不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达
不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达
不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达戴随（天津市第五中心医院检验科，天津300450）摘要：目的探讨不同来源的鼠伤寒沙门菌侵袭力和毒力基因表达的差异。方法从腹泻患者粪便﹑河水及土壤中共分离出鼠伤寒沙门菌（分别简称为临床株﹑水体株﹑土壤株）34株，分析菌株在上皮细胞黏附﹑侵袭以及巨噬细胞内复制能力的差异；选择与黏附﹑侵袭以及复制阶段相关的毒力基因（鞭毛合成位点filC，致病岛1位点hilA﹑invI，致病岛2位点ssrA﹑sseF），通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测不同来源细菌的毒力基因表达差异。结果土壤株和水体株的黏附力和侵袭力与标准菌株（ATCC 14028）类似，但80%左右的临床株表现出比标准菌株（ATCC 14028）更高的黏附力和侵袭力。在巨噬细胞内的复制结果显示，临床株﹑土壤株以及水体株的胞内复制能力均与标准菌株（ATCC 14028）类似。不同菌株的毒力基因表达情况与细胞黏附﹑侵袭及胞内复制结果相吻合。高侵袭力临床株在黏附期filC基因以及侵袭期hilA﹑invI基因的表达量显著高于标准菌株（ATCC 14028）（P＜0.05），而胞内复制期ssrA和sseF基因的表达量与标准菌株（ATCC 14028）类似。土壤株和水体株在不同时期的基因表达量均
与标准菌株（ATCC 14028）类似。结论鼠伤寒沙门菌临床株显示出较环境菌株更强的黏附力﹑侵袭力及更多的相应毒
力基因表达量，应着重加强对医院内沙门菌感染的防控措施，降低医源性沙门菌的感染率。关键词：鼠伤寒沙门菌；侵袭力；毒力基因表达鼠伤寒沙门菌是一种重要的人畜共患致病菌，广泛寄生于人和动物肠道内。其通过粪口途径传播，主要引起肠胃炎，在免疫功能低下的个体如老人和小孩中能引起全身性中毒症状，严重者可致死[1]。鼠伤寒沙门菌的致病过程分为肠道感染和细胞内感染2个阶段：细菌黏附并侵入小肠上皮细胞，为肠道感染阶段；细菌进入上皮细胞或巨噬细胞内，然后在胞内复制，为细胞内感染阶段。其致病能力与多种毒力因子相关，包括致病岛1﹑致病岛2﹑鞭毛﹑菌毛等[2]，其中影响入侵过程的主要毒力因子为致病岛1，影响胞内复制的主要毒力因子为致病岛2[1-2]。致病菌毒力强弱与细菌来源相关[3-4]。目前，针对沙门菌来源与其致病性之间关系的研究报道甚少。本研究以分离自腹泻患者粪便﹑土壤以及河水的共计34株鼠伤寒沙门菌为研究对象，分析菌株在黏附﹑侵袭﹑胞内复制以及毒力基因表达方面
的差异，为进一步研究鼠伤寒沙门菌的致病特性提供新的实验数据，以期为更好地防控沙门菌感染提供新的思路。1 材料和方法 1.1 菌株与细胞系研究对象为分离得到的34株
鼠伤寒沙门菌，其中包括从医院腹泻患者粪便中获得的18
株（简称临床株，L1～L18），从市内海河水中分离的10株（简称水体株，S1～S10），从土壤中分离的6株（简称土壤株，T1～T6）。所有入选菌株均与O∶4单价血清进行抗血清凝集试验从而被重新鉴定。鼠伤寒沙门菌标准菌株（ATCC 14028）购自美国模式菌种收集中心（American Type Culture Collection，ATCC），由检验科保存。人结肠癌细胞系Caco-2和鼠巨噬细胞系J774A.1购自上海中国科学院细胞库。 1.2 主要试剂用于细胞培养的RPMI-1640培养基﹑胰酶和胎牛血清购自Gibco公司，用于RNA提取的Trizol购自Invitrogen 公司，RNA纯化试剂盒购自QIAGEN公司，cDNA反转录试剂盒及SYBR Green Mix购自TaKaRa公司，24孔细胞培养板购自Corning公司。 1.3 主要仪器恒温CO2细胞培养箱购自Thermo公司，7500荧光定量PCR仪购自ABI公司，高速冷冻离心机购自Eppendorf公司，NanoDrop 2000分光光度计购自Thermo公司，凝胶成像系统购自Tanon公司。1.4 方法1.4.1 细胞培养细胞采用RPMI-1640培养基，补充10%的胎牛血清，于37 ℃恒温培养箱中传代培养。当培养瓶中细胞生长到80%以上时，用胰酶消化，之后将细胞均分于24孔细胞培养板内继续孵育约24 h，待细胞铺满各培养孔后直接用于后续试验。 1.4.2 黏附力及侵袭力检测细菌对上皮细胞的黏附力及侵袭力检测参照ISBERG等[5]报道
的方法进行。收集对数中期的细菌，用RPMI-1640培养基重
悬，采用平板计数方法计算初始菌量。细菌按照感染复数（细菌∶细胞）为10加入至细胞培养板中，以1 000×g离心5 min，在37 ℃﹑5% CO2恒温培养箱中共培养1 h。吸去菌液，用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）洗3次，加入0.1% 十二磺基硫酸钠裂解细胞，在裂解液梯度稀释后涂板并计数。细菌黏附率=黏附细菌数/每孔中加入的细菌数×100%。侵袭力检测方法基本同上。细菌与细胞共培养1 h，吸去菌液并用PBS洗3次，然后在含细菌和细胞的24孔板中加入含有50 μg/mL庆大霉素的培养基，继续培养1 h，以便杀死未进入细胞的细菌。裂解细胞，稀释后涂平板并计数。细菌侵袭率=细胞内细菌数/黏附细菌总数×100%。
1.4.3 复制能力检测菌株在巨噬细胞内的复制能力检测参
照SITTKA等[6]报道的方法进行。收集对数中期的细菌，用RPMI-1640培养基重悬，按照感染复数为10加入至细胞培养板中，以1 000×g离心5 min，在37 ℃﹑5% CO2恒温培养箱中共培养30 min。用PBS洗3次以便洗掉未被吞噬的细菌，此时的时间点为T0。在含细菌和细胞的24孔板中加入含有50 μg/mL庆大霉素的RPMI-1640培养基，于37 ℃﹑5% CO2恒温培养箱中继续孵育1 h，裂解部分细胞，涂板并计数细菌，此时（T1）的细菌数目为初始胞内菌量。将培养基换成新的含10 μg/mL庆大霉素的RPMI-1640培养基，继续孵育23 h，裂解剩余细胞，涂板并计数此时（T24）的胞
内菌量。细菌复制力=T24胞内菌量/初始胞内菌量。1.4.4 实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）根据Invitrogen公司提供的说明书提取各测试样本的RNA。用RNA纯化试剂盒纯化RNA样本，纯化后进行反转录。用反转录得到的cDNA进行实时荧光定量PCR，反应在7500荧光定量PCR仪上进行。用Primer premier 5.0软件设计实时荧光定量PCR的引物，引物由生工生物（上海）有限公司合成，序列见表1。以16S rRNA作为内参基因。以2-ΔΔCt方法计算基因的差异表达倍数。1.5 统计学方法采用SPSS 15.0软件进行统计分析。用3次数据的平均值计算误差条，并采用独立样本t检验进行比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 黏附力差异受试菌株对Caco-2细胞的黏附结果显示，临床株的黏附力显著高于水体株和土壤株。土壤株和水体株的黏附力均与标准菌株（ATCC 14028）类似，黏附率约为25%；而在18株临床株中，有14株菌株的黏附率＞35%，占受试临床株总数的78%，黏附力明显高于标准菌株（ATCC 14028）（P＜0.05）。见图1﹑图2。表1 本研究所用的引物序列基因名称基因功能序列（5'～3'）扩增长度（bp）16S rRNA 管家基因F：CGGGGAGGAAGGTGTTGTG 180 R：GAGCCCGGGGATTTCACATC fi lC 鞭毛调控基因F：CCTCGGCTACTGGTCTTGGT 152 R：
