ARTer- RACE cDNA Amplification Kit User Manual
SMARTer? RACE cDNA Amplification Kit User Manual
I. 简要概述
II. 成分列表
Control Human PlacentalTotal RNA 和BD SMART II A Oligonucleotide在–70°C下保存。NucleoTrap Gel Extraction Kit 室温下保存。
其余试剂–20°C下保存。
随BD SMART RACE cDNA Amplification Kit 同时免费提供BD PowerScript Reverse Transcriptase和BD Advantage 2 PCR Kit。所有试剂可以满足7次cDNA 合成反应和30次PCR反应。
First-strand cDNA 合成
?7μl BD SMART II? A Oligonucleotide (12 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC GCGGG–3'
? 7μl 3'-RACE CDS Primer A (3'-CDS; 12 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC(T)30V N–3'
(N = A, C, G, or T; V = A, G, or C)
? 7μl5'-RACE CDS Primer (5'-CDS; 12 μM)
5'–(T)25V N–3' (N = A, C, G, or T; V = A, G, or C)
? 7μl BD PowerScript? Reverse Transcr iptase
? 200 μl 5X First-Strand Buffer
250 mM Tris-HCl (pH 8.3)
375 mM KCl
30 mM MgCl2
? 200 μl Dithiothreitol (DTT; 20 mM)，二硫苏糖醇
? 1ml Deionized H2O
5'- & 3'-RACE PCR
? 400 μl 10X Universal Primer A Mix (UPM)
Long (0.4 μM):
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT–3' Short (2 μM):
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3'
? 50 μl Nested Universal Primer A (NUP; 10 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT–3'
Control Reagents
? 5μl Control Human Placental （胎盘）Total RNA (1 μg/μl)
? 25 μl Control 5'-RACE TFR Primer (10 μM)
? 25 μl Control 3'-RACE TFR Primer (10 μM)
General Reagents
? 70 μl dNTP Mix (dATP, dCTP, dGTP, and dTTP, each at 10 mM)
? 2 X 1 ml Tricine-EDTA Buffer
10 mM Tricine-KOH (pH 8.5)
1.0 mM EDTA
NucleoTrap? Gel Extraction Kit (Cat. No. 636053 or K3070-y)
? 100 μl NucleoTrap Suspension
? 3 ml NT1 Buffer
? 10 ml NT2 Buffer
? 2ml NT3 Buffer
? User Manual (PT3169-1)
Free trial-size BD Advantage? 2 PCR Kit (Cat. No. 639207 or K1910-y)
The BD Advantage 2 kit provides sufficient reagents for 30 PCR reactions.
The following components are included:
? 30 μl50X BD Advantage 2 Polymerase Mix
? 200 μl10X BD Advantage 2 PCR Buffer
? 50 μl 50X dNTP Mix (10 mM each)
? 30 μl Control DNA Template (100 ng/μl)
? 30 μl Control Primer Mix (10 μM each)
? 1 ml PCR-Grade Water
? User Manual (PT3281-1)
III. 另备物品
下列试剂需另外准备：
? 0.5-ml PCR 反应管，推荐使用PerkinElmer GeneAmp 0.5-ml reaction tubes (Cat. No.
N801-0737 or N801-0180).
? Mineral oil (e.g., Sigma Cat. No. M-3516)
IV. BD SMART RACE的要点
使用前请全面阅读
?所有参数均经过优化，但可能因所使用的酶、模版、引物和热循环仪而不同。因此应使用Control Human Placental Total RNA和Control 5'- and 3'- RACE TFR Primers进行预实验。
?RACE PCR的效率取决于试验样品RNA中mRNA的丰度。另外退火温度和延伸温度也
依引物不同而变化。请参照第X节的建议优化PCR的条件。
?在进行5'-RACE and 3'-RACE PCR时必须使用热启动。本手册已经过优化，所使用的BD Advantage 2 Polymerase Mix中包含BD TaqStart 抗体用于自动进行PCR的热启动(Kellogg et al., 1994)。也可以手动(D’Aquila et al., 1991).或使用蜡珠(Chou et al., 1992)来进行热启动。
?推荐使用试剂盒中提供的Tricine-EDTA缓冲液稀释和重悬DNA样品。Tricine缓冲液在高温下较Tris-based缓冲液有更好的缓冲能力。Trisbased 缓冲液会导致pH降低，引起DNA的降解。
?整个过程要戴手套以防核酸酶污染。
? 重悬过程（包括吸入和吹出溶液）要轻缓，短暂离心使所有成分聚集管底。
? 无特别标示，所有操作均应在冰上进行。
? 聚合酶在最后加入。
? 使用推荐的酶加入量，该量已经过特别的优化。
? EB是致癌物质，小心处理和使用。
V. 引物设计
A. 引物序列
特异引物(Gene-Specific Primer，GSPs) 应当：
? 23–28 个核苷酸
? GC含量为50–70%
? Tm ≥65°C，如果Tm >70°C可获得最好的结果(可使用降落touchdownPCR)。
模版、引物及RACE产物如图3所示。至少需要两个特异引物才能进行完整的BD
SMART RACE：即用于5'-RACE PCR的反义引物和用于3'-RACE PCR的正义引物。如果只进行5'- 或3'-RACE则只需一个特异引物。引物长度在23–28个核苷酸，长于30个核苷酸没有优势。
如图3所示，两种引物的5'- and 3'-RACE扩增产物存在部分重叠，如果在重叠区有一个合适的限制性酶切位点，可以通过酶切和连接反应可以得到cDNA的全长。将两个引物设计成其RACE产物有100–200-bp的重叠的形式，就能够配合使用作为PCR反应的阳性对照。引物并非一定要设计成获得重叠片断的形式。对于大或稀有cDNAs，引物最好要设计的尽量靠近cDNA的末端，不产生重叠。此外，引物自身可以重叠（如互补）。
特异引物GC含量为50–70% ，其至少65°C。使用nearest neighbor 分析(Freier et al., 1986; 我们使用Primer Premier软件来计算Tm’s) Tm.应尽可能大于70°C。根据我们的经验，长引物的退火温度高于70°C特别从困难的样品中可以得到强的RACE扩增。Tm’s 超过70°C 可以使用降落PCR。此外GSP1和GSP2设计成具有相似的Tm’将更有利于使用。通过计算或试验能够得到GSP1和GSP2的Tm’s。要避免使用内部互补的引物或引物之间互补的引物，尤其在引物的3'末端互补。
注意：不要将酶切位点都合并到5'和3'特异引物的5'末端，根据我们的经验，这些额外的序列将会增加反应的背景。
Figure 3. The relationship of gene-specific primers to the cDNA template.
B. 引物在基因上的位置
尽管我们使用BD SMART RACE Kit成功地得到了大于6.5 kb扩增产物，但为了使你的5'-和3'-RACE 产物达到2 kb，建议对引物加以筛选。
C. 降落touchdownPCR
我们发现降落PCR (Don et al., 1991; Roux, 1995)明显增加BD SMART RACE扩增的特异性。降落PCR的退火温度符合首次PCR循环的Tm 高于通用引物的Tm 。如果你的特异引物Tm，在这些循环中将只有与基因特异性结合的引物发生聚合，从而积累一定量的特定产物。退火温度在随后降低到与通用引物相配合的程度，引起特异性基因模版的指数和高效率的扩增。
当你的引物的T m>70°C时我们推荐使用降落循环程序。
D. 巢式引物
在首次试验时，不要使用巢式PCR。混合的通用引物（UPM）和基因特异引物（GSP）通常能得到较好的低的非特异性背景的RACE产物。但是，巢式特异引物可以作为探针在鉴定RACE产物的Southern blotting中使用。此外巢式PCR在使用特异引物进行5'- or 3'-RACE存在高背景或高非特异性扩增时有必要使用。在巢式PCR中，使用外侧引物进行一个初步的扩增，如果扩增产物模糊不清，可以使用内部引物重新扩增初步产物的一部分。BD SMART RACE 指南包括了可选的步骤，指明了巢式引物能够被使用的地方。本试剂盒提供的通用巢式引物A 可用于5'- and 3'-RACE。
按照上述指南可以设计巢式特异引物。巢式引物与外侧特异引物尽可能不重叠，如果因序列有限而必须重叠，其内部引物的3'末端的序列也要尽可能唯一。
VI.总RNA 和Poly A+ RNA的制备
A. 总的预防
影响cDNA合成质量的首要因素就是总RNA和poly A+ RNA的完整度和纯度。下述预防措施可使你避免RNA的降解和污染。
? 戴手套
? 直接使用新鲜去离子水，没有用DEPC 处理。.
? 用0.5 N NaOH漂洗所有的玻璃器皿，160–180°C烘烤4–9 hr.
? 使用一次性吸管吸头.
B. RNA 分离
BD Biosciences Clontech 提供几种试剂盒用于RNA分离和纯化，如NucleoBond?
