promega 小提质粒提取说明书

Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System protocol

所用试剂盒为Promega公司的Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System，能够去除对细胞有害的细菌内毒素。

具体操作步骤如下：

（1）将5ml 培养过夜的阳性菌在室温(24℃)下10000×g离心10 min。弃上清，将离心管倒置至吸水纸上去除剩余水分。

（2）加入250μl 重悬液，振荡至完全重悬。

（3）加入250μl细胞溶解液，颠倒离心管6～8次，彻底混匀。室温孵育5min。

（4）加入350μl中和液，立即颠倒离心管6～8次，彻底混匀。

（5）室温下10000×g离心细菌溶解产物20min，上清移至新的1.5 ml 离心管，再次离心20 min，将上清移至新离心管。

（6）彻底摇匀除内毒素树脂，加50μl到离心管中，室温孵育10 min，在孵育过程中每隔3 min剧烈振荡5 sec。

（7）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。放置至液体澄清后30 sec，吸取上清至新离心管，弃去沉淀。

（8）加入200 μl GTC（5M/L），与上步分离的上清剧烈振荡混和。如果GTC产生沉淀，37℃加温10min，冷却到25℃使用。

（9）彻底重悬磁珠，加150 μl至溶液中，剧烈振荡混和，室温孵育2～3 min。

（10）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。

（11）将离心管从磁架上取出，加入200 μl 4/40洗脱液。剧烈振荡15sec 重悬磁珠微粒。4/40洗脱液可以去除无关蛋白，如核酸酶。

（12）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。

（13）将离心管从磁架上取出，加入1.0 ml 80％乙醇洗涤微粒。剧烈振荡10sec，将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。

（14）重复操作步骤（13）两次。

（15）洗涤完最后一遍后，打开离心管盖，放置在磁珠分离架10min，去除残余液体。

（16）将离心管从磁架上取出，加入240 μl 去离子水，振荡10sec，在室温孵育1min。将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。放置3 min后，将上清小心移至新离心管中。14000g离心10min，上清移至新管中，同时计算上清体积。

（17）加入0.5体积醋酸铵（7.5M/L）和2.5体积95％乙醇，混匀后室温下14000×g离心15 min。小心吸出上清，用1ml 70％乙醇洗涤沉淀，室温下14000×g离心5 min。小心吸去上清，空气中干燥5 min，用30 μl去离子水溶解。

（18）分别取1ul，2ul，3ul反应产物电泳，估计质粒浓度。

（19）用分光光度计测OD值及核酸浓度。

高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.sodocs.net/doc/285689220.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号：PL03 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存 50次 （PL0301） 100次 （PL0302） 200次 （PL0303） 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA（10mg/ml）-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管（2ml）室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml） 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍：

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14-16个小时，可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－

提取罐说明书

直锥提取罐机组 目录 一前言 (2) 二设备性能简介 (2) 三基本技术参数表 (2) 四设备工作原理 (3) 五安全试车要求说明 (3) 六使用操作说明 (5) 七维护保养注意事项 (6) 八随机附件 (7) 一前言： 本提取罐设备属一类压力容器，启用前必须报劳动部门皮批准后方能使用。安装时应装置与设备要求相符的安全阀、减压阀和压力表等，操作人员上岗前应进行培训，以保证设备与人生安全。认真学习国家劳动颁发的“压力容器安全技术监察规程”并遵照执行。 二设备性能简介： 提取罐是专门为中药厂煮提工段设计的生产设备。具备直接加热和间接加热两种方式。排渣门采用气动执行结构完成开启和锁紧。凡与药物接触之处均采用不锈钢制作，具有良好耐腐蚀能力，确保中药产品质量，而且寿命厂。

本设备可作为中药或其它植物类水和乙醇提取、蒸制、灭菌及残渣中的乙醇用。设备附有“冷凝器”、“油水分离器”、“除沫器”、“双联过滤器”。“油水分离器”主要针对醇提用来吊油操作。 本设备具有提取时间短、生产效率高、能耗少、升温时间快、排渣方便、应用范围广、操作简单、安全可靠等特点。 三基本技术数据表：