AAGAGTCACCTCACCGTTCGT hilA SPI-1调节基因F：TCCACGCAGGAAATAACAGG 203 R：TGGGCAACCAGCACTAACG invI SPI-1入侵基因F：GGCGATCCTTGAACAAATAGC 145 R：CGGCGAACAATAGACTGCTT ssrA SPI-2调节基因F：GCTTTCCTTTATACCCAACCC 169 R：GGAAGTTTAACCGTCACCTCA sseF SPI-2效应蛋白基因F：GACAGTCGTGTTTGGGTTATCG 136 R：CTGGCGGTTTGTAATGGCTC 图1 鼠伤寒沙门菌对Caco-2细胞的黏附率图2 典型鼠伤寒沙门菌的细胞黏附图注：（a）ATCC 14028；（b）L12；（c）Caco-2细胞；（d）S6；（e）T4；（f）Caco-2细胞 2.2 侵袭力差异临床株的侵袭力明显高于水体株和土壤株。土壤株和水体株的侵袭力均与标准菌株（ATCC 14028）类似，侵袭率约为46%；15株临床株的侵袭率＞55%，占受试临床株总数的83%，侵袭力明显高于标准菌株（ATCC 14028）（P＜0.05）。高侵袭力与高黏附力无直接关联，如临床株L13﹑L17黏附力不强，但表现出较高的侵袭力；L4﹑L11侵袭力不强，但有较高的黏附力。见图3。2.3 在巨噬细胞内的复制能力差异对受试菌株在巨噬细胞内的复制能力进行检测后发现，3种不同来源的受试菌株都表现出与标准菌株（ATCC 14028）相似的复制能力，说明这3种细菌来源对细菌的胞内复制未产生影响。见图4。图
3 鼠伤寒沙门菌对Caco-2细胞的侵袭率图
4 鼠伤寒沙门菌的复制能力2.4 毒力基因表达情况分别选择鞭毛合成相关位点filC，致病岛1位点hilA﹑invI和致病岛2位点ssrA﹑sseF检测不同时期不同菌株毒力基因的表达情况。随机选择水体株S6﹑土壤株T2﹑黏附力及侵袭力均增强的临床株L8和L12进行实时荧光定量PCR，以标准菌株（ATCC 14028）作为对照菌株。土壤株及水体株在各个时期的毒力基因表达情况均与标准菌株（ATCC 14028）类似。临床株L8和L12在黏附期filC基因以及侵袭期hilA和invI基因的表达量显著高于标准菌株（ATCC 14028）（P＜0.05），而胞内复制期ssrA 和sseF基因的表达量与标准菌株（ATCC 14028）类似，因此临床株的基因表达结果也与之前的黏附﹑侵袭和胞内复
制试验结果相吻合。见图5﹑图6。图5 各菌株毒力基因表达的差异注：fi lC；hilA；invI；ssrA；sseF 图6 invI及hilA 基因电泳图片注：1为ATCC 14028；2为临床株L8；3为临床株L12；4为水体株S6；5为土壤株T2 3 讨论沙门菌严重威胁人类健康。据美国疾病预防控制中心最新调查发现，在美国，沙门菌每年可导致约150万的食物中毒病例，造成26亿～146亿美元的经济损失[7]。在发展中国家，因人口众多﹑卫生医疗条件不完善等原因，其造成的损失远远高于美国。鼠伤寒沙门菌作为沙门菌的典型血清型，深入研究其致病特性对沙门菌属的治疗及防控具有重要的指导意义。本
研究表明，临床株的黏附力及侵袭力显著高于水体株和土壤株，与黏附及侵袭相关的毒力基因表达量也显著高于水体株及土壤株。相似的结果在其他研究中也被报道。非致病性的大肠埃希菌在经历巨噬细胞内的多代选择后，其对抗巨噬细胞吞噬的能力以及对小鼠的致病能力均得到显著提高[8]。由此推测本研究临床株侵袭力的提高可能与其经历宿主肠道内的选择压力相关。肠道内的高渗透压及低氧信号均能诱导沙门菌对肠道上皮细胞的入侵[9]。临床株离开宿主后，可能仍保持被诱导的状态。从长期进化水平来讲，宿主压力可能导致毒力基因或毒力调控基因的单核苷酸多态性发生变化或在某些表观遗传学上产生差异，从而导致毒力基因的表达增强。由于单核苷酸多态性是多种多样的，因此对于同一种临床株来讲，有可能是鞭毛基因的变化，也有可能是入侵相关基因的变化，还有可能是二者同时发生变化，所以本研究中同一临床株的高侵袭力与高黏附力并不直接相关。在巨噬细胞内的生存复制是沙门菌开启胞内感染的必要阶段，也是细菌导致系统性伤寒症的必要条件[10]。在本研究中，临床株并未表现出较环境株更高的胞内复制能力，这说明临床株的高毒力仅限于肠道感染阶段，此结果也可能与鼠伤寒沙门菌本身的致病特性相关。鼠伤寒沙门菌在免疫功能健全的成人中一般不引起系统性疾病[11]，而在巨噬细胞内的复制能力是与系统性疾病相关的[2]。鼠伤寒沙门菌在人体内可能
没有经历过在巨噬细胞内对其复制相关基因的诱导阶段。
总之，本研究发现临床株表现出较环境株更高的侵袭力和毒力基因表达能力。这一结果提示我们应该重点加强医院内菌株的控制，在腹泻患者集中的住院区域，加强患者用品﹑食物的卫生管理及卫生宣传工作，防止再度发生医源性沙门菌感染。参考文献：[1] FABREGA A，VILA J. Salmonella enterica serovar Typhimurium skills to succeed in the host：virulence and regulation [J]. Clin Microbiol Rev，2013，26（2）：308-341. [2] LAROCK D L，CHAUDHARY A，MILLER S I. Salmonellae interactions with host processes[J]. Nat Rev Microbiol，2015，13（4）：191-205. [3] HEITHOFF D M，SHIMP W R，HOUSE J K，et al. Intraspecies variation in the emergence of hyperinfectious bacterial strains in nature[J]. PLoS Pathog，2012，8（4）：e1002647. [4] JACKSON R W，JOHNSON L J，CLARKE S R，et al. Bacterial pathogen evolution：breaking news [J]. Trends Genet，2011，27（1）：32-40. [5] ISBERG R R，FALKOW S. A single genetic locus encoded by Yersinia pseudotuberculosis permits invasion of cultured animal cells by Escherichia coli K-12[J]. Nature，1985，317（6034）：262-264.
