MLU Presentation_06_2015_International_Office_1

胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒使用说明

胃蛋白酶（Pepsin）试剂盒使用说明 分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC2320 规格：50/24S 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入25mL试剂二充分溶解。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入25mL蒸馏水充分溶解。 试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入30mL蒸馏水充分溶解。 试剂六：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，0.5μmol/mL酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。 产品说明： 胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。 自备仪器和用品： 研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰和蒸馏水。 操作步骤：

一、粗酶液提取： 组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min，调节波长到580nm，蒸馏水调零。 2.试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。 3.标准管：取EP管，加入100μL标准品，200μL试剂二，600μL试剂五，100 μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A标准管。 4.空白管：取EP管，加入100μL蒸馏水，200μL试剂二，600μL试剂五，100 μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A空白管。 5.对照管：取EP管，加入500μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入500 μL试剂四，盖紧后摇匀1min；加入100μL粗酶液，混匀后8000g4℃离心10分钟； 取上清液100μL，加入新EP管，再加入200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A对照管。 6.测定管：取EP管，加入100μL粗酶液，500μL试剂三，置于37℃水浴保温 10min；加入500μL试剂四，盖紧后摇匀1min；8000g4℃离心10分钟；取上清液100μL，加入新EP管，再加入200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm测光吸收，记为A测定管。 注意：空白管和标准管只需要测定一次。 三、计算公式： 1)按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。 胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）=C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 货号：BC2310 规格：50T/48S 产品内容： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解。 试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。 产品说明： 胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。 胰蛋白酶催化水解BAEE的酯键，生成BA，BA在253nm处有吸收峰，通过测定253nm吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。 自备仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 称取约0.1g样品，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000rpm4℃离心10min，取上清液，即粗酶液，置冰上待测。或者直接称取1mg酶粉，加1mL提取液，充分混匀后置冰上待测（为保证实验的准确性建议梯度稀释）。 二、测定： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到253nm，蒸馏水调零。 第1页共2页

2.工作液的配制：将试剂一与试剂二按2:97配置工作液，按需配制，并置于37℃水浴预热30min以上。 3.空白管：取1mL石英比色皿，加入990μL工作液，再加入10μL蒸馏水，混匀，迅速于253nm测定0s 和60s的吸光度，分别记为A1、A2，△A空白=A2-A1。 4.测定管：取1mL石英比色皿，加入990μL工作液，再加入10μL粗酶液，混匀，迅速于253nm测定0s 和60s的吸光度，分别记为A3、A4，△A测定=A4-A3。 三、胰蛋白酶活性计算： 1.按蛋白浓度计算： 活性单位（U）定义：在1mL体系下，37℃每毫克蛋白质每分钟催化253nm处吸光值增加0.001为一个单位。胰蛋白酶（U/mg prot）=(△A测定-△A空白)÷0.001÷（Cpr×V1）÷T =100000×(△A测定-△A空白)÷Cpr 2.按样本鲜重计算： 活性单位（U）定义：在1mL体系下，37℃每克组织每分钟催化253nm处吸光值增加0.001为一个单位。 胰蛋白酶（U/g鲜重）=(△A测定-△A空白)÷0.001÷（W×V1÷V2）÷T =100000×(△A测定-△A空白)÷W Cpr：粗酶液蛋白质浓度（需要另外测定），mg/mL；W：样本鲜重，g； V1：加入反应体系中粗酶液体积，10μL=0.01mL；V2：粗酶液总体积，1mL； T：反应时间，1min。 注意事项： 实验前用1～2个样做预实验，保证吸光值变化在0.01～0.15之间。 第2页共2页

SUMO蛋白酶使用说明

SUMO蛋白酶使用说明 货号：P2070 规格：1000U(200μL) 产品内容： 试剂名称规格保存温度 SUMO蛋白酶（5U/μL）200μL-80℃ SUMO Protease Buffer1mL×2-20℃ 产品说明： SUMO蛋白酶也称Ulp，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶，它能识别SUMO蛋白的三级结构，而不是氨基酸序列，因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。SUMO蛋白酶在较宽范围的反应环境体系中能保持较高的活性，如温度（4-30℃），PH(5.5-9.5)等，SUMO蛋白酶带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。 保存条件： SUMO蛋白酶-80℃长期保存，可存储2年；首次使用后可置于-20℃保存，避免反复冻融。SUMO Protease Buffer可置于-20℃保存。 酶活定义： 在1×SUMO Protease Buffer(50mM Tris-HCl,1mM DTT,pH8.0)中，30℃反应1h，剪切>85％的2μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 使用方法说明： 1.SUMO蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100。

