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LNMPA遇到504 Gateway time-out错误的解决方法

LNMPA遇到504 Gateway time-out错误的解决方法
LNMPA遇到504 Gateway time-out错误的解决方法

LNMPA遇到504 Gateway time-

out错误的解决方法

Nginx的特点是处理静态很给力,Apache的特点是处理动态很稳定,两者结合起来便是LNMPA,nginx处理前端,apache处理后端,这样处理静态会很快,处理动态会很稳定。当我以为安装完成以后便万事大吉,不料更新网站的时候却出现504 Gateway time-out;起初还以为这是偶然,多次尝试后依然出现这样的情况,因此才决定查找解决方法。

LNMP面对504 Gateway time-out

因为504 Gateway time-out是Nginx的专属错误,因此起初我以为是nginx配置出错,查找网上的教程,找到相应的解决方法,下面简单说说LNMP 面对此种情况的解决方案。Nginx出现这样的错误,是因为对PHP-CGI进程数限制得太小,面对更新网站这类操作,很可能出现进程不足而超时的情况,因此要修改两处涉及到处理时间的文件。

首先是nginx.conf文件,这个文件在/nginx/conf/nginx.conf,打开以后,主要修改前面几个时间,建议修改为120秒以上。至于用什么工具修改,推荐在线命令行编辑;或者用winscp下载下来,用Dreamweaver修改。

fastcgi_connect_timeout 300s;

fastcgi_send_timeout 300s;

fastcgi_read_timeout 300s;

fastcgi_buffer_size 128k;

fastcgi_buffers 8 128k;#8 128

fastcgi_busy_buffers_size 256k;

fastcgi_temp_file_write_size 256k;

其次要修改php-fpm.conf文件,这个文件在/php-5.2.17/etc/php-fpm.conf,不同的一键安装包位置有所不同,反正找找php安装以后文件下面的etc文件夹即可,在线编辑或下载下来用Dreamweaver编辑。

进入文件后搜索”max_children”这是php-cgi进程数,一个进程占

20M~30M内存,按自己的VPS或云主机内存进行计算,好比512M内存,推荐设置为18即可;另外搜索”request_terminate_timeout”,这是超时时间,若

php程序要长时间运作,那么设置时间大一点会比较好,好比设置为120秒,单位默认是秒,或者写成120同样可以。

LNMPA遇到504 Gateway time-out

当我按照Nginx的解决方法设置,很快设置成功,不过依然会出现504 Gateway time-out,这时我直接切换为LNMP组合,发现不再遇到504 Gateway time-out错误,这说明设置已经生效;为什么还会出现这样的错误呢?

经过大量的资料查找,终于发现这是Nginx与Apache通信时间设置问题,当用户发出php脚本执行请求,nginx不会执行php,会把这个问题留给后台的apache,nginx会等待一段时间,apache可以在等待时间内处理php脚本请求,若未处理完,nginx便已未收到数据请求而返回504 Gateway time-out错误,实际情况是apache依然会在后台处理完php脚本,只是前台返回错误。

解决方法是修改nginx与apche通信时间,具体是配置proxy.conf,这个文件在/nginx/conf/下面,名字可能会有变化,好比有的安装包是

laproxy.conf,反正是**proxy.conf文件。

proxy_connect_timeout 60;

proxy_send_timeout 600;

proxy_read_timeout 90;

proxy_buffer_size 128k;

proxy_buffers 8 128k;

proxy_busy_buffers_size 256k;

proxy_temp_file_write_size 100m;

第一项是连接时间,前端连接后端时间,60s以内即可,第二个是发送时间,允许后端返回数据的时间,90s以内即可,第三个时间是读写时间,这是前端等待后端处理时间,这是导致504 Gateway time-out的根本原因,出现这个错误,说明这个值太小,推荐不小于600s,服务器越差,那么设置得更长,保证处理完毕。

当我把这个文件设置好,重启nginx和apache,再次更新文章,已经不会遇到这类错误,说明出错原因不是nginx,而是前段和后端的通信时间太短。另外,nginx还会有502错误,实际上原理是差不多的,同样设置上面这部分文件,LNMPA组合依然是设置前后端的通信时间。本文由121好资讯(/)完成,转载分享请注明,谢谢合作,不妨保留链接!

文章来源于:https://www.sodocs.net/doc/213943538.html,/article-26450-1.html

春秋航空案例分析

“春秋航空” 案例分析报告 小组成员:张美玲王晶晶余婷 张芷君张宏辉张振 目录 1.春秋航空简介 (2) 2.环境分析 (2) 3.差异化分析 (4) 4.与美国西南航空对比 (5) 5.战略风险分析 (6) 6.战略风险规避 (6) 一、春秋航空简介 春秋航空股份有限公司是首个中国民营资本独资经营的低成本航空公司专线。春秋航空是中国首批民营航空公司之硕果仅存者,是国内首家低成本航空公司,2011 年净利润逾4.7 亿元,成为当前国内最成功的低成本航空公司,总部在上海,在上海虹桥机场、上海浦东机场、石家庄正定机场、沈阳桃仙机场设有基地。春秋航空有限公司经中国民用航空总局批准成立于2004年5月26日,由春秋旅行社创办,注册资本8000万元人

民币,创立之初,只有3架租赁的飞机空客A320飞机,经营国内航空客货运输业务和旅游客运包机运输业务。2005年7月18日首航。春秋航空平均上座率达到95.4%,成为国内民航最高客座率的航空公司。 截止2013年8月,机队规模达到37架180座空客A320飞机。开通了往返于日本、韩国、泰国、马来西亚、柬埔寨、香港、澳门等的10余条国际及地区航线,及北京、上海、广州、成都、深圳、昆明、重庆、珠海、揭阳(汕头)、厦门、三亚、沈阳、哈尔滨、长春、大连、青岛、石家庄、西安、绵阳、兰州、乌鲁木齐、呼和浩特、杭州、南京、宁波、常德、张家界、桂林、南宁、淮安、洛阳等国内航线,共约70余条。 二、环境分析 1.“五力”模型分析 ●潜在新进入者的威胁: 在春秋航空之后,又陆续出现了多家民营航空公 司,如奥凯,鹰联,东星等。这些新的民营航空公司虽然目前所占市场份额较小,但是凭借低价优势和灵活市场机制,发展势头十分迅猛;同时,2014年1月起,法国航空公司、荷兰皇家航空公司等成为了在中国使用艾玛迪斯系统的首批外国航空公司,外国航空公司本身就具备良好口碑和雄厚资金,加上系统支持,如虎添翼,将会加剧中国空中市场的竞争。春秋航空同时面临国内和国外的双重挑战。 ●行业内现有竞争对手之间的竞争: 根据2014年中国航空公司排名,位于 前五的国航、东航、南航、泰航、海航占据了国内航空市场的绝大部分,同时这些行业巨头仍在不断地扩大规模,在竞争实力方面,春秋航空难