RNA/DNA Mini Kit (Cat. No. 635945)。
C. RNA 分析
推荐使用变性甲醛琼脂糖电泳检测RNA 样品。哺乳动物的总RNA 展示为两条4.5 和
1.9 kb的带，分别对应28S 和18S 核糖体RNA，它们之间的亮度比率约为1–2:1。哺乳
动物的Poly A+ RNA 会产生0.5–12 kb 的弥散带，亮度较核糖体RNA带弱。Size
distribution may be smaller with nonmammalian tissue sources.
VII. cDNA 的第一链合成
如下所述，两个10-μl的反应可以将50 ng–1 μg 总RNA 或poly A+RNA转换成用于RACE 的cDNA的第一链。
我们推荐尽量使用poly A+ RNA。但是如果总RNA的量少于50 μg，则不宜进行poly A+RNA 的纯化，否则最终产量很小将会影响分析RNA数量和质量。为获得最好的试验结果，可以使用1 μg 的poly A+ RNA或1 μg 的总RNA 。
我们强烈推荐使用包括Human Placental Total RNA 在内的试验样品进行阳性对照cDNA 的合成。该cDNA将会被用于阳性对照的RACE反应。
1. 在0.5-ml 微型离心管中加入下列试剂：
*取1 μl 的Control Human Placental Total RNA (1 μg/μl)作为对照合成。
2.加入消毒水至终体积为5 μl 。
3. 混合并在小型离心机上短暂离心。
4. 70°C 下温育2 min。
5. 迅速在冰上冷却2 min。
6. 短暂离心使成份聚集管底。
7. 在每个反应管中再加入下列试剂（已有5 μl体积）：
2 μl 5X First-Strand Buffer
1 μl DTT (20 mM)
1 μl dNTP Mix (10 mM)
1 μl BD PowerScript Reverse Transcriptase
总体积为10 μl
8. 小心混合管内组分。.
9. 短暂离心使成份聚集管底。
10. 42°C 下温育1.5 hr。
注意: 使用水浴或热循环仪会由于蒸发作用而降低反应液的体积，由此降低第一链的合成效率。
11. 使用Tricine-EDTA 缓冲液来稀释反应产物：
? 如果以<200 ng的总RNA开始反应，可加入20 μl来稀释。
? 如果以>200 ng的总RNA开始反应，可加入100 μl来稀释。
?如果以poly A+ RNA开始反应，可加入250 μl 来稀释。
12. 72°C下加热管7 min。
13.所得产品可以在–20°下保存3个月。
到此你已经得到了用于3'- 和5'-RACE的cDNA 样品。这些产物的量足以用于后期的
RACE反应，如果使用LD PCR 构建全长cDNA ，请在此留出足够的产物用作膜板。VIII. PCR 的阳性对照试验
在用样品cDNA进行5'- 和3'-RACE之前，我们强烈推荐使用来自于Control Human Placental 总RNA 的cDNAs进行阳性对照RACE PCR 反应。这些反应将会扩增铁转运蛋白受体(TFR) cDNA。该程序会为你确认BD SMART RACE的正确工作节省可观的时间。将来一旦有问题出现，本对照试验将有助于你确认问题是发生在RACE PCR（如不同的循环仪）还是cDNA 。
我们推荐使用提供的BD Advantage 2 Polymerase Mix进行首次BD SMART RACE PCR反应。如果你的cDNA的GC含量比较高，可以使用BD Advantage? GC 2 Polymerase Mix (Cat. No.
639114) 或PCR Kit (Cat. Nos. 639119 & 639120)。for subsequent analysis. For applications in which the highest fidelity product is desired, the BD Advantage?
HF 2 PCR Kit (Cat. Nos. 639123 & 639124) can amplify templates up to 3.5 kb.
For more information, see Section XI (Troubleshooting Guide).
1. 为所有的PCR反应和1 个额外的反应准备足够的主混合液。对于每个50-μl PCR反应，
混合下列试剂：
34.5 μl PCR纯度的水
5 μl 10X BD Advantage 2 PCR Buffer
1 μl dNTP Mix (10 mM; in BD SMART RACE 或BD Advantage
2 PCR Kit)
1 μl 50X BD Advantage
2 Polymerase Mix
总体积为41.5 μl
2. 旋涡混合(无泡沫产生), 短暂离心。
3. 按表2进行PCR反应的准备，按顺序在0.5-ml PCR 管中加入各种成份，轻柔混合。
4. 每管加入2滴矿物油覆盖，加盖。
注意: 如果使用热盖循环仪则可以不用矿物油。
5. 按下列程序启动降落PCR
6. 每样取5 μl在1.2 % 琼脂糖凝胶上进行电泳分析。其余45 μl 保存在–20°C。
理想的试验结果(泳道2 和 5 所示)：5'-RACE对照应当产生一条2.6-kb 带，3'-RACE对照反应应当产生一条 2.9-kb 带。如果没有观察到这些带出现，将各PCR反应管重新放回到循环仪中，再进行5次循环。如果仍然没有期望的带出现，参照第XI节的疑难解答。一定要在阳性对照反应能够在42个或更少的循环次数内(5 cycles annealing at 72°C + 5 cycles at 70°C + 32 cycles at 68°C).产生了很明显的单条正确的产物带之后再使用试验引物和cDNA进行正式的试验。
Figure 4. 5'- and 3'-RACE sample results.
本试验使用总RNA进行RACE的反应结果：
Lanes 1 & 4：干扰素受体
Lanes 2 & 5: 铁转运蛋白受体
Lanes 3 & 6: HPRT.
2和5道的RACE产物的大小为2.6 kb和2.9 kb。铁转运蛋白受体的3'-.RACE （5道）会偶尔产生一条0.6-kb 的产物
IX. cDNA 末端的快速扩增(RACE)
本部分描述了利用5'-RACE 和3'-RACE PCR 反应得到5' 和3' cDNA 片段. 正式试验前请按照第八节所述进行阳性对照试验。虽然随盒提供了Nested Universal Primer A(NUP)，
但在BD SMART RACE反应中不是一定要进行巢式PCR。
所有的RACE PCR 反应都用BD Advantage 2 Polymerase Mix进行了最优化处理。
1.PCR 反应混合液的准备：确保混合液体积足够所有的PCR反应和一次额外的反应。该
混合液用于5'- 和3'-RACE 反应。
对于50-μl PCR 反应，所混合的成份如下：
2. 旋涡混合(不要产生气泡), 短暂离心。
3. 对于5'-RACE: 按表III准备PCR反应；
对于3'-RACE: 按表IV准备
在0.5-ml PCR 管中按顺序加入所有成份，轻柔混合。
* 如果RNA是非人类的，可以跳过此步
? 如果特异引物不产生重叠可以跳过此步。
有关对照反应的细节参照第XI节.
* 如果RNA是非人类的，可以跳过此步
? 如果特异引物不产生重叠可以跳过此步。
有关对照反应的细节参照第XI节.