2.酶切体系： 融合蛋白1000μg SUMO Protease Buffer20μL SUMO蛋白酶2μL ddH O定容至1000μL 2 3.酶切条件：推荐4℃酶切过夜，用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索，以下酶切分析图片可供参考。 4.酶切后可取少量样本进行SDS-PAGE分析，若要去除酶切后体系中的SUMO蛋白酶，可用His标签纯化树脂亲和层析。 酶切后电泳分析图: 4℃酶切3h;5h;6h;7h;8h;10h;12h;22h后SDS-PAGE电泳图。 注意事项： 1.为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。

胰蛋白酶(Trypsin)试剂盒说明书

货号: QS2303 规格：50管/48样胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。 测定原理： 胰蛋白酶催化水解BAEE的酯键，生成BA，BA在253nm处有吸收峰，通过测定253nm 吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。 粗酶液提取： 组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到253 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二置于37℃水浴预热30min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入10μL蒸馏水，100μL试剂二，900μL试剂三，迅速混匀于253nm测定0s和60s的吸光度A1和A2，△A空白= A2-A1。 4. 测定管：取1mL石英比色皿，加入10μL粗酶液，100μL试剂二，900μL试剂三，迅速混匀于253nm测定0s和60s的吸光度A3和A4，△A测定= A4-A3。 胰蛋白酶活性计算公式： (1) 按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃每毫克蛋白质每分钟催化253nm处吸光值增加1为1个酶活单位。 胰蛋白酶（U/mg prot）= (△A测定-△A空白) ×V反总÷（Cpr×V1）÷T =101×(△A测定-△A空白) ÷Cpr Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），10μL=0.01 mL；V反总：反应总体积，1.01mL；T：反应时间（min），1min。 （2）按照样本质量计算 活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化253nm处吸光值增加1为1个酶活单位。 胰蛋白酶（U/g鲜重）= (△A测定-△A空白) ×V反总÷（W×V1÷V2）÷T 第1页，共2页

复方胃蛋白酶颗粒说明书

复方胃蛋白酶颗粒说明书 导读：我根据大家的需要整理了一份关于《复方胃蛋白酶颗粒说明书》的内容，具体内容：复方胃蛋白酶颗粒(康诺)用于消化不良、食欲缺乏。下面是我整理的，欢迎阅读。复方胃蛋白酶颗粒商品介绍通用名：复方胃蛋白酶颗粒生产厂家: 南宁康诺生化制药有限责任公... 复方胃蛋白酶颗粒(康诺)用于消化不良、食欲缺乏。下面是我整理的，欢迎阅读。 复方胃蛋白酶颗粒商品介绍 通用名：复方胃蛋白酶颗粒 生产厂家: 南宁康诺生化制药有限责任公司 批准文号：国药准字H45021315 药品规格：10g*10袋 药品价格：￥15元 【通用名称】复方胃蛋白酶颗粒 【商品名称】复方胃蛋白酶颗粒 【拼音全码】FuFangWeiDanBaiMeiKeLi 【主要成份】复方胃蛋白酶颗粒为复方制剂，每袋(10克)含胃蛋白酶100单位，维生素B10.5毫克，山楂300毫克。 【性状】复方胃蛋白酶颗粒为浅红色至浅棕色颗粒，味酸甜。 【适应症/功能主治】用于消化不良、食欲缺乏。 【规格型号】10g*10袋