国内外枢纽机场陆侧换乘布局案例研究分析

国内外枢纽机场陆侧换乘布局案例分析

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城市道路与交通规划 读书报告 姓名: 班级:2011级城市规划 学号:20111150212 日期:2014年4月

摘要:大型机场枢纽解决了远距离快速运输,但在地面的疏散中,要注意和公共交通的对接,意在即快速舒适度又高。对于大型枢纽机场,在一个集中区域完成全部的换乘方式几乎是不可能的。所以,各国机场都不约而同采取以步行通道连接各交通换乘节点的“人车分离”手法解决该矛盾。对我们的启示是应充分认识到步行系统在陆侧交通组织中的骨架作用,它所体现的旅客满意度直接影响到陆侧交通运营的服务水平。 关键词:枢纽机场,陆测交通,公共交通,步行体系 一.北京首都国际机场案例 首都机场于1958年3月2日正式投入使用。随着民航事业的发展及客货运量的不断增长,多年来进行了大规模的扩建施工。1980年1月1日,面积为6万平方米的一号航站楼及停机坪、楼前停车场等配套工程建成并正式投入使用。一号航站楼按照每日起降飞机60架次、高峰小时旅客吞吐量1500人次进行设计。扩建完成后,首都机场飞行区域设施达到国际民航组织规定的4E标准。随着通往首都北京的国际航线数量和国际航班的密度稳步提高,1995年10月-1999年11月期间,首都机场对航站区又一次进行了扩建。1999年11月1日,建筑面积达33.6万平方米,使用现代化技术设备装备起来的二号航站楼正式投入使用,二号航站楼每年可接待超过2650万人次的旅客,高峰小时旅客吞吐量可达9210人次。北京首都国际机场二号航站楼的启用,标志着20年来首次名副其实地成为中国最繁忙的客运机场。 首都机场在屡次的扩建中都非常重视机场的换乘问题,特别是机场的停车问题(如图1)。目前机场内共有一座停车楼和5个停车场。停车楼位于T2航站楼前。

Gateway克隆技术,简单易操作

Gateway克隆技术,简单易操作 在过去数十年,用限制性内切酶产生黏性末端,在DNA连接酶的作用下,连接两个甚至更多片段的克隆方法,是载体构建的经典方案。但是现如今我们再提到克隆的时候,远远不再只有传统的限制酶克隆一种选择。其中Gateway克隆技术作为一种可以快速、高效将DNA 序列转移到载体上的克隆方法已经流行开来。不要觉得Gateway克隆技术高深莫测,其实了解一下你就能懂。 Gateway克隆方法是λ噬菌体感染细菌时发生的整合和切割重组反应的体外形式。在体内,噬菌体(attP)和细菌(attB)的附着位点发生重组反应,噬菌体整合到细菌基因组中,两侧为两个新的重组位点(attL-left-和attR-right-)。在某些条件下,attL和attR位点可以重组,导致噬菌体从细菌染色体上切除并重新生成attP和attB位点。 即Gateway技术依赖于下面描述的两个反应:BP反应和LR反应,通过BP反应获得入门克隆(有时候我们也说中间克隆),再通过LR反应将目的DNA以正确的方向连接到各种目的载体上,形成不同的表达载体。GeneCopoeia的EZShuttle?重组克隆体系应用E.coli 和λ噬菌体特异位点的重组酶促体系使DNA片段在载体间相互转换,其原理与Gateway 克隆技术相同。 BP反应-构建入门载体: 通过PCR将attB位点添加到目的DAN序列两侧,形成attB-PCR产物。用attB-PCR产物或者含attB位点的供体质粒和含attP位点的质粒发生重组生成入门克隆。EZRecombinase BP混合物,货号:RCBM-1002-020

LR反应-构建表达载体: 制作表达载体时,选择适合的目标载体非常重要。这种选择取决于许多因素,如宿主类型,所需的表达水平和实验目的。选定的attR表达载体与attL-入门载体重组以产生表达载体。EZRecombinase LR混合液,货号:RCBM-1001-020

基于Gateway技术的表达载体构建

基于Gateway技术的表达载体构建 1. Gateway-T载体(pGWC)的酶切反应 pGWC除具有传统T载体的克隆功能外,还可以作为入门克隆(Entry Clone)与Gateway 重组克隆技术兼容。该载体中的ccdB基因编码一个能够使大多数E. coli致死的毒蛋白,可作为重组子的负选标记取代了蓝白斑筛选。 该载体在使用前,需经过AhdI(实验中采用其同裂酶Eam1105 I)酶切,使载体两端产生5’T,用与PCR产物的两端的3’A互补。PCR产物回收后与pGWC载体连接,挑取正向克隆送测序。 pGWC载体的酶切反应体系如下: pGWC 10 μl(约2μg) 10×Eam1105 I Buffer 5 μl Eam1105 I 2 μl ddH2O 34 μl 共计 50 μl 将反应混和液于37℃温育6h。取1μl酶切反应液走1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切效果,估测载体片段的浓度,该酶切反应液可直接用作连接无需纯化。 2. PCR产物的回收与连接反应 PCR产物用琼脂糖凝胶回收试剂盒(北京天根生化科技有限公司)进行回收,与pGWC载体进行连接。 DNA片段与pGWC-T的连接: pGWC-T 1μl(约50ng) DNA回收片段 4μl(600bp片段约需40ng) Solution I (TaKaRa) 5μl 共计 10μl 反应混合液于4℃下连接过夜(约12~16h)。 3. 连接产物的转化 取大肠杆菌DH5α感受态细胞(50μl/管)于冰上融化,加入5μl连接产物,用移液器轻轻吸打混匀,在冰上放置30min,42℃水浴热激90s,冰上放置5min,加入无抗生素的LB培养基300μl,37℃,160rpm振荡培养45min,将菌液铺在氯霉素抗性(25mg/L)LB平板上,在超净台吹干后37℃倒置培养过夜。 4. LR反应与表达载体构建 表达载体均采用Gateway重组克隆技术构建,目标基因连入pGWC后即为入门克隆(Entry