[6] SITTKA A，PFEIFFER V，TEDIN K，et al. The RNA chaperone Hfq is essential for the virulence of Salmonella typhimurium[J]. Mol Microbiol，2007，63（1）：193-217. [7]
MINOR T，LASHER A，KLONTZ K，et al. The per case and total annual costs of foodborne illness in the United States[J]. Risk Anal，2015，35（6）：1125-1139. [8] MISKINYTE M，SOUSA A，RAMIRO R S，et al. The genetic basis of Escherichia coli pathoadaptation to macrophages[J]. PLoS Pathog，2013，9（12）：e1003802. [9] LEE C A，FALKOW S. The ability of Salmonella to enter mammalian cells is affected by bacterial growth state [J]. Proc Natl Acad Sci U S A，1990，87（11）：4304-4308. [10] LAWLEY T D，CHAN K，THOMPSON L J，et al. Genome-wide screen for Salmonella genes required for long-term systemic infection of the mouse[J]. PLoS Pathog，2006，2（2）：e11. [11] COBURN B，GRASSL G A，FINLAY B B. Salmonella，the host and disease：a brief review[J]. Immunol Cell Biol，2007，85（2）：112-118. Invasion abilities and the virulence gene expressions of Salmonella typhimurium with different origins DAI Sui.
（Department of Clinical Laboratory，Tianjin Fifth Central Hospital，Tianjin 300450，China）Abstract：ObjectiveTo analyze the difference of invasion abilities and the virulence gene expressions of Salmonella typhimurium with different origins.MethodsA total of 34 isolates of Salmonella typhimurium were collected from soil（strains from soil），water
（strains from water）and patients with diarrhea（clinical strains），and their abilities of attachment and invasion to epithelial cells and abilities of replication in macrophages were compared. Real-time fl uorescence quantitation polymerase chain reaction（PCR）was used to determine the virulence gene expressions of Salmonella typhimurium with different origins. The virulence genes，including fl agella locus filC，Salmonella pathogenicity island-1 loci hilA and invI，and Salmonella pathogenicity island-2 loci ssrA and sseF，were determined.ResultsThe attachment and invasion abilities of strains from soil and water were comparable to those of standard strain（ATCC 14028），while about 80% clinical strains exhibited higher attachment and invasion abilities to epithelial cells. Macrophage replication assay showed that all the strains showed comparable replication ability with that of standard strain （ATCC 14028）. The expression patterns of virulence genes in different strains were highly consistent with the results of the attachment and invasion abilities and the replication abilities in macrophages. In line with the results of invasion ability，clinical strains showed high filC，hilA and invI gene expressions relative to that of standard strain（ATCC 14028）（P＜0.05），while the gene expressions of ssrA and sseF were not altered. Strains from
soil and water showed comparable expression of all the determined genes to that of standard strain（ATCC
14028）.ConclusionsClinical strains exhibit higher invasion ability and virulence gene expression than those of environmental strains，and the controlling for clinical strains should be highlighted to prevent from nosocomial infection.
Key words：Salmonella typhimurium；Invasion ability；Virulence gene expression 文章编号：1673-8640（2017）
02-0071-05 中图分类号：：R446.5 文献标志码：：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2017.02.001 （收稿日期：
2016-04-28）（本文编辑：姜敏）作者简介：戴随，男，1983年生，硕士，主管技师，主要从事临床检验诊断学研究。
伤寒沙门杆菌
伤寒、副伤寒沙门菌感染 伤寒、副伤寒沙门菌感染主要是通过消化道传播，少部分也可通过微生物或感染性材料的胃肠道外接种传播。伤寒由伤寒沙门菌引起，副伤寒由副伤寒甲、乙、丙沙门菌引起。沙门菌还可引起胃肠炎和败血症。伤寒沙门菌进入消化道后，未被胃酸杀灭的细菌进入小肠，在肠腔内碱性环境、胆汁和营养物质的适宜条件下繁殖。伤寒沙门菌入侵肠黏膜，经淋巴管进入肠道淋因组织及肠系膜淋巴结继续繁殖，再由胸导管进入血流，引起第一次菌血症。此阶段属潜伏期，患者无症状。伤寒沙门菌随血流进入肝脾、胆囊、骨髓等组织器官内继续大量繁殖，再次进入血流引起第二次菌血症，释放内毒素，产生临床症状（相当于初期）。（腹痛）病程第2～3 周，伤寒沙门菌继续随血流播散全身，经胆囊进入肠道，大量细菌从粪便排出。来自胆囊的伤寒沙门菌，部分通过小肠黏膜，再次入侵肠道淋巴组织，使原已致敏的肠道淋巴组织产生严重炎症反应，加重肠道病变。在所有肠道病原感染中，伤寒沙门菌（Salmonella typhi）感染是最严重的，伤寒沙门菌内毒素是重要的致病因素。但伤寒持续发热的发生机制则主要是由于病灶中的单核-吞噬细胞和中性粒细胞释放内源性致热原所致。随着机体免疫反应，尤其是细胞免疫作用的发展，细胞内伤寒沙门菌逐渐被消灭，病变亦逐渐愈合，患者随之恢复健康。少数患者在病愈后，由于胆囊长期保留病菌而成为慢性带菌者。副伤寒致病机制与伤寒类似。 从临床表现上看伤寒的潜伏期为7~23d ，一般为10~14d。病程第1 周，起病大多缓慢。发热，常伴全身不适、乏力、食欲减退、咽痛和咳嗽等。病情逐渐加重，体温呈梯形上升，可在5~7d 内高达39~40℃。病程第2~3周常出现伤寒的典型表现，如高热、稽留热持续10~14d；出现明显食欲不振、腹部不适、腹胀、便秘、腹泻等消化道症状；尚可出现精神恍惚、表情淡漠、呆滞、反应迟钝、听力减退等神经系 统症状，重者可出现谵妄、昏迷、病理反射等中毒性脑病表现；常有相对缓脉或有重脉； 肝脾肿大；部分患者于病程7~13d 皮肤出现淡红色玫瑰疹。肠出血、肠穿孔等并发症较多在本期出现。病程第3~4周体温出现波动，并开始逐步下降。病程第 5 周体温恢复正常， 食欲好转，通常在 1 个月左右完全康复。 副伤寒甲、乙潜伏期为2~15d ，一般在8~10d 。起病时可有急性胃肠炎症状，如腹痛、呕吐、腹泻等。2~3d 后出现发热等伤寒临床表现，胃肠炎症状减轻。弛张型发热较多见，每天波动大，热程较短（副伤寒甲平均3 周，副伤寒乙2 周），毒血症状较轻，但胃肠症状明显（副伤寒乙尤为多见）。玫瑰疹出现转早、较多、较大，颜色较深。 副伤寒丙临床表现复杂，起病急，体温上升快，不规则热型，常伴寒战。主要表现为败血症型，其次为伤寒或胃肠炎型。热程一般约2~3 周。 二、细菌的生物学特性 伤寒、副伤寒甲乙丙均属于肠杆菌科、沙门菌属，为革兰氏阴性直杆菌，大小
