常用pH缓冲液缓冲液缓冲范围

资料]常用pH缓冲溶液的配制和pH值

?常用pH缓冲溶液的配制和pH值

一、常用溶液的配制

（一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在~之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）（1/15）Mol/L磷酸缓冲液

1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．），用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。

2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，.）（或者Na2HPO4·2H2O ）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

?

（三）L PB液

Na2HPO4·2H2O分子量= L溶液含L。Na2HPO4·12H2O分子量= L溶液含L。NaH2PO4·H2O分子量= L溶液含L。NaH2PO4·2H2O分子量= L溶液含L。

（四）L PB缓冲液

L Na2HPO4·2 H2O溶液L

Na2HPO4·12 H2O溶液含L

LNaH2PO4·H2O溶液含L

NaH2PO4·2 H2O溶液含L

欲配L PB缓冲液则在L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（L PH ）

NaCl

KCl

Na2HPO4

（如为Na2HPO4·12H2O，则为）

KH2PO4

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌

10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗

涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）

1．硼酸（Ｈ3BO3）

L硼酸：硼酸加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）

L硼砂：硼砂加水至1 000ml。

（七）巴比妥缓冲液

1．离子强度L巴比妥缓冲液

巴比妥钠

蒸馏水 3 000ml

HCl

（ N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）

⑴ 将巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加 N HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到，并加蒸馏水至4 265ml。

2． L巴比妥缓冲液

巴比妥

巴比妥钠

加蒸馏水至 1

3． L巴比妥缓冲液

巴比妥

巴比妥钠

加蒸馏水 1

（八）L醋酸盐缓冲液见表附表5

（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）

不同pH，L

L三羟甲基氨基甲烷加х，加水稀释至100ml（见下表）

三羟甲基氨基甲烷（Tris）

分子量=

L三羟甲基氨基甲烷：，加水至1 000ml。

：取，加水至1 000ml。

?

（十）L 碳酸盐缓冲液

NaHCO3

Na2CO3

溶于蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液

1．配制磷酸缓冲液

L Na2HPO4

NaH2PO4

混合即可

2．9份甘油与1份磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液

1．贮存液

NaCl

KCl

Na2HPO4·12 H2O

KH2PO4

葡萄糖

％酚红液

双馏水加至

115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液

贮存液 1份

双馏水 9份

115℃高压灭菌15min。临用时用灭菌的％NaHCO3液调pH值至左右（溶液呈橙红

色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）

配方1：氯化汞

碘化钾

20％NaOH 30ml

加蒸馏水至 100ml

配方2：碘化汞

碘化钾 8g

蒸馏水 50ml

（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

用途：检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液

葡萄糖

柠檬酸钠

氯化钠

蒸馏水 100ml

溶解后，以10%柠檬酸调节pH至，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）

青霉素（40万U） 5支

链霉素（200万μg） 1支

分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉

素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）

配方1：重铬酸钾 150g

蒸馏水 300ml

浓硫酸 3 000ml

将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为

强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上

眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：浓硫酸 50%

蒸馏水 50%

重铬酸钾 5%

此为中等强度洗液。

配方3：重铬酸钾 100g

蒸馏水 1 000ml

加热溶解，冷却后缓慢加入

工业硫酸 100ml

此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，

经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。缓冲液名称及常用浓度缓冲pH范围主要物质分子量

MES (2吗啉代乙磺酸)

Bis-Tris

HEPES

PIPES

MOPS

Tricine

TEA (三乙醇胺)

甘氨酸-盐酸缓冲液（L）甘氨酸Mr=

邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（L）邻苯二甲酸氢钾Mr=

磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液磷酸氢二钠Mr=

柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液柠檬酸Mr=

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（L）柠檬酸Mr= 柠檬酸钠Mr=

乙酸-乙酸钠缓冲液（L）乙酸钠Mr= 乙酸Mr=

邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液邻苯二甲酸氢钾Mr=

磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（L）

磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15 molL）

磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（L）

巴比妥钠-盐酸缓冲液(18℃) 巴比妥钠Mr=

Tris-盐酸缓冲液L 25℃) 三羟甲基氨基甲烷（Tris）Mr=

甘氨酸-氢氧化钠缓冲液L) 甘氨酸Mr=

硼砂-氢氧化钠缓冲液L) 硼砂Na2B4O710H2O Mr=

碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液L) 碳酸钠Mr= 碳酸氢钠Mr= 碳酸钠-氢氧化钠缓冲液L)

磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液

氯化钾-盐酸缓冲液（L）氯化钾Mr=

氯化钾-氢氧化钠缓冲液（L）氯化钾Mr=

(完整版)生物化学名词解释大全

第一章蛋白质 1．两性离子：指在同一氨基酸分子上含有等量的正负两种电荷，又称兼性离子或偶极离子。 2．必需氨基酸：指人体（和其它哺乳动物）自身不能合成，机体又必需，需要从饮食中获得的氨基酸。 3.氨基酸的等电点：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH 值，用符号pI表示。 4．稀有氨基酸：指存在于蛋白质中的20 种常见氨基酸以外的其它罕见氨基酸，它们是正常氨基酸的衍生物。 5．非蛋白质氨基酸：指不存在于蛋白质分子中而以游离状态和结合状态存在于生物体的各种组织和细胞的氨基酸。 6．构型：指在立体异构体中不对称碳原子上相连的各原子或取代基团的空间排布。构型的转变伴随着共价键的断裂和重新形成。 7．蛋白质的一级结构：指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，以及二硫键的位置。 8．构象：指有机分子中，不改变共价键结构，仅单键周围的原子旋转所产生的原子的空间排布。一种构象改变为另一种构象时，不涉及共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活性。 9．蛋白质的二级结构：指在蛋白质分子中的局部区域内，多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。 10．结构域：指蛋白质多肽链在二级结构的基础上进一步卷曲折叠成几个相对独立的近似球形的组装体。 11．蛋白质的三级结构：指蛋白质在二级结构的基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的构象。 12．氢键：指蛋白质在二级结构的基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的构象。 13．蛋白质的四级结构：指多亚基蛋白质分子中各个具有三级结构的多肽链以适当方式聚合所呈现的三维结构。 14．离子键：带相反电荷的基团之间的静电引力，也称为静电键或盐键。15．超二级结构：指蛋白质分子中相邻的二级结构单位组合在一起所形成的有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体。 16．疏水键：非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。如蛋白质分子中的疏水侧链避开水相而相互聚集而形成的作用力。 17．范德华力：中性原子之间通过瞬间静电相互作用产生的一种弱的分子间的力。当两个原子之间的距离为它们的范德华半径之和时，范德华力最强。 18．盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐（如硫酸氨），使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。 19．盐溶：在蛋白质溶液中加入少量中性盐使蛋白质溶解度增加的现象。20．蛋白质的变性作用：蛋白质分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键遭到破坏导致天然构象的破坏，但其一级结构不发生改变。 21．蛋白质的复性：指在一定条件下，变性的蛋白质分子恢复其原有的天然构象并恢复生物活性的现象。 22．蛋白质的沉淀作用：在外界因素影响下，蛋白质分子失去水化膜或被中和其

常用pH缓冲液 缓冲液缓冲范围

资料]常用pH缓冲溶液的配制和pH值 ?常用pH缓冲溶液的配制和pH值常用pH缓冲溶液的配制和pH值 .biodrug.

一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2．药品称量要精确。 3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。 ４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。 （二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液 1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶，再稀释至刻度（1 000ml）。2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。 3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。 附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）