北京首都机场成功案例

科传O2O全渠道解决方案,构建首都机场智能运营管理平台 企业简介 北京首都国际机场建成于1958年,运营50多年来,北京首都国际机场年旅客吞吐量从1978年的103万人次增长到2014年的8612.83万人次,位居亚洲第1位、全球第2位。 北京首都国际机场,位于中国北京市顺义区,是中国的空中门户和对外交流的重要窗口。在国际民航权威认证机构Skytrax发布的“2015年世界前百位主要机场排名”中,位列榜单第10位。 科传系统能适应机场的特殊性质,针对性的构建信息管理平台,进行任何经营模式下的数据收集和数据接口整合,并能满足多样化的运营、管理需求。 北京首都国际机场信息化管理需求

机场旅客吞吐量的增长、机场商业管理思路的变化、新的特许经营合同所致的租金核算和财务流程的变化、移动互联网时代对系统技术更新的要求等,都需要机场能针对性的对原系统进行升级改造,用以满足原商业系统在投产运营7年后无法满足的机场业务需求。 ●需要构建一个会员管理系统,用于管理首都机场庞大的人流吞吐量,挖掘、分析短 时间滞留于机场内客流的潜在价值; ●筛选合适的商户进驻机场商铺,需要精准有效的数据分析作为支撑; ●首都机场作为中国重要的对外窗口之一,需要为应对机场内商业涉及到的多币种交 易和复杂的分类税收政策提供相关解决方案; ●针对客流来自世界各地不同地区这一特性,机场内商户需为顾客对应提供邮购或异 地取货服务; ●需要灵活对接应需求增设的各种便捷化服务App的数据接口。 科传购物中心解决方案在首都机场信息化应用中的核心价值 ●打通了会员管理系统,从多个渠道获取首都机场下辖大量商户的销售数据和会员数 据,支撑会员营销管理所需的数据分析,最终达到提高消费者转化率、复购率的作用; ●提供可视化BI报表功能,保证数据采集的及时性、有效性和数据分析准确性,同时 丰富报表的图像展示形式,帮助企业优化营销策略和提升运营能力; ●完善的商户管理平台和灵活的商务条款合同管理体系,在便捷管理操作的同时,对 商户、商铺从入驻到运营的全过程(包括铺位管理、商品进销存管理等多个方面)进行全面监控管理,帮助企业提高自身管理水平,增创企业经济效益;

厦门高崎机场案例分析报告(终稿)

厦门高崎国际机场 T3地下停车场免取卡管理系统 案 例 分 析 厦门市路桥信息工程有限公司 2013年7月

目录 一、项目背景 (3) 1.1 厦门高崎国际机场 (3) 1.2一路?免取卡管理系统 (3) 二、案例分析 (5) 2.1方案设计 (5) 2.2案例特点 (6) 2.3效益分析 (7) 2.3.1社会效益分析 (7) 2.3.2经济效益分析 (8) 三、武汉天河机场停车场升级改造建议 (8) 3.1采用免取卡停车场管理系统 (9) 3.2停车诱导与智能寻车系统 (9) 3.3智能照明与引导系统 (10) 四、公司简介 (10) 4.1厦门信息集团 (10) 4.2厦门路桥信息工程有限公司 (12) 五、部分工程实例 (13)

一、项目背景 1.1 厦门高崎国际机场 目前,厦门高崎国际机场拥有位于地面的东停车场、南停车场和3号候机楼的地下停车场,共3个停车场。东停车场主要供大中巴车、部分小型社会车辆停放;南停车场仅面向内部驻场员工开放,属于免费的停车场;3号候机楼地下停车场除的士禁入外,接送旅客的车辆可以在此停放,此停车场是离机场主楼最近最方便的停车场,人们可通过自动步道、电梯、扶梯到达候机楼的到达层和出发层,3号候机楼地下停车场是厦门高崎国际机场一扇重要的对外形象窗口。 3号候机楼(以下简称“T3”)地下停车场,位于厦门高崎国际机场3号候机楼南侧园林广场喷水池地块,占地面积60094 m2,总建筑面积:48460m2,其中地下室建筑面积:47860m2,楼梯上地面部分面积为600m2。 2013年1月25日,T3地下停车场正式对外开放,整个建设工期约一年零九个月,该工程比计划工期提前三个月,于2013年春运前夕投入使用,自投入运行以来,系统稳定高效、应用效果良好,出入口车辆通行效率大幅提高,大大缓解了机场停车拥挤问题,获得了社会大众的一致好评,进一步提升了厦门空港的保障能力。 T3地下停车场共有1075个停车位,设计4进11出,共15个车道。由于出入口数量较多,车位数量也比较多,为确保停车楼能够持续高效运转,同时提高停车楼的信息化、智能化管理水平,给车主提供方便快捷、轻松开放的停车环境,机场相关部门在该停车楼的设施配备上,引入了厦门市路桥信息工程有限公司的一路?免取卡停车场管理系统,对停车楼进行全方位的“智能武装”。 1.2一路?免取卡管理系统 一路?免取卡停车场管理系统源自“免取卡,自由行”的停车场管理新理念,基于射频识别技术(Radio Frequency Indentification,简称RFID),以车载电子标签(厦门路桥卡)识别为主、车牌识别为辅,在保证收费信息精确的基础上实现车辆进出停车场“入口免取卡,出口不停车”。 入场时,车主无需停车取卡即可入场,系统会自动记录车辆信息及入场时间;出场时,车辆行驶至收费岗亭处,系统即根据停留时间快速自动计算出需缴费金额,提示缴费,免费、月租以及通过中央收费处缴纳停车费的车辆可不停车快速

