☆如何阅读质粒图谱
如何阅读质粒图谱
最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于
大家分享。
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素
#复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+
＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l
＃P/E 启动子/增强子l
＃Termsl 终止信号
＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用
二、如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号
＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。
＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。
＃核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。l
＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针？
那其实是代表两条DNA 链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上.
三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写）
1. 什么是载体
即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。
P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA
2. 载体的分类
＃按功能分成：
（1）克隆载体都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨型载体）
（2）表达载体具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA 顺序的载体。
＃按进入受体细胞类型分：（1）原核载体（2）真核载体（3）穿梭载体（sbuttle vector）指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭往返两种生物之间）. P.S. 穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子，以确保两类细胞中都能扩增。
3. 基因工程载体的3个特点：
（一）都能独立自主的复制：载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域，如MCS，插在其中的外源DNA片段，能被动的跟着载体一起复制/扩增，就像载体的正常成分一样。（二）都能便利的加以检测：如载体的药物抗性基因，多是抗生素抗性基因，将受体细胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时，只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细胞才能存活。（三）都能容易进入宿主细胞中去，也易从宿主细胞中分离纯化出来。
4. 载体的选择和制备：选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。
载体选择主要考虑下述3点：
【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型：
－－－（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。－－－（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。
－－－（3）对原核表达载体应该注意3点：
－－－－－－①选择合适的启动子及相应的受体菌；
－－－－－－②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；
－－－－－－③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。
选用质粒（最常用）做载体的4点要求：
①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；
②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；
④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。
无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。
质粒载体质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下：
①是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalently closed circuar DNA,cccDNA），可
自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，＜15kb的小质粒比较容易分离纯化，＞15kb的大质粒则不易提取。
②能自主复制，是能独立复制的复制子（autonomous replicon）。一般质粒DNA复制的质
粒可随宿主细胞分裂而传给后代。
按质粒复制的调控及其拷贝数可分两类：严紧控制（stringent control）型质粒的复制常与宿主的繁殖偶联，拷贝数较少，每个细胞中只有1个到十几个拷贝；另一类是松弛控制（relaxed control）型质粒，其复制宿主不偶联，每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒DNA上都有复制的起点，只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制，不同质粒复制控制状况主要与复制起点的序列结构相关。有的质粒的可以整合到宿主细胞染色质DNA中，随宿主DNA复制，称为附加体，例如细菌的性质粒就是一种附加体，它可以质粒形式存在，也能整合入细菌的DNA，又能从细菌染色质DNA上切下来。F因子携带基因编码的蛋白质能使两个细菌间形成纤毛状细管连接的接合（conjugation），通过这细管遗传物质可在两个细菌间传递。
③质粒对宿主生存并不是必需的。这点不同于线粒体，线粒体DNA也是环状双链分子，也有
独立复制的调控，但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的一部分，质粒也往往有其表型，其表现不是宿主生存所必需的，但也不妨碍宿主的生存。某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存，例如，细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因，如编码合成能分解破坏四环素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因，这种质粒称为抗药性质粒，又称R质粒，带有R质粒的细菌就能在相应的抗生素存在生存繁殖。所以质粒对宿主不是寄生的，而是共生的。
附：公司Vectors目录
其实载体这东西嘛，实验室本来有就用，米有就去借借~~~也能省很多啦~~~~ （具体建议索要产品目录看看~）
MERCK-Novagen?
Phage
λCE6
T7Select
λBlueS TAR?
λSCREEN?
Plasmid
pBAC
pTriEx
pCITE
pCDF & pRSF
pBiEx
pETBlue
pET
pETcoco
pIEx
pIEx/Bac
pT7Blue
pTandem
pSTBlue
pSCREEN
Duet
TAKARA
首页-产品分类目录-Vectors、Primers、cDNA libraries
·Vectors、Primers、cDNA libraries－新品
常用Vectors
·pUC18 DNA
·pUC19 DNA
·pHSG系列载体
·pUC118 DNA
·pUC119 DNA
·pUC118 EcoR I/BAP
·pUC118 BamH I/BAP
·pUC118 Hinc II/BAP
·pUC118 Pst I/BAP
·pUC118 Hind III/BAP
·pTV118N DNA
·pSTV系列载体
·pBR322 DNA
PCR产物克隆用Vectors
·pBackZero-T Vector
·pMD?18-T Vector
·pMD?19-T Vector
·pMD?20-T Vector
·pMD?18-T Simple Vector
·pMD?19-T Simple Vector
·pSIMPLE-18 EcoR V/BAP Vector
·pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector
原核基因表达
·Chaperon Plasmid Set
·Cold Shock Express Vectors－－pCold? ·pCold? TF DNA
·Simple Protein Production System (SPP System?)