【用法用量】口服。成人一次2袋，一日3次。5岁以下小儿一次1袋。5岁以上同成人量，一天3次。 【不良反应】尚不明确。 【禁忌】消化道出血患者禁用。 【注意事项】1对复方胃蛋白酶颗粒过敏者禁用，过敏体质者慎用。2 复方胃蛋白酶颗粒性状发生改变时禁止使用。3请将复方胃蛋白酶颗粒放在儿童不能接触的地方。4儿童必须在成人监护下使用。5如正在使用其他药品，使用复方胃蛋白酶颗粒前请咨询医师或药师。 【儿童用药】尚不明确。 【老年患者用药】尚不明确。 【孕妇及哺乳期妇女用药】尚不明确。 【药物相互作用】1不宜与抗酸药同服。2在碱性环境中活性降低。3与铝制剂相拮抗，不宜同服。4如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。 【药物过量】尚不明确。 【药理毒理】复方胃蛋白酶颗粒中胃蛋白酶为一种蛋白水解酶，能在胃酸参与下使凝固的蛋白质分解成蛋白□及蛋白胨和少量多肽;维生素B1参与体内辅酶形成，是碳水化合物代谢所必需;山楂可消食健胃。 【药代动力学】尚不明确。 【贮藏】遮光密封，置阴凉处。 【包装】10g*10袋/盒。 【有效期】24月

夏盛蛋白酶说明书

夏盛中性蛋白酶 夏盛中性蛋白酶是一种用于啤酒行业的酶制剂。它适应啤酒糖化阶段蛋白休止工艺的要求，高效作用于蛋白质肽键，生成短肽以及氨基酸，提高麦汁的α-氨基氮含量，为酵母提供营养。本品是通过夏盛选育的优秀菌株经深层液体发酵而制成。 作用机理 夏盛中性蛋白酶是一种键内酶，作用在蛋白质肽键上，主要生成物为多肽、短肽、以及氨基酸。这些产物是形成游离态氨基氮的重要物质，为酵母提供营养。如果为酵母提供的α-氨基氮不足的活，会影响发酵的质量，导致啤酒质量低劣。而在糖化工序中加入夏盛中性蛋白酶有助于提高麦汁的α-氨基氮含量。当使用劣质的麦芽或大量辅料来制造啤酒时，添加夏盛中性蛋白酶更为有效。有关研究表明，用正常的麦芽时，仅30-40%的蛋白质被溶解形成；而添加了夏盛中性蛋白酶后，这一比例可提高到40-50%。可以选用玉米、小麦等蛋白质相对难溶解的辅料。 产品外观 夏盛中性蛋白酶是棕色或浅棕色、易溶粉末。 活力特性 夏盛中性蛋白酶最适温度是40-50℃，最适pH6.0-7.5（见图1，2）。 图1 夏盛中性蛋白酶温度曲线图2中性蛋白酶pH曲线 作用条件 本品作用于蛋白休止阶段，在35-55℃，pH5.6-7.0作用效果良好。 产品标准：本产品执行企业标准。

包装与储存 夏盛中性蛋白酶采用无毒塑料桶包裝，10kg/桶。 本品属生物活性物质，应置于低温、干燥处，避免阳光直射。 使用方法 本品为粉末状制剂，使用前应先用糖化水适量溶解稀释，于糖化投料时加入。 推荐的加量为麦芽干重的0.01%～0.05%（依据麦芽的质量作适当调整）。 本品在麦汁煮沸中钝化。 本品因发酵原料、周期等因素，颜色会稍有差异，不影响使用功效。 产品保质期 本产品原封装在阴凉、干燥环境下保质期12个月，5℃～15℃低温干燥环境下，保质期18个月。

重组蛋白酶K使用说明

重组蛋白酶K使用说明 酶活：45U/mg蛋白 保存：-20℃保存，有效期至少2年。 产品简介： 蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到，用于生物样品中蛋白质的一般降解。该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。在较广的pH范围内（pH4-12.5）均有活性，在尿素和SDS中也较为稳定，还具有降解天然蛋白质的能力。蛋白酶K的用途广泛，主要的应用行业包括：医疗及基础研究领域：基因诊断试剂盒；基因组DNA提取试剂盒；RNA提取试剂盒中取出DNA和RNA制备中的核酸酶；此外，还应用于：皮革工业（皮革软化及精细化、脱毛和软化、蚕丝脱胶）制备脉冲电泳的染色体DNA；提取组织中非蛋白成分时，降解含有蛋白质杂质；食品、酿造工业：肉类嫩化、酒类澄清；洗涤工业：酶洗衣粉、洗衣液等也有应用。 使用说明： 蛋白酶K配成液态后-20oC保存12个月。溶解后，建议分装保存，避免反复冻溶。如果需要在2~8oC环境下放置，超过3天后，建议过滤除菌或加入抑菌剂如0.3%叠氮化钠，防止微生物污染。 稀释缓冲液 根据需要，利用20mM Tris-HCL缓冲液(pH7.5)溶解成20mg/ml的工作浓度 质量说明 活性单位定义 37oC、pH7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1μmol酪氨酸所需蛋白酶K的量，定义为一个单位（U）。 脱氧核糖核酸酶残留 以λDNA为底物，37oC消化4小时以上，未检测到脱氧核糖核酸酶活性。 核糖核酸酶残留 37oC消化12小时以上，未检测到核糖核酸酶活性。