国际贸易实务经典案例分析集锦

[案例1] 有一份CIF合同在美国订立,由美国商人A出售一批IBM电脑给香港商人B,按CIF香港条件成交。双方在执行合同的过程中,对合同的形式及合同有关条款的解释发生争议。请分析解决此项纠纷应适用香港法律还是美国法律? [案例分析]结论:应适用于美国法律。 理由:合同与美国关系最密切,因为订约地和履约地都在美国。 分析:在按CIF香港条件成交的合同中,出口方在出口国装运港履行交货义务,所以履约地在美国装运港,而非目的港香港。(有关CIF条件的内容参见“贸易术语”) 第二章货物的质量 [案例1] 商品质量不符引起的纠纷案 我生产企业向马来西亚客户出口汽车配件,品名为YZ-8303R/L,但生产企业提供了YZ-8301R/L,两种型号的产品在外型上非常相似,但却用在不同的车型上,因此客户不能接受,要求我方要调换产品或降低价格。我方考虑到退货相当麻烦,费用很高,因此只好降低价格15%,了结此案子。 [案例分析]商品的质量是国际货物买卖合同中不可缺少的主要条件之一,是十分重要的条款。卖方属于重大违约,因此赔偿对方损失是不可避免的。 [案例2]我某出口公司与德国一家公司签定出口一批农产品的合同。其中品质规格为:水分最高15%,杂质不超过3%,交货品质以中国商检局品质检验为最后依据。但在成交前我方公司曾向对方寄送过样品,合同签定后又电告对方,确认成交货物与样品相似。货物装运前由中国商检局品质检验签发品质规格合格证书。货物运抵德国后,该外国公司提出:虽然有检验证书,但货物品质比样品差,卖方有责任交付与样品一致的货物,因此要求每吨减价6英磅。 我公司以合同中并未规定凭样交货为由不同意减价。于是,德国公司请该国某检验公司检验,出具了所交货物平均品质比样品差7%的检验证明,并据此提出索赔要求。我方不服,提出该产品系农产品,不可能做到与样品完全相符,但不至于低7%。由于我方留存的样品遗失,无法证明,最终只好赔付一笔品质差价。[案例分析] 此例是一宗既凭品质规格交货,又凭样品买卖的交易。 卖方成交前的寄样行为及订约后的“电告”都是合同的组成部分。 根据商品特点正确选择表示品质的方法,能用一种表示就不要用两种,避免双重标准。 既凭规格,又凭样品的交易,两个条件都要满足。 样品的管理要严格。如“复样”、“留样”或“封样”的妥善保管,是日后重要的物证。[案例3]1997年10月,香港某商行向内地一企业按FOB条件订购5000吨铸铁井盖,合同总金额为305万美元(约人民币2534.5万元)。货物由买方提供图样进行生产。 该合同品质条款规定:铸件表面应光洁;铸件不得有裂纹、气孔、砂眼、缩孔、夹渣和其他铸造缺陷。 合同规定(1):订约后10天内卖方须向买方预付约人民币25万元的“反保证金”,交第一批货物后5天内退还保证金。 合同规定(2):货物装运前,卖方应通知买方前往产地抽样检验,并签署质量合格确认书;若质量不符合同要求,买方有权拒收货物;不经双方一致同意,

gateway重组技术

Gateway 基因克隆 Gateway 基因克隆就是由Invitrogen公司在二十世纪九十年代末发明并应用于分子生物学基因克隆的一项专利技术。该技术利用专有的重组序列使得DNA片段能够更有效地被转入质粒当中,可应用于大片段的基因克隆,并且在保持正确阅读框的前提下让不同表达载体间的DNA转移成为可能。 这一技术在插入的目的DNA片段两端整合att L1与att L2两个侧端重组序列,来构建一个类似通道的结构并称之为“入门克隆”(Gateway Entry Clone)。据Invitrogen宣称Gateway 技术使用99%有效且可逆的一小组重组反应,如此使得基因克隆不同于传统的限制性内切酶方法,避免了目的片段内存在切点的问题而使得大片段DNA保持其完整性,大大提高了克隆效率,常应用于大规模的DNA片段整合进同一种表达载体,因此又称之为高通量基因克隆技术(Gateway Cloning Technology)。 一、Gateway 基因克隆的原理及机制 Gateway被视为一种克隆操作平台:把目的基因克隆到入门载体(Entry Vector)后,就不用依赖限制性内切酶,而靠载体上存在的特定重组位点与重组酶,高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体(Destination Vector,目的载体)上。 Gateway的原理就是建立在噬菌体DNA定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体与细菌的整合因子(INF、Int)的作用下,lambda的attP位点与大肠杆菌基因组的attB位点可以发生定点重组,lambda噬菌体DNA整合到大肠杆菌的基因组DNA中,两侧产生两个新位点:attL与attR。这就是一个可逆的过程,如果在一个噬菌体编码蛋白Xis与IHF、Int的共同介导下这两个新位点可以再次重组回复为attB与attP位点,噬菌体从细菌基因组上裂解下来(见图1)。这一过程的方向就是受控于两个重要因素:存在的介导蛋白与重组位点。