4. 每管内覆盖2滴矿物油，加盖。
Note:.如使用热盖循环仪则不必加矿物油。
5. 使用下列程序之一启动循环仪，(programs 1 和2 用于5'- 和3'-RACE TFR
和UPM Primers的阳性对照)。依据所使用的是poly A+ 还是总RNA来选择正确的循环次数。
* 如果扩增的片段长度>3 kb ，则每增加1 kb延长1 min。
6. [可选] 如果本次PCR 反应没有产生目的带或产生的是弥漫带，可以用Southern
blot 来验证：
a. A cDNA probe
b. A nested primer as a probe
或者，可以使用NUP 引物和NGSP进行“巢式”PCR：
a. 取上述PCR产物5 μl用245 μl Tricine- EDTA缓冲液稀释。
b. 重复上述步骤1–5 ：
?用5 μl 稀释过的初级PCR 产物代替用于RACE的cDNAs。
? 加入NUP 引物1 μl 、巢式特异引物1 μl 。
? Program 2的循环为15–20 次。
X. RACE 产物的鉴定
RACE 产物的鉴定使用3种方法：(A) 对比用GSPs 和NGSPs得到的RACE产物；(B) Southern blotting；(C) 克隆和测序。A 和B 需要巢式引物。
A. 对比用GSPs 和NGSPs得到的RACE产物
对于5'-RACE 反应，将UPM Mix 和GSP1 得到的初级扩增产物与UPM 和NGSP1得到的扩增产物进行对比(对于3'-RACE，将UPM和GSP2 与UPM 和
NGSP2的扩增产物进行对比)。当有多条扩增带时，巢式引物的扩增带应当稍小些，其中一些带应当消失。
Note: 不要使用Nested Universal Primer A (NUP)。
B. Southern Blot Analysis
当RACE 产物有多条带时，用GSPs 或NGSPs制作探针进行Southern blot 可以把握地确认真正的RACE产物带。通常5'-RACE 比3'-RACE易出现多条带。
1. 琼脂糖凝胶电泳检测RACE 产物。
2. 照相、转尼龙膜。
3. 准备探针，探针内不能有GSP1 (or GSP2)的序列。可以将NGSP1 (or
NGSP2)进行末端标记。如果GSPs的5' 和3'产物有重叠，则可以用GSP2 做探针鉴定5'-RACE产物，用GSP1 做探针鉴定3'-RACE产物。使用cDNA进行缺口翻译或随机引物扩增都可以制作探针。
4.杂交、曝光、显影。
5. 与琼脂糖凝胶电泳照片进行对比。
6. 一旦得到了目的条带，使用NucleoTrap Gel Extraction Kit进行胶回收，分离DNA。
C. RACE产物的克隆和测序
1. 使用NucleoTrap GelExtraction Kit 进行RACE 产物的回收和纯化，直接克隆到T/A
类型的PCR 克隆载体上。
2. 使用32P-标记的NGSP进行菌落杂交或从GSP处开始测序，验证克隆的插入。对于
5'-RACE产物，推荐至少挑取8–10单克隆，以便在5' 末端获得最大量的序列。一旦确认克隆内含有最大的特异基因的插入子，就尽可能获取较多的序列数据。可以得到完整ORF以及5' 和3UTR。
Options for generating full-length cDNA
在对RACE产物进行部分或完全测序之后，用下述方法之一可以得到全长cDNA ：
1. 根据cDNA的5' 和3' 的末端序列设计引物，以用于5'-RACE 的cDNA为膜板，进
行长距离PCR (LD PCR)。
2. 克隆重叠性5'- 和3'-RACE 片段，借助重叠区内的限制性酶切位点得到全长。XI. 疑难解答
A:常见的PCR问题
GC-Rich 模板解决办法：
如果PCR产物，特别是5'-RACE产物，不是预期的大小或者没有，其原因可能是GC-Rich 模
板，Clontech 提供Advantage GC 2 Polymerase Mix (Cat. No. 639114) and PCR Kit (Cat. Nos. 639119 &639120) 来有效扩增GC-rich模板。然而，混合液需要修改以及PCR参数可能要根据模板重新选定，想要得到更多内容，请参见Advantage GC 2 PCR User Manual
(PT3316-1)，先用Advantage 2 Polymerase Mix做RACE，如果你不能得到预期的PCR产物是由于GC含量过高，再利用Advantage GC 2 Polymerase Mix (Cat. No. 639114)来做RACE。降落Touchdown PCR解决办法：
要排除降落PCR问题，首先要改变最终设定的循环参数。如果在68℃的最小循环数下看不出扩增的目的产物，将你的加样管从放回PCR仪中再跑5个循环，如果产物还未出现，68℃下再加3~5个循环，如果还未成功，重做一次PCR，改变第三个循环的退火温度从68℃到65℃，这一程序非常管用，特别是当你的GSP的Tm接近70℃的时候
B．第一链cDNA合成问题
在第一链cDNA合成方案中描述的RT（逆转录）反应其实是可以改变的，然而，有些情况下，比如说长的，数量很少的稀有转录子中，在第一链cDNA合成反应中，将SMARTScribe Reverse Transcriptase的量从1 μl减少至0.5 μl可以提高SMARTer 5’-RACE反应的灵敏度。
分析第一链cDNA的质量
如果你怀疑扩增cDNA片段的问题是由于反转录的失败，你可以检测第一链cDNA的质量利用32 P-标记程序（如果是来自poly A + RNA）。要做到这一点，重新做第一链cDNA合成实验，用1 μl 的0.1 μCi/μl [α- 32 P] dATP 或 dCTP取代1 μl水，将产物在碱性琼脂糖胶上跑电泳，用放射自显影法检测扩增模式，如果第一链cDNA合成成功的话，你会看到扩增模式与你的RNA的产物是一样的，哺乳动物的poly A + RNA一般都会出现0.5~12kb的smear，哺乳动物的总RNA一般会出现分别为1.9 kb和4.5 kb的两条亮带
C．多条带的RACE产物
有些情况下，你的初始试验会出来多条5’或3’产物，你必须决定哪个是真实的，哪个是赝像，以下的指导方针可以帮助你排除赝像，证实真的完整条带，这要求具备其他信息包括转录起始位点的定位，内含子/外显子结构和poly A位点和基因组序列。
多重片段并不意味着你不能扩增出全长cDNA，然而，如果试图通过反应来排除非特异性片断，你就要有一个长足的打算。如果多重片段持续存在而你又想继续，你应该利用每次RACE反应的最长片段，因为它最有可能是真实的，完整的RACE产物。
“真实的”多重RACE产物的来源
单个基因可以产生多个不同大小的转录子，因此多重RACE片段至少有三种机制：
1、选择性剪切可能导致5’或3’RACE的多重产物
2、不同的转录起始位点会导致多重5’RACE产物
3、不同的poly A位点会引起3’RACE的多重产物
相应的，目的基因可能是多基因家族的一个成员，这样会引起你的“基因特异性”引物可能扩增出一些高度同源的cDNAs
区别RNA的真实多态性形式是科学研究的一大难题，但是，你可以试图找到含量最丰富的剪切形式。、
赝像的来源
多重条带一般不是实际的，完整的转录子，这些赝像RACE产物可以分成两类——不完的及非特异的
第一链cDNA合成的非成熟终止引起逆转录停止从而导致多重5’RACE产物，这一问题在大的RNA中很普遍，并且由于是逆转录的固有限制而非常难克服
起始材料的RNA降解常导致多重5’RACE产物，
不管是5’还是3’RACE某些特定基因很难扩增引起多重产物通常是GC含量过高
引物的非特异结合于双链cDNA的多重位点或人工引物二聚体引起非特异性RACE产物
多重条带RACE产物的排除建议
如果还未成功的话，用所有建议的对照重复你的RACE反应。特别时，确保你的GSPs在单独存在的条件下不会产生条带，并且在一起的时候只产生一条带。如果任何单个GSP中存在条带，我们建议你跟据下面的讨论改变循环参数或设计巢式，同样重复RACE PCR 实验的阳性对照。
利用5μl 5~10倍的cDNA稀释液重做实验
如果还未成功，根据V.C部分检查起始RNA的大小分布，如果你的RNA看起来比预期的小，重新提RNA并重新cDNA合成
如果多重条带还是存在，尝试改变PCR循环参数
通过升高退火温度2~5度以提高PCR的严谨性，在很多情况下，非特异引物引起的条带将会消失同时真实的或不完整的产物将会出现
减少循环数，同样，非特异引物引起的条带将会消失同时真实的或不完整的产物将会出现减少扩增时间
对于大的RACE产物，增加额外的扩增时间有助于消除额外的条带
如果多重条带还是存在，尝试设计新的引物
重计引物使之Tm高于70度，并利用降落PCR
我们建议你设计的新引物将会产生的RACE产物与初始引物的产物有微小的差别，新引起要么来自初始引物要么是初始引物的“巢式PCR”，在巢式PCR中，PCR反应的产物在初始引物的内部得到二次扩增，这常常会极大地降低在单一引物产物的背噪和非特异性扩增，巢式引物的设计在IV部分中讨论