酵母·丝状真菌转化系统
·pAUR101 DNA
·pAUR112 DNA
·pAUR123 DNA
·pAUR224 DNA
·pAUR135 DNA
·pAUR316 DNA
Pyrithiamine抗性系列载体
·pPTR I DNA
·pPTR II DNA
植物转化用高效表达载体
·pRI系列载体
·pRI 101系列载体
Retrovirus Vector Series
·pDON-AI-2系列载体
·pMEI-5系列载体
·pDON-5系列载体
·Human iPS Cell Generation? Vect or Set
Invitrogen
DNA 载体
细菌表达载体
Champion? pET300?NT-DEST and pET301?CT-DEST Gateway? Vector Kit Champion? pET302?NT-His and pET303?CT-His Vector Kit
Gateway? pDEST?14 Vector
Gateway? pDEST?15 Vector
Gateway? pDEST?17 Vector
Gateway? pDEST?24 Vector
Gateway? pET-DEST42 Vector
pBAD?His Kit
pBAD?gIII Kit
pBAD-DEST49 Gateway? Destination Vector
pBAD/Myc-His Kit
pBAD202 Directional TOPO? Expressions Kit
pEM7?Zeo
pRSET A, B, & C
pRSET-BFP
pRSET-CFP
pRSET-EmGFP
pTrcHis A, B, & C
pTrcHis2 A, B, & C
.无细胞表达载体
pEXP-5-CT?TOPO? TA Expression Kit
pEXP-5-NT?TOPO? TA Expression Kit
pEXP1-DEST Vector Kit
pEXP2-DEST Vector Kit
pEXP3-DEST
pEXP4-DEST
.对照DNA 和质粒
λDNA (cIind 1 ts857 Sam 7)
.DNA 亚克隆载体
M13KO7 Helper Phage
Plasmid pBR322
pUni/V5-His A, B, C Cloning Kit with PIR1 E. coli
pUni/V5-His A, B, C Cloning Kit with PIR2 E. coli
.Gateway? 供体载体- pDONR
PCR Cloning System with Ga teway? Technology with pDONR??Zeo and OmniMAX?2 Competent Cells
PCR Cloning System with Gateway? Technology with pDONR?221 and OmniMAX?2 Competent Cells
pDONR??Zeo
pDONR?221
.Gateway? 入门载体- pENTR
pCR?8?GW?TOPO? TA Cloning Kit
pCR?8?GW?T OPO? TA Cloning Kit
pCR?8/GW/TOPO? TA Cloning Kit with One Shot? Mach1?-T1R Chemically Competent
E. coli
pCR?8/GW/TOPO? TA Cloning Kit with One Shot? Mach1?-T1R Chemically Competent
E. coli
pCR?8/GW/TOPO? TA Cloning Kit with One Shot? TOP10 Chemically Competent E. coli K250020SC
pENTR?11 Dual Selection
pENTR?1A Dual Selection
pENTR?2B Dual Selection
pENTR?3C Dual Selection
pENTR?4 Dual Selection
pENTR?5′TOPO? TA Cloning Kit with One Shot? TOP10 Chemically Competent E. coli pENTR??D-TOPO? Cloning Kit
pENTR??SD?D-TOPO? Cloning Kit
pENTR?/D-TOPO? Cloning Kit with One Shot? Mach1?-T1R Chemically Competent E.
coli
pENTR?/SD/D-TOPO? Cloning Kit with One Shot? Mach1?-T1R Chemically Competent E.
coli
pE NTR??TEV?D-TOPO? Cloning Kit with One Shot? Mach1?-T1R Chemically Competent E. coli
pENTR??TEV?D-TOPO? Cloning Kit with One Shot? TOP10 Chemically Competent E.