国贸案例分析题

国际贸易案例 1 、FCA贸易术语案例分析 我0方出口手表到印度,按 FCA Shanghai Airport签约。交货期8月。出口企业8月31日将该手表运到上海00 虹桥机场并由航空公司收货开具航空运单。我方即电传印度发出装运通知。9月2日手表抵达孟买,将到货通知连同发票和航空运单送交孟买XX银行。该银行即通知印商提货、付款,但印商以延迟交货为由拒绝。 分析: FCA (FREE CARRIER)“货交承运人(……指定地点)”是指卖方只要将货物在指定的时间地点交给买方指定的承运人,并办理了出口清关手续,即完成交货。此案例中没有指明承运货物的航空公司是否为买方所指定的,但即便买方没有指定,卖方也可按惯例指定航空公司运输(费用到付,即买方承担),只要卖方在约定的时间内(8月31日前,包括8月31日)将货交承运人,卖方即完成交货,买方需按约付费,所谓的延迟交货不成立,卖方应立即支付所有款项。 2 、有关FOB价格术语的一个案例 我某公司以FOB条件出口一批冻鸡,合同签订后接到买方来电,称租船较为困难,委托我方代为租船,有关费用由买方负担。为了方便合同履行,我方接受了对方的要求,但时间已到了装运期,我方在规定的装运港无法租到合适的船,且买方又不同意改变装运港,因此到装运期满面时,货仍未装船。买方因销售即将结束,便来函以我方未按期租船履行交货义务为由撤销合同。问:我方应如何处理? 分析: 1、我方应拒绝撤销合同的无理要求。 2、这个安全涉及FOB术语总是根据FOB术语,买方负责租船订舱、运输、支 付运费。为了卖方装船交货方便,卖方也可以接受买方的委托,代为租船订舱,但费用和风险应由买方承担,卖方不承担租不到船的责任。 3、结合本案例,因为卖方代买方租船没有租到,买方又不同意改变装运港,因此卖方不承担因自己未租 到船而延误装运的责任。买方也不能因此撤销合同。 3 、案例:CIF合同 CIF价国要注意的选择际贸易操作中要注意的选择 某出口公司按CIF伦敦向英商出售一批核桃仁,由于该商品季节性较强,双方在合同中规定;买方须于9月底前将信用证开到,卖方保证运货船只不迟于12月2日驶抵目的港。如货轮迟于12月2日抵达目的港.买方有权取消合同,如贷款已收,卖方必须将贷款退还买方。问这一份合同的性质是否属于CIF合同 分析: 这一合同的性质不再属于CIF合同。因为合同条款内容与CIF本身的解释相抵触。抵触有二;一是合同在C1F条件下竟规定了“到货日期”.这与CIF价格术语所赋予的风险界限划分的本意相触,按CIF是装运港交货,货物超越船舷后的一切风险均由买方负责。如果限定到货日期,岂不是耍卖方承担超越船舷后的一切风险7二是CIF是“象征性交货”,只要卖方提供齐全、正确的货运单据,买方不能拒收单据,拒付货款。而该合同竞规定‘如货运船只不能如期到达,买方将收回货款,实际上成了货到付款。由此看来,该合同的一些主要条款已与CIF价格术语的本意相抵触。尽管名义上是按CIF成交,但实质上并不是CIF合同性质。 4 、案例: 一法国商人于某日上午走访我国外贸企业洽购某商品。我方口头发盘后,对方未置可否,当日下午法

gateway技术

Gateway技术提供以下可能:通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 同时将您的基因转移到多个表达系统 在任何您选择的系统――体外,细菌,酵母,昆虫,或哺乳动物――分析表达 一、一种更好的克隆方法 Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统(图1)。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤,而同时典型的克隆效率高达95%或更高。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时,还可以保证正确的方向和阅读框。Gateway也有助于进行带不同数目纯化和检测标签蛋白的表达。 图1 Gateway技术的灵活性 Gateway技术:克隆、表达新方法 - zhchyuan2008 - zhchyuan2008的博客 目的基因克隆进入门载体后,可以同时转移目的基因到多个目的载体。 Gateway利用了位点特异重组,所以在构建入门载体后,不再需要使用限制性内

切酶和连接酶。一旦您拥有了一个入门克隆,就可以多次使用它,转移您的目的基因到Gateway改造过的各种表达载体(目的载体)。 此外,由于在重组时DNA片段的阅读框和方向保持不变,因而您不必再为新的表达克隆测序担心。在使用每一种新的表达系统时,将会节省您更多的时间。 二、一项强大而可靠的技术 Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。 Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统(attB x attP →attL x attR)。BP和LR两个反应就构成了Gateway技术(表1和图2)。BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。 LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。 图2 Gateway技术总结 下载 (22.19 KB) 6 天前 19:23 Gateway技术:克隆、表达新方法 - zhchyuan2008 - zhchyuan2008的博客 在BP反应中基因转移形成入门克隆,在LR反应中入门克隆可以作为反应物产生最终的表达克隆。

Gateway技术操作指南

Gateway? Cloning Protocols The Basics of Gateway? Reaction ?BP reaction—to create a Gateway? entry clone ?LR reaction—to create a Gateway? expression clone ?One tube format—to create a Gateway? expression clone from a PCR product ?Gateway? Vector Conversion—converting your favorite cloning vectors to Gateway? Technology TOPO? TA Cloning - To Create a Gateway? Entry Clone Step One - Produce PCR product Produce PCR products using Taq polymerase and your own protocol. End the PCR reaction with a final 7 to 30 minute extension step. Step Two - Perform the TOPO? Cloning Reaction 1. Set up one of the following TOPO? Cloning reactions using the reagents in the order shown. For electroporation, dilute Salt Solution 4-fold to prepare Dilute Salt Solution. Reagent Chemical Txn Electroporation Fresh PCR product0.5 to 4 μl0.5 to 4 μl Salt Solution 1 μl-- Dilute Salt Solution -- 1 μl Sterile Water to a final volume of 5 μl to a final volume of 5 μl TOPO? Vector 1 μl 1 μl Total volume6μl6μl 2. Mix gently and incubate for 5 minutes at room temperature. 3. Place on ice and proceed to transform One Shot? chemically competent E. coli, below

空港经济区案例汇总

(一)国外空港经济发展概况及案例分析 纵观世界空港地区的发展,大体经历由航空运输区向临空产业区发展,再向航空城发展的阶段。自爱尔兰香农国际机场建立自由贸易区之后,随着经济的发展和航空业的进步,国际上许多国家和地区非常重视依托机场资源发展区域经济,纷纷在机场周边发展临空产业,并且都在使临空产业区向航空城发展,形成了一些临空经济发展比较成熟的范例,如美国孟菲斯机场、荷兰阿姆斯特丹史基浦国际机场、德国慕尼黑机场等。 1、美国孟菲斯:联邦快递—空港物流 美国孟菲斯市于1929年建立了孟菲斯市机场。1973年,独具慧眼的施伟德(原联邦快递集团董事会主席、总裁兼首席执行官)把联邦快递总部和转运中心设在了孟菲斯。经过30多的发展,联邦快递从一个不起眼的小货运企业成长为世界四大航空物流公司之一,孟菲斯和孟菲斯国际机场也实现了巨大的飞跃。联邦快递超级中心货运量从1995年的86.17万吨增长为2004年的181.41万吨,贡献了孟菲斯国际机场93.6%的吞吐量。同一期间,联邦快递对孟菲斯地区的直接/间接经济产值贡献从1995年的71亿美元上升到2004年的111亿美元,直接/间接雇佣人员从1995年的43000人上升到2004年的67000人。 图1 联邦快递公司对孟菲斯经济发展的贡献 孟菲斯国际机场的货物和旅客流量在孟菲斯产生了巨大的经济效应。根据2004年统计,该机场为孟菲斯创造了166000个工作岗位(占该地