在做巢式RACE PCR之前，我们建议你分别利用UPM与GSP1和NGSP1做一次初始扩增，这个测试可以帮助你展示多重位点是正确的引物PCR结果还是非特异性引物PCR，如果多重位点是真实的，它们在两个反应中都会出现，但是在巢式引物中会小一点，两个产物的差异应该与GSP和NGSP在cDNA结构中的位置相一致
调节阀操作说明书
气缸直行程控制阀 使用说明书 成都欧浦特控制阀门有限公司 ChengDu OPTIMUX Control Valves Co.,Ltd
一、 概述 OPGL 气缸直行程控制阀是成都欧浦特控制阀门有限公司引进美国先进技术，集多年成功的专业制造经验而生产的产品。该系列控制阀采用高刚性、大推力的气缸式执行机构，气源压力可达1.0MPa，气缸强大的推力可克服很高的介质流体压力。(OPGL 电动控制阀所配用的电动执行机构，根据用户要求确定)。自动对中心无螺纹连接卡入式阀座，使维修工作轻而易举，简单快捷。粗壮的阀杆及与其一体式的阀芯，能够承受高压差而阀芯不致脱落。另外它还综合了传统的单座控制阀、双座控制阀和笼式控制阀的优点，泄漏量小、稳定性好、允许压差高，使OPGL 气缸直行程控制阀充分显示出其独有的特点，它代表了国际九十年代末控制阀最先进的主流，我们相信广大客户在使用OPGL 气缸直行程控制阀时很快会发现其越来越多的优点。 在安装使用和维护OPGL气缸直行程控制阀前阅读本说明书将会给你很大的帮助。安装、操作或维修阀门时，使用和维修人员一定要充分地阅读安装说明，了解它的结构特点和拆装方法步骤，才能保证其安全运行。 OPGL 电动控制阀的用户请阅读本说明书和相应配套的电动执行机构的说明书。 OPGL 气缸直行程控制阀国内独家生产，具有国家发明专利的高科技产品。 二、 结构特点 1、OPGL 气缸直行程控制阀技术先进，性能卓越。具有调节、切断、切断压差大、泄漏量小等全部功能，特别适用于允许泄漏量小、而阀前后压差较大的自控系统，可同时替代薄膜式单座阀、双座阀及笼式阀。 2、标准化、模块化设计，库存备件少、维修更方便。 3、带弹簧的双作用气缸式执行机构，材质为压铸铝合金，体积小、重量轻，配双作用阀门定位器，动作灵敏、定位精度高，活塞的上部和下部同时接受纯净的压缩空气，气缸内部免受腐蚀。气源压力最高可达1.0MPa，推力大、行程速度快、使用寿命长。气源故障时弹簧可使阀门自动关闭或打开，保证了系统的安全。特殊设计的气缸卡环结构可使气关、气开方式在现场很方便地更换。同时具备了单作用执行机构和双作用执行机构的功能和优点。 4、自动调准中心插入式无螺纹连接阀座，通过阀盖和阀笼固定在阀体内，易于拆出、维修方便，控制阀可以在线检修，阀芯阀座密封面的优化设计和超精加工无需研磨就可以达到极小的泄漏量。 5、阀芯和阀杆为一体式，阀杆较传统类型阀杆粗3~4倍，可承受高压差并消除了阀芯脱落、阀杆弯曲断裂的事故隐患。 6、双顶式导向结构，阀芯与阀笼无接触，彻底消除了阀笼导向所引起的阀芯擦伤、阀笼卡死等阀门应用问题。 7、阀笼有多种设计：分别用于一般工况和高温高压差的严酷工况。如：消除气蚀型、降噪型，保护阀芯和阀体免受气蚀的损坏，大幅度降低噪音。 8、维修简单、快捷、经济，阀体不必从管线上拆下来，只需拧下阀盖法兰上的螺母，阀盖、阀芯、阀座零件就可很方便的依次取出检查，反之亦然。
物联网技术综述论文
物联网技术综述 引言 物联网是新一代信息技术的重要组成部分，也是“信息化”时代的重要发展阶段。其英文名称是：“Internet of things（IoT）”。顾名思义，物联网就是物物相连的互联网。这有两层意思：其一，物联网的核心和基础仍然是互联网，是在互联网基础上的延伸和扩展的网络；其二，其用户端延伸和扩展到了任何物品与物品之间，进行信息交换和通信，也就是物物相息。物联网通过智能感知、识别技术与普适计算等通信感知技术，广泛应用于网络的融合中，也因此被称为继计算机、互联网之后世界信息产业发展的第三次浪潮。物联网是互联网的应用拓展，与其说物联网是网络，不如说物联网是业务和应用。因此，应用创新是物联网发展的核心，以用户体验为核心的创新2.0是物联网发展的灵魂。 物联网的起源与发展 1990年物联网的实践最早可以追溯到1990年施乐公司的网络可乐贩售机——Networked Coke Machine。 1995年比尔盖茨在《未来之路》一书中也曾提及物联网，但未引起广泛重视。 1999年美国麻省理工学院（MIT）的Kevin Ash-ton教授首次提出物联网的概念。 1999年美国麻省理工学院建立了“自动识别中心（Auto-ID）”，提出“万物皆可通过网络互联”，阐明了物联网的基本含义。早期的物联网是依托射频识别（RFID）技术的物流网络，随着技术和应用的发展，物联网的内涵已经发生了较大变化。 2003年美国《技术评论》提出传感网络技术将是未来改变人们生活的十大技术之首。 2005年11月17日，在突尼斯举行的信息社会世界峰会（WSIS）上，国际电信联盟（ITU）发布《ITU互联网报告2005：物联网》，引用了“物联网”的
英汉翻译中的增词法和减词法
英汉翻译中的增词法和减词法 英汉两种语言，由于表达方式不尽相同，翻译时既可能要将词类加以转换，又可能要在词量上加以增减。 标签：翻译；增词法；减词法 英汉两种语言，由于表达方式不尽相同，翻译时既可能要将词类加以转换，又可能要在词量上加以增减。增补法就是在翻译时按意义上和句法上的需要增加一些词来更忠实通顺地表达原文的思想内容。减词法也可以称之为省略法。省略是指原文中有些词在译文中不译出来，因为其在译文中是不言而喻的。但省略并不是把原文的某些思想内容删去。 一、增词法 （一）词汇加词，也就是说，由于词汇方面的原因而引起的加词现象 1.加动词 由于英语的词汇当中，名词居多；而汉语则不管有多少动词都可以并排使用。因此，许多英语的名词翻译成汉语时都要加上一些动词，否则，意思则很不完整，例如： The cities utilize these funds for education，police and fire departments，public works and municipal buildings.市政府将这些资金用于兴办教育事业，加强治安消防，投资公共建筑和市政工程。 2.加名词 在汉语中，及物和不及物动词的区别不是很明显；而英语对及物动词和不及物动词的区别很明显，特别是一些不及物动词必须带上后面的宾语句子意思才完整。因此，我们在翻译时往往需要增词。例如： According to scientists，it takes nature 500years to create an inch of topaoil. 根据科学家们的看法，自然界要用500年的时间才能形成一英寸厚的表面土壤。 3.加形容词 With what enthusiasm the Chinese people are building socialism. 中国人民正在以多么高的热情建设社会主义啊！
增词法减词法补充,课后看
通过英译汉中的增词法减词法复习汉译英增词法减词法 I. What is Omission Omission: Amplification to leave out some unnecessary words. One of the differences in syntax between English and Chinese is the disparity in wording. What is regarded as a natural or indispensable element in one language may be regarded as superfluous or even “a stumbling block”in the other. For the sake of succinctness, functional words in English such as the article, the preposition are usually omitted in translation. The time-keeping devices of electronic watches are much more accurate than those of mechanical ones. 电子表比机械表准确得多。 He took off his coat and shoes. Then he put on his slippers，went to the sofa and began to watch TV. After a moment, he asked his wife to bring him a cup of tea. 他脱了大衣和鞋子，然后穿上拖鞋，走到沙发前，开始看电视。过了一会儿，他叫妻子给他端杯茶来。 3) A difference arose between the neighbors over the height of the fence. 邻居之间为了篱笆的高度惹起了一场争论。 邻居为篱笆的高低有过争论。（思果，《译道探微》，中国对外翻译出版公司，2002） II. Omission of pronoun 1. 在英语中，代词充当主语的情况相当多。为了使译文前后的句子意思紧凑，避免重复 用词，汉语习惯采用无主句，其主语就是前面的代词。 