coli
.昆虫和杆状病毒表达载体
Bac-N-Blue?Transfection Kit K855-01 Polyhedrin Untagged 5 transfections
Bac-to-Bac? Baculovirus Expression System 10359-016 Polyhedrin Untagged 1 kit Bac-to-Bac? HT V ector Kit 10584-027 Polyhedrin His Tag (6x His) 1 kit
Bac-to-Bac? Vector Kit 10360-014 Polyhedrin Untagged 1 kit
BaculoDirect? C-Term Expression Kit 12562-013 Polyhedrin Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 5 transfections
BaculoDirect? C-Term Transfection Kit 12562-039 Polyhedrin Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 5 transfections
BaculoDirect? N-Term Expression Kit 12562-054 Polyhedrin Protein Tag or Fusion
His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 5 transfections
BaculoDirect? N-Term Transfection Kit 12562-062 Polyhedrin Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 5 transfections
Baculovirus Expression System with Gateway? Technology 11827-011 Polyhedrin Protein Tag or Fusion GST Tag His Tag (6x His) Untagged
GST Tag 20 reactions
DES? BioEase?Kit with pCoBlast K4140-01 MT BioEase Tag 20 reactions
DES? TOPO? TA Expression Kit K4125-01 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 20 reactions
DES?–Inducible Kit with pCoBlast K5120-01 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
DES?–Inducible Kit with pCoHygro K4120-01 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
DES?–Inducible?Secreted Kit with pCoBlast K5130-01 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
DES?–Inducible?Secreted Kit with pCoHygro K4130-01 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
DES?-Blasticidin Support Kit K5150-01 1 kit
Gateway? pDEST?10 Vector 11806-015 Polyhedrin His Tag (6x His) 6 μg Gateway? pDEST?20 Vector 11807-013 Polyhedrin GST Tag 6 μg
Gateway? pDEST?8 Vector 11804-010 Polyhedrin Untagged 6 μg
Gateway? pMT-DEST48 Vector 12282-018 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 6 μg
InsectSelect? Glow Kit with Sf9 cells K810-01 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
pAc5.1?V5-His A, B, & C V4110-20 pAC5 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 20 μg
pFastBac Dual 10712-024 Promoter Polyhedrin p10
Polyhedrin Untagged 10 μg
pIB?V5-His TOPO? TA Expression Kit K890-20 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 20 reactions
pIB?V5-His Vector Kit V8020-01 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
pIB?V5-His-DEST Vector 12550-018 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 6 μg
pIZ?V5-His Vector Kit V8000-01 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
pIZT?V5-His Vector Kit V8010-01 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
pMIB?V5-His V ector Kit V8030-01 OplE2 Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 1 kit
p MT?BiP?V5-His A, B, & C V4130-20 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 20 μg
pMT?V5-His A, B, & C V4120-20 MT Protein Tag or Fusion His Tag (6x His) V5 Epitope Tag
His Tag (6x His) 20 μg
.哺乳动物表达载体
CT-GFP Fusion TOPO? Expression Kit K4820-01 CMV 20 reactions 联系我们
Flp-In?Complete System K6010-01 CMV 1 kit 联系我们
Flp-In?Core System K6010-02 CMV 1 kit 联系我们
Flp-In? T-REx? Core Kit K6500-01 CMV?TO 1 kit 联系我们
Gateway? pDEST?26 Vector 11809-019 CMV 6 μg 联系我们
Gateway? pDEST?27 Vector 11812-013 CMV 6 μg 联系我们
Gateway? pEF-DEST51 Vector 12285-011 EF-1α 6 μg 联系我们
Gateway? pT-Rex?-DEST30 Vector 12301-016 CMV?TO 6 μg 联系我们
Gateway? pT-Rex?-DEST31 Vector 12302-014 CMV?TO 6 μg 联系我们
Gateway? pcDNA?-DEST40 Vector 12274-015 CMV 6 μg 联系我们
Gateway? pcDNA?-DEST47 vector 12281-010 CMV 6 μg 联系我们
Gateway? pcDNA?-DEST53 vector 12288-015 CMV 6 μg 联系我们
GeneBLAzer? C-terminal Gateway? Fusion Kit for in vitro detection
GeneBLAzer? C-terminal Gateway? Fusion Kit for in vivo detection
GeneBLAzer? C-terminal TOPO? Fusion Kit for in vitro detection
GeneBLAzer? C-terminal TOPO? Fusion Kit for in vivo detection
GeneBLAzer? N-terminal Gateway? Fusion Kit for in vitro detection
GeneBLAzer? N-terminal Gateway? Fusion Kit for in vivo detection
GeneBLAzer? N-terminal TOPO? Fusion Kit for in vivo detection
GeneSwitch?Complete Kit
GeneSwitch?Core Kit
Jump-In?Fast Gateway? Core Kit
Jump-In?Fast Gateway? System
Jump-In?TI?Gateway? System
Jump-In?TI?Gateway? Vector Kit
Jump-In?TI?Platform Kit
Mammalian Lumio?Gateway? Vectors with Dual Lumio?Red and Green In-Cell Detection Kit
Mammalian Lumio?Gateway? Vectors with Lumio?Green In-Cell Detection Kit
NT-GFP Fusion TOPO? Expression Kit
NativePure?Lentiviral Gateway? Vector Kit
NativePure?pcDNA?Gateway? Vector Kit
Plasmid pCMV?SPORT-βgal
T-REx? Complete Kit with pcDNA?4/TO/myc-His?
T-REx? Complete Kit with pcDNA?4/TO?
T-REx? Core Kit with pcDNA?4?TO
T-REx? Core Kit with pcDNA?4/TO/myc-His?