四设备工作原理： 本设备的整个提取过程是在密闭的循环系统内完成。可进行常压提取，无论是水提、醇提、吊油等方面的工艺要求，均由中药厂根据制药工艺要求自行拟定。在此只作一般水提（醇提）基本原理介绍。 1、加热方式：如属水提，水和中草药装入提取罐后，开始向罐内通蒸汽，进行直接加热，当温度达到规定值后，停止向罐内进蒸汽，改为向夹套进蒸汽，进行间接加热，以维持罐内温度在规定范围内；如属醇提，则全部产用向夹套通蒸汽的方式进行间接加热。 2、强制循环提取：在提取过程中，为了使药液提取温度达到平衡和提高提取效率，可以用泵对药液进行强制循环（但对含淀粉多的物料和粘性较大物料提取不适用）。强制循环即药液从罐体下部放液口放出，经管道过滤器过滤，再用泵送回上部罐体内。 3、回流提取：在提取过程中，提取罐内必然会产生大量蒸汽，这些蒸汽从排气口经冷凝器进行冷凝，再回流到提取罐内，如此循环，直至提取终止。 提取液的放出:提取完毕后，药液从罐体下部侧过滤放液口和排渣门上的放液口一起放出，经管道过滤器过滤，然后用泵将药液输送到储罐或浓缩工段进行浓缩。 五安全试车要求说明： 1、安置要求 （1）设备落位后，应用螺栓或点焊固定在平台上，要求四个支座全部落实均匀受力。 （2）工艺管道依靠药液重力流动段，应按先后顺序，留有一定的液位差，以免液体滞留管内。 （3）速换旋转管接头处的外接管道应予以支撑，使旋转接头能随排渣门盖一起转动，防止损坏排渣门出液连接软管。 （4）进液管口应装置液体流量计，以方便记录进液量。 （5）蒸汽管必须装置减压阀、安全阀和压力表等安全附件。 2、试车要求 在设备安装完毕进行投产之前，首先检查一下主罐排渣门上的汽缸、卡勾等运动部分是否灵活，关闭排渣门时，卡勾能否锁紧到位，橡胶密圈是否起到密封作用，检查主罐排渣门以及辅助设备和管道等连接处、密封处是否漏水或漏气，安全附件是否正常，只有在经过全面检查确认符合安全要求后，才能正式投水试罐。 3、提取罐排渣门的操作流程： （1）、正常工作时：

多功能提取罐

TQ多功能提取罐 说明书 三原博康机械有限公司 地址：三原三独路东段1公里 电话：029— 传真：029— 邮编：713800

TQ 多功能提取罐说明书 一、主要用途： 本设备主要用于中草药的提取，并能回收溶媒和提取芳香油。 二、结构及特点 多功能提取罐，除主体外，为了回收溶媒和提取芳香油的需要，根据用户需要并提出，备有冷凝器、冷却器、油水分离器、过滤器和搅拌器等附件。主罐体和附件凡与药物接触，均用SUS304 进口不锈钢制造，具有良好的耐腐蚀性，符合GMP制药标准。为了便于排渣，底部出渣门内装有不锈钢过滤网，出渣门的启动和紧闭锁有汽缸控制，汽缸所配压缩空气压力要求在~，才能保证动作的顺利进行，气路的控制本厂备有简易控制装置，也可根据用户要求进行配套设计。 三、设备原理 多功能提取罐的工作原理是单纯的煎煮过程，中草药浸泡在水中，采用蒸汽加热，加热一定时间后，将有效成 分提取出来。煎煮时间的长短，可根据不同的性能自行决 定。一次投料量由于中草药的形状和有效成分提取难易不 一，所以不能作统一规定，只能建议投料量不超过设备容 积的三分之二为宜，当提取芳香油时，二次蒸汽通过冷凝、冷却后，油水进入油水分离器，清油在分离器上不排出， 重油在下部提出，水通过溢流排放或回流（具体流程见管

口方位及安装示意图） 设备在工作状态时，上钩锁紧系统气路的阀门亦出于工作状态。为了更加安全可靠，出渣门用3~4个夹紧锁。 四、主要技术参数 五、设备安装 操作台一般现场加工制作，然后用吊装设备将操作台立起，用水平尺找平。在平台上依次将主罐体、冷凝器、冷却器吊装就位、校平（误差3/100），然后参照安装图装好阀门，连接正气、进水、进料、冷凝水、冷却水、二次蒸汽管道。