He was thin and haggard and he looked miserable. 他消瘦而憔悴，看上去痛苦不堪的样子（一副可怜相） He was well-favoured, bright, a good dancer, a fair shot and a fine tennis player. He was an asset at any party. He was lavish with flowers and expensive boxes of chocolate, and though he entertained little, when he did it was with an originality that pleased. 他很聪明，舞跳得不错，枪打得也可以，网球也打得挺好，深得（女孩子）喜爱。他是宴会中的宝贝儿，任意购买鲜花和高价巧克力送人。尽管他不大请客，请起来也别有一番创意，让人开心不已。 2.英语中的泛指人称代词作主语时，常常可以省略，翻译成无主句。 As you come into the room, you’ll notice a piano. 一进房间门，就会看见一台钢琴。 One can never be too careful in one’s work. 工作越仔细越好。 Fight when you can win; move away when you cannot win. 打得赢就打，打不赢就走。 We have 7 days a week and 24 hours a day. 一周有七天，一天有24小时。 1) The significance of a man is not in what he attains but rather in what he longs to attain. 人生的意义不在于已获取的，而在于渴望获得什么样的东西。
以标准化手段促进机关事务管理水平提升
龙源期刊网 https://www.sodocs.net/doc/284770294.html, 以标准化手段促进机关事务管理水平提升 作者：孟祥国 来源：《赢未来》2018年第08期 摘要：在很早以前的生产劳动和社会活动中，就出现了标准化手段。在推动国家统一和生产社会的分工过程中，秦始皇推行的“车同轨、书同文”等在提升机关事故管理水平过程中发挥了非常重要的作用。国际上最注重的就是标准化，“软法”是很多学者对标准的认知，标准化作为国家社会治理和公共服务改革以及提高政府行政服务水平过程中最重要的方式。比如关于社会责任、公共安全、城市可持续性发展以及环境管理体系等一大批关于管理类的标准在国际标准化组织连连出台，在标准化管理水平得到提升的同时并对世界各国注重管理方面的标准提供了引导性作用。 关键词：标准化；促进；机关事务；管理水平 一、标准化作为国家治理体系和治理能力现代化的重要基础 标准化理念和方法实践涉及到了很多领域，推动了人类的社会发展和进步。第一、标准化是进行工业化大生产管理过程中最常用的手段。在现如今大生产标准下，判断产品是否合格的重要依据就是标准化，对产业结构、淘汰落后产能的重要手段就是将标准和产业政策结合起来。第二、转化科技成果最好的途径就是标准化。在经济全球化的条件下标准化作为转化创新成果最有效果的途径，在技术产业化、市场化最关键的环节就是形成经济、科技竞争的最高点。标准零部件可以在生产领域进行互换，将生产工作进行简单化和统一，在降低投入成本的同时也保证了产品质量，不仅规模得到了提升，而且也提高了生产效率。第三、标准化在全球贸易得到通用。标准、技术法规和合格评定程序在世贸组织框架下共同建立了技术性环保措施，因此标准化也是推动贸易和保护产业及其安全的重要手段。第四、社会治理和政府管理的有效手段就是标准化。随着经济型社会的不断发展，标准化已经从最初的工业领域逐渐的拓展到了农业以及服务业，并开始向社会治理和公共服务行业所延伸，对经济、社会、政治以及文化发展过程发挥了重要作用。管理精细化最好的方法就是标准化，管理水平和工作效率可以通过标准化规范来提高，提高公共产品和服务质量，保障服务和改善民生问题已经在政府部门和社会机构达成共识。 二、科学管理水平可以通过机关事务管理标准化来得到提高 国家机关运行过程中所产生的经费、资产、服务以及能源资源等统筹配置、科学合理的使用和有效的监督管理在机关事务管理和服务过程中都是重点涉及对象。机关事务在为党和国家中心工作、保障机关高效规范运行过程以及提倡节约反对浪费、推动从严治党方面的管理工作发挥着重要的作用。标准化的管理水平在机关事务管理工作过程中适合从多个领域进行提高。尤其是对一部分需要定量化、程序性以及可操作性比较强的工作领域中，在新形势下，实行标准化可以提高机关事务工作。将《机关事务工作“十三五”规划》中明确强调的加强机关事务标
调节阀手册
调节阀手册第一章概述 O.P.小洛维特 在现代化工厂的自动控制中，调节阀起着十分重要的作用，这些工厂的生产取决于流动着的液体和气体的正确分配和控制。这些控制无论是能量的交换、压力的降低或者是简单的容器加料，都需要靠某些最终控制元件去完成。最终控制元件可以认为是自动控制的“体力”。在调节器的低能量级和执行流动流体控制所需的高能级功能之间，最终控制元件完成了必要的功率放大作用。 调节阀是最终控制元件的最广泛使用的型式。其他的最终控制元件包括计量泵、调节挡板和百叶窗式挡板（一种蝶阀的变型）、可变斜度的风扇叶片、电流调节装置以及不同 于阀门的电动机定位装置。 尽管调节阀得到广泛的使用，调节系统中的其它单元大概都没有像它那样少的维护工作量。在许多系统中，调节阀经受的工作条件如温度、压力、腐蚀和污染都要比其它部件更为严重，然而，当它控制工艺流体的流动时，它必须令人满意地运行及最少的维修量。 调节阀在管道中起可变阻力的作用。它改变工艺流体的紊流度或者在层流情况下提供一个压力降，压力降是由改变阀门阻力或"摩擦"所引起的。这一压力降低过程通常称为“节流”。对于气体，它接近于等温绝热状态，偏差取决于气体的非理想程度（焦耳一汤姆逊效应）。在液体的情况下，压力则为紊流或粘滞摩擦所消耗，这两种情况都把压力转 化为热能，导致温度略为升高。 常见的控制回路包括三个主要部分，第一部分是敏感元件，它通常是一个变送器。它是一个能够用来测量被调工艺参数的装置，这类参数如压力、液位或温度。变送器的输出被送到调节仪表一一调节器，它确定并测量给定值或期望值与工艺参数的实际值之间的偏差，一个接一个地把校正信号送出给最终控制元件一一调节阀。阀门改奕了流体的流量，使工艺参数达到了期望值。 在气动调节系统中，调节器输出的气动信号可以直接驱动弹簧－薄膜式执行机构或者活塞式执行机构，使阀门动作、在这种情况下，确定阀位所需的能量是由压缩空气提供的，压缩空气应当在室外的设备中加以干燥，以防止冻结，并应净化和过滤。 当一个气动调节阀和电动调节器配套使用时，可采用电－气阀门定位器或电－气转换器。压缩空气的供气系统可以和用于全气动的调节系统一样来考虑。 在调节理论的术语中，调节阀既有静态特性，又有动态特性，因而它影响整个控制回路成败。静态特性或增益项是阀的流量特性，它取决于阀门的尺寸、阀芯和阀座的组合结构、执行机构的类型、阀门定位器、阀前和阀后的压力以及流体的性质。第5章中将详细地介绍这些内容。 动态特性是由执行机构或阀门定位器－执行机构组合决定的。对于较慢的生产过程，如温度控制或液位控制，阀的动态特性在可控性方面一般不是限制因素。对于较快的系统，
4种物联网芯片
4种物联网芯片 一、什么是物联网芯片？ 我们知道芯片种类很多，那么什么是IoT芯片呢？首先，我们必须知道什么是物联网。简单来说，就是互联的物联网。它的核心仍然是互联网，但它是在不仅仅是以人为本的基础上衍生和扩展的，而是打通了物与物之间的连接通道。 其实，物联网芯片归根结底是芯片，只是角色更细分，物联网芯片更灵活。本质上还是集成电路，但是更有方向性，需要应用到特定的环境。对企业来说也提出了更高的要求，因为物联网芯片的用户需要更多的是一套解决方案，往往不仅仅是单一的芯片产品。 二、那么物联网芯片有哪些种类呢？ 1、安全芯片 享受高科技互联网技术带来的一切便利和云同步，人们现在必须面对信息安全保障风险，担心自己的私人信息和财产信息。现在，保密工作芯片的作用与“保管
箱”相同，将最重要的私人信息和口令数据存储在保密工作芯片中。 根据安全芯片的原理，由于只能输出加密数据，不能输入加密，所以加密法和解密在安全芯片内部进行，结果只能输出到更高级别，避免了密码泄露的可能性。解密保密工作芯片通讯端口的密钥长度最多为2048二进制位。也就是说，要解除从保密工作芯片发送的数据的摇滾乐，必须解密2048二进制位的密码。这相当于向信息添加可靠的防火墙。更简单且安心地享受高科技的红利和便利性。 2、无线射频芯片 无线射频芯片是将无线信号的通讯转换为特定的无线信号波形并通过天线谐振发送的电子部件。特别是在万物互联以新基建时代，无线射频芯片也将被广泛应用。 3、移动支付芯片 在这个万物互联的时代，移动支付已经遍及我们生活的方方面面，已经完全离不开移动支付了。二移动支付芯片主要用于智能手机，因此对移动支付芯片的需求依赖于不断更新换代的智能手机，这一将是移动支付芯片的一大市场。 4、智能身份识别芯片 身份识别是根据人体的物理特征进行身份验证。物理特征包括人类的身份识别特征，如指纹、语音、脸、骨骼、视网膜、虹膜、DNA；以及个人行为特征，如签名行为、步态等。近几年人脸识别技术还公开了生物识别技术。凭借其强大的