不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达
不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达 不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达不同来源鼠伤寒沙门菌的侵袭力及毒力基因表达戴随（天津市第五中心医院检验科，天津300450）摘要：目的探讨不同来源的鼠伤寒沙门菌侵袭力和毒力基因表达的差异。方法从腹泻患者粪便﹑河水及土壤中共分离出鼠伤寒沙门菌（分别简称为临床株﹑水体株﹑土壤株）34株，分析菌株在上皮细胞黏附﹑侵袭以及巨噬细胞内复制能力的差异；选择与黏附﹑侵袭以及复制阶段相关的毒力基因（鞭毛合成位点filC，致病岛1位点hilA﹑invI，致病岛2位点ssrA﹑sseF），通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测不同来源细菌的毒力基因表达差异。结果土壤株和水体株的黏附力和侵袭力与标准菌株（ATCC 14028）类似，但80%左右的临床株表现出比标准菌株（ATCC 14028）更高的黏附力和侵袭力。在巨噬细胞内的复制结果显示，临床株﹑土壤株以及水体株的胞内复制能力均与标准菌株（ATCC 14028）类似。不同菌株的毒力基因表达情况与细胞黏附﹑侵袭及胞内复制结果相吻合。高侵袭力临床株在黏附期filC基因以及侵袭期hilA﹑invI基因的表达量显著高于标准菌株（ATCC 14028）（P＜0.05），而胞内复制期ssrA和sseF基因的表达量与标准菌株（ATCC 14028）类似。土壤株和水体株在不同时期的基因表达量均
与标准菌株（ATCC 14028）类似。结论鼠伤寒沙门菌临床株显示出较环境菌株更强的黏附力﹑侵袭力及更多的相应毒 力基因表达量，应着重加强对医院内沙门菌感染的防控措施，降低医源性沙门菌的感染率。关键词：鼠伤寒沙门菌；侵袭力；毒力基因表达鼠伤寒沙门菌是一种重要的人畜共患致病菌，广泛寄生于人和动物肠道内。其通过粪口途径传播，主要引起肠胃炎，在免疫功能低下的个体如老人和小孩中能引起全身性中毒症状，严重者可致死[1]。鼠伤寒沙门菌的致病过程分为肠道感染和细胞内感染2个阶段：细菌黏附并侵入小肠上皮细胞，为肠道感染阶段；细菌进入上皮细胞或巨噬细胞内，然后在胞内复制，为细胞内感染阶段。其致病能力与多种毒力因子相关，包括致病岛1﹑致病岛2﹑鞭毛﹑菌毛等[2]，其中影响入侵过程的主要毒力因子为致病岛1，影响胞内复制的主要毒力因子为致病岛2[1-2]。致病菌毒力强弱与细菌来源相关[3-4]。目前，针对沙门菌来源与其致病性之间关系的研究报道甚少。本研究以分离自腹泻患者粪便﹑土壤以及河水的共计34株鼠伤寒沙门菌为研究对象，分析菌株在黏附﹑侵袭﹑胞内复制以及毒力基因表达方面 的差异，为进一步研究鼠伤寒沙门菌的致病特性提供新的实验数据，以期为更好地防控沙门菌感染提供新的思路。1 材料和方法 1.1 菌株与细胞系研究对象为分离得到的34株 鼠伤寒沙门菌，其中包括从医院腹泻患者粪便中获得的18
无乳链球菌的耐药基因、毒力因子和基因分型的研究
汕头大学医学院硕士学位论文 目 录 中文摘要..........................................................................................................................................I ABSTRACT..................................................................................................................................III 英文缩写词....................................................................................................................................V 目录...........................................................................................................................................VI 前言 (1) 第一章无乳链球菌的耐药基因和耐药机制的研究 (3) 1.1 引言 (3) 1.2 材料和方法 (5) 1.3 结果 (12) 1.4 讨论 (16) 1.5 本章小结 (17) 第二章无乳链球菌毒力因子的研究 (18) 2.1 引言 (18) 2.2 材料和方法 (19) 2.3 结果 (21) 2.4 讨论 (23) 2.5 本章小结 (24) 第三章无乳链球菌MLV A基因分型的研究 (25) 3.1 引言 (25) 3.2 材料和方法 (26) 3.3 结果 (28) 3.4 讨论 (31) 3.5 本章小结 (32) 全文总结 (33) 参考文献 (35) 综述 (44) 个人简历 (72) 致谢 (73) VI 万方数据
沙门氏菌感染
沈阳儿童医院PICU 2020-05-11
医院污物种类 根据医院用品的危险性分类及其消毒、灭菌的原则 医院日常清洁、消毒、灭菌工作 病理性放射性 化学性 各种感染性 创伤性 药剂 爆炸性 一般生活性
患儿女，2个月15天，以“发热、腹泻4天”为主诉入院。 病例简介 查体 患儿于入院前4天总有无明显有瘾出现发热，体温最高39.2℃，无寒战及抽搐，口服“对乙酰氨基酚”体温可降至 37.5℃，间隔月6-7小时反复发热，伴有腹泻，每日排7-8次黄绿色粘液变，口服“琥乙红霉素”0.1克，日2次，“电解质泡腾片”随服，“酪酸梭菌二联活菌散”500mg，日2次，治疗4天病情无好转，入院当天大便可见血丝，再次来我院，急诊以“细菌性痢疾”为诊断收入院，患儿病后精神状态一般，有鼻塞，偶有喉中痰鸣，无咳嗽及喘息，人工喂养，配方奶 120ml/次，无呕吐及腹胀，尿量略少 T：36.9℃，P：154次/分，R：44次/分，BP：94/46mmHg,意识清楚，状态反应可，全身皮肤无黄染，皮肤弹性可，无皮疹及出血点，全身浅表淋巴结无肿大。前囟平坦，2.0*2.0cm，对光反射 灵敏，无鼻扇，口唇粘膜略干燥、无发绀，口腔粘膜光滑，眼部粘膜充血，颈软无抵抗，无三凹征，双肺叩诊轻音，双肺呼吸音粗糙，心前区无隆起，心尖搏动范围正常，心浊音界无扩大，心率：154次/分，节律齐，心音有力，心前区可闻及2/6级收缩期杂音，无心包摩擦感，腹部略膨隆，柔软，无压痛，无包块，肝下界在中线肋缘下1cm，质地软，脾肋下未触及。肠鸣音4次/分。 现病史
根据医院用品的危险性分类及其消毒、灭菌的原则 治疗 2020-04-29本院便常规：白细胞（高倍视野>40个/HPF）红细胞（高倍视野20-25个/HPF），潜血阳性。血常规：白细胞计数：11.9*109/L， 中性粒细胞百分比54.5%，淋巴细胞百分比31.5%，CRP 14.36mg/L。胸部正侧位DR：双肺纹理增强、左下肺纹理模糊，双肺透光度良好，双肺门不大。 入院后肠道菌群：细菌总数较正常减少，G+杆菌明显减少，G-杆菌减少，G+球菌增加，印象诊断：II度菌群失调。2020-05-01脑脊液常规：外观无色透明液体，潘氏蛋白定性阴性，脑脊液细胞计数2*106/L，脑脊液生化：脑脊液蛋白0.26g/L，脑脊液氯化物122.1mmol/L，脑脊液葡萄糖 2.90mmol/L。脑脊液图片：未见细菌。头部MRI：双侧颞额蛛网膜下腔增宽，枕大池大。血培养：沙门菌属某些种菌，头孢曲松、环丙沙星敏感。 入院后予头孢米诺静滴、干扰素泵吸抗感染治疗，有鼻塞及喉中痰鸣，予布地奈德、特步他林泵吸局部抗炎，口服微生态制剂调节肠道菌群，口服蒙脱石散保护肠道粘膜，口服补液盐频服、静脉补液支持治疗。第2病日患儿仍有发热，发热峰值下降、发热间隔延长，第3日，便培养：沙门菌属某些种菌，血培养阳性，复查血培养，完善腰穿除外颅内感染。第4病日，日内体温最高37.5℃，予物理降温可降至正常。第4病日，患儿睡眠时偶有喉鸣音，补充诊断：先天性喉喘鸣，自备维生素AD口服。第6病日，热退，复查血常规及CRP等炎性指标。 辅助检查
鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验
鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Awes试验) 一目的 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验是检测原核生物(细菌)回复突变的遗传毒理学体外试验， 遗传学终点是基因突变，用于检测受试物能否引起鼠伤寒沙门氏菌基因组碱基置换或移码突变。本试验是美国加州大学Ames教授发展的，故称Ames试验。 二原理 利用鼠伤寒沙门氏菌(SaJ.monellatyph}murium)的突变型即组氨酸缺陷型(hi sv)， 作为指示生物。这些菌株在无组氨酸的培养基上不能生·长，在有组氨酸的培养基上可以正常生长。致突变物可使沙门氏菌突变型回复突变为野生型(hi s})，恢复了合成组氨酸能力，因而在无组氨酸培养基上也能生长为可见的菌落。故可根据在无组氨酸的培养基上菌落生成数量，检查受试物是否为致突变物。对于间接致突变物，可用经Aroclor1254(或多氯联苯))诱导的大鼠肝匀浆制备的S9混合液作为代谢活化系统。 正向突变 眼伤寒沙门氏苗原养型}113} 一------一卜 气}}} 组氮酸营养缺陷型突变株(hiss !士S9代谢活化系统 受试物 三仪器和试剂 I.低温高速离心机，低温冰箱(-80 0C)或液氮罐，洁净工作台，恒温培养箱，恒温水浴， 蒸气压力锅，匀浆器等实验室常用设备。 培养基成分或试剂除说明外，应是化学纯，无诱变性。避免重复高温处理，选择适当 保存温度和期限。 2.培养基制备_ C1)营养肉汤培养基 牛肉膏2. 5g 胰陈(或混合蛋白膝)5. 0g 氯化钠2. 5g 磷酸氢二钾(KZHPO}.3H20 ) }. . 3 g 蒸馏水至500mL 加热溶解，调pH至7. 4，分装后0. 103MPa 20min灭菌，4℃保存备用。C2}?营养肉汤琼脂培养基: 凉脂粉 营养肉汤培养基 加热融化后调pH为7. C3)底层培养基 用于基因型C rfa突变， 2. 0g R因子，P}Q1 ...，份，卜州‘闷，r闷. 质粒，△ urvB)鉴定。
鳗弧菌毒力相关基因的研究进展
鳗弧菌毒力相关基因的研究进展 3 戈 蕾 1,2 黄 233 李 琪 1 (教育部海水养殖重点实验室中国海洋大学生命科学与技术学部 青岛 266003)1 (农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放试验室中国水产科学院黄海水产研究所 青岛 266071)2 摘要:鳗弧菌是引起多种海水鱼类出血性败血症的病原菌。其致病机理与各个毒力基因的协同作用密切相关。文中综述了鳗弧菌的主要毒力基因,包括编码外毒素、粘附因子、侵袭因子、细胞表面成分以及铁吸收系统的基因和部分检测方法。 关键词:鳗弧菌,毒力相关基因,检测 中图分类号:Q93919 文献标识码:A 文章编号:025322654(2007)0320584203 Advance in Studies on Virulence G enes of Vibrio anguillarum G E Lei 1,2 H UANGJie 2 LI Qi 1 (K ey Lab o f Mariculture Ministry o f Education ,Ocean Univer sity o f China ,Qingdao 266003)1 (K ey Lab for Sustainable Utilization o f Marine Fisheries Resource ,Ministry o f Agriculture Yellow Sea Fisheries Research Institute , Chinese Academy o f Fishery Science ,Qingdao 266071) 2 Abstract :Vibriosis is fish disease responsible for considerable econom ic hardship to mariculture operation w orldwide.Vibrio anguillarum is an im portant in fectious agent.The first step of in fection requires attachment of the bacterium to the host.The flagellum has been suggested to be inv olved in virulence as a m otility organelle that carries an adhesive com ponent.The iron 2uptake system of v .anguillarum is im portant to the pathogenic process.Extracellular com pounds such as hem olysin and metalloprotease have been inv olved in virulence too.The article reviews all factors including ex otoxin ,adherence factors ,invasion factors ,cell sur face com ponents and iron 2uptake system.K ey w ords :Vibrio anguillarum ,Virulence gene ,Detection 3农业部948项目资助(N o.20052Z 50) 33通讯作者 T el :0532285823062,E 2mail :aqudis @https://www.sodocs.net/doc/1f9976189.html, 收稿日期:2006206230,修回日期:2006208221 弧菌病是世界范围内对海水养殖业造成严重经济损失的鱼类疾病,主要由鳗弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌和哈维氏弧菌等引起[1]。鳗弧菌(Vibrio anguillarum )隶属于弧菌科 (vibrionaceae )弧菌属(Vibrio )[2],是引起多种海水鱼类出血性 败血症的病原菌[3]。国内外学者多方面研究后普遍认为鳗弧菌的致病性与其产生的毒素密切相关。许多学者从分子水平对鳗弧菌开展了研究,为阐明鳗弧菌的致病机理提供了一些理论依据,并建立起针对几种主要毒力因子的检测手段。本文综述了鳗弧菌主要毒力相关基因及其检测手段,以期为鳗弧菌致病机理的研究及鳗弧菌的防治提供参考和借鉴。 1 主要毒力相关基因 111 外毒素(exotoxin) 11111 溶血素(hem olysin ):目前国内外研究资料表明鳗弧菌有6条溶血素基因序列:vah 1、vah 2、vah 3、vah 4、vah 5和M3株的溶血素基因。Hirono 克隆了一个5kb 的溶血素片段,其中一个是vah 1的开放阅读框2253bp ,对应751个氨基酸残基[4]。邹玉霞等用PCR 扩增出鳗弧菌M3株的溶血素基因,推测的氨基酸编码序列与已发表的A 型血清的鳗弧菌 PT 84057株有86%的相似性,并证明所克隆的溶血素基因对 鳗弧菌M3的毒力没有直接的作用[5]。在随机基因组测序中,鳗弧菌所有的溶血素基因与弧菌属的其它物种如O1型霍乱弧菌E1T or 、副溶血弧菌和创伤弧菌的溶血素基因相似程度都很高[6]。 R odkhum (2005)对vah 2、vah 3、vah 4、vah 5等4个溶血素 基因进行了克隆和测序,4个基因都有很多开放阅读框,分别编码含有291、690、200和585个氨基酸残基的多肽,预测分子量分别为33kD 、75kD 、22kD 和66kD ,vah 2的产物与假定的创伤弧菌Y J016的溶血素有89%的相似性,vah 3的产物 ?485?微生物学通报2007年34(3)
甲氧西林耐药_敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测_王俊瑞