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文） （适用于No. D6942, D6943 & D6944） 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼．．．． 的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。 注意：DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ，使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作，不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl （取决于终产物的期望浓度） 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量：分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下： DNA 浓度=A 260×50×（稀释倍数）μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者，DNA 的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译

多功能提取罐确认方案

方案编号：TS-71191-00 设备编码：3A016 项目负责人： 确认领导小组审查汇签：

1.主题内容 本方案规定了前处理车间TTQZV5-00多功能提取罐的确认范围、方法及标准。 2.适用范围 本方案适用于前处理车间TTQZV5-00多功能提取罐的确认。 3.实施确认人员及职责 4.简介 4.1.TTQZV5-00多功能提取罐是我公司前处理车间用于中药材药液提取用，该设备主罐体和附件与物 料接触部分均采用304不锈钢制造，下方开有出渣门，出渣门内装304不锈钢席型过滤网，出渣门的启闭和锁紧采用推拉式专利技术，具有由气缸控制、安全自锁的功能。为确保该设备符合GMP 要求，符合工艺要求，保证产品质量，特对该设备的性能指标进行确认。 4.2.设备基本情况

5.验证范围 本次验证为xx制药有限公司TTQZV5-00多功能提取罐的确认，确认内容包括：设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。 ●设计确认（DQ）：考察设备的技术规格、技术参数和指标的适用性并参考设备使用说明书考察设备是 否满足公司生产需求及GMP要求，整个设备设计确认过程应严格执行《设备管理规程》。 ●安装确认（IQ）：对安装设备的外观检查；测试的步骤、文件、参考资料和合格标准，以证实设备的 安装确实是按照制造商的安装规范进行的，符合设备运行前提条件。 ●运行确认（OQ）：按设备操作规程操作正常运行通过记录及文件证实设备能正常平稳运行，各功能键 按钮灵敏、可靠。同时确认设备操作规程的适用性。 ●性能确认（PQ）：设备的性能确认是负载运行机器，是以符合相应的药典和《规范》要求所展开的， 它是从设计、制造到使用最重要的一个环节，具体确认过程与工艺验证同步进行。 ●供应商所提供的该设备证书类（出厂合格证、使用说明书）文件已在初次检查后存档由专人保管，此 次不再进行确认。 6.确认目的 根据《质量风险管理规程》、《确认与验证管理规程》、《确认与验证操作规程》、《设备及公用系统确认SOP》的要求，同时参考《TTQZV5-00多功能提取罐使用说明书》对设备的各项技术指标及性能进行确认，用以证明该设备的各项指标和性能均能满足日后生产和GMP的要求。 7.培训 确认方案起草人在方案批准后对本次确认相关人员进行培训，并记录在相关附件中。如果在确认中涉及到其他培训，培训记录的复印件附在验证报告中。 8.变更和偏差处理

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号：DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围： 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不 能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点： 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500μg），OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。 4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 （20μl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。

提取罐说明书

直锥提取罐机组 TQ-0.5 目 录 一 前言..................................................................2 二 设备性能简介......................................................2 三 基本技术参数表...................................................2 四 设备工作原理......................................................3 五 安全试车要求说明................................................3 六 使用操作说明......................................................5 七 维护保养注意事项................................................6 八 随机附件 (7) 一 前言： 本提取罐设备属一类压力容器，启用前必须报劳动部门皮批准后方能使用。安装时应装 置与设备要求相符的安全阀、减压阀和压力表等，操作人员上岗前应进行培训，以保证设备与人生安全。认真学习国家劳动颁发的“压力容器安全技术监察规程”并遵照执行。 二 设备性能简介： 提取罐是专门为中药厂煮提工段设计的生产设备。具备直接加热和间接加热两种方式。 排渣门采用气动执行结构完成开启和锁紧。凡与药物接触之处均采用不锈钢制作，具有良好耐腐蚀能力，确保中药产品质量，而且寿命厂。 本设备可作为中药或其它植物类水和乙醇提取、蒸制、灭菌及残渣中的乙醇用。设备附有“冷凝器”、“油水分离器”、“除沫器”、“双联过滤器”。 “油水分离器”主要针对醇