阀门使用说明书
阀门安装使用说明书 1、阀门的安装及拆卸的注意事项 1.1维护保养和安装使用注意要点 一）.阀门应放在干燥通风的室内,通径两端须密封防尘; 二）.长期存放应定期检查,并在加工表面上涂油,防止锈蚀; 三）.阀门安装前应仔细核对标志是否与使用要求相符; 四）.安装时应清洁内腔和密封面,检查填料是否压紧,连接螺栓是否均匀拧紧; 五）.阀门应按照允许的工作位置安装,但须注意检修和操作的方便; 1.2其他注意事项： 1)阀门一般应在管路安装之前定位。配管要自然，位置不对不能硬扳，以免留下预应力； 2)低温阀门在定位之前应尽量在冷态下(如在液氮中)做启闭试验，要求灵活无卡壳现象； 3)液体阀应配置成阀杆与水平成10°倾斜角，避免液体顺着阀杆流出，冷损增加；更主要的是要避免液体触及填料密封面，使之冷硬而失去密封作用，产生泄漏； 4)安全阀的连接处应有弯头，避免直接冲击阀门；另外要保证安全阀不结霜，以免工作时失效； 5)截止阀的安装应使介质流向与阀体上标示的箭头一致，使阀门关闭时压力加在阀顶的锥体上，而填料不受负荷。但对不经常启闭而又需要严格保证在关闭状态下不漏的阀门(如加温阀)，可有意识地反装，以借助介质压力使之紧闭； 6)大规格的闸阀、气动调节阀应该竖装，以免因阀芯的自重较大而偏向一方，增加阀芯与衬套之间的机械磨损，造成泄漏； 7)在拧紧压紧螺钉时，阀门应处于微开状态，以免压坏阀顶密封面； 8)所有阀门就位后，应再作一次启闭，灵活无卡住现象为合格；
9）天气寒冷时，水阀长期闭停，应将阀后积水排除。汽阀停汽后，也要排除凝结水。阀底有如丝堵，可将它打开排水。 10）非金属阀门，有的硬脆，有的强度较低，操作时，开闭力不能太大，尤其不能使猛劲。还要注意辟免对象磕碰。 11）新阀门使用时，填料不要压得太紧，以不漏为度，以免阀杆受压太大，加快磨损，而又启闭费劲。 确认管道上的盲板是否拆掉，以及施工时操作过的阀门要恢复施工前的启闭状态。 1.3阀门安装的注意事项 1.3.1阀门安装之前，要确认阀门符合设计要求和有关标准。 1.3.2在搬运和安装阀门时，要谨防磕碰划伤的事故 1.3.3安装阀门前，管道内部要清洗，除去铁屑等杂质，防止阀门密封座夹杂异物。另外，安装时的阀门应是关闭状态。 1.3.5在安装阀门时，要确认介质流向、安装形式及手轮位置是否符合规定。
翻译技巧：加词法和减词法
翻译技巧（二）：加词法和减词法 加（增）词法 英汉两种语言，由于表达方法不尽相同，有些词在英语中可以省略而不会影响全句意思的完整表达，但译成汉语后就可能出现意思不够明确的语言现象；还有些词虽然在原文中意义明确而完整，但译成汉语后文字却不甚通顺流畅。在这种情况下，就需要使用增词译法。增词法就是在翻译时按照意义、修辞或句法上的需要，在原文的基础上添加必要的单词、词组、分句或完整句，从而使得译文在语法、语言形式上符合译文习惯和在文化背景、词语联想方面与原文一致，使得译文与原文在内容、形式和精神等三方面都对等起来，更忠实通顺地表达原文的思想内容。 S y n t a c t i c a l A m p l i f i c a t i o n（从句法结构上考虑的增词） This kind of amplification includes: amplification by supplying such kinds of words as verbs, nouns, adjectives, adverbs, numerals, category words, generalization words, and the plural forms of nouns. (1) 增加量词（classifier） 英语中数词与可数名词往往可以直接连用，不用加量词。而汉语往往要加量词。 It was a nova! 这是一颗新星！ The sun rose thinly from the sea. 一轮红日从海边淡淡升起。 A stream was winding its ways through the valley into the river. 一弯溪水蜿蜒流过山谷，汇到江里去了。 (2) 增加表达复数的词(convey the concept of plurality)
“SD”调节阀使用说明书
COPES－VULCAN 带快速更换 内部部件的单座“SD”调节阀 安装、运行、维护使用说明书 SINGLE WEB “SD” TYPE CONTROL VALVE WITH QUICK CHANGE TRIM
目录 引言 (4) 第一部分安装 (6) 1.1 验收 (6) 1.2 储存 (6) 1.3 安装 (6) 1.4 调试前复检 (9) 1.5 执行机构及配件 (10) 1.6 运行要求 (10) 第二部分维护 (11) 2.1 注意事项 (11) 2.2 例行检查 (11) 2.3 从调节阀上拆卸执行机构 (14) 2.4 解体调节阀 (15) 2.5 装配调节阀 (20)
2.6 装配执行机构 (28) 2.7 研磨阀塞及套筒 (31) 图1 调节阀剖面图 (33) 图2 螺栓紧固顺序 (36) 表1 紧固力矩 (37) 表2 阀塞和阀杆组件紧固力矩 (38)
引言 SD型调节阀是用于高温高压工况下的调节阀，其尺寸范围为3/4”、1”、1.5”、2”、3”、6”、8”、10”、12”、14”和16”（20mm、25 mm、40 mm、50 mm、80 mm、150 mm、200 mm、250 mm和300 mm、350 mm、400 mm），ANSI压力磅级由150磅级到2500磅级。每个阀门由几个分项组件组成。例如在图一中，阀体组件包含阀体〔1〕、阀盖螺栓〔13〕及阀盖螺母〔14〕和阀盖/阀体密封垫圈〔15〕。 阀盖组件包含阀盖〔2〕、盘根螺栓及螺母〔11〕和〔12〕，及根据阀门与执行机构的几种不同连接方式所需要配备的零件：压块连接包含压块〔22〕及内六角螺栓〔23〕；螺杆连接包含螺纹环〔32〕；螺栓连接包含螺栓〔33〕和螺母〔34〕。 盘根组件包含支撑环〔7〕、盘根〔8〕、盘根压盖或盖圈〔9〕及盘根紧固件〔10〕组成。如果采用双盘根自然就包含两套盘根〔8〕及一个隔离套环〔24〕。 阀塞组件的构成取决于种类及尺寸，阀塞有平衡及非平衡式之分，尺寸有全尺寸及变径之分。 非平衡单座阀塞包含阀塞〔3〕、阀座〔5〕、套筒〔4〕、阀杆〔6〕、阀杆固定销〔17〕、和阀塞密封垫圈〔16〕。 平衡单阀座阀塞包含阀塞〔3〕、阀座〔5〕、套筒〔4〕、阀杆〔6〕、阀杆固定销〔17〕、和阀塞密封垫圈〔16〕及阀塞密封，也就是通常所称的”U”杯型密封圈〔18a〕其耐温范
增词法和减词法 translation
Amplification & Omission增词法和减词法 翻译的标准首先是忠实于原文。那么，忠实是否就意味着我们在翻译过程中不能增加词也不能减少词呢？实际上并非如此。美国著名翻译学家奈达曾经说过“Translation is translating meaning”，在翻译过程中主要是准确表达出原文的意思，而不必拘泥于原文用词的形式。英汉两种语言不论在词汇上还是在句法上都存在着显著的差异，一味拘泥于原文的形式，有时会令人费解、语句罗嗦或偏离原文的意思。适当地增加一些词或者省略一些词，恰恰是为了达到忠实于原文或者通顺流畅表达的目的。下面分别举例介绍一下英汉翻译过程中常见的增词和减词的用法。 1．增词法 增词法并不是说译者可以随心所欲地增加任何词。一般说来，增加的词尽管没有出现在原文字面上，但实际上其意思都隐含在原文中。经常使用的增词法有以下几种情况： (1)增加表示时态和复数的词 英语具有某些综合形语言的特征，可以通过名词、动词的词形变化来表现时态和复数。而汉语则是典型的分析形语言，词形本身没有变化，要表示时态和复数需要通
过增加相应的时间副词或表示复数的词。所以一定要注意在汉语译文中添加这些词，如： 例1：His father was a fisherman. He was as poor as we are. 译文：他父亲过去是个渔夫。那时候他和我们现在一样穷。 例2：The agreement will come into force next spring. 译文：协议将于明年生效。 例3：Lion is the king of animals. 译文：狮子是百兽之王。 例4：As is known to all, air is a mixture of gases. 译文：众所周知，空气是许多种气体的混合物。 (2)增加语义表达中需要的词 增加语义表达中需要的词，是指为了使译文表达通顺流畅而根据汉语的表达习惯增加的一些词。经常增加的语义表达中需要的词有动词、名词、形容词、副词和量词。 1) 增加动词 汉语句子中动词占优势，使用的频率很高。因此英汉翻译中经常需要根据上下文的意思添加一些动词，使译文表达更加清楚、通顺，如： 例5：He dismissed the meeting without a closing speech.