胃蛋白酶质控说明书

胃蛋白酶原质控（高值）说明书 【产品名称】 通用名称：胃蛋白酶原质控（高值） 商品名称：QC-PG-H“荣研” 英文名称：Pepsinogen Control （High） 【包装规格】 1mlx10 【预期用途】 常规检测血清.血浆中的胃蛋白酶原I和II过程中精密度控制。 是用自动分析装置检测血清、血浆中的胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II时的高浓度质控血清。【主要组成成分】 本品是以人血清为原料制成的冻干品。 下表记载了将本品溶解到1.0ml的蒸馏水中，用胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II定量检测试剂盒（乳胶免疫测检测定法）检测胃蛋白酶原高浓度质控的平均值和参考范围。以Lowry法测定蛋白质浓度的精制胃蛋白酶原I和II标准物为基准，设定测定值。 测定值因手法等原因会有一些变动，所以，最好各使用单位设定各自仪器的平均值和参考范围。 【适用仪器】

日立7180 【储存条件及有效期】 储存条件：2-8℃ 有效期：2年 1)各试剂应按指定的储存条件下保存，请勿使用过期的试剂。 2)本品溶解后，应在2-10℃保存，7日以内使用。 【校验方法】 1．轻打开外盖 2.轻轻取下小瓶的橡胶塞，用吸液管准确地加入1.0ml的蒸馏水。 3.盖上橡胶塞，轻轻来回颠倒混合，为了更加均匀地混合溶解，也可以将小瓶放桌面上，平地摩擦桌面像画圆一样进行混合。请至少放置15分钟。 4.检测时，请用检测未知样本同样的方法进行检测。 5.加入到测试杯中时，本品的液面上如出现气泡，会引起检测误差，所以请去除气泡。【注意事项】 1.本品为体外诊断用品，不能用于其它用途。 2.本品是人血清制品，本品的HBs抗原，HIV（HIV-1，HIV-2）抗体以及HCV抗体测试为阴性。但仍不能忽视传染的危险性以及病原体的存在，所以，在使用时请与患者的样本同样重视，注意使用。 3.接触本品的容器和废液等，应使用次氯酸钠溶液（有效氯浓度1,000ppm以上，浸泡1个小时以上）或者戊二醛（205，浸泡1个小时以上）作为消毒液进行消毒处理，或者使用高压灭菌锅（121℃，20分钟以上）进行灭菌处理。 4.本品飞溅时，请使用80%的乙醇等进行擦拭消毒。

rTEV蛋白酶使用说明书

rTEV 蛋白酶使用说明书 货号：P2060 规格：1000U（200μL） 产品简介： rTEV 蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶，该酶特异性识Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly 七氨基酸序列。rTEV 蛋白酶与肠激酶U(EK)、Thrombin、FactorXa、SUMO 等蛋白酶相比，具有高活性、高特异性的双重特点，rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特异性，已成为融合蛋白表达后去除融合tag 的首选蛋白酶。该酶经6×His 标签纯化而得(含组胺酸标签)，纯度达99％，剪切反应完毕后可通过His 标签纯化树脂Ni-NTA Resin(Cat.No.P2010)去除。 产品内容：试剂名称 规格保存温度rTEV 蛋白酶（5U/μL） 200μL -80℃250×rTEV Protease Buffer 1mL -20℃ 说明书 1份保存条件： rTEV 蛋白酶-80℃长期保存，可存储2年；首次使用后可置于-20℃保存，可储存6个月，避免反复冻融。250×rTEV Protease Buffer 可置于-20℃保存。 酶活定义： 在1×rTEV Protease Buffer 中，30℃反应1h，剪切>85%的3μg 底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 使用方法说明： 1.推荐使用溶液：50mM NaH 2PO 4,150mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,10%甘油，pH 8.0buffer 中进行剪 切。 2. 250×rTEV Protease Buffer：250mM EDTA,250mM DTT,PH 8.03.rTEV 蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100