中国感染与化疗杂志２０１５年１月２０日第１５卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ｊａｎ．２０１５，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．１·论著· 甲氧西林耐药／敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测 王俊瑞１， 杜小莉２， 塔 拉１， 崔晶花２， 福 泉１， 韩艳秋 １ 摘要： 目的 分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金葡菌）（ＭＲＳＡ）和甲氧西林敏感金葡菌（ＭＳＳＡ）临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异，了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法 采用脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）方法和多位点序列分型（ＭＬＳＴ）方法对呼和浩特地区住院患者中分离的３０株ＭＲＳＡ和３０株ＭＳＳＡ进行分子分型，同步采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测菌株毒力基因。结果 ６０株金葡菌ＰＦＧＥ分型共分１９个型，ＭＳＳＡ菌株分布在Ｉ和Ｈ型等１６个基因型中，而ＭＲＳＡ株主要集中分布在Ｋ和Ｍ２个基因型中。２０株不同ＰＦＧＥ型菌株ＭＬＳＴ分型结果显示，ＭＲＳＡ株主要为ＳＴ－２３９型；ＭＳＳＡ株呈多样性分布特征，主要以ＳＴ－５型、ＳＴ－７型、ＳＴ－ １５型为主。毒力基因在ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ中分布差异显著。ＭＳＳＡ毒力基因整体携带率明显高于ＭＲＳＡ（５３．９％对４０．０％，χ２ ＝３ ２．７，Ｐ＜０．０１）。ＭＲＳＡ株ｓｅａ、ｃｎａ和ｃａｐ８基因携带率明显高于ＭＳＳＡ携带率（Ｐ＜０．０１），而ｓｅｃ、ｓｅｇ、ｓｅｉ、ｓｅｍ、ｓｅｎ、ｓｅｏ、ｆｎｂＢ、ｅｂｐＳ、ｃａｐ５基因携带率明显低于ＭＳＳＡ（Ｐ＜０．０５）。结论 呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点，ＭＲＳＡ主要以ＳＴ－２３９型为主。ＭＳＳＡ毒力基因携带率高，特定毒力因子在ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ株中呈现一定聚集分布特征，金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。 关键词： 金黄色葡萄球菌； 耐药性； 毒力基因； 分子分型 中图分类号：Ｒ３７８．１１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００９－７７０８（２０１５）０１－００７０－ ０６ 基金项目： 国家自然科学基金（８１２６０２４４）。 作者单位： １．内蒙古医科大学附属医院检验科，呼和浩特０１００５０； ２． 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。 作者简介： 王俊瑞（１９８１—），男，博士，主治医师，主要从事金黄色葡萄球菌感染致病机制研究。 通信作者：韩艳秋，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｙ ｈ１０１６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅＳｔａｐｈｙ ｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓＷＡＮＧ Ｊｕｎｒｕｉ，ＤＵ Ｘｉａｏｌｉ，ＴＡ Ｌａ，ＣＵＩ Ｊｉｎｇｈｕａ，ＦＵ Ｑｕａｎ，ＨＡＮ Ｙａｎｑｉｕ． （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ ０１００５０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ａｎｄ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍＨｏｈｈｏｔ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＰｕｌｓｅｄ ｆｉｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＦＧＥ）ａｎｄ ｍｕｌｔｉ ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ（ＭＬＳＴ）ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｄｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｙｐｉｎｇ ｆｏｒ ３０ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ３０ ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｈｏｈｈｏｔ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ．ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄｔｏ ｐｒｏｆｉｌｅ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＰＦＧＥ ｔｙｐｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ６０ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ｉｎｔｏ １９ ｍａｊｏｒ ｔｙｐｅｓ．ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ １６ ｔｙｐｅｓ，ｍａｉｎｌｙ ｔｙｐｅｓ Ｉ ａｎｄ Ｈ．ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｍａｉｎｌｙ ｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏ ｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｋ ａｎｄ Ｍ．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ２０ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＰＦＧＥ ｔｙｐｅｓ，ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ＳＴ－２３９ ｔｙｐｅ．ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ｄｉｖｅｒｓｅ ＳＴｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐ ｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ＳＴ－５，ＳＴ－７ ａｎｄ ＳＴ－１５．Ｔｈｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅ ｏｖｅｒａｌｌ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ＭＲＳＡｓｔｒａｉｎｓ（５３．９％ｖｅｒｓｕｓ ４０．０％，χ２ ＝３ ２．７，Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｓｅａ，ｃｎａ ａｎｄ ｃａｐ８ ｇｅｎｅｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇ ｈｅｒ ｉｎ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｔｈａｎ ｉｎ ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ（Ｐ＜０．０１），０ ７
关于一起鼠伤寒沙门氏菌引起食物中毒的结案报告