? （三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法

生物化学基本知识

第六章生物化学实验基本知识 主编：齐锦生编委： 孔德娟齐锦生许丽辉杨崇辉周秀霞罗湘衡君智炜张晓玲王芳 实验室要求 一、实验课的目的 1、加深理解：加深对生物化学基本理论的理解。 2、掌握技术：掌握生物化学的基本实验方法和实验技术（四大基本技术：离心、电泳、层析、比色）及分子生物学的一些基本技术和方法。 3、培养能力：培养学生的思维能力、动手能力和表达能力。 4、掌握精髓：科学的精髓是实事求是、敢于探索、善于创新的精神，要对实验中出现的一切反常现象进行讨论，并大胆提出自己的看法。 二、生化实验室规则和要求 1、预习：课前要预习实验教材，了解实验目的、原理，熟悉操作规程。 2、秩序：自觉遵守纪律，维护教学秩序，不准迟到、早退，保持安静，严禁谈笑打闹，听从教师指导，未经教师同意，不得随意离开实验室。 3、整洁：搞好实验环境和仪器的卫生整洁，实验台面必须保持整洁，仪器药品要井然有序，公用试剂用毕，应立即盖严放回原处，勿使药品试剂撒在实验台面和地面。实验完毕，需将药品试剂排列整齐，仪器要洗净倒置放好。固体废物，如滤纸、棉花、血块不得倒入水池中，以免堵塞下水道；一般性废液可倒入水池中冲走，但强酸强碱或有毒有害溶液必须用水高度稀释后，方可倒入水池中，同时放水冲走，以免腐蚀水管。全体同学由班长安排轮流值日，负责当天实验室卫生、安全和一些服务性工作，经教师验收合格后，方可离开实验室。 4、节约：使用仪器、药品、试剂及各种物品必须厉行节约，并节约水电。应特别注意保持药品和试剂的纯净，严防混杂、乱用和污染。使用和洗涤仪器应小心仔细，防止损坏，贵重仪器使用前应熟悉使用方法，严格遵守操作规程，严禁随意开动，发现故障后应立即报告指导教师，不要自己动手检修，如有损坏按学校规定赔偿。 5、安全：注意人身和国家财产安全是至关重要的，要时刻注意防火、防水、防电、防危险品、防事故，以免发生意外。实验室内严禁吸烟。使用乙醚、苯、乙醇、丙酮等易燃品时，不允许在电炉、酒精灯上直接加热。实验中须远离火源，如有危险发生，应首先关掉电源；有机溶剂着火时，勿用水泼，以免扩大燃烧面积，可用沙土、灭火器具灭之。用火时必须严格做到：火着人在，人走火灭。用毕电器后及时切断电源。加热试剂、液体时，管口不要对人，要十分小心操作，避免灼伤人。实验室内一切物品未经本室负责教师批准，严禁携带出室外，有毒物品尤其如此。借物必须办理登记手续。

53种常见缓冲液配制方法

53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。

《生物化学》常用名词解释(一)

《生物化学》常用名词解释 （一） 1.氨基酸（aminoacids）: 是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在α-碳上。氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。 2.必需氨基酸（essentialaminoacids）： 指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从饮食中获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等氨基酸 3.非必需氨基酸（nonessentialaminoacids）： 指人（或其它脊椎动物）自己能由简单的前体合成的，不需要由饮食供给的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。 4.等电点（pI，isoelectricpoint）： 使分子处于兼性分子状态，在电场中不迁移（分子的净电荷为零）的pH值。 5.茚三酮反应（ninhydrinreaction）： 在加热条件下，氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色（与脯氨酸反应生成黄色）化合物的反应。 6.肽键（peptidebond）： 一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合，除去一分子水形成的酰胺键。 7.肽（peptides）：

两个或两个以上氨基酸通过肽键共价连接形成的聚合物。 8.蛋白质一级结构(primarystructure)： 指蛋白质中共价连接的氨基酸残基的排列顺序。 9.层析(chromatography)： 按照在移动相（可以是气体或液体）和固定相（可以是液体或固体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。 10.离子交换层析(ion-exchangecolumnchromatography)： 使用带有固定的带电基团的聚合树脂或凝胶层析柱分离离子化合物的层析方法。 11.透析（dialysis）： 通过小分子经半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。 12.凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)： 也叫做分子排阻层析（molecular-exclusionchromatography）。一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。 13.亲和层析（affinitychromatography）： 利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。 14.高压液相层析（HPLC，high-pressureliquidchromatography）： 使用颗粒极细的介质，在高压下分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。