中性蛋白酶活性测定试剂盒使用说明

中性蛋白酶活性测定试剂盒使用说明 分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC2290 规格：50T/24S 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加10mL蒸馏水溶解。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10mL试剂一，沸水溶解。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加50mL蒸馏水溶解。 试剂五：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5mL EP管和蒸馏水。 产品说明： NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。 中性条件下，NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。 操作过程： 一、粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 2.血清或培养液：直接测定。 3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 二、测定操作： 1.分光光度计预热30min，调节波长到680nm，蒸馏水调零。 2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。 3.对照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL试剂二，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入200μL试剂三，混匀后8000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm 测定光吸收，记为A对照管。 4.测定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL试剂三，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入200μL试剂二，混匀后8000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm 测定光吸收，记为A测定管。（注意与空白管不同，先加试剂三，后加试剂二） 5.空白管：取EP管，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A空白管。 6.标准管：取EP管，加入200μL标准品，1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A标准管。注意：空白管和标准管只需要测定一次。 三、计算公式： 1.按照样本蛋白浓度计算 NP活性单位定义：30℃每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。

Prescission蛋白酶制作及使用方法

Prescission蛋白酶制作及使用方法 柱下酶切用酶的制作方法 1L TB菌体用PBS重悬至35ml做高压裂解，最终40ml总量。上清用流速，挂3-4ml柱子，PBS漂洗30ml。用含有10%甘油的洗脱液洗脱，每管收集体积为2ml，只取主峰，可以粗略定量，也可以取百分之一的量在Akta上用上样泵来做积分定量（参考下面的积分定量方法举例）。也可以用分光光度计定量，一般可用稀释20倍定量。马上分装成每管，可切5ml介质。 柱上酶切用酶的制作方法 亲和纯化方法同柱下酶切，洗脱液不含甘油，得到10ml左右洗脱液，浓缩10倍，再加入10ml 含有10%甘油和2mM DTT的PBS稀释，一共浓缩三次换buffer，每次浓缩时间一般在30分钟以内。最终浓缩至10mg/ml，浓缩10分钟混匀一次。尽快分装成每管，可切5ml介质。 柱上酶切用酶的Q纯化制作方法 亲和纯化方法同柱下酶切，洗脱液不含甘油，收集后加水大于三分之一。过Q柱，AB液配方中含有10%甘油，8%B洗脱，50%B直接洗下后积分定量，分装。 粗略定量参考 2000峰宽为，蛋白质总量为24mg，取了12ml，浓度为2mg/ml，直接分装的话，可以用125ul和250ul每份。 积分定量方法举例 取10ul ppase浓缩液，用本底缓冲液（PBS）稀释到500ul，用上样泵做积分定量，积分体积为325mAu*ml，可知浓缩好的蛋白质光吸收为每毫升为，光吸收为1，浓缩好的蛋白质浓度为ml，一共24mg 蛋白。 表达 1.取-80度保存的质粒pGEX-PPase转化BL21（DE3）感受态，涂布，37度孵箱培养12~16 h。 2.挑取单克隆到50ml LBA培养基37度培养12-15小时。 3.1%接种到1L TBA中，培养3小时，4度水浴降温，加终浓度为0.2mM的IPTG，度诱导培 养18小时。 4.4000rpm离心20分钟收菌。加入PBSE（1mM EDTA）至终体积30-40ml重悬。 纯化 1．高压裂解2-3次。 2．万转离心30分钟，留上清。 3．PBSS平衡5ml的GST柱，上样，PBSS漂洗，4℃放置过夜，等RNA降解，再用含有10%甘油和% Tween20的酶切buffer漂洗干净。洗脱用含10%甘油的还原性谷胱甘肽溶液，2ml每管收集，取峰尖3*。 4．上样泵灌盐酸胍再生柱子，重力流灌水，灌20%乙醇，4℃保存柱子。 酶切效率确定 5ul，10ul，20ul酶切PH35C蛋白3-4天，电泳检测酶切产物，全部切开了。估计10ul过夜酶切1L的培养产物足够，下次实验再做验证。 保存 用PCR管，分装50ul每管，冻存于-80度。 使用 谷胱甘肽洗脱的融合蛋白，加入1份PPase，混匀后4度过夜酶切。 缓冲液 1．10*PBSS（欧蒙基础） 配方：5包PBS粉剂（欧蒙），加入360ml 5M NaCl，定容到500ml，4℃保存。 2．500ml 2M Tris（），500ml 2M Tris（）