区所有工作岗位的27%)和207亿美元的直接经济产值。2004年,孟菲斯国际机场货运吞吐量为地区带来了195亿美元的经济产值和155872个就业岗位(共56亿美元收入);旅客流量为地区带来了12亿美元的经济产值和9487个就业岗位(共3.4亿美元收入)。2004年,孟菲斯机场为孟菲斯运送了1197912名游客,这些游客在孟菲斯共花费4亿美元,创造了7.79亿美元的经济产出和11000个就业岗位。 近20年来,航空物流对美国新经济的飞速发展起到极其关键的辅助作用。从1980年到1999年的20年间,物流成本占美国GDP的比例从7.6%下降到3.6%,美国的库存和销售之间的比率下降了34%,美国总的商务库存减少了4.6万亿美元(几乎是美国GDP总量的一半)。而所有这些,都和速递业的发展密不可分。 图2 航空物流对美国经济的作用 在孟菲斯国际机场最大的使用者——联邦快递的主导作用下,孟菲斯的国际物流、健康保健和医疗设备行业以及非常发达。联邦快递为孟菲斯带来了许多全新的商业模式,特别是近年来盛行的电子商务,如美国着名的Submit https://www.sodocs.net/doc/213943538.html,公司就因为联邦快递的便捷服务而选择了在孟菲斯落户。 2、阿姆斯特丹史基浦机场——着名空港城市 史基浦机场(SCHIPHOL),位于荷兰首都阿姆斯特丹城西南部,于1916年建成,现在的史基浦机场已经不单单是个机场,确切地说,它是一个汇集了人流、物流、展览、观光以及娱乐的“空港城市”。 史基浦机场地区,是一个多种交通模式并存的集合处:拥有航空交

国际贸易实务课后案例分析答案解析

国际贸易实务课后案例分析答案 案例1 案情简介: 出口合同规定的商品名称为“手工制造书写纸”。买主收到货物后,经检验发现该货物部分工序为机械操作,而我方提供的所用单据均表示为手工制造,按该国法律应属“不正当表示”和“过大宣传”,遭用户退货,以致使进口人蒙受巨大损失,要求我方赔偿。理由有二:(1)该商品的生产工序基本上是手工操作,在关键工序上完全采用手工制作;(2)该笔交易是经买方当面先看样品成交的,而实际货物质量又与样品一致,因此应认为该货物与双方约定的品质相符。后又经有关人士调解后,双方在友好协商过程中取得谅解。对此,希予评论。 要点评析: 本案例合同中约定采用“手工制造”商品制造方法表示商品品质,是属于“凭说明买卖”的一种表示方法。从各国法律和公约来看,凭说明约定商品品质,卖方所交商品的品质与合同说明不符,则买方有权撤销合同并要求损害赔偿。本案我方从根本上违反了买卖双方在合同中约定的品质说明,从而构成卖方的违约行为,应承担所交货物与合同说明不符的责任。同时贸易中如果采用样品表示商品品质需要在合同中明示或默示地做出具体规定,而本案例中合同中没有明确表示双方是采用样品成交,所以我方所说的实际所交货物与样品一致不能称为拒付理由。 本案例交易产品在实际业务中不可能采用全部手工制作,应该在合同中标明“基本手工制造书写纸”,以免双方产生争议,与实际所提交产品品质完全吻合。 案例2 案情简介: 合同规定水果罐头装入箱,每箱30听。卖方按合同规定如数交付了货物,但其中有一部分是装24听的小箱,而所交货物的总听数,并不短缺。可是,买方以包装不符合合同规定为由拒收整批货物,卖方则坚持买方应接受全部货物,理由是经买方所在地的公证人证实:不论每箱是装24听或30听,其每听市场价格完全相同。于是引起诉讼。对此,你认为法官应如何判决?依据何在? 要点评析: 根据《公约》规定,卖方需要按照合同约定的数量、品质规格交货,并按照合同规定的方式包装或者装箱,如果没有按照规定,卖方需承担违约责任。 通常合同中的包装条款针对包装方式或包装材料的规定,对于每个包装的数量,属于双方特殊的约定。如果双方约定卖方没有按照规定数量装箱,买方有权拒收货物,则本案例中买方可以拒收整批货物。但是案例中只是约定每箱的听数,一般认为卖方属于一般违约,所以买方只能提出索赔,不能以包装不符合合同规定为由拒收整批货物。 案例1 案情简介: 我某出口企业按FCA Shanghai Airport条件向印度A商出口手表一批,货价5万美元,规定交货期为8月份。自运往孟买;支付条件:买方凭由孟买某银行转交的航空公司空运到货通知即期全额电汇付款。我出口企业于8月31日将该批手表运到虹桥机场交由航空公司收

Gateway

Gateway?技术提供以下可能: ?通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 ?将您的基因转入到多个表达系统 ?在任何您选择的系统――体外,细菌,酵母,昆虫,或哺乳动物――分析表达 Gateway?技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统(图1)。 这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤,而同时典型的 克隆效率高达95%或更高。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时, 还可以保证正确的方向和阅读框。Gateway?也有助于进行带不同数目纯化和 检测标签的表达。 Gateway?利用了位点特异重组,所以在构建入门载体后,不再需要使用限制性内切酶和连接酶。一旦您拥有了一个入门克隆,就可以多次使用它,转移您感兴趣的基因到Gateway?改造过的的各种表达载体(目的载体)。 此外,由于在重组时DNA片段的阅读框和方向保持不变,因而您不必再为新的表达克隆的测序担心。在使用每一种新的表达系统时,将会节省您更多的时间。