74系列芯片功能介绍说明

74系列芯片功能介绍说明 型号功能 ---------------------------------------------------- 74ls00 2输入四与非门 74ls01 2输入四与非门 (oc) 74ls02 2输入四或非门 74ls03 2输入四与非门 (oc) 74ls04 六倒相器 74ls05 六倒相器(oc) 74ls06 六高压输出反相缓冲器/驱动器(oc,30v) 74ls07 六高压输出缓冲器/驱动器(oc,30v) 74ls08 2输入四与门 74ls09 2输入四与门(oc) 74ls10 3输入三与非门 74ls11 3输入三与门 74ls12 3输入三与非门 (oc) 74ls13 4输入双与非门 (斯密特触发) 74ls14 六倒相器(斯密特触发) 74ls15 3输入三与门 (oc) 74ls16 六高压输出反相缓冲器/驱动器(oc,15v) 74ls17 六高压输出缓冲器/驱动器(oc,15v) 74ls18 4输入双与非门 (斯密特触发)

74ls19 六倒相器(斯密特触发) 74ls20 4输入双与非门 74ls21 4输入双与门 74ls22 4输入双与非门(oc) 74ls23 双可扩展的输入或非门 74ls24 2输入四与非门(斯密特触发) 74ls25 4输入双或非门(有选通) 74ls26 2输入四高电平接口与非缓冲器(oc,15v) 74ls27 3输入三或非门 74ls28 2输入四或非缓冲器 74ls30 8输入与非门 74ls31 延迟电路 74ls32 2输入四或门 74ls33 2输入四或非缓冲器(集电极开路输出) 74ls34 六缓冲器 74ls35 六缓冲器(oc) 74ls36 2输入四或非门(有选通) 74ls37 2输入四与非缓冲器 74ls38 2输入四或非缓冲器(集电极开路输出) 74ls39 2输入四或非缓冲器(集电极开路输出) 74ls40 4输入双与非缓冲器 74ls41 bcd-十进制计数器

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号：HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 （注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存） 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。 2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。 3. 纯度高：所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。 （注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次） 2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 （注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低） 3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。 （注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA片段的污染，所用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏，如未完全变得清亮，可能是菌体太多，可增加Buffer P2的用量，在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加） 4. 加入350 ul Buffer P3，立即温和颠倒混匀6 ~ 8次，可见白色沉淀物产生，室温静置2 min，然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 （注意：Buffer P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清） 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中，静置2 min，让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min，弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液，12,000 rpm离心1 min，弃收集管中废液。 （注意：如果宿主菌是endA-，如DH5α若TOP10，此步骤可省略。如果宿主菌是endA+，如TG1、BL21、HB101、JM101等，此步骤不可省略，因这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

中药提取罐验证方案

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目录 1．验证目的························································2．验证范围························································3．方案说明·······················································4．验证职责·······················································5．设备概述························································6．验证步骤························································予确认 安装确认 运行确认 性能确认 7．偏差处理 8．验证方案总结····················································9．再验证周期······················································ 附录 测试仪器校验证书复印件 验证立项申批表 安装确认记录 运行确认记录 性能确认记录 验证方案培训表

一、验证目的 通过对CTG-10型中药提取器进行予确认、安装确认、运行确认和性能确认，验证 设备的性能是否符合工艺要求，达到保证设备正常运转的目的，从而保证最终产品 的质量。 二、验证范围 本方案的范围提供了验证本设备的概要。本方案应表明： A．每一件已安装的设备符合工程设计和设备数据单规格。 B．本设备是根据设计说明书和生产厂家推荐意见安装的。 C．备品备件清单完备且准确，并且所有的操作、预防性维护等手册完备。 D．所有的安装测试报告完备并保存于设备历史档案中。 E．本系统符合现行的兽药GMP要求。 F．没有事先批准或有文件记录的变更管理程序不得进行任何整改。 G．所有与安全有关的内容已形成文件。 H．本设备在设计标准范围内操作。 I．本设备的操作、清洗和预防性维护SOP符合现行GMP的要求。 J．本设备操作人员以接受了相应的培训，且培训情况记录在案。 K．建立了记录册以记录设备的使用、清洗和维护情况。 L．本设备能够在接受标准范围内运行，本设备能够符合生产要求。 三、方案说明 A．尽可能详细地填写本方案中的所有表格。用墨水笔填写。完成表格的人员应签上姓名和日期。如果由一个以上的人填写，那么每一个人都应签上姓名和日期。 B．方案执行时可能会发现偏差。一旦这种情况发生，应将一份异常情况报告送交验证领导小组进行处理。 C．验证小组在测试结束后应作出一份现场活动的总结报告，该报告由公司质量部经 理批准。 四、验证职责 A．验证领导小组 负责验证工作的组织和协调。 负责验证数据及结果的审批。 负责验证报告的审批。