碱性蛋白酶活性测定试剂盒使用说明

碱性蛋白酶活性测定试剂盒使用说明 分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 货号：BC2300 规格：50T/24样 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加10mL蒸馏水溶解。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10mL试剂一，沸水浴中溶解。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加50mL蒸馏水溶解。 试剂五：液体×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。 产品说明： AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。 在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、 1.5mL EP管、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组

织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 2.血清或培养液：直接测定。 3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 二、测定操作： 1.分光光度计预热30min，调节波长到680nm，蒸馏水调零。 2.试剂二、试剂三和试剂四置于40℃水浴保温30min。 3.对照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液（血清或培养液），200μL试剂二，混匀后置于40℃水浴保温10min；加入200μL试剂三，混匀后8000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A对照管。 4.测定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液（血清或培养液），200μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min；加入200μL试剂二，混匀后8000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A测定管。（注意与对照管不同，先加试剂三，后加试剂二） 5.空白管：取一支EP管，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂四200μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A空白管。 6．标准管：取EP管，加入200μL标准品，1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于40℃水浴保温20min，于680nm测定光吸收，记为A标准管。 注意：空白管和标准管只需测定一次。 三、计算公式： 1.按照样本蛋白浓度计算 AKP活性单位定义：40℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。AKP活性（nmol/min/mg prot）=C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白

胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒说明书

货号：MS2304 规格：100管/48样 胃蛋白酶（Pepsin）试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 测定原理： 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。 自备仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入10mL试剂二充分溶解。 试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。 试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入15mL蒸馏水充分溶解。 试剂六：液体×1 瓶，4℃保存。 标准品：液体×1 支，0.5μmol/mL 酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。 粗酶液提取： 组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 测定步骤： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到580nm，蒸馏水调零。 2. 试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。 3. 标准管：取0.5 mL EP管，加入20μL标准品，40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六， 混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96 孔板，580 nm 测光吸收，记为A 标准管。 4. 空白管：取0.5 mL EP管，加入20μL蒸馏水，40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六， 混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96 孔板，580nm测光吸收，记为A标准空白管。 5. 对照管：取0.5mL EP管，加入100μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入100μL试剂四， 盖紧后摇匀1min；加入20μL粗酶液，混匀后 8000g 4℃离心10分钟；取上清液20μL，加入新 EP管，再加入40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六，混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，580nm测光吸收，记为A空白管。 6. 测定管：取0.5mL EP管，加入20μL粗酶液，100μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加 第1页，共2页

蛋白酶抑制剂Cocktail使用说明书奥默生物

奥默生物电话：021-5096 7598 邮箱：techsupport@https://www.sodocs.net/doc/1b14427953.html, 网站：https://www.sodocs.net/doc/1b14427953.html, 产品简介： 本产品是由6种独立的蛋白酶抑制剂（不含EDTA）按照优化的配比配置而成的蛋白酶抑制剂混合物。其作用的靶点分别为丝氨酸蛋白酶，丝氨酸半胱氨酸蛋白酶，氨肽酶，半胱氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶等，广泛作用于各种蛋白酶，可称之为广谱蛋白酶抑制剂。 本产品应于-20℃环境下密封保存，产品有效期为2年。使用时可短时间放置于常温或4℃中，用毕应立即放回-20℃中保存。 储存条件： 蛋白酶抑制剂Cocktail (不含EDTA，100X DMSO储液) 蛋白酶抑制剂Cocktail 使用说明书 蛋白酶抑制剂通过抑制蛋白酶的活性，减少蛋白酶对蛋白的分解，从而有效地提高蛋白质得出率，而且不使细胞及组织本身的性质发生改变。 作用原理： 产品组成：成分 MTT法CCK法 AEBSF Aprotinin Bestatin E-64 Leupeptin Pepstatin A Cysteine proteases Serine proteases Aminopeptidases Serine proteases Serine and cysteine proteases Aspartic proteases Irreversible Reversible Reversible Reversible Reversible Irreversible 靶点靶点类型运输条件： 蓝冰运输。