各种缓冲液的配制方法

1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液

2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）

10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。

247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2

常用缓冲溶液配制方法

毫升甘氨酸毫升，再加水稀释至毫升

NaHPO- 2HO分子量=,mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O7 - H b O分子量=,mol/L 溶液为21.01克/升。 4 .柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液 pH 钠离子浓度 (mol/L) 酸（克） a - h2O 氢氧化钠 （克） NaOH 97% 盐酸（毫升） HCl （浓） 最终 （升） 210 84 160 10 210 83 116 10 210 83 106 10 210 83 45 10 245 144 68 10 285 186 105 10 266 156 126 10 ① 体积 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化

钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（mol/L ） 柠檬酸钠Na C6H5O7 ? 2HQ分子量，mol/L 溶液为29.41克/毫升。.乙酸-乙酸钠缓冲液（）

Nc2Ac- 3H2O分子量=,mol/L 溶液为27.22克/升。 7.磷酸盐缓冲液 (1)磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液() NaHPO -12^0分子量=,mol/L溶液为克/升。 NaHPQ?2H2O分子量=,mol/L溶液为克/升。

磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个 值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：NaHPQ：PKa1 =, pKa2=；NaHPO： pKa1 =,PKa2= 溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释10倍后pH的变化小于。 其缺点为：①易与常见的钙Ca24离子、镁Mg24离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 )磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液() pH mol/L/15Na 2HPO （毫升）mol/L pKa 配酸性缓冲液: 用NaHPO, pH= 1 ?4, 配中性缓冲液: 用混合的两种磷酸盐，pH= 6?8, 配碱性缓冲液: 用NaHPO, pH= 10?12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难 pH范围宽；③pH 15M11.876 克15M9.078 克0.05M0.2M

各种缓冲液的配制方法

24 Na2HPO4-2H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。

① 使用时可以每升中加入 1 克克酚，若最后 pH 值有变化，再用少量 50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量 210.14，0.1 mol/L溶液为 21.01 克/升。柠檬酸钠 Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41 克/毫升。 22 7．磷酸盐缓冲液

242 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64 克/升。Na2HPO4·2H2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为 31.21 克/升。 242 KH2PO4 分子量 = 136.09，1/15M 溶液为 9.078 克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M） X 毫升 0.2M K2PO4 + Y 毫升 0.2N NaOH 加水稀释至 29 毫升

10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃） 50毫升0.1M 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X 毫升0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100毫升。 C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为 12.114 克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 硼砂 Na2B4O7·H2O,分子量=381.43;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含19.07 克/升。硼酸 H2BO3,分子量 =61.84,0.2M 溶液为 12.37 克/升。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。

各种缓冲液的配制方法

各种缓冲液的配制方法

1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 （一）基本概念 ⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）: 1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl- ＋H+ HCl是酸，Cl-是它的共轭碱。 pH = pKa+log{[质子受体]/[质子供体]} ⑵缓冲体系的设计： 1960年，N.E.Good和他的同事们提出，适合生命科学研究使用的缓冲体系应具有以下特性： ① pKa值在6-8之间； ②在水中的溶解度高； ③不易穿透生物膜； ④盐效应小； ⑤离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小； ⑥不与金属离子生成复合物或沉淀； ⑦该缓冲剂化学稳定； ⑧紫外和可见光波长范围内光吸收小； ⑨易制得高纯度的盐。 （二）生物化学常用缓冲液 ⑴磷酸盐缓冲液： 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级

解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21 Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1-4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6-8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10-12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为： ①容易配制成各种浓度的缓冲液； ②适用的pH范围宽； ③pH受温度的影响小； ④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。 其缺点为： ①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀； ②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵ Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液： Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5-8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0-9.0 Tris-HCl缓冲液的优点是： ①因为Tris的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由

缓冲溶液【(最全)常见缓冲溶液配制方法】

缓冲溶液【(最全)常见缓冲溶液配制方法】常见缓冲溶液配制 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)：取氯化钙0.294g，加 0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液 调节pH值至8.1，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml。

巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过。 巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。