机关事务信息化整体解决方案
机关事务信息化整体解决方案 前言： 目前，我国的电子政务事业正在飞速的发展，政府信息化已经成为一种社会趋势。一些重要机关先后开展了如“十二金工程”这样的国家重点支持项目。机关后勤管理工作因为其政府内部服务的特殊性，一直比较少地为社会公众所关注或重视。但随着这几年国家对资产管理的重视，信息化建设从原来注重财务管理信息化逐渐向国有资产管理信息化发展，作为机关事务管理的机构，正承担着这样一种责任和使命。开展机关后勤管理的信息化建设，是整个社会和国家发展的必然趋势，也使国有资产管理走向正规化和现代化。 目前，市场上基本没有机关后勤管理和资产管理类的成熟软件，而我公司据此而提出的针对机关事务管理工作的《机关事务管理系统》是我公司为机关事务管理工作定向开发的软件，契合机关事务工作的信息化管理要求，并得到了当地政府及众多机关事务管理局的认可和称赞。它基本可包括三个部分组成：即业务管理应用平台、协同办公应用平台和对外宣传、服务平台组成。 软件架构： 一．业务管理应用平台： 包括：《固定资产管理系统》、《房屋分配管理系统》、《房屋出租管理系统》。 1、《固定资产管理系统》是专门针对机关事务管理局的业务处理特点而定向开发的，其中包括各类固定资产的管理，如“房产、土地、汽车、计算机、办公设备”等，并结合了资产的流向、转移、统计、查询等各类功能。集“资产管理，图片管理，文档管理”为一体，具有相当的先进性和科学性。 2、《房屋出租管理系统》是对政府所属房产的租赁业务进行全过程计算机化管理，对房屋的承租人、租金、租期、合同、收费单据等进行逐一登记管理，使政府房产出租管理变得可视化、系统化。同时对房屋到期、转租、变更的管理更便捷和有序。软件还对房屋出租中的水电费管理也进行了相应的设计，使整个房屋出租业务形成了系统化的管理。 3、《房屋分配管理系统》是对政府所属房产的分配利用管理。对各类房产按地区坐落、面积、房屋样式等对应政府各机关单位的房屋分配使用情况统一进行登记。其中包括房屋的产权单位、建造日期、面积、出资情况、现所属单位等进行详细的录入。并对房产的转移、变更可进行相应的操作管理，对各类房屋的使用、分配、移交、出资等情况可提供多种方式的查询、统计功能等。 业务管理软件的应用可以由传统的办公方式、业务处理方式向办公无纸化、资源信息化管理方式转变，提高办公效率，减轻工作负担，同时也可以节约宝贵的办公经费。 二．协同办公应用平台： 针对机关后勤工作的复杂性和多样性，通过机关内部协同办公业务系统，可有效地管理单位在财务、人事、行政、业务等各个环节的信息和知识资源，提升单位整体的知识层次和工作效率，提高机关单位的管理水平。 它可以包括： 1、日常办公管理：管理个人日程事务、电子邮件的收、发，通讯薄管理。 2、公文管理：日常收发文、公文配置、公文授权、流程定义等。 3、档案管理：根据国家档案标准进行电子公文归档、查询、利用等操作。 4、信息发布与管理：各类通知、规章制度、个人建议、讨论园地、公告栏和聊天室。 5、机关行政事务管理：信访登记、管理。人事登记、管理。接待登记、管理等。 三．对外宣传、服务平台：
风量调节阀使用说明书
风量调节阀CVD 安装指导手册
风量调节阀CVD安装指导手册 1.CVD风量调节阀简介 CVD型风量调节阀是妥思公司为中国市场推出的空调通风系统中风量调节和压力控制的阀门。 CVD型调节阀为用户提供方形和圆形阀门，可选配手动机构、电动弹簧复位、电动双位、电动连续调节执行器等，形式多样能满足用户不同要求。 CVD型风量调节阀根据用户要求，叶片可做成平行叶片、对开叶片形式。圆形阀门也可做成碟阀。 (1)手动风量调节阀示意图 (2)电动风量调节阀示意图
2. 风量调节阀安装指导说明 风量调节阀的选用与安装依据下列国家规范与标准以及建筑标准设计图集执行《采暖通风与空气调设计规范》GB50019-2003 《通风与空调工程施工质量验收规范》GB50423-2002 《洁净室施工及验收规范》JGJ71-90 《风量调节阀》JB/77228-94 《通风管道技术规程》JGJ141-2004 《薄钢板法兰风管制作及安装》07K133 《风管支吊架》03K132 《管道与设备保温》98R418 《管道与设备保冷》98R419
风量调节阀安装，依据国家建筑标准设计图集07K120《风阀选用与安装》进行。说明如下： 1．运到施工现场的风阀产品，安装单位应报监理验收，根据装箱清单开箱查验合格证、检测报告和安装指导说明文件等，逐个校验产品的型号、规格、材质、标识及控制方式是否符合设计文件的规定，并应做好记录和各方签字确认。 2．风阀在就位安装之前应逐个检测其结构是否牢固、严密，进行开关操作试验，检查是否灵活可靠；对电动风阀要逐个通电试验并检测，做好试验记录。3．风阀就位前必须检查其适用范围、安装位置、气流方向和操作面是否正确。4．风阀的开闭方向、开启角度应在可视面有准确的标识。 5．安装在高处的风阀，其手动操纵装置宜距露面或操作平台1.5-1.8m。 6．风阀的操作面距墙、顶和其他设备、管道的有效距离不得小于200mm，且风阀不应安装于结构层或孔洞内。阀周边缝宽度宜大于150mm。 7．检查连接风管预留的法兰尺寸、配钻孔径与孔距、法兰面的平整度和平行度、垫片材质和厚度、非金属风管的连接方式等是否符合要求。 8．检查支、吊架位置及做法是否符合规范或设计文件要求。单件风阀重量大于50kg的应设单独的支、吊架；电动风阀一般宜设单独支、吊架；用于软质非金属风管系统的风阀一般也宜设单独支、吊架。 9．用于洁净通风系统的风阀安装前必须按要求清洁阀体内表面，达到相应的洁净标准后封闭两端，封装板在就位后方可去除。擦洗净化空调系统风阀内表面应采用不掉纤维的材料，擦洗干净后的风阀不得在没有做好墙面、地面、门窗的房间内存放，临时存放场所必须保持清洁。 10. 输送介质温度超过80℃的风阀，除按设计要求做好保温隔热外，还应仔细核 对伸缩补偿措施和防护措施。 11. 设于净化系统中效过滤器后的调节风阀叶片轴如有外露，则应对其与阀间的缝隙进行密封处理，确保不泄露。 12. 连接风阀与风管法兰、薄钢板法兰或无法兰连接的紧固件均应采用镀锌件。除镀锌板材料的风阀外，不锈钢、铝合金材料的风阀连接件均应同材质，且其支、吊架如是钢质，还应采用厚度不小于60mm的防腐木垫或5mm橡胶板垫，使之与阀体绝缘。 13. 法兰垫片厚度设计无规定时，一般不小于3mm；垫片不应凸入阀内，不宜突出法兰外，净化系统的法兰垫片应选用弹性好、不透气、不产尘的材料，如橡胶板或硅胶板等，严禁采用泡沫塑料、厚纸板、石棉绳、铅油麻丝及油毡纸等含开孔孔隙和易产尘的材料。密封垫厚度根据材料弹性大小决定，一般为4-6mm，一对法兰的密封垫规格、性能及垫层厚度应相同。严禁在密封垫上涂刷涂料，法兰密封尽量减少接头，做接头时要采用阶梯形或企口形，并涂密封胶，如下图所示：14. 风阀安装的水平度误差不大于3%，垂直度误差不大于2%，不单独设支、吊架的风阀安装公差随风管一起控制精度。采用薄钢板法兰风管连接应符合下列规定： 14.1 连接完整无缺损，表面应平整，无明显扭曲。 14.2 弹簧夹或紧固螺栓的间隔不应大于150mm，且分布均匀，无松动现象。 15. 风阀安装后一般与风管系统一同进行严密性检测与试验，但为了减少风阀的调整试验次数，应对电动风阀和洁净系统、实验室风系统的风阀单独进行安装完
计算机科学与技术物联网专业
计算机科学与技术物联网专业方向介绍 什么是物联网工程师？当然就是从事物联网技术的人员。“物联网技术”的核心和基础,仍然是“互联网技术”，是在互联网技术基础上的延伸和扩展的一种网络技术;其用户端延伸和扩展到了任何物品和物品之间，进行信息交换和通讯。因此，物联网技术的定义是：通过射频识别(RFID)、红外感应器、全球定位系统、激光扫描器等信息传感设备，按约定的协议，将任何物品与互联网相连接，进行信息交换和通讯，以实现智能化识别、定位、追踪、监控和管理的一种网络技术叫做物联网技术。 一、专业简介 物联网(The Internet of Things，简称IOT)，是指“物物相连的互联网”，即通过射频识别(RFID)装置、红外感应器、全球定位系统、激光扫描器等多种信息传感设备，按照约定的协议，把任何物品与互联网连接起来，进行信息交换和通信，以实现智能化识别、定位、跟踪、监控和管理的一种网络。它是在互联网基础上延伸和扩展的网络。物联网被认为是继计算机、互联网之后，世界信息产业的第三次浪潮，已列为国家战略性新兴产业，并写入十二五规划纲要。政府将采取多项措施支持企业开展物联网技术创新与应用，物联网产业及其相关技术具有广阔的发展空间。 