鼠伤寒沙门氏菌引起的一起食物中毒探讨 俞保社庐阳区疾病预防控制中心 沙门氏菌是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性菌。其种类繁多，少数能使人致病，其他可使动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒、副伤寒以及食品中毒或败血病。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食品中毒常占首位或者第二位。沙门氏菌菌型繁多，已确认的沙门氏菌有2 500 个以上血型。在常规检测中，血清学作为诊断依据，但经常发生生化符合而血清不凝集的现象。2012年5月25日市一院急诊科收治4名疑似因吃卤菜引起的食物中毒患者，标本检测出现此现象，具体处置如下。 【材料】： 基本情况：发病患者晚上就餐食物为某板鸭店购买的板鸭及家中自备的部分菜。首发病例4小时后出现腹痛、腹泻、发热等不适症状，其余三人陆续出现发类似症状， 4人至合肥市某院急诊科就诊。经流行病学调查：7人于在家就餐，餐后4小时左右陆续发病。最早发病5月24日晚11:30左右（餐后4小时，最先发病的蒋志容据推断应该个体差异的问题对被污染的食物较为敏感，较早地出现了症状。），最迟发病5月25日早晨8时左右（餐后约11时）。发病统计时长约11小时。 样品采集：采集蒋某大便标本1份，胡某大便标本和肛拭子各1份，患者家中剩余板鸭1份、水果刀涂抹样1份，板鸭店砧板、刀具、容器、从业人员手的涂抹样及板鸭各1份共10份样品进行检测。 【实验室检验】： 前增菌：除便样和肛拭子外，样品称取25g放入盛有25mlBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打90S。样品为液态，直接进行培养，于36℃±1℃培养18h。 增菌：轻轻摇动培养过的样品混合物，移取5ml，转种于10mlTTB内；于42℃±1℃,18h~24h培养。同时，另取5ml,转种于10mlSC内，于36℃±1℃,18h~24h培养。 分离：便样和肛拭子直接分离培养，取经TTB增菌液1环，划线接种
细菌毒力岛的研究进展
细菌毒力岛的研究进展 1 毒力岛基本特征及分类 1.1基本特征 毒力岛(virulenceisland)又称致病性岛(pathogenicity island),是近年来在细菌分子学研究领域出现的新概念。1997年Hacker等对毒力岛下了较为精确的定义:即毒力岛是编码细菌毒力基因簇的一分子量相对较大的染色体DNA片段。毒力岛具有下列基本特征[1～4]:(1)编码细菌毒力基因簇的一个相对分子质量较大的(20～100k左右)染色体DNA片段。(2)一些毒力岛的两侧具有重复序列和插入元件,但是也可以没有。(3)毒力岛往往位于细菌染色体的tRNA基因位点内或附近,或者位于与噬菌体整合有关的位点,肠致病性大肠杆菌(EPEC)的LEE毒力岛就位于转运RNAselC位点[2,3]。(4)毒力岛DNA片段的G+Cmol%、密码使用和宿主细菌染色体有明显差异,有的比宿主细胞的G+Cmol%明显高,有的明显低。(5)毒力岛编码的基因产物许多是分泌性蛋白和细胞表面蛋白,如溶血素、菌毛和血红素结合因子,一些毒力岛编码细菌的分泌系统(如Ⅲ型分泌系统)、信息传导系统和调节系统。(6)一种病原菌可以有一个或几个毒力岛。(7)一部分学者认为,细菌的毒力岛应该包括位于噬菌体和质粒上的、与细菌的毒力有关的、其G+C 百分比和密码使用与宿主细胞明显不同的DNA片段。(8)毒力岛可能与新发现的病原性细菌有关。 1.2 分类 目前发现的毒力岛根据其G+C百分比与宿主菌的差异,可分成两类:即高G+C 毒力岛,如小肠结肠炎耶尔森菌的毒力岛；低G+C毒力岛,如大肠杆菌、沙门氏菌以及幽门螺杆菌中的毒力岛。根据毒力岛编码的产物性质可分为致病性岛和共生岛两大类。 2 结构与功能 2.1 结构 毒力岛是由独特的DNA片段构成,其不同来源的毒力岛的分子量、密码使用、G+C百分比各异。毒力岛主要含有与细菌毒力有关的基因,此外,RS和IR在毒力岛上也比较常见,而且,IR的类型也多种多样。大多数毒力岛在染色体上的位置
沙门氏菌病
沙门氏菌病 沙门氏菌在各种动物以及人类当中分布广泛。其中有些菌株可导致猪病。 这种细菌主要在生长猪以及有些母猪的肠道内繁殖。感染猪只可连续数周甚至数月从粪便中排出病原，而不表现任何症状。在屠宰的时候，猪只肠道中的沙门氏菌可能污染胴体，导致人类食物中毒，对公共健康构成潜在威胁。 霍乱沙门氏菌S. choleraesuis和德比沙门氏菌S. derby对猪具有宿主适应性，感染母猪可携带病原很长时间。其中霍乱沙门氏菌有时会引发母猪的临床症状（体温升高、抑郁、败血症、肺炎、脑膜炎、关节炎和腹泻），但很少引起人类的疾病。然而猪当中最常见的血清型是鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium，这种沙门氏菌有时会导致仔猪腹泻，更是导致人类食物中毒的一种主要原因。该沙门氏菌的有些毒株具有多种抗药性。如果确诊猪群中感染了这种病原，就应采取必要卫生措施，以防工作人员被感染。猪体内还常会检到一些以其它动物为宿主的沙门氏菌，但这些细菌不会导致发病。 发病与否与病原剂量有关，病原数量达到一定水平之后才会引发临床症状。 需要注意，鼠伤寒沙门氏菌是造成人类食物中毒的常见原因。这种病菌常可在猪身上检出。任何日龄猪只均可感染沙门氏菌病，8周龄以上生长猪更常见。典型的、严重的沙门氏菌病通常发生在12～14周龄阶段。 症状 断奶猪与生长猪 ?霍乱沙门氏菌会导致急性败血病和肺炎，表现发烧、厌食、呼吸困难、抑郁、咳嗽和生长缓慢等病症。 ?肢体末端（鼻、蹄、尾等部位）皮肤变蓝。 ?下痢恶臭，有时带血。这是个常见的典型症状。 ?肝脏受损时会表现黄疸，关节受损时会表现跛行。 ?患脑膜炎后会表现神经症状。 ?若不治疗，死亡率会上升。 ?鼠伤寒沙门氏菌感染可造成腹泻。 仔猪 ?仔猪通常可从初乳当中获得母源免疫，少见发病。 母猪 霍乱沙门氏菌感染和鼠伤寒沙门氏菌感染可能导致下列症状： ?体温升高。 ?精神抑郁。 ?食欲减退。 ?耳部、鼻吻部及尾部充血（皮肤变红）。 ?肺炎。 ?咳嗽。
鼠伤寒沙门氏菌试验(Ames试验)文献综述
文献综述： 鼠伤寒沙门氏菌试验（Ames试验） 摘要：食品安全无论如何怎样强调都不会过分，迅速而准确地检测致癌物质是食品安全问题的重要方面。美国科学家Dr. Bruce Ames及其同事创立了一种方法，叫鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验），它是利用一组组氨酸营养缺陷型菌株加入待测物在有或没有微粒体活化系统条件下，发生回复突变的特征鉴定化学物质的诱变活性，现已成为初步筛选化学物潜在致突变的首选方法。 关键词：鼠伤寒沙门氏菌试验；基本原理；一般步骤；应用及其研究进展； 1 前言 污染物对人体的潜在危害，引起人们的普遍关注。世界上已发展了百余种短期快速测试法，检测污染物的遗传毒性效应。美国科学家Dr. Bruce Ames等经十余年努力，于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验（亦称Ames试验）已被世界各国广为采用。该法比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种污染物的综合效应。 众多学者有的用Ames试验检测食品添加剂、化妆品等的致突变性，由此推测其致癌性；有的用Ames试验检测水源水和饮用水的致突变性（比如，美国派斯净水器就通过了Ames 试验），探索较现行方法更加卫生安全的消毒措施；或检测城市污水和工业废水的致突变性，结合化学分析，追踪污染源，为研究防治对策提供依据；有的检测土壤、污泥、工业废渣堆肥、废物灰烬的致突变性，以防止维系生命的土壤受致突变物污染后，通过农作物危害人类；检测气态污染物的致突变性，防止污染物经由大气，通过呼吸对人体发生潜在危害；用Ames 试验研究化合物结构与致变性的关系，为合成对环境无潜在危害的新化合物提供理论依据；检测农药在微生物降解前后的致突变性，了解农药在施用后代谢过程中对人类有无隐患；还有用Ames试验筛选抗突变物，研究开发新的抗癌药等等[1]。 2 定义 2.1 回复突变（Reverse mutation） 细菌在化学致突变物作用下由营养缺陷型回变到原养型(prototroph)。 2.2 基因突变（Gene mutation） 在化学致突变物作用下细胞DNA中碱基对的排列顺序发生变化。 2.3 碱基置换突变（Base substitution mutation） 引起DNA链上一个或几个碱基对的置换。 碱基置换有转换(transition)和颠换(transversion )两种形式。 转换是DNA链上的一个嘧啶被另一嘧啶所替代，或一个嘌呤被另一嘌呤所代替。 颠换是DNA链上的一个嘧啶被另一嘌呤所替代，或一个嘌呤被另一嘧啶所代替。 2.4 移码突变（Frameshift mutation） 引起DNA链上增加或缺失一个或多个碱基对。 2.5 鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验（Salmonella typhimurium/reverse mutation assay） 利用一组鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型试验菌株测定引起沙门氏菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的组氨酸缺陷型(his-)转变为原养型(his+)回复突变的试验方法。 3 原理 鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养
沙门氏菌
