液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用(HPLC-QTOF)
液相色谱-四极杆/飞行时间质谱联用（HPLC-QTOF）
一、开机
1.打开计算机，LAN Switch电源。
2.打开液相各个模块电源，打开质谱前面的电源开关，等待大约两分钟，当听到第二声溶剂阀切换的声音(表明质谱自检完成)后，仪器可以联机。
3.在计算机桌面上双击MassHunter采集软件图标，进入MassHunter工作站。
4.如果MassHunter工作站在之前曾经打开和关闭过，请确认在再次打开工作站之前，关闭MassHunter所有的进程；双击桌面上的图标，在弹出的窗口点击Shut Down，等待所有的Status都变为Terminated后，点击Close。然后再打开MassHunter工作站。注意：在MassHunter采集软件关闭后，再次打开之前，必须执行上面的操作，否则无法进入采集软件。
5. 点击Standby按钮，检查前级真空（典型值应≤2.5Torr）和高真空，等到高真空≤2×10-6Torr后，关闭工作站。
6. 进入仪器诊断软件界面，在菜单上选择Connection > Connect，输入IP地址
192.168.254.12，点击OK。
根据不同的情况，选择不同的Condition HV的模式。0.6 Hour Cycle (Quick Vent) 适用于Q-TOF短暂关机后的Condition，比如更换泵油，短时间停电等。2 Hour Cycle (Optics Service) 适用于对Q-TOF关机，进行简单维护后的Condition，比如清洗毖绅管等。8 Hour Cycle (TOF Service) 适用于对Q-TOF关机，进行比较长时间的维修后的Condtion，比如仪器出现故障后Agilent工程师上门维修后再次开机。13 Hour Cycle (Installation) 适用于Q-TOF安装时第一次开机后的Condtion；当者是比如长假关机后再次开机。
7. 标签栏显示Instrument ON/OFF界面，点击Condition HV。
8. 当Condition HV结束后，在File菜单上选择Connection > Disconnect，关闭TOF Diagnostics软件。
9. 重新进入MassHunter工作站。
二、调谐和校正
准备调谐和校正
将稀释好的TOF-ESI调谐液装入Calibrant B瓶中，调谐液的配置方法见下表(以制备100mL 调谐液计算)。
切换到调谐界面左键/当右键点击Q-TOF图标，选择On。然后在Context下拉框中选择Tune，切换到Tune界面，如果出现Method Editor对话框，选择No。接着出现Agilent MS Acquisition Worklist Pane对话框，选择No。
对于Q-TOF仪器，TOF部分的调谐和校正有下面几种模式：Initial Tune，Standard Tune，Quick Tune，Check Tune，Set Detector Gain以及Calibration。Initial Tune做的项目最多，所需时间最长；Standard TOF Tune次之；Quick Tune最少。Check Tune只是检查仪器状态，不会修改任何参数；Calibration只校正质量轴。注意：建议每天仪器运行之前运行Calibration。
三、方法编辑
在桌面上双击数据采集软件图标，进入MassHunter数据采集界面。在这个界面中完成所有HPLC和Q-TOF的方法参数设置。
新建方法
通过菜单File>New>Method创建一个新的方法。当者通过菜单File>Open>Method来打开D:\MassHunter\Methods\目录下的默认方法Default.m。在这个方法的基础上创建新的方法。注意：不建议使用已有方法直接选择“另存为”来创建新方法，最好的办法就是像上面所述通过全新的方法模板来创建新方法。
自动进样器选项卡
点击自动进样器页面(h-ALS-SL)，设置自动进样器的参数。Standard injection是指进样器吸取样品后直接进样分析。Injection with Needle Wash是指进样器吸取样品后，会先自动清洗进样针的外壁，然后再进样分析。Use Injection Program是指对自动进样器的动作按照自己的需要进行编程，来决定自动进样器一步步如何操作。这种模式很少用到，但对一些特殊的分析，如氨基酸柱前衍生自动分析是最佳的选择。一般建议设置为Injection with Needle Wash，即带洗针的进样方式，这样可以显著减少样品交叉污染。
对于一般的应用来说，不要设置High Throughput。其作用是通过减少两次进样的间隔时间，加快样品分析的速度。这个选项可以一定程度减少每次进样运行之间的等待时间，但若设置不当也可能会增加交叉污染，降低重现性。
Options和Carryover Reduction页面下的参数一般不需要设置，使用默认值即可。
泵选项卡
点击泵的页面，设置泵的参数。在Setup页面设置泵的流量、流动相比例等。Timetable可以让您建立一个梯度程序。也可以编写流量和压力的时间程序。可以通过Insert、Append、Cut、Copy和Paste等功能方便的进行编辑。在Option菜单下可以设置冲程、压缩因子、及最大流量梯度等。
柱温箱选项卡
在柱温箱编辑画面输入柱温箱温度。大部分应用情况下，左右加热的温度设置成相同值。Time Table和Options内的参数一般不需设置，使用默认值
Q-TOF选项卡
Time Segments
可以设定不同的质谱采集时间片断，在每个时间片断内还可以设定不同的试验参
数(Experiment #)。在Q-TOF的参数里面，如果某个参数后标有Seg，则说明这是可以按照Time Segment来设置的参数。如果某个参数后面标有Expt，则说明这是可以按照Experiment来设置的参数。
General