T-REx?Expression System Support Kit
ViraPower?Adenoviral Gateway?Expression Kit
ViraPower?Adenoviral Promoterless Gateway? Expression Kit
ViraPower? Bsd Lentiviral Support Kit
ViraPower?HiPerform?Lentiviral FastTiter?Gateway? Expression Kit
ViraPower?HiPerform?Lentiviral FastTiter?TOPO? Expression Kit
ViraPower?HiPerform?Lentiviral FastTiter?TOPO? Expression Kit
ViraPower?HiPerform?Lentiviral Gateway? Expression Kit
ViraPower?HiPerform?Lentiviral TOPO? Expression Kit
ViraPower? HiPerform? Promoterless Gateway? Expression System
ViraPower? HiPerform? Promoterless Gateway? Vector Kit
ViraPower? HiPerform? T-REx? Gateway? Expression System
ViraPower? HiPerform? T-REx? Gateway? Vector Kit
ViraPower?II Lentiviral C-Lumio?Gateway? Expression System
.MultiSite Gateway? 载体
MultiSite Gateway? Pro 2.0 (for cloning two DNA fragments into a Gateway? Destination vector)
MultiSite Gateway? Pro 3.0 (for cloning three DNA fragments into a Gateway? Destination vector)
MultiSite Gateway? Pro 4.0 (for cloning four DNA fragments into a Gateway? Destination vector)
MultiSite Gateway? Pro Plus (for flexible cloning of up to four DNA fragments into a Gateway? Destination vector) 1
MultiSite Gateway? Three-Fragment Vector Construction kit
.PCR 克隆载体
TA Cloning? Kit (with pCR? II vector) with One Shot? INVaF′Chemically Competent E.
coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? INVaF′Chemically Competent E.
coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? INVaF′Chemically Competent E.
coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? INVaF′Chemically Competent E. coli - no manual
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10 Chemically Competent E. coli - no manual
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10 Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10 Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10 Chemically Competent E. coli - no manual
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10F′Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10F′Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10F′Chemically Competent E. coli - no manual
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) with One Shot? aTOP10F′Chemically Competent E. coli- no manual
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) without chemically competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?2.1 vector) without chemically competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?II vector) with One Shot? INVaF′Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR?II vector) with One Shot? aTOP10F′Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit (with pCR? II vector) with One Shot? aTOP10F′Chemically Competent E. coli
TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II vector) without chemically competent E. coli TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II vector) without chemically competent E. coli TOPO TA Cloning? Kit (with pCR?2.1-TOPO? vector) with One Shot? Mach1?T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
TOPO TA Cloning? Kit (with pCR?2.1-TOPO? vector) with One Shot? TOP10 Electrocomp?E. coli
TOPO TA Cloning? Kit (with pCR?2.1-TOPO? vector) with One Shot? TOP10 Electrocomp?E. coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II-TOPO? vector) with One Shot? TOP10 Electrocomp?E. coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II-TOPO? vector) with One Shot? TOP10 Electrocomp?E. coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II-TOPO? vector) with One Shot? TOP10′Chemically Competent E. coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II-TOPO? vector) with One Shot? TOP10′Chemically Competent E. coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter (with pCR?II-TOPO? vector) with One Shot? Mach1?T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter with One Shot? MAX Efficiency?DH5α-T1R E.
coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter with One Shot? MAX Efficiency?DH5α-T1R E.
coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter-no manual with One Shot? TOP 10 Chemically Competent E.coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter-no manual with One Shot? TOP 10F' Chemically Competent E.coli
TOPO TA Cloning? Kit Dual Promoter-no manual with One Shot? TOP 10F' Chemically Competent E.coli
TOPO TA Cloning? Kit for Sequencing (with pCR?4-TOPO?) with One Shot? TOP10 Chemically Competent E. coli and PureLink?Quick Plasmid Miniprep Kit
TOPO TA Cloning? Kit for Sequencing with One Shot? TOP10 Chemically Competent E.
coli
TOPO TA Cloning? Kit for Sequencing with One Shot? TOP10 Electrocomp?E. coli
TOPO TA Cloning? Kit for Sequencing with One Shot? TOP10 Electrocomp?E. coli
TOPO TA Cloning? Kit for Sequencing with One Shot? Mach1?T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
TOPO TA Cloning? Kit with One Shot? MAX Efficiency?DH5α-T1R E. coli
TOPO TA Cloning? Kit with One Shot? MAX Efficiency?DH5α-T1R E. coli
TOPO TA Cloning? Kit–no manual with One Shot? TOP10′Chemically Competent E.
coli
TOPO TA Cloning? Kit–no manual with One Shot? TOP10′Chemically Competent E.
coli
TOPO? TA Cloning Dual Promoter Kit
TOPO? TA Cloning Dual Promoter Kit
TOPO? TA Cloning Kit for Sequencing with One Shot? MAX Efficiency?DH5α-T1R E.
coli
TOPO? TA Cloning Kit for Sequencing with One Shot? MAX Efficiency?DH5α-T1R E.
coli
TOPO? TA Cloning Kit for Sequencing with One Shot? TOP10 Chemically Competent E.
coli
TOPO? TA Cloning Kit for Sequencing with One Shot? TOP10 Chemically Competent E.
coli
TOPO? TA Cloning? Dual Promoter Kit with One Shot? TOP10 Chemically Competent
E.coli (no manual)
TOPO? TA Cloning? Kit (with pCR?2.1-TOPO?) with One Shot Mach1?-T1R Chemically Competent E. coli and PureLink?Quick Plasmid Miniprep Kit
TOPO? TA Cloning? Kit (with pCR?2.1-TOPO?) with One Shot TOP10 Chemically Competent E. coli and PureLink?Quick Plasmid Miniprep Kit
.RNAi 载体
BLOCK-iT?Adenoviral RNAi Expression System
BLOCK-iT? HiPerform? Lentiviral PolII miR RNAi Expressio n System with EmGFP
BLOCK-iT? Inducible H1 Lentiviral RNAi System
BLOCK-iT? Inducible H1 RNAi Entry Vector Kit
BLOCK-iT? Inducible Pol II miR RNAi Expression Vector Kit w?EmGFP.