各种缓冲液配制方法

不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。

C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。

（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100

生物化学 常用试剂配制

常用试剂配制-生物、化学．常规试剂配制和测定方法

一、溶液的配制1000 mL）1. Mandels营养盐溶液（g）称重 量（名 14 ）)硫酸铵（(NHSO42420 ）磷酸二氢钾（KHPO423 尿素）HNCONH （223 ）MgSO·7HO硫酸镁（244 O）氯化钙（CaCl·2H22注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 微量元素溶液（1000 mL）2. Mandels）量（g称重名

3.7 氯化钴（CoCl·O）6H221.4 ）·ZnSO7HO硫酸锌（241.6 O）MnSO硫酸锰（·H245.0 ）硫酸亚铁（FeSO·7HO24后的蒸馏水配制。注：用煮沸10 min 3. DNS试剂的配制（1000 mL） （1）取：3,5-二硝基水杨酸（CHNO）7.5 g 7472氢氧化钠（NaOH ）14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min） （2）加入：酒石酸钾钠（CHOKNa·4HO）216.0 g 24465.5 mL ℃水浴中融化）50 苯酚（在 6.0 g 偏重亚硫酸钠（NaSO）522使5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置

用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。注意：倒入瓶中时要尽量装满！！ 的配制（1000 mL）4. 考马斯亮蓝G-250mL 乙醇中，加入100 mL 即0.1g溶于50 95%称考马斯亮蓝G-250 100 mg）（w/v85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含0.01 % w/v）磷酸。（w/v）乙醇，8.5 %（，考马斯亮蓝G-2504.7 % 1000 mL）5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（(g) 量量Mn

常用缓冲溶液的配制方法

常用缓冲溶液的配制方法 磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/ 升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。 pH 4.0 20mL ：Na2HPO4 0.219g + C4H2O7·H2O 0.258g 柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 pH 4.0 20mL ： C4H2O7·H2O 0.275g + Na3 C6H5O7·2H2O 0.203g

乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 pH 4.0 20mL ：NaAc 0.098g + HAc 0.282mL 甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 甘氨酸分子量=75.07; 0.2M 溶液含15.01克/升。 pH 10.0 20mL ：甘氨酸0.075g + NaOH 0.013g 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+ 无水Na 2CO 2分子量=105.99;0.1M 溶液为10.60克/升。 Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。 Na 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。 pH 10.0 20mL ：无水碳酸钠 0.127g +碳酸氢钠0.067g

生物化学与分子生物学常用试剂配方

30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 100mL 将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。 【保存条件】 4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存 【注意事项】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液） 称取15.0gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】 室温保存，两年有效。 【注意事项】 配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。 电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。 摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法 10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS 配制20mL 【组分浓度】10%(w/v)SDS 【配制方法】 称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存 【保存条件】 室温保存 【注意事项】 对人体有害，请注意防护。 摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

常用缓冲液的配制

常用缓冲液的配制（TBS，PBS） 科研探索2007-04-23 13:25:54 阅读728 评论0 字号：大中小订阅 这是各种缓冲液的配制方法 1. 0.01MPBS(PH7.2)液 NaCl 8g Na2HPO4 1.15g KH2PO4 0.2g （NaH2PO4） 加双蒸水至1000ml 2. 0.05MTBS(PH7.4)液 Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g Nacl 17.5g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。 3. 0.02MTBS（PH8.2）液 Tris 4.84g Nacl 17.5g BSA 2.0g NaN3 1.0g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。 （BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。 4. 0.05MTB液（PH7.6） 先配制0.05MTB液： Tris 60.75g 1N HCL 约420ml 双蒸水至1000ml 配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL 或1N NaOH将PH值调至7.6，再加双蒸水至1000ml。 用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液 磷酸缓冲液(Gomori缓冲液)

最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者Gomori命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出pH 5.8至pH8.0之间缓冲液(见表A1-3A和A1-3。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点： ?磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对DNA的切割，DNA的连接和细菌转化等。 ?因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀DNA和RNA。 ?磷酸盐螯合像Ca2+和Mg2+这样的阳离子。 表A1-3A 25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制 pH 1 mol/L K2HP04的体积/mL 1 mol/L KH2PO4的体积/mL 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 2 7.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.0 注：根据Green(1933)的资料汇编。 用蒸馏水将混合的两种1mol/L的贮存液稀释至1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh方程计算其pH值： pH=pK'+Log ，在此，pK'=6.86(25℃) 表A1-3B 25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制 pH 1mol/L Na2HPO4的体积/mL 1mol/L NaH2P04体积/mL 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 1 7.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7