在这里设置离子源的各种参数。在此主要应考虑进入质谱的流动相的实际组成及流量确定适合的Gas Temp，Drying Gas，Nebulizer的值。依据化合物特性及分子量大小来确定适合的Fragmentor，Skimmer，OCT1 RF Vpp，VCap等。
Source
在此设置离子的极性为正还是负，数据保存方式是棒状图还是轮廓图。以及LC流出的流动相是流入MS还是废液等。
Acquisition-TOF Mode
在Acqisition界面，如果选择MS (Seg)，则仪器按照TOF模式采集一级质谱数据。这里设置采集的质量范围，采样速度等。
Acquisition-Auto MS/MS Mode
在Spectral Parameters标签页设定一级和二级质谱的Mass Range，采集速度等参数。四极杆的分辨率(Isolation Width)一般推荐使用Medium (~4 m/z)。
Collision Energy设置碰撞能量。可以使用固定数值，也可以使用线性变换当用表格设定。
在Precursor Selection I标签页设定母离子选择的相关参数：母离子的数量，是否使用动态排除当静态排除等。
在Precursor Selection II标签页设定母离子的优选价态。
在Preferred/Exclude标签页设定母离子优选当者排除的m/z值、保留时间、碰撞能量等。
Target MS/MS Mode
在Spectral Parameters标签页设定一级和二级质谱的Mass Range，采集速度等参数。
Collision Energy设置碰撞能量。可以使用固定数字，也可以使用线性变换当用表格设定。
在Target List标签页设定目标母离子及其相关参数，如保留时间，四极杆分辨率、碰撞能量、采集时间等。
Ref Mass
这个界面来设定是否使用内标校准及内标离子，包括内标离子检测窗口和门槛。常用的正、负参比离子如下表。对于正离子模式，还经常使用149.02332，这是增塑剂的离子，在流动相中经常存在。设置参比时，选择2个不同的离子即可。参比溶液使用９５％乙腈/5%水来配制。参比物质的加入量可以根据实际参比离子的响应做调整。一般我仧希望参比离子的响应丰度能够在10000以上。对于Dual ESI离子源，参比溶液是通过参比Nebulizer导入的。
Chromatogram
Chromatogram界面来设置在运行中实时监视的信号。比如可以显示TIC，EIC，BPC等等。
Properities
在Properties选项卡设定方法路径、前运行及后运行脚本等信息。在Description中可以输入方法说明信息。
保存方法
通过File菜单选择Save>Method，当者点击方法保存按钮保存当前方法。也可以通过File 菜单选择Save As>Method来给方法另存成其他名字。
四、运行单针样品
打开样品栏，输入样品名字、瓶号、数据文件名以及数据保存路径等。Injection Volume若为-1，则表示进样量为方法里面自动进样器参数下的进样量。若为一个有实际意义的值，则实际进样量就是该数值，方法里面自动进样器参数下的进样量被忽略。
调整实时绘图：在实时色谱图显示区单击鼠标右键，单击Change，在弹出的对话框中左侧选择想要监视的信号单击Add添加，设定范围后，单击OK。
五、编辑和运行Worklist
工作表是自动进行样品分析的一系列指令。使用工作表，可对多个样品实现自动进样分析
创建工作表
通过File菜单选择New>Worklist创建新工作表。工作列表面板点击右键，通过弹出的菜单可以实现添加单个当多个样品，复制，插入等功能。这和通过Worklist菜单能实现的功能相同。
添加一个样品
从Worklist菜单中选择Add Sample 。工作列表表格就添加了一行新的样品。在工作列表表格输入以下样品信息：样品名称，样品位置，方法，数据文件名称，样品类型，进样体积，注释和级别名称等。
添加多个样品
从Worklist菜单选择Add Multiple Samples。在Sample Position 选项卡下，填写样品名称，数据文件名称，调用方法，方法路径以及数据文件储存路径等。点击sample Position选项卡，选择要添加的样品所放置的位置。
点击并拖动鼠标来确定一个邻近的区域；在键盘上按住Ctrl点击并拖动鼠标，可以选择其不相邻的位置的样品；使用键盘的Shift+Ctrl 键在相同地方选择多个样品。点击OK 关闭Add Multiple Samples 对话框。指定的样品出现在Worklist表格，并且可以进行再次编辑。从Worklist菜单选择Worklist Run Parameters…，设定工作表的运行信息，方法路径以及数据文件储存路径等。选中Post worklist ，在弹出的窗口选择SCP_InstrumentStandby，这个Script的功能是使得Worklist 在运行完毕后仪器自动切换到Standby
保存工作表
使用工具栏的保存工作列表快捷按钮，当者通过File菜单选择Save as > Worklist 菜单保存工作表.
运行工作表
使用工具栏上的快捷按钮，当者通过Run菜单中选择Worklist，开始运行工作表。
五、关机
注意：关机前务必确认气镇阀处于闭状态，否则前级泵的泵油可能因此回流到质谱的真空腔内，损坏仪器。
点击MS TOF 图标，依下图所示选择Vent开始放空。也可以单击Context下拉框选择Tune，切换至Tune画面，在Diagnostics选项卡选择Vent。
系统开始放空，此过程需要等待大约30min，当等涡轮泵的转速到5%以下之后，关闭MassHunter工作站。如果想在放空过程中监视系统真空状态，则可以按上所述，在Tune 界面的Diagnostics选项卡观察真空。关闭TOF及LC各模块的电源。关闭电脑。如果使用液氮罐，同时关闭自增压阀门。
注意：在日常操作时，必须每周逆时针拧开气振阀，约20-30min，把油气分离器内多余的泵油放回泵内。并检查确认泵油液位在标识的最高和最低刻度之间。