科技小发明的主要技法及案例

科技小发明的主要技法及案例 发表时间：2018-12-03T11:57:34.867Z 来源：《中小学教育》2019年3月05期作者：徐静要睿熙 [导读] 小发明活动是小学生科技活动的重要组成部分，其内容广泛，趣味性强，由于不受教材、大纲的束缚，没有人数限制，没有固定的活动模式，因此小发明活动作为提高学生创造能力的一个重要途径，对于培养学生的创造精神，创造性思维和创造个性有极其重要的作用。 徐静要睿熙重庆九龙坡区第二实验小学 400000 【摘要】小发明活动是小学生科技活动的重要组成部分，其内容广泛，趣味性强，由于不受教材、大纲的束缚，没有人数限制，没有固定的活动模式，因此小发明活动作为提高学生创造能力的一个重要途径，对于培养学生的创造精神，创造性思维和创造个性有极其重要的作用。 【关键词】小学；科技小发明；技法；案例 中图分类号：G662.7 文献标识码：A 文章编号：ISSN1001-2982 （2019）05-133-01 一、普及小发明活动，全面提高学生创造能力 学生都有发明欲望，这是潜在的内动力，让学生明白小发明的目的和意义，采用鼓励、引导的方式启发学生的内动力。向学生介绍发明成果和获奖情况，让学生产生引力目标。在科技小发明活动中，应充分让学生自己选择发明课题，自己设计，自己制作，独立思考和研究。教师要善于发现学生思维中的独特见解，在发明过程中培养学生敏锐的观察力、丰富的想象力，从而提高学生的创造能力。 二、小发明的主要技法 小发明的技法就是在制作小发明作品中所采用的一些有规律的方法，称为技法。主要技法有五种： 2.1改变创造法 就是对不完美的东西，通过创新，对它的体积、结构、内容、材料、原理、成分等进行改变，使其成为一种实用性更强的新产品。比如：把墙壁上开关按钮由很小的体积，变成和面板大小相同的体积；单一的台灯改变成多种类卡通可爱的外形；门钮被通过改变使用方法成为斜翻门钮、平转门钮等。 2.2主体附加法： 就是在一个主体上附加一个东西，产生一个新的发明。即：（主体）+（附加物）=（新产品）。如：灯为主体，加紫外线成为紫外线杀菌灯，加彩色成为彩色灯。给盆景花加上彩灯成为花灯。笔为主体，加彩色成为彩色笔，加录音设备成为录音笔； 2.3自身组合创造法 对任何一个主体，在它的功能、材料、形态结构等方面进行探索、创新，通过相互组合的方式，让其成为一种新的物品。比如：手表增加了通讯功能，就成了电话手表；给汽车安装自动驾驶模块后，就成了自动行驶车辆。 2.4物品改造法 不少物品在使用过程中，毫不例外地存在着某些不足，只是我们习惯了，没有发现而已。如我们从样式、功能等诸多方面给予改造，它就能成为一项新的发明。如：原来的电插座只能插双插头，经改造后可插多种插头；厨房里的菜刀种类单一，改进后的菜刀有砍刀、切肉刀、蔬菜刀等。 2.5缺点列举法 就是发现已有事物的缺点，将其一一列举出来，它是改进原有事物的一种很重要的发明创新方法。缺点列举法一般可按以下步骤进行： ①列举研究对象的缺点并加以整理，按缺点的性质或主次进行归类。 ②寻求改进缺点的设想，并评价筛选出可实施的最佳方案。以室内墙壁上插座为例，以前的五孔插座，上面2孔与下面3孔插座设计距离太近，导致2孔和3孔插头不能同时插电板。经过加大上下插孔的间距后，消除了原来的缺陷，实用性增强。 三、自制会发光的盆景花案例 3.1需要的材料 ①电路图：设计出一套完整回路图纸。 ②电源：5号干电池4节。 ③排线：连接电器起到输送电能量的作用，本次我们采用彩色排线，它颜色易分辨。 ④ LED小灯：一种是放在花蕊里，根据花朵的颜色可以配红色、黄色两种。另一种是放在叶子的根部，选用绿色的灯泡。 ⑤声控开关：遇到声音或者震动，节点就会闭合。 ⑥延时继电器：采用5V延时继电器，提供一组常开节点。 ⑦一盆假花：选择自己喜爱的盆景花。 3.2制作步骤 第1步：铺开图纸，整齐摆放原材料。 第2步：将平行电线撕开，每两股线为一组，由红色和黑色组成。红色线的一头连接在LED灯泡的长腿上，黑色线的一头连接在LED灯泡的短腿上。 第3步：将红色的LED灯泡放置花蕊中，连接线从花朵根部穿出，沿着花茎缠绕至花盆里；将绿色的LED灯泡放在叶子的根部，连接线顺着叶柄缠绕至花盆里。 第4步：将所有红色电线的另一头接在电源正极上，从电源负极上引出一根线连接至延时继电器常开节点1号上。将所有黑色电线的另一头连接至延时继电器常开节点的2号上。 第5步：将声控开关节点连接在电池的正极上，另一个节点与延时继电器带“+”符号的节点连接，最后将延时继电器带有“-”符号的脚与