BLOCK-iT?Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System
BLOCK-iT?Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System with EmGFP BLOCK-iT?Lentiviral RNAi Expression System
BLOCK-iT?Lentiviral RNAi Gateway? Vector Kit
BLOCK-iT? Lentiviral RNAi Zeo Gateway? Vector Kit
BLOCK-iT?Pol II miR RNAi Expression Vector Kit
BLOCK-iT?Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP
BLOCK-iT?Pol II miR-lacZ Validated miRNA Control Vector
BLOCK-iT?Pol II miR-luc Validated miRNA Control Vector
BLOCK-iT?Pol II miR-LMNA Validated miRNA Control Vector
BLOCK-iT?U6 RNAi Entry Vector Kit
pSilencer?2.1-U6 hygro
pSilencer?2.1-U6 hygro with Manual
pSilencer?2.1-U6 neo
pSilencer?2.1-U6 neo with Manual
pSilencer?2.1-U6 puro
pSilencer?2.1-U6 puro with Manual
pAd?BLOCK-iT?-DEST RNAi Gateway Vector
pBLOCK-iT?6-DEST Vector
pMIR-REPORT?miRNA Expression Reporter Vector System
pMIR-REPORT?miRNA Expression Reporter Vector System with Manual .Seamless Cloning Vectors
GENEART? Linear pUC19L Vector for Seamless Cloning
.酵母表达载体
Gateway? pYES-DEST52 V ector
PichiaPink?Secreted Protein Vector Kit
PichiaPink?Secretion Signal Set
PichiaPink?Vector Kit
pAO815
pFLD1 Vector Kit
pGAPZ A, B, & C
pGAPZαA, B, & C
pPIC3.5K
pPIC6 A, B, & C
pPIC6αA, B, & C
pPIC9K
pPICZ A, B, & C
pPICZαA, B, & C
pTEF1?Zeo
pYES2
pYES2?CT
pYES2?NT A, B, & C
pYES2.1 TOPO? TA Expression Kit
pYES3?CT
基因酷质粒图谱https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/bbs/forum-38-1.html，收藏了将近800种质粒的图谱及相关信息
特向大家推荐，介绍及使用方法见：
https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/bbs/thread-417-1-1.html
质粒图谱信息
一.九种表达载体
Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,
pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA
二.克隆载体
pTZ19R DNA
pUC57 DNA
PMD18T
PQE30
pUC18
pUC19
pTrcHisA
pTrxFus
pRSET-A
pRSET-B
pVAX1
PBR322
pbv220
pBluescript II KS (+)
L4440
pCAMBIA-1301
pMAL-p2X
pGD926
三.PET系列表达载体
Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b
Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems Protein Express ion ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells
Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42
Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44
Protein Expressio n ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA
Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits
四.PGEX系列表达载体
T EcoR pGEX-1 I/BAP
pGEX-2T
pGEX-2TK
pGEX-3X
pGEX-4T-1
pGEX-4T-2
pGEX-4T-3
pGEX-5X-1
pGEX-5X-2
pGEX-5X-3
pGEX-6P-1
pGEX-6P-2
pGEX-6P-3
五.PTYB system
PTYB1
PTYB2
PTYB11
PTYB12
六.真核表达载体
pCDNA3.1(-)
pCDNA3.1(+)
pPICZ alpha A
pGAPZαA
PYES2.0
pBI121
pEGFP-N1
pEGFP-C1
pPIC9K
pPIC3.5K
答学生问：克隆载体与表达载体
FROM：红泥小火炉
问题：
基因工程中有克隆载体和表达载体，克隆载体可以在受体菌中大量复制，表达载体用于表达目的蛋白，那么实际应用中，我们的最终目的是要得到目的蛋白，克隆载体不能完成表达，有何用呢？还是说利用克隆载体实现目的基因的大量复制后，再将其转移到表达载体中实现表达？它是否有何缺陷不能整合克隆载体的功能？构建兼有克隆和表达双重功能的载体有何困难？
回答：
1.克隆的目的比较单一，就是将你感兴趣的DNA片段，重组进入载体，然后于宿主细胞中大量繁殖，主要用于各种文库的建立，比如人类基因组计划；同时由于载体所能容纳的目的片段的长度是有限的，而克隆载体没有表达所需的各种片段，所以可以容纳更长的目的片段，即可以克隆足够长的基因，效率更高。
2.重组DNA需要使用限制性内切酶，因此待克隆的目的片段两端必需有其识别位点，现在的T/A克隆载体可以直接克隆PCR产物，省去了两端加装识别位点的设计，PCR效率就更高。
3.表达载体的目的是多样化的，为了实现实际工作中的需要，不同的目的就要设计不同的载体，用表达载体克隆基因不是不可以，实际工作中要考虑更多，因此更复杂。
4.细菌摄取能量的能力是一定的，如果用来合成大量蛋白质，合成核酸就会少。
5.细菌承受的工作负荷也是有限的，给它的工作太多，效率必然低下，这和我们日常生活是一个道理。
原因很简单，不是不能，是完全可以，但是效率会低很多。所以我们一般的策略是，将目的片段克隆于非常简单的克隆载体上，按照需要再亚克隆于可以满足各种要求的表达载体上。回答的不是很系统，如有问题可以继续来信讨论，希望对你有所帮助。
新浪网友2009-10-10 08:48:28 [举报]
您好！
您博文里得“T/A克隆载体可以直接克隆PCR产物，省去了两端加装识别位点的设计，PCR 效率就更高。”是什么意思？
我是初学者，请求赐教。
博主回复：2009-10-16 09:51:51
T/A克隆载体是PUC载体的线性化后两端加了T，而Taq酶有在PCR产物后随机加A的特性，所以PCR产物直接可以接入T载体。而经典的克隆PCR产物需要限制性内切酶切割后接入载体，所以在设计PCR引物时两端要加酶的识别位点，而加装的序列与模板不配对，
因此PCR效率会低很多。
新浪网友2010-01-08 13:00:09 [举报]
老师，您好！
您的意思是说克隆载体只是为了得到大量的目的基因，而现在多用PCR就可以达到这个目的。那这个目的基因的主要用途是什么？只用来测序吗？
表达载体应该兼有克隆与表达的功能的吧？
盼望您的回复！谢谢
博主回复：2010-03-20 13:07:05
嗯，基本是这个意思。就测序不克隆也可以进行，克隆到载体的CMS中就在基因两端有了可供你选择的很多限制性酶切位点，方便亚克隆到各种表达载体上。当然表达载体可以克隆，但是效率低于克隆载体。一是因为表达载体不能直接克隆PCR产物，必须加装限制性酶切识别序列，上面已经讲过。二是表达载体的选择相对克隆载体是更加严谨型的质粒，就是每个细菌里的拷贝数较低，能量守恒，细菌摄取能量的能力是一定的，用来合成蛋白质，核酸的合成必然受一定得限制。
维真生物-如何阅读基因载体图谱
如何阅读基因载体图谱 基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件： （1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒； （2）介导外源基因的转移和表达； （3）对人体不致病； （4）在环境中不会引起增殖和传播。 非病毒载体一般是指质粒DNA。 2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。 3、按功能分类：克隆载体、表达载体 克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。 表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。 载体组成元件 1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 4、P/E：启动子/增强子 5、Terms：终止信号 6、加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 示例阅读载体： pENTER载体 1）human ORF + pENTER载体 2） CMV启动子，T7启动子 3） ORF的C端融合了Flag和His tag 4) 多克隆位点，常用AsisI 和 MluI(人源基因上不常见的)