本专业适应国家战略性新兴产业发展的需求，培养德、智、体全面发展，系统地掌握计算机软件相关技术和物联网工程领域的专门知识与关键技术，具备综合运用软件技术、信息技术、现代传感器、信息处理和嵌入式等技术进行信息标识、获取、处理、传输和控制等物联网工程的实践能力，能够在软件行业和物联网应用相关的各行业中从事科学研究、系统集成、设备制造、关键技术研发和推广、网络运营和管理等工作的高素质应用型复合人才。 二、物联网核心技术该如何学习？需要什么样的基础 物联网和其他专业来比，学习门槛基本是一样的，没有什么特殊要求。物联网是偏重于硬件设计，所以学员大学所学专业最好是硬件相关的专业，例如电子、自动化控制、通信、精仪等专业，学习物联网非常适合，对于纯软件开发专业的学员，没有基本的硬件技术基础，学习物联网刚开始会有一些困难。以物联网培训机构华清远见的专业培训课程大纲为例，可以更直观更系统的了解物联网工程师所需掌握的一些基本技能：* 数字电路基础 * 模拟电路基础 * 计算机组成原理 * C 语言基础 * 常用仪器仪表的使用（万用表、示波器等） * 低功耗 ARM 处理器与接口技术 ARM Cortex-M0 开发、ARM Cortex-M3 开发、ARM Cortex-M4 开发、接口开发； * Cadence 原理图及 PCB 电路设计 Capture 原理图设计规范、原理图原件库建立方法、层次图的设计方法、Allegro PCB 设计规范、PCB 原件库的建立、设计规则添加、多层电路板的设计方法、高速 PCB 设计理论、制作 PCB 电路板流程； * 实时操作系统 * 传感器与无线传感网络
如何成为一名合格的机关事务管理者
如何成为一名合格的机关事务管理者 学院：人文社会科学学院 专业：行政管理 姓名：*** 班级：汉二班 学号：**** 提交日期：二○一四年六月
【摘要】在当今经济高速发展的时代，为适应社会和经济的同步发展，我国行政体制改革正在逐步有序进行。依据我国改革开放不断深入和社会主义市场经济飞速发展的社会现实，建设服务型政府势在必行。而建设服务型政府不可或缺的一项内容是造就一支高素质的机关事务管理者，所以加强我国机关事务管理者的素质建设成为当务之急。本文以建设服务型政府为背景，侧重以“服务”为中心简要阐述服务型政府建设对我国机关事务管理者素质提出的新要求，以及就如何成为一名合格的机关事务管理者提出一些个人的见解。 【关键词】机关事务管理者素质合格 一、为何要提升机关事务管理者的素质 在当今经济，社会飞速发展的新形势下，改革开放不断深入，高新技术迅猛发展，新思维、新事物不断涌现，知识更新瞬息万变，整个社会已进入一个全新的知识经济时代，在知识经济的扩张作用下，政府要面对纷繁复杂的新情况、新问题、新现象，机关事务管理者更需要与时俱进，但是，不少机关事务管理者由于思维封闭，观念陈旧，知识老化，在日常政务工作中出现以下这些现象。 1、组织学习时照本宣读多，追根溯源少，无法探究问题的实质与根源。 2、同职工交流时无法做到融入其中，突出表现为说教多，换位思考、启蒙引导少。 3、平时讲大道理多，办实事少，无法解决实际问题。 因此，加强机关事务管理者的素质不但是全面提高我国国家公务
人员整体素质的关键举措，而且是新形势下提高思想政治工作水平的必由之路。 二、如何成为一名合格的机关事务管理者 （一）自身角度探索提升机关事务管理者素质的措施与对策夯实理论功底是机关事务管理者修养的基础新形势下，不少机关事务管理人员忙于事务性工作，忽视理论学习，导致实际工作中看得不远、讲得不深、说得不透，不能理论联系实际、有的放矢地释疑解惑、凝聚人心、鼓舞斗志。所以说，扎实的理论功底是机关事务管理者修养的基础，具包括如下几个方面： 1、坚持努力学习,不断优化知识结构 认真读书,勤于学习是提高机关事务管理者素质的重要途径和方法机关事务管理者的每一种素质的提高,都离不开勤于学习，实践证明,机关事务管理者的素质与其掌握的知识是互相联系，互相制约的，一方面，机关事务管理者，掌握知识要以一定的素质为前提；另一方面，知识的掌握会促进机关事务管理者综合素质的提高和发展。 2、创新工作方法,提高业务能力和行政管理能力 在思想观念上,增强法制观念和法律意识，消除以权代法，以权压法和凭想当然办事的陋习,提高依法行政的自觉性,并注意落实在 平时工作中,做到在每处理一件事时首先想到处理方式方法是否合法;在管理方式方法上,改变传统的行政命令方式,做到有法必依，执法必严，违法必究，依法办事,不能因为当事人或人民群众不懂法而违法。 3、要提高处理突发事件能力
电动调节阀说明书
调节阀 电动调节阀是工业自动化过程控制中的重要执行单元仪表。随着工业领域的自动化程度越来越高，正被越来越多的应用在各种工业生产领域中。与传统的气动调节阀相比具有明显的优点：电动调节阀节能（只在工作时才消耗电能），环保（无碳排放），安装快捷方便（无需复杂的气动管路和气泵工作站）。阀门按其所配执行机构使用的动力，按其功能和特性分为线性特性，等百分比特性及抛物线特性三种 阀门结构 由电动执行机构和调节阀连接组合后经过机械连接装配、调试安装构成电动调节阀。主要零件 零件材料：阀体、阀盖、填料压盖、阀杆、阀瓣、密封圈、指示标、阀杆螺母、螺帽套 材料：灰铸铁、铸钢、不锈钢、黄铜 工作原理 工作电源：DC24V,AC220V,AC380V等电压等级。 输入控制信号：DC4-20MA或者DC1-5V。 反馈控制信号：DC4-20MA（负载电阻碍500欧姆以下） 通过接收工业自动化控制系统的信号（如：4~20mA）来驱动阀门改变阀芯和阀座之间的截面积大小控制管道介质的流量、温度、压力等工艺参数。实现自动化调节功能。 新型电动调节阀执行器内含饲服功能，接受统一的4-20mA或1-5V·DC的标准信号，将电流信号转变成相对应的直线位移，自动地控制调节阀开度，达到对管道内流体的压力、流量、温度、液位等工艺参数的连续调节。 流量特性 电动调节阀的流量特性，是在阀两端压差保持恒定的条件下，介质流经电动调节阀的相对流量与它的开度之间关系。 电动调节阀的流量特性有：线性特性，等百分比特性及抛物线特性三种。 应用领域 电力、化工、冶金、环保、水处理、轻工、建材等工业自动化系统领域。 安装 电动调节阀最适宜安装为工作活塞上端在水平管线下部。温度传感器可安装在任何位置，整个长度必须浸入到被控介质中。 电动调节阀一般包括驱动器，接受驱动器信号（0-10V或4-20MA）来控制阀门进行调节，也可根据控制需要，组成智能化网络控制系统，优化控制实现远程监控。
物联网技术应用领域有哪些
1 华清远见嵌入式培训官网：https://www.sodocs.net/doc/284770294.html, 物联网技术应用领域有哪些 什么是物联网：物联网在国际上又称为传感网，业内人士称它为“第三次信息技术革命”世界上的万事万物，只要嵌入一个微型感应芯片，把它变得智能化，这个物体就可以“自动开口说话”。再借助无线网络技术，人们就可以和物体“对话”，物体和物体之间也能“交流”，这就是物联网。那么现如今物联网应用中都用到了那些技术和什么领域呢？华清远见小编同你一起探讨一下这个问题。 物联网技术： 1、传感器技术：计算机应用中的关键技术。大家都知道，到目前为止绝大部分计算机处理的都是数字信号。自从有计算机以来就需要传感器把模拟信号转换成数字信号计算机才能处理。 2、RFID技术：RFID标签也是一种传感器技术，RFID是融合了无线射频技术和嵌入式技术为一体的综合技术。 3、嵌入式系统技术：是综合了计算机软硬件、传感器技术、集成电路技术、电子应用技术为一体的复杂技术。嵌入式系统相当于人的大脑，在接收到信息后要进行分类处理。 4、M2M ：这个词国外用得较多，侧重于末端设备的互联和集控管理，X-Internet，中国三大通讯营运商在推M2M这个理念。 5、两化融合：工业信息化也是物联网产业主要推动力之一，自动化和控制行业是主力，但目前来自这个行业的声音相对较少。 物联网的应用： 智能照明人体智能感应器节点大多数时候能够独立做出判断，并直接控制灯光，实时采集环境数据进行分析并选择最佳的亮度和节能方式。 智能衣服穿在身上的只能衣服，追踪跑步者的路线、距离、速度、海拔上升、环境温度，还能追踪步频、蹬地技巧、脚掌重心与压力分布等信息。 智能充电通过无线电方式为多个物联网设备同时充电，且能够自动识别充电区域内所有设备的电池型号、电压、充电速度、充电曲线要求等，进行自动选择最优充电模式。 智能遥控智能家居遥控APP能把你的iPhone等智能手机变成一个万能遥控器，对家居所有智能家电进行遥控操作，一个APP就能控制所有智能家居联网设备 物联网的应用十分广泛：市政管理、安防防控、智能消防、老人护理、花卉栽培、水系监测等众多领域都用到了物联网。所以小编认为未来的发展一定会更智能。生活也会越来越好 keywords：(物联网技术应用领域)