质粒提取试剂盒 说明书 翻译

E.Z.N.A.?质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文） （适用于No. D6942, D6943 & D6944） 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml的LB培养基进行培养。37℃强力摇动（~300rpm）孵育12-16h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌室温10,000 x g离心1min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入250μl溶液II，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。可能需要孵育2min。不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl溶液III，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g离心10分钟。白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼 ．．．．的吸取上清液，加入装配在2ml收集管中的小量纯化柱I中。确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液，重新使用2ml收集管；加入500μl HB缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g离心1分钟，使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液，重新使用2ml收集管；加入700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清洗柱子，室温10,000 x g离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。 注意：DNA清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA清洗液稀释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g离心2min，使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作，不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl（取决于终产物的期望浓度）洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min。≥13,000 x g离心1min洗脱DNA。可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA。 13. DNA的产量和质量：分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下： DNA浓度=A260×50×（稀释倍数）μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者，DNA的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。 张小强翻译

提取罐验证方案

提取罐验证方案审批表

目录 概述 验证目的 验证方法 验证小组成员及职责 培训 验证实施的时间进度 验证步骤： 1.预确认 2.安装确认 3.运行确认 4.性能确认 偏差情况处理 拟定验证周期 验证结果评定与结论 变更及超出允许范围的对应措施 记录

概述： 提取车间进行GMP改造。多功能式中药提取罐是XXXX、XXXX、XXXX生产的关键设备，为达到GMP要求和满足生产的需要，对多功能式中药提取罐是否符合生产工艺要求和GMP要求进行验证。其工作原理如下： 本机是采用煎煮方法，物料由加料口送入，然后通过管道加提取溶剂，给罐体加热一段时间，收集提取液放出药渣。 验证目的：通过一系列验证，确认设备的安装、运行及性能符合生产需要，并提供足够的数据和文件依据以证明提取罐能够达到质量标准。 验证方法: 主要通过调研确定设备购置的可行性；通过外观检查和核对的方法进行设备的安装确认；通过启动设备后、观察和测试设备的各项技术参数来进行设备的运行确认；通过模拟生产或实际试生产进行设备的性能确认。 验证小组成员及职责： 参加验证人员及职责： 培训： 在设备验证实施之前，要先进行验证方案培训并确认岗位操作人员已进行了