如何阅读分析质粒图谱
如何阅读分析质粒图谱 日期：2012-04-18来源：未知作者：xilu点击：次 如何阅读分析质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 1. 复制起始位点Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4. P/E 启动子/增强子 5. Terms 终止信号 6. 加poly(A)信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1. Ampr水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2. tetr可以阻止四环素进入细胞。 3. camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活 5. hygr使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
如何阅读质粒图谱(更新版本)
如何阅读质粒图谱 最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于 大家分享。 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 #复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 ＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+ ＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l ＃P/E 启动子/增强子l ＃Termsl 终止信号 ＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 ＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 ＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 ＃核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。l ＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
质粒图谱的阅读方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 质粒图谱的阅读方法 质粒图谱的阅读方法载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 a. 复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。 原核生物 DNA分子中只有一个复制起始点。 而真核生物 DNA分子有多个复制起始位点。 b. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ c. 多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 d. P/E 启动子/增强子 e. Terms 终止信号 f. 加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用二、如何阅读质粒图谱第一步： 首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）。 第二步： 再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1） Ampr 水解－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2） tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3） camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4） neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使 G418（长那霉素衍生物）失活（5） hygr 使潮霉素失活。 第三步： 1 / 6
看多克隆位点（MCS）。 它具有多个限制酶的单一切点。 便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。 决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步： 再看外源 DNA 插入片段大小。 质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA 片段。 一般来说，外源DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步： 是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。 克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。 选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a. 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 b. 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）
阅读质粒图谱的基本方法
阅读质粒图谱的基本方法.txt爱情是彩色气球，无论颜色如何严厉，经不起针尖轻轻一刺。一流的爱人，既能让女人爱一辈子，又能一辈子爱一个女人！[转帖] 阅读质粒图谱的基本方法 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 a复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一 个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 b 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp ,Kan c 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 d P/E 启动子/增强子 e Terms 终止信号 f 加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于 外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标 志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的 基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外 源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转 化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位 点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入 一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要 以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子 编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转 录的部位，但启动子本身不被转录。 b增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有 增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向 无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子， 负调控序列。 c核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体
质粒阅读方式
一、如何阅读质粒图谱（转） 载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多λ克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子－为真核λ基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 λ转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA 的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信
如何阅读分析质粒图谱
基因酷质粒图谱https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/bbs/forum-38-1.html，收藏了将近800种质粒的图谱及相关信息 特向大家推荐，介绍及使用方法见： https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/bbs/thread-417-1-1.html 质粒图谱信息 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体
怎么查找质粒图谱