奥默生物 使用说明： 1. 本产品适用于哺乳动物细胞及组织的蛋白质提取及纯化，蛋白免疫印迹（WesternBlot）, 免疫共沉淀（Co-IP），免疫荧光（IF），免疫组织化学（IHC），激酶测定（kinaseassay） 和抗体，酶诊断试剂盒（Dignose Kit）等。 2. 实验时，按照1:100的容积比，将Cocktail预先加入在已准备好的实验体系中，轻轻混合均 匀。 注意事项： 1. 本产品不含EDTA，为100×DMSO储存液形式。使用时应调整Cocktail浓度为1×，若有蛋 白酶含量丰富的细胞或组织，可适当增加Cocktail在实验体系中的浓度。 2. 本产品置于-20℃保存时，DMSO呈现冰晶状态，此属于正常现象，非产品质量问题。 3. 本产品仅供科研使用。 常见问题解答： 1. 蛋白酶抑制剂Cocktail有哪些优势？ 回答：针对多种氨基酸的靶点，对目的蛋白进行全方位的保护，使其免受内源性蛋白酶的降 解，蛋白的得出率较高，大大提高实验效率。 2. 可以配合细胞裂解液一起使用吗？ 回答： 可以，这样可以充分的裂解细胞或组织中的蛋白，有效降低蛋白质的降解。 3. 为什么需要用DMSO溶解？可否换成其他溶剂？ 回答： 蛋白酶抑制剂Cocktail较易溶解于DMSO，且DMSO通常不会影响实验结果，而且性 质稳定，利于保存和运输。因此暂不考虑其他溶剂。 4. 实验时误将其放置常温下，会不会造成试剂变质？ 回答： 短时间放置于常温下是可以的，不会造成试剂变质，因为蛋白酶抑制剂通常比较稳定。 如果实验需要在常温下进行，建议将其置于冰块操作，用毕后迅速放置-20℃保存。同时应尽 量避免反复冻融。 电话：021-5096 7598 邮箱：techsupport@https://www.sodocs.net/doc/1b14427953.html, 网站：https://www.sodocs.net/doc/1b14427953.html,

蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明

蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明 一、蛋白酶抑制剂 PMSF： 特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。 溶解性：溶于异丙醇、乙醇、甲醇和丙二醇里>10mg/ml。在水溶液中不稳定。在100%异丙醇，25℃时稳定至少9个月。 分子量：174.2 使用：贮存浓度200mM，工作浓度1mM Leupeptin 亮肽素 特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。 溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。4℃一周稳定，分成小份，冷冻在-20℃至少6个月。 分子量：C20H38N6O4 ×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 × H2O:493.6 使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)。 Aprotinin抑肽酶 特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。 溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如0.1M tris，pH8.0）。pH约7~8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。避免反复冻融, pH>12.8的碱性环境可使其灭活。分子量：6,512 使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.06~2.0 ug/ml(0.01~0.3 uM)。 Pepstatin胃蛋白酶抑制剂 特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶、肾素、组织蛋白酶D、凝乳酶、许多微生物酸性蛋白酶 溶解性：溶于甲醇约1mg/ml；可溶于乙醇，过夜溶解可达到1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保存1个月。 分子量：685.9 使用：贮存浓度1mg/ml，使用浓度0.7 μg/ml(1 μM)。 EDTA-Na2 特性：金属蛋白酶抑制剂 溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的条件下，4℃稳定至少6个月 分子量：372.24 使用：工作浓度0.2~0.5 mg/ml(0.5~1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8~9时再加入。 二、磷酸酶抑制剂 NaF氟化钠 溶解性：溶于水 分子量：41.99 使用：贮存液5M，工作浓度10~20mM。 Na3VO4原矾酸钠 分子量：183.91 溶解性：溶于水，我们购买过来的是原矾酸钠。原矾酸钠需要经过处理以后才能成为激活的矾酸钠，激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用。 原因：原钒酸钠有一定程度的聚合，使用前要激活使之变成单体才有最大抑制效价 原矾酸钠变成激活的矾酸钠的过程是：100mM 原矾酸钠激活储存液配制