沙门氏菌 沙门氏菌属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，己发现1800种以上。除可感染人外，还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。 沙门氏菌属（Salmonella）是一大群寄生于人类和动物肠道内，生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌，有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病，这些统称为沙门氏菌。 沙门氏菌目前已经发现1800种以上，按抗原成分可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌型。其中与人类疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒和肠炎杆菌。 此菌可引起禽伤寒、鸡白痢、猪霍乱、鼠伤寒沙门氏菌病、猪副伤寒、马流产沙门氏菌病等疾病。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌（Salmonella cholerae），其次是鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）和肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）。感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。，近日美国多地暴发疑似由生鸡肉引发的沙门氏菌疫情，至少42%患者已入院治疗。数据显示，已有18个州的278人感染具有耐药性的海德堡沙门氏菌。
沙门氏菌属肠道细菌科，包括那些引起食物中毒、导致肠胃炎、伤寒和副伤寒的细菌。能引起食物传播性疾病，近年来，已经成为最常见的食物中毒原因。肠炎沙门氏菌感染通常源于奶制品、禽产品和肉产品；鸡肉和鸡蛋尤其是高风险食品。沙门氏菌感染的症状通常是肠胃出现问题，包括恶心、腹部绞痛、呕吐和腹泻，一般最多持续7天。在免疫力低下的人群中，如果不及时服用抗生素类药品，沙门氏菌感染将导致生命危险。 关注食品安全，关注三方圆
一起由鼠伤寒沙门氏菌引起的食物中毒
一起由鼠伤寒沙门氏菌引起的食物中毒 2007年6月30日，我市郊区某饭店发生一起食物中毒，后经流行病学调查、实验室诊断确 认本次食物中毒系鼠伤寒沙门氏菌污染烧鸡所致。现报告如下。 1 流行病学调查 2007年6月30日，某饭店婚宴就餐人数267人，餐后99人发病，79人住院。无年龄、性别差异。患者潜伏期最短2 h，最长72 h。多数患者初期恶心、头痛、头晕、发冷、全身无力，继而呕吐，剧烈腹痛。腹泻一般6~10次以上，为黄绿色水样便。体温38.5℃~41℃，多数经3~5 d对症治疗全愈。 2 检样 剩余食品、呕吐物、便。 3 实验方法 3.1 镜检将上述样品直接进行革兰氏染色及镜检，镜下可见革兰阴性杆菌及其他杂菌。 3.2 病原菌的分离鉴定按食品卫生微生物学检验［1］进行。 3.2.1 增菌及分离分别将上述检样进行前增菌，37℃培养24 h后再接种于各自的分离平板。经培养后在血平板上未见溶血菌落，排除金黄色葡萄球菌的可能；在亚硫酸铋琼脂平板上有可疑菌落生长，菌落为深棕褐色，周围有黑色圈，对光观察有金属光泽，并为平板上的优势菌，镜检为G-阴性杆菌。 3.2.2 生化试验挑取可疑菌落接种TSI琼脂，培养后取斜面阴性、底层产酸、硫化氢阳性菌落，接种于21种革兰阴性杆菌新编码系列生化培养基，37℃24 h 培养，试验结果：ONPG-,精氨酸+，赖氨酸+，鸟氨酸+，柠檬酸盐+，硫化氢+，尿素-，IPA-，吲哚-，V-P-，明胶-，葡萄糖+，甘露醇+，肌醇+，山梨醇+，鼠李糖+，蔗糖-，密二糖+，苦杏仁甙-，阿拉伯糖-，氧化酶-。编码值6704750，为沙门氏菌。 3.2.3 血清学鉴定用卫生部兰州生物制品研究所生产沙门氏菌属30种诊断血清进行沙门氏菌血清分型，其中O抗原A-F多价凝集，B群O抗原4凝集，H抗原i，2凝集，盐水对照不凝集，鉴定为鼠伤寒沙门氏菌。 4 讨论
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群：能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。大小通常为 0.7～1.5μm × 2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长。 §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小(2 ～ 4mm)菌落。鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落。§麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂(EMB)：菌落无色半透明
沙门菌感染的途径和原因都有哪些
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活常识分享沙门菌感染的途径和原因都有哪些 导语：沙门菌感染是一种常见的记性传染病，可以通过由本菌污染的肉类食物感染，因为沙门菌感染的表现形式有很多种，可以分为败血症型、胃肠炎型和 沙门菌感染是一种常见的记性传染病，可以通过由本菌污染的肉类食物感染，因为沙门菌感染的表现形式有很多种，可以分为败血症型、胃肠炎型和伤寒型等感染类型，除了这些表现之外还有其它类型的表现，我们在这里就不详细多说了，大家只需要做一个了解就好。大部分的人都不怎么了解沙门菌感染的途径和原因，所以往往到患病了才引起注意。下面就跟着小编来看看沙门菌感染的途径和原因都有哪些吧！ 起病当日至2周前有否进食不洁食物如凉菜、酱肉、松花蛋等及同居同食者有否类似病症的发生;有否密切接触鼠类、狗、猫、鸡、鸭及鸟类史或进食被上述动物污染食物史;新生儿要特别注意询问有无家庭及管理人员通过饮食管理或生活接触造成被传染沙门菌的可能。 沙门氏菌侵入机体后发病与否取决于细菌的型别、数量、毒力及机体的免疫状态。各型沙门氏菌的致病力差别明显，如鸭沙门氏菌常引起无症状感染，猪霍乱沙门氏菌常引起败血症和迁徙性病灶，鼠伤寒沙门氏菌多引起胃肠炎，亦可进入血循环引起败血症。此外机体的免疫状态也有重要作用。有人发现，摄入大量的沙门氏菌(105～106)才能引起健康人胃肠炎，而婴幼儿、年老体弱、慢性疾病患者则少量沙门氏菌即可致病。胃酸减少，胃排空增快，肠蠕动变慢、肠道菌群失调等，可增加沙门氏菌的感染机会。 沙门氏菌经口腔进入人体内，克服了共生细菌的抑制和小肠粘膜吞噬细胞的作用，得以在肠道大量繁殖，从而引起局部微绒毛变性、粘
传染病学第四节 非伤寒沙门氏菌感染
传染病学第四节非伤寒沙门氏菌感染 非伤寒沙门氏菌感染（nontyphoidalsalmonellosis）是指伤寒、副伤寒以外的各种沙门菌所引起的急性传染病。其临床表现复杂，可分为胃肠炎型、类伤寒型、败血症型、局部化脓感染型，亦可表现为无症状感染。 [病原学] 沙门氏菌属于肠杆菌科沙门菌族。菌型繁多，迄今世界已发现XXXX个以上的血清型。 沙门氏菌为革兰阴性杆菌，无芽胞，无荚膜，具有鞭毛，能运动。在普通培养基中易生长繁殖。对外界的抵抗力较强，在水、乳类及肉类食物中能生存数月。加热60℃30分钟可灭活，5%石炭酸或1：500升汞于5分钟内即可将其杀灭。 沙门氏菌有菌体抗原“O”和鞭毛抗原“H”。根据菌体抗原结构分为A、B、C、D、E……等34个组，再根据鞭毛抗原的不同鉴别组内的各菌种或血清型。在沙门氏菌中，有些仅对人类有致病性，如伤寒杆菌、副伤寒杆菌（甲和丙）等；有些是动物和人类的共同致病菌，如副伤寒乙沙门氏菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌、猪霍乱杆菌等；有些仅对动物有致病性如鸡痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌等。引起人类疾病的沙门氏菌主要属于A、B、C、D、E5组，其中除伤寒和副伤寒沙门氏菌外，以B组的鼠伤寒沙门氏菌、C组的猪霍乱沙门氏菌、D组的肠炎沙门氏菌及E组的鸭沙门氏菌等10多个型最为常见。 [流行病学] （一）传染源沙门氏菌主要以动物为其储存宿主，家禽如鸡、鸭、鹅，家畜如猪、牛、羊、马等；野生动物如鼠类、兽类均可带菌。感染动物的肉、血、内脏可含有大量沙门氏菌。也存在于蛋类（鸡蛋、鸭蛋等）和其它食物（腌肉、腊肉、火腿、香肠等）中。因此，本病的主要传染源是家畜、家畜及鼠类。病人及无症状带菌者亦可作为传染源。 （二）传播途径 1．食物传播为引起人类沙门氏菌感染的主要途径。沙门氏菌在食物内可以大量繁殖，因此进食被病菌污染而未煮透的食品如肉类、内脏、蛋类等即可引起感染；牛奶、羊奶也可被沙门氏菌污染，故食用未消毒的牛、羊奶亦可感染。 2．水源传播沙门氏菌通过动物和人的粪便污染水源，饮用此种污水可发生感染。供水系统被污染，亦可引起流行。 3．直接接触或通过污染用具传播沙门氏菌可因与病人直接接触或通过染菌用具传播。此种传播方式可见于医院中，以婴儿室、儿科病房较为常见。感染可通过医务人员的手带菌或污染的医疗用具传播，也可以由老鼠、螳螂等通过偷吃