经常在坛子里看到一些人求助质粒图谱，很多时候我发现其实有些质粒图谱还是很容易找到了，刚开始帮忙查找了下，还公布了一些查找质粒图谱比较好的网站，后来看得多了，很多时候，这样的帖子直接跳过了。今天又看到几个求质粒图谱的帖子，因此决定就查找质粒图谱的方法，写个总结帖子，希望对虫子们有些帮助。这些方法，大部分是自己学习的过程中积累的，也许总结得还不够全面，望其他虫友指正。 方法一：安装软件Vector NT 做分子实验，经常和不同的质粒打交道，了解各种质粒的图谱信息是必需的，invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，功能强大、界面美观，使用起来很人性化。后面的很多方法都是基于在这款软件的使用之上，因此个人觉得要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。而且，一旦安装了这款软件，你就发现这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱（不是有虫子求pRS系列质粒吗？帖子链接https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/bbs/viewthread.php?tid=3103223&fpage=1，如下图，数据库中本身就有很多）。这里就不一一细说，各位虫子可以自己体验下。（这款软件的下载和使用说明书站内很多）
方法二：查找质粒图谱的网站： 这个之前有人求助质粒图谱时，我在回应求助帖里面公布过几个我经常用的网址，估计不是专题，很多人没看到，现在在此重新总结下 1.Vector Database 地址：https://https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/g?a=vdb 这个网站很页面很人性化，直入主题，也是我经常用到一个网站，比如同样这个帖子求pRS类质粒图谱（注意，是一类质粒图谱，没关系，照样能找到），直接在搜索框输入pRS，可以看到，之类质粒一共有三十多个。
如何阅读质粒图谱
一、载体主有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多 克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆
载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或 操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子－为真核λ基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 λ转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT 或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。 三、载体及其分类 载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的 基因片段进入受体细胞的DNA。 载体的分类 按功能分成：（1）克隆载体：都有一个松弛的复制子，能带动 外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨型载体）（2）表达载体：具有克隆载体的基本元件 （ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。
认识质粒图谱
一、如何阅读质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。 而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。 一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 二、相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子－为真核l基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 l转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA 的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。 三、载体及其分类 载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载
如何阅读质粒图谱
如何阅读质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 1. 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核 生物DNA分子有多个复制起始位点。 2. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4. P/E 启动子/增强子 5. Terms 终止信号 6. 加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1. Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2. tetr 可以阻止四环素进入细胞。 3. camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 4. neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 5. hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 1. 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA 分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。
查询质粒方法汇总
如何查找质粒图谱之我见——plasmid map, Vector Sequence方法汇总 经常在坛子里看到一些人求助质粒图谱，很多时候我发现其实有些质粒图谱还是很容易找到了，刚开始帮忙查找了下，还公布了一些查找质粒图谱比较好的网站，后来看得多了，很多时候，这样的帖子直接跳过了。今天又看到几个求质粒图谱的帖子，因此决定就查找质粒图谱的方法，写个总结帖子，希望对虫子们有些帮助。这些方法，大部分是自己学习的过程中积累的，也许总结得还不够全面，望其他虫友指正。 方法一：安装软件Vector NT 做分子实验，经常和不同的质粒打交道，了解各种质粒的图谱信息是必需的，invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，功能强大、界面美观，使用起来很人性化。后面的很多方法都是基于在这款软件的使用之上，因此个人觉得要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。而且，一旦安装了这款软件，你就发现这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱。这里就不一一细说，各位虫子可以自己体验下。（这款软件的下载和使用说明书站内很多） 方法二：查找质粒图谱的网站： 这个之前有人求助质粒图谱时，我在回应求助帖里面公布过几个我经常用的网址，估计不是专题，很多人没看到，现在在此重新总结下 1.Vector Database 地址：https://https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/g?a=vdb 这个网站很页面很人性化，直入主题，也是我经常用到一个网站，比如同样这个帖子求pRS类质粒图谱（注意，是一类质粒图谱，没关系，照样能找到），直接在搜索框输入pRS，可以看到，之类质粒一共有三十多个。
pcDNA3.1质粒图谱
pcDNA?3.1(+) pcDNA?3.1(–) Catalog nos. V790-20 and V795-20 Version K 10November2010 28-0104 User Manual
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Table of Contents Important Information (v) Accessory Products (vi) Methods (1) Overview (1) Cloning into pcDNA?3.1 (2) Transfection (6) Creating Stable Cell Lines (7) Appendix (10) pcDNA?3.1 Vectors (10) pcDNA?3.1/CAT (12) Technical Support (13) Purchaser Notification (13) References (15) iii
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Important Information pcDNA? Vectors This manual is supplied with the following products. Product Catalog no. pcDNA?3.1(+) Vector V790-20 pcDNA?3.1(–) Vector V795-20 Shipping and Storage Vectors are shipped on wet ice. Upon receipt, store at –20°C. Contents The pcDNA?3.1 vector components pcDNA?3.1 are listed below: Item Concentration Volume pcDNA?3.1 Vector pcDNA?3.1(+) or pcDNA?3.1(–)20 μg at 0.5 μg/μl, in TE buffer, pH 8.0 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 40 μl Control Plasmid pcDNA?3.1/CAT 20 μg at 0.5 μg/μl, in TE buffer, pH 8.0 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 40 μl Product Qualification The Certificate of Analysis provides detailed quality control information for each product. Certificates of Analysis are available on our website. Go to https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,/support and search for the Certificate of Analysis by product lot number, which is printed on the box. v