图1-Gateway?技术的灵活性 *目的基因克隆进入门载体后, 可以同时转移目的基因到多个目的载体。 一种强大而可靠的技术 Gateway?技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。 Gateway?技术是基于已研究的非常清楚的λ嗜菌体位点特异重组系统(attB x attP →attL x attR)。BP和LR两个反应就构成了Gateway?技术(表1和图2)。BP反应利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。 Gateway?技术也利用了ccdB选择方法,确保高效率的分离重组克隆。典型的效率是>95%。需要了解更多的有关ccdB的信息,请

gateway重组技术

河南农业大学牧医工程学院 1 Gateway 基因克隆 Gateway 基因克隆是由Invitrogen 公司在二十世纪九十年代末发明并应用于分子生物学基因克隆的一项专利技术。该技术利用专有的重组序列使得DNA 片段能够更有效地被转入质粒当中,可应用于大片段的基因克隆,并且在保持正确阅读框的前提下让不同表达载体间的DNA 转移成为可能。 这一技术在插入的目的DNA 片段两端整合att L1和att L2两个侧端重组序列,来构建一个类似通道的结构并称之为“入门克隆”(Gateway Entry Clone )。据Invitrogen 宣称Gateway 技术使用99%有效且可逆的一小组重组反应,如此使得基因克隆不同于传统的限制性内切酶方法,避免了目的片段内存在切点的问题而使得大片段DNA 保持其完整性,大大提高了克隆效率,常应用于大规模的DNA 片段整合进同一种表达载体,因此又称之为高通量基因克隆技术(Gateway Cloning Technology )。 一、Gateway 基因克隆的原理及机制 Gateway 被视为一种克隆操作平台:把目的基因克隆到入门载体(Entry Vector )后,就不用依赖限制性内切酶,而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶,高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体(Destination Vector ,目的载体)上。 Gateway 的原理是建立在噬菌体DNA 定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体和细菌的整合因子(INF 、Int )的作用下,lambda 的attP 位点和大肠杆菌基因组的 attB 位点可以发生定点重组,lambda 噬菌体DNA 整合到大肠杆菌的基因组DNA 中,两侧产生两个新位点:attL 和attR 。这是一个可逆的过程,如果在一个噬菌体编码蛋白Xis 和IHF 、Int 的共同介导下这两个新位点可以再次重组回复为attB 和attP 位点,噬菌体从细菌基因组上裂解下来(见图1)。这一过程的方向是受控于两个重要因素:存在的介导蛋白和重组位点。

Gateway重组克隆技术

Gateway? 重组克隆技术 经典的克隆工作流程包括许多步骤,尤其是传统的限制性内切酶克隆方法。这种传统的方法限制了克隆的成功率。 例如,当其可能会在目的基因内部进行切割, 从而截短插入片段,并使得基因无法用于下游表达时,某些限制性内切酶是不能使用的。采用传统的克隆方法, 需要额外的片段回收步骤,而且在克隆大片段DNA 时,将会遇到重组效率降低, 从而需要浪费费很多时间以筛选到所需的克隆的问题- 所有这些步骤都会耗费大量的时间和精力,而且成功还无法得到保障。 而Gateway? 重组克隆技术则不存在这些问题。 极好的通用性 相反,Gateway? 重组克隆技术则规避了这些克隆限制,使您几乎能够使用任何表达系统。Gateway? 重组克隆采用了99% 有效且可逆的一小时重组反应, 并且不使用限制性内切酶、连接酶、亚克隆步骤,也不需要对不计其数的菌落进行筛选,从而节省您的时间、金钱和精力。Gateway? 技术自推出后便为研究界广泛采用, 仅参考文献便超过1500 篇。此技术使跨学科研究的合作变得简单方便,而且能从这些研究团体中获得众多载体用于真正的多学科科学研究。 最后,MultiSite Gateway? 技术等最新进展使得Invitrogen 的 Gateway? 克隆成为蛋白质表达和功能分析的理想克隆方法。 Gateway? 技术的优点 只需一小时,室温克隆反应便能快速产生您所需的克隆,效率高达99% 以上 无需使用限制性内切酶或连接酶便能保持片段正确的插入方向和阅读框,从而,获得可直接进行表达的克隆 从靶标鉴定到验证始终使用同一个克隆,无需重新测序,从而确保结果在整个实验过程中一致 使DNA 插入片段从一个表达载体穿梭到另一个表达载体,既提高了灵活性,同时还简化了克隆工作流程

