁 检查显微镜是否有毛病,是否清洁,镜身机械部分可用干净软布擦拭.透镜要用擦镜纸擦拭,如有胶或粘污,可用少量二甲苯清洁之. 3、对光 镜筒升至距载物台1～2厘米处,低倍镜对准通光孔.调节光圈和反光镜,光线强时用平面镜,光线弱时用凹面镜,反光镜要用双手转动. 若使用的为带有光源的显微镜,可省去次步骤,但需要调节光亮度的旋钮. 4、安装标本 将玻片放在载物台上,注意有盖玻片的一面一定朝上.用弹簧夹将玻片固定,转动平台移动器的旋钮,使要观察的材料对准通光孔中央. 5、调焦 调焦时,先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒,并从侧面仔细观察,直到物镜贴近玻片标本,然后左眼自目镜观察,左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒,直到看清标本物像时停止,再用细调焦旋钮回调清晰. 操作注意：不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时,应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值. 若使用双筒显微镜,如观察者双眼视度有差异,可靠视度调节圈调节.另外双筒可相对平移以适应操作者两眼间距. 6、观察 若使用单筒显微镜,两眼自然张开,左眼观察标本,右眼观察记录及绘图,同时左手调节焦距,使物象清晰并移动标本视野.右手记录、绘图. 镜检时应将标本按一定方向移动视野,直至整个标本观察完毕,以便不漏检,不重复. 光强的调节：一般情况下,染色标本光线宜强,无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱,高倍镜观察光线宜强.除调节反光镜或光源灯以外,虹彩光圈的调节也十分重要. （1）低倍镜观察 观察任何标本时,都必须先使用低倍镜,因为其视野大,易发现目标和确定要观察的部位. （2）高倍镜观察 从低倍镜转至高倍时,只需略微调动细调焦旋钮,即可使物像清晰. 使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮,否则易压碎盖玻片并损伤镜头. 转动物镜转换器时,不可用手指直接推转物镜,这样容易使物镜的光轴发生偏斜,转换器螺纹受力不均匀而破坏,最后导致转换器就会报废.

扫描电子显微镜操作规程

扫描电子显微镜操作规程 1. 打开墙上配电箱里的空气开关（见标签上开下关） 2. 打开变压器电源（正常电压应为100v） 3. 打开主机电源：钥匙拧到START位置，停两秒松手，钥匙回到I位置。 4. 打开电脑电源 5. 点击桌面图标，等待 6. 当HT图标显示蓝色后，点VENT排气（排气时vent闪，排完气vent不闪），排完气方可打开样品室 7. 正确选择Z轴高度（需要估计样品高度，Z轴大于样品高度 放入样品，关闭样品台，点击EV AC抽气，抽气时推着样品室门，听到机械泵响声后松手 8. 打开HT图标（此图标在非真空下是灰色，真空位蓝色，打开灯丝拍照为绿色） 9. 选择扫描模式、加速电压（0.5-30KV之间选择，一般微生物类样品选10左右）、WD工作距离（10-15之间选择）、SS电子束斑（一般选30-40） 10. 在SCAN2下调焦、调整对比度及亮度、调消象散（放大时照片晃动、或者样品变形、或者整体移动可点WOBBLE（一般10000倍左右调节有效果）调节光缆使照片不晃动） 11. 高倍下调清晰度，低倍下拍照，拍照选择photo(曝光40秒)或者SCAN4（曝光80秒），拍完选择FREEZE并保存照片 12. 拍完照后关闭灯丝，点VENT排气（排气时vent闪，排完气vent不闪），排完气方可打开样品室，取出样品台；关闭样品台，点击EV AC抽气，抽气时推着样品室门，听到机械泵响声后松手 13. 依次关闭软件、电脑、主机电源、变压器、空开 注意事项 1.注意Z轴的距离要足够高不要让样品碰到探头 2.慢慢调节光缆，防止调节过快看不到被观察物 3.取、放前一定要卸真空，再抽真空 4.关机的时候，要在真空状态下关机

使用高倍显微镜观察几种细胞实验报告.doc

使用高倍镜观察几种细胞 班级姓名座号日期 实验目的 掌握显微镜的规范操作步骤；使用高倍显微镜观察几种细胞，比 较不同细胞的异同点；运用制作临时装片的方法。 实验原理 构成生物体的细胞是很微小的，肉眼一般无法看到。绝大多数 只能在显微镜下才能观察到。细胞的形状多种多样，结构有所差异， 功能也不相同。我们可以根据细胞的形态和结构特征，识别不同种 类的细胞，探讨其功能。 实验器材 显微镜，A、C组酵母菌装片、水绵装片、蚕豆叶下表皮装片、 蛙表皮细胞装片、蛙血涂片，B、D组：大肠杆菌涂片、黑藻叶装片、蚕豆叶下表皮装片、运动神经元装片、心肌切片。 实验步骤 知识点一：正确使用显微镜 1、显微镜的结构示意图 2、取镜 (1)怎样取镜，为什么？（尝试感受走右手那只握镜臂，那只拖 镜座更安全。）____________________________________________ 。 _______________________________________________________ (2) 将显微镜平稳地放在接近光源、靠身体前略偏左的地方， 使镜壁对着身体，切记显微镜的底座一定要放平。 (3)安装好目镜和物镜。 【我还有的疑问】______________________________________ 3、对光

(1)转动转换器，______、_____、______、_____在一条直线上； (2)右眼睁开，左眼注视目镜内，转动_____，调试一个明亮而 不刺眼的视野。转动光圈，不同的光圈在不同的视野中是如何变化？ __________________________________________________________ 【我还有的疑问】______________________________________ 4、观察 (1)先放一张装片到载物台上，用压片夹压住，标本正对_____。 (2)调焦：两眼从侧面盯住物镜，_____转动_______，使镜筒慢 慢下降，当其降至距标本0．5cm时停止。然后__眼朝注视目镜内， 同时_____转动_______，使镜筒缓缓上升，当看到物像时停止。在 调节_________，直至物像清晰为止。转动_____，换置高倍镜。当 换置高倍镜时，不可在转动_________。肉眼看着高倍物镜，轻轻转 动粗准焦螺旋，预测如果用力过大，将会带来什么后果？_________ ______________。尝试写出取换装片的步骤_____________________ ______________________________________（参照上面两条步骤）。 (4)重复步骤（2），选取桌面上的永久装片3张进行观察，并 且一边观察一边在下面依次画出细胞结构图： 【我还有的疑问】______________________________________ 知识点二：整理实验装置 1、显微镜整理：取下目镜，放入收纳盒，______转动 ______ 上升镜柱，取下装片，转动转换器，使其中倍数较小的两个物镜成 八字形与通光孔之上，顺时针下降镜柱。光圈调置最小，反光镜立 起来放置，检查显微镜是否有不正常的部位，正确如实书写显微镜 使用登记表。 2、实验桌的整理，仪器装备整齐摆放在实验台上，关闭电源。 知识点三：课后交流与分析 活动一：AB和为一组CD和一组讨论归纳观察到的细胞在结构 上的共同点，并描述它们之间的差异，分析差异产生的可能原因？ 活动二：小组讨论对于显微镜的使用，我们还应该注意什么？