生化考研常见大题

生物化学答疑库 1.糖类化合物有哪些生物学功能？---------------答案 2.葡萄糖溶液为什么有变旋现象？---------------答案 3.什么是糖蛋白？有何生物学功能？-------------答案 4.纤维素和糖原都是由D-葡萄糖经1→4连接的大分子，相对分子质量相当，是什么结构特点造成它们的物理性质和生物学功能上有很大的差异？ -------------------答案 5.天然脂肪酸在结构上有哪些共同特点----------答案 6.为什么多不饱和脂肪酸容易受到脂质过氧化？---答案 7.人和动物体胆固醇可能转变为哪些具有重要生理意义的类固醇物质？ ---------------------------------------------------------------------------------答案 8.判断氨基酸所带的净电荷，用pI-pH比pH-pI更好，为什么？ -------------------------------------------------------------------------------------------答案 9.甘氨酸是乙酸甲基上的氢被氨基取代生成的，为什么乙酸羧基的pKa是4.75，而甘氨酸羧基的pKa是2.34？------------------------------------------- -------答案

10.（1）Ala，Ser，Phe，Leu，Arg，Asp，Lys 和His的混合液中pH3.9进行纸电泳，哪些向阳极移动？哪些向阴极移动？（2）为什么带相同净电荷的氨基酸如Gly和Leu在纸电泳时迁移率会稍有差别？ ----------------------------------------------------------------------答案 11.（1）由20种氨基酸组成的20肽，若每种氨基酸残基在肽链中只能出现1次，有可能形成多少种不同的肽链？（2）由20种氨基酸组成的20肽，若在肽链的任一位置20种氨基酸出现的概率相等，有可能形成多少种不同的肽链？ ----------------------------------------------答案 12.在大多数氨基酸中，-COOH的pKa都接近2.0，-NH 的pKa都接近9.0。但是，在肽链中，-COOH的pKa为3.8，而-NH3＋的pKa值为7.8。你能解释这种差别吗？----答案 13. -螺旋的稳定性不仅取决于肽链部的氢键，而且还与氨基酸侧链的性质相关。室温下，在溶液中下列多聚氨基酸哪些能形成螺旋？哪些能形成其他有规则的结构？哪些能形成无规则的结构？并说明其理由。（1）多聚亮氨酸pH7.0；（2）多聚异亮氨酸pH7.0；(3) 多聚精氨酸pH7.0；(4) 多聚精氨酸pH13.0；（5）多聚谷氨酸pH1.5；(6) 多聚氨酸pH7.0；(7) 多聚羟脯氨酸pH7.0.-答案 14.球蛋白的相对分子质量增加时，亲水残基和疏水残基的相对比例会发生什么变化？

实验常用试剂,缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 ⑴ 磷酸盐缓冲液 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pK a 值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH 2PO 4 ： pK a1 ＝2.12， pK a2 ＝7.21 Na 2HPO 4 ： pK a1 ＝7.21， pK a2 ＝12.32 配酸性缓冲液：用 NaH 2PO 4 ，pH＝1～4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用 Na 2HPO 4 ，pH＝10～12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯 酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的 变化小于0.1。 其缺点为：①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵Tris（三羟甲基氨基甲烷，N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane）缓冲 液 Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5～8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0～9.0 配制常用的缓冲液的方法有两种：①按书后附录中所列该缓冲液表中的方法，分别配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按表中所列体积混合。由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用另一种方法；②若配1L 0.1mol/L 的Tris-HCl缓冲液：先称12.11g Tris碱溶于950mL～970mL 无离子水中，边 搅拌边滴加4N HCl，用pH计测定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水补足到1L。 Tris-HCl缓冲液的优点是：①因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这 一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。 其缺点是：①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，即： △pK a ／℃＝－0.031 ，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于 0℃～4℃。③易吸收空气中的CO 2 ，所以配制的缓冲液要盖严密封。④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。