质粒图谱大全
（转载） 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19RDNA pUC57DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescriptIIKS( ) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits 四.PGEX系列表达载体 TEcoR?pGEX-1I/BAP
pcDNA3.1质粒图谱
pcDNA3.1(+) pcDNA3.1(-) Catalog nos. V790-20 and V795-20, respectively Version I 081401 28-0104 https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html, tech_service@https://www.sodocs.net/doc/1011387718.html,
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Table of Contents Table of Contents (iii) Important Information (v) Purchaser Notification (vi) Methods (1) Overview (1) Cloning into pcDNA3.1 (2) Transfection (6) Creation of Stable Cell Lines (7) Appendix (10) pcDNA3.1 Vectors (10) pcDNA3.1/CAT (12) Technical Service (13) References (15) iii
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Important Information Contents pcDNA3.1 is supplied as follows: Catalog no.Contents V790-2020 μg pcDNA3.1(+), lyophilized in TE, pH 8.0 20 μg pcDNA3.1/CAT, lyophilized in TE, pH 8.0 V795-2020 μg pcDNA3.1(-), lyophilized in TE, pH 8.0 20 μg pcDNA3.1/CAT, lyophilized in TE, pH 8.0 Shipping/Storage Lyophilized plasmids are shipped at room temperature and should be stored at -20°C. Product Qualification Each of the pcDNA3.1 vectors is qualified by restriction enzyme digestion with specific restriction enzymes as listed below. Restriction digests must demonstrate the correct banding pattern when electrophoresed on an agarose gel. The table below lists the restriction enzymes and the expected fragments. Vector Restriction Enzyme Expected Fragments (bp) pcDNA3.1(+)Nhe I Pst I Sac I 5428 1356, 4072 109, 5319 pcDNA3.1(-)Nhe I Pst I Sac I 5427 1363, 4064 169, 5258 pcDNA3.1/CAT Nhe I Pst I Sac I 6217 2145, 4072 109, 6008 v
质粒图谱大全
（） 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19RDNA pUC57DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescriptIIKS( ) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits 四.PGEX系列表达载体 TEcoR?pGEX-1I/BAP
教你如何阅读质粒图谱
一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物dna分子中只有一个复制起始点。而真核生物dna分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，kan+ 多l 克隆位点：mcs克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号加poly（A）信号：可以起到稳定m rna作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori 的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记：（1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。（3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。（4）neor（kan r）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。（5）hygr：使潮霉素β失活。第三步：看多克隆位点（mcs）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步：再看外源dna插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb 的外源dna片段。一般来说，外源dna片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。相关概念：启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号启动子－促进DNA 转录的DNA 顺序，这个DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA 分子上可以与rna pol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。增强子/沉默子－为真核 l 基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。核糖体结合位点/起始密码/SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：m rna有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是aug（起始密码）和SD 序列。l 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列，此位点 down－stream 有一段gt或 T 富丰区，这2部分共同构成 poly （A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA 的保守序列，此位点 down－ stream 有一段gt或T 富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。三、载体及其分类载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 P.S.基因工程所用的vector 实际上是DNA 分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA。载体的分类按功能分成：（1）克隆载体：都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA 片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨型载体）（2）表达载体：具有克隆载体的基本元件 （ori,Ampr,mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA 顺序的载体。按进入受体细胞类型分：（1）原核载体（2）真核载体（3）穿梭载体（sbuttle vector）指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭往返两种生物之间）。 P.S. 穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子，以确保两类细胞中都能扩增。基因工程载体的3个特点：（一）都能独立自主的复制：载体DNA 分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域，如mcs，插在其中的外源DNA 片