胃蛋白酶质控说明书

【产品名称】 通用名称：胃蛋白酶原质控（高值） 商品名称：QC-PG-H“荣研” 英文名称：Pepsinogen Control （High） 【包装规格】 1mlx10 【预期用途】 常规检测血清.血浆中的胃蛋白酶原I和II过程中精密度控制。 是用自动分析装置检测血清、血浆中的胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II时的高浓度质控血清。【主要组成成分】 本品是以人血清为原料制成的冻干品。 下表记载了将本品溶解到1.0ml的蒸馏水中，用胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II定量检测试剂盒（乳胶免疫测检测定法）检测胃蛋白酶原高浓度质控的平均值和参考范围。以Lowry 法测定蛋白质浓度的精制胃蛋白酶原I和II标准物为基准，设定测定值。 测定值因手法等原因会有一些变动，所以，最好各使用单位设定各自仪器的平均值和参考范围。 【适用仪器】 日立7180 【储存条件及有效期】 储存条件：2-8℃ 有效期：2年 1)各试剂应按指定的储存条件下保存，请勿使用过期的试剂。 2)本品溶解后，应在2-10℃保存，7日以内使用。

1．轻打开外盖 2.轻轻取下小瓶的橡胶塞，用吸液管准确地加入1.0ml的蒸馏水。 3.盖上橡胶塞，轻轻来回颠倒混合，为了更加均匀地混合溶解，也可以将小瓶放桌面上，平地摩擦桌面像画圆一样进行混合。请至少放置15分钟。 4.检测时，请用检测未知样本同样的方法进行检测。 5.加入到测试杯中时，本品的液面上如出现气泡，会引起检测误差，所以请去除气泡。【注意事项】 1.本品为体外诊断用品，不能用于其它用途。 2.本品是人血清制品，本品的HBs抗原，HIV（HIV-1，HIV-2）抗体以及HCV抗体测试为阴性。但仍不能忽视传染的危险性以及病原体的存在，所以，在使用时请与患者的样本同样重视，注意使用。 3.接触本品的容器和废液等，应使用次氯酸钠溶液（有效氯浓度1,000ppm以上，浸泡1个小时以上）或者戊二醛（205，浸泡1个小时以上）作为消毒液进行消毒处理，或者使用高压灭菌锅（121℃，20分钟以上）进行灭菌处理。 4.本品飞溅时，请使用80%的乙醇等进行擦拭消毒。 5.试剂瓶是玻璃、塞子是橡胶、瓶盖是聚丙烯（PP），试剂盒主要是纸质材料。 6.按照医疗废弃物处理的相关规定以及防止水质污染等的各种规定，应负责对使用后的试剂、容器以及器具类、各设备进行处理。 7.开盖时，请注意不要划伤手。

胰蛋白酶(Trypsin)试剂盒说明书

货号：MS2303 规格：100管/96样 胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。 测定原理： 胰蛋白酶催化水解BAEE的酯键，生成BA，BA在253nm处有吸收峰，通过测定253nm吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。 自备仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV 板)、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。 粗酶液提取： 组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。 测定： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到253nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二置于37℃水浴预热30min。 3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂二，180μL试剂三，迅 速于253nm 测定0s 和60s 的吸光度A1和A2，△A空白=A2-A1。 4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入10μL粗酶液，20μL试剂二，180μL试剂三，迅 速于253nm 测定0s 和60s 的吸光度A3和A4，△A测定=A4-A3。 胰蛋白酶活性计算公式： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃每毫克蛋白质每分钟催化253nm处吸光值增加1为1个酶活单位。 胰蛋白酶（U/mg prot）= (△A 测定-△A 空白) ×V 反总÷（Cpr×V1）÷T =21×(△A 测定-△A 空白) ÷Cpr （2）按样本质量计算 活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化253nm处吸光值增加1为1个酶活单位。 胰蛋白酶（U/g）= (△A 测定-△A 空白) ×V 反总÷（W×V1÷V2）÷T =21×(△A 测定-△A 空白) ÷W 第1页，共2页