国际贸易经典案例分析含答案

?案例:某出口公司向外商出售一级大米300吨,成交条件FOB上海.装船时货物经检验符合合同要求,货物出运后,卖方及时向买方发出装船通知.但是航运途中,因海浪过大,大米大半被海水浸泡,品质受到影响.货物到达目的港后,只能按三级大米价格出售,于是买方要求卖方赔偿差价损失。问应如何处理这一纠纷?卖方不应该赔偿差价损失。采用FOB条款,货物在越过船舷之后,风险和责任在买方。 ?案例:我国某内陆出口公司于2000年2月向日本出口30吨甘草膏,每吨40箱共1200箱,每吨售价1800美元,FOB新港,共54000美元,即期信用证,装运期为2月25日之前,货物必须装集装箱。该出口公司在天津设有办事处,于是在2月上旬便将货物运到天津,由天津办事处负责订箱装船,不料货物在天津存仓后的第二天,仓库午夜着火,抢救不及,1200箱甘草膏全部被焚,办事处立即通知内地公司总部并要求尽快补发30吨。否则无法按期装船。结果该出口公司因货源不济,只好要求日商将信用证的效期和装运期各延长15天。试分析其中缘由。 ?该出口公司所在地正处在铁路交通的干线上,外运公司和中远公司在该市都有集装箱中转站,既可接受拼箱托运也可接受整箱托运。假如当初采用FCA(该市名称)对外成交,出口公司在当地将1200箱交中转站或自装自集后将整箱(集装箱)交中转站,不仅风险转移给买方,而且当地承运人(即中转站)签发的货运单据即可在当地银行办理议付结汇。该公司自担风险将货物运往天津,再集装箱出口,不仅加大了自身风险,而且推迟结汇。 ?案例:我与越南某客商凭样品成交达成一笔出口镰刀的交易。合同中规定复验有效期为货物到达目的港后的60天。货物到目的港经越商复验后,未提出任何异议。但事隔半年,越商来电称:镰刀全部生锈,只能降价出售,越商因此要求我方按成交价的40%赔偿其损失。我方接电后立即查看我方留存的复样,也发现类似情况 ?问我方应否同意对方的要求,为什么? ?不同意,此案例中的买卖是凭买方样品买卖,即由提供样品由买方依样承制。在我方留存的复样中,也发现生锈,说明我方式按照买方提供的样品生产,生锈了的才是符合卖方要求的 ? ?案例:我国某公司同日本公司签订出口羊绒衫合同,供出口羊绒衫10000件,价值100万美元。合同规定羊绒含量为100%,商标上也表明“100%羊绒”。当对方对我方公司出口羊绒衫进行检验后,发现羊绒衫含量不符合合同规定而提出索赔,要求赔偿200万美元。最后我方公司赔偿数十万美元结案。 ?在合同中没有用品质机动幅度 ?案例:我某出口公司在某次交易会上与外商当面谈妥出口大米10000公吨,每公吨USD275FOB中国口岸。但我方公司在签约时,合同上只笼统地写了10000吨,我方当事人主观上认为合同上的吨就是指公吨。后来,外商来证要求按长吨供货。如果我方照证办理则要多交大米160.5公吨,折合美元为44137.5美元。于是,双方发生争议。 ?应采用国际单位制计量单位 ?案例:我某公司出口布匹以信用证结算,买方银行来证规定,数量大约为5000码,每码1美元,但金额注明为不超过总额5000美元,则我某公司如何掌握装运数量? ?大约可解释为交货数量有不超过10%的增减幅度,4500~5000 ?案例:黑龙江某贸易出口公司与俄罗斯公司成交一笔黄豆出口交易。合同的数量条款规定:每袋黄豆净重100公斤,共1000袋,合计100吨,但货物运抵俄罗斯后,经俄罗斯海关检查后,每袋黄豆净重只有96公斤,1000袋共96吨,当时正遇市场黄豆价格下跌,俄罗斯公司以单货不符为由,提出降价5%的要求,否则拒收。请问:俄罗斯的要求是否合理?我方应采取什么补救措施?另问:若该例黄豆不是用袋装而是散装,则结果又如何? ?合理,把黄豆改成散装,在5%的增减幅度内,则无须降价赔偿 ?《UCP500》第39条B款规定:除非信用证规定货物的指定数量不得有增减外,在所支付款项不超过信用证及呢的条件下,货物数量准许有5%的增减幅度,但以包装单位或个数记数时不适用 ?案例:某公司出口自行车800辆,合同规定用木箱装,来证也成为PACKED IN WOODEN CASE。但在CASE之后加

实验方案gateway

实验方案 Gateway? 反应的基本原理 ?BP反应—构建Gatew ay? 入门克隆 ?LR 反应—构建Gatew ay? 表达克隆 ?一管模式—从PCR 产物构建Gatew ay? 表达克隆 ?Gatew ay? 载体转化—将您喜爱的克隆载体转化成Gatew ay? 载体 TOPO? TA 克隆- 创建Gateway? 入门克隆 ? ?步骤一–制备PCR 产物 使用Taq 聚合酶和自己的方案生成PCR 产物。通过 最后7 到30 分钟的延伸步骤,结束PCR 反应。 步骤二- 进行TOPO? 克隆反应 1. 按所示顺序使用试剂,以建立以下一种TOPO? 克隆 反应。对于电穿孔,将盐溶液稀释 4 倍以制备稀释 盐溶液。 试剂化学转染电穿孔法 新鲜的PCR 产物0.5 至 4 μl 0.5 至 4 μl 盐溶液 1 μl -- 稀释盐溶液-- 1 μl 无菌水至终体积为 5 μl 至终体积为 5 μl TOPO? 载体 1 μl 1 μl 总体积 6 μl 6 μl ? 2. 轻轻混合并在室温下孵育 5 分钟。 3. 置于冰上,然后开始转化One Shot? 化学感受态 E. coli,步骤如下 步骤三- 转化One Shot? 化学感受态E. coli 1. 每次转化时,解冻置于冰上的一小瓶One Shot? E. coli 细胞。 2. 在一小瓶One Shot? 化学感受态E. coli 中加入 2 μl TOPO? 克隆反应液, 轻轻混匀。

3. 在冰上孵育 5 至30 分钟。 4. 将细胞置于42°C 下热休克30 秒,不振荡。立即 将试管转移至冰上。 5. 加入250 μl 室温S.O.C. 培养基。 6. 在37°C 下振荡孵育 1 小时。 7. 在预热的LB 琼脂平板上涂布10-50 μl 细菌培养物(琼脂平板含有 100 μg/ml 大观霉素),并于37°C 下过夜孵育。 Gateway? 反应的基础知识 ? ? ? ?BP 反应 从含有att B 侧翼序列的PCR 产物到生成Gatew ay? 入门克隆只需 1 小时的简单反应。参见下文的实验设置概述。更多详细信息,请参阅说明书。 1. 在室温下向 1.5 ml 管中加入下述组分并混匀: attB-PCR 产物(=10 ng/μl;最终量~15-150 ng)1-7 μl 供体载体(150 ng/μl) 1 μl TE缓冲液,pH 8.0 补充至8 μl 2. 将BP Clonase? II 酶混合物置于冰上约 2 分钟解冻。对BP Clonase? II 酶混合物稍 微震荡两次(每次 2 秒)。 3. 对于每份样品(上述步骤1),向反应液中加入 2 μl BP Clonase? II 酶混合物,稍微震 荡两次以充分混匀。进行短暂的低速离心。 4. 将BP Clonase? II 酶混合物放回-20°C 或-80°C 储存。 5. 反应体系25°C 孵育 1 小时。 6. 向每份样品中加入 1 μl 蛋白酶K 溶液来终止反应。稍微震荡。在37°C 下孵育样品10 分钟。 转化 7. 取 1 μl 的各LR 反应液转化50 μl One Shot? OmniMA X ? 2 T1 噬菌体抗性细胞(目 录号C8540-03).冰上孵育30 分钟。通过30 秒的42°C 孵育对细胞进行热休克。加入250 μl S.O.C. 培养基并在37°C 震荡孵育 1 小时。将20 μl 和100 μl 每种转化液分别涂布于选择 性平板上。注意:任何转化率达>1.0 × 10 8 转化子/μg 的感受态细胞均可以使用。

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