岗位培训。 验证方案培训安排如下： 授课人： 培训人员： 培训时间： 培训时应填写人员培训记录及培训确认记录（表一-1-2）。 验证实施的时间进度： 验证步骤： 1.预确认 设备购置的可行性研究，通过调研确定以下内容： 1.1待购设备的性能（技术指标、型号）适用性 1.2设备结构设计合理性 1.3供货厂家的可靠性 （表二预确认记录） 2.安装确认 2.1仪器仪表校验的确认：列出设备安装确认、运行确认、性能确认所使用的计量器具清单及设备附属计量器具和仪表等清单，确认是否校验及校正周期。（表三验证用仪器、仪表校验记录） 2.2技术资料的确认:确认随机带来的文件、图纸的种类及数量、使用说明书及确认保存的位置。 2.3 设备的确认:包括设备的生产厂家、出厂日期、型号规格及性能技术指标。 2.4设备安装确认：根据设备技术文件及图纸要求，检查设备的安装地点是

微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒 目录号：DN25 目录编号包装单位 DN2501 50次 适用范围： 适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次 裂解液ML 室温11 ml 结合液CB 室温15 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Poly Carrier -20℃200 μl 洗脱缓冲液EB 室温10 ml 蛋白酶K粉（可选） 20mg/ml -20℃20 mg 吸附柱AC和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项：

1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分 钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后， 加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。 3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。仔细阅读注意事项4。 4. 产品介绍： 本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。 产品特点： 1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。 3.配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。 4.多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规 操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

多功能提取罐

湖北盛通药业有限公司 验证报告 验证项目名称：DTQ-HF5m3多功能提取罐验证报告 验证报告编号：VR-TQ-05-02 验证方案编号：VP-TQ-05-02 验证完成日期：2012年04月21日至2012年05月08日验证人员：刘五艮、汪鹏、胡小桂、张向阳 报告编制日期： 报告编制人： 报告审核人： 报告批准人：

目录 1.验证目的 2.验证人员： 3.验证方案的实施情况 4.验证内容 4.1安装确认 4.1.1安装确认所需文件资料 4.1.2确认设备安装符合设计规范，GMP要求。 4.2运行确认 4.3性能确认 5、验证结论 6、价与建议 7、再验证周期 8、验证的结果与批准 9、附件

1.验证目的 进行验证的目的是对DTQ-HF5m3的安装过程、安装条件进行检查，安装后进行试运行，以证明设备能够达到设计要求及规定的技术指标；在确认设备能够达到设计要求或规定的技术指标的前提下，进行模拟生产，证明该设备不仅能够满足生产操作需要，而且符合工艺要求。 2.验证人员 由刘五艮、汪鹏、胡小桂、张向阳组成验证小组，负责对本设备的验证。 3.验证方案的实施情况 验证小组严格按验证方案所规定内容负责对DTQ-HF5m3多功能提取罐进行验证，具体时间从2012月04月21日至2012年05月8日。 4.验证内容 4.1预确认： 设备设计与造型： 根据生产规模，我公司对多功能提取罐的各种技术参数及性能指标进行了解，我公司已有一台3m3多功能提取罐，此次新增一个5m3提取罐可以满足生产需求。根据设计方案，我公司与多个设备生产厂家进行了接触和了解，比较几个厂家在生产多功能提取罐方面的优势和缺点，以及价格和货后服务等诸多因素，我们认为温州华芳机械制造有限公司生产的多功能提取罐符合设计要求。我们于2011

科技创新小发明过程及技巧指南

科技创新小发明过程及技巧指南 【科技创新小发明的一般步骤】: （一）确定发明对象 搞小发明的第一步，就是要确定发明的对象，考虑研究什么问题，这就是选题。对青少年来说，应从自己所熟悉的生活实际出发，在学校、家庭及周围的生活圈中去寻找发明题材。如当你在学习、生活中遇到一些困难时，你肯定会说："要是有某某东西就好了。"这个你想的所要发明的东西就可作为发明对象。不过，同学们在选题时，一定要结合自己的知识水平和设计制作能力，不要空想办不到的发明。 （二）构思设计 题材选好后，接着是构思设计。也就是根据基本的科学原理和经验，设计出选题对象的形态、结构、方法与实施方案。构思时尽可能想出多套设计方案，再根据可行性与实用性精选出最佳结构方案。方案以取材简单、巧妙易行、缺点最少为好。 （三）制作.改进 构思成熟后，就可以开始制作了。制作时应尽可能利用现有条件，在少花钱甚至不花钱的前提下制作出精巧的

作品。某些技术上的问题，可以向老师和家长请教，有时还可以找一些有关厂家帮助制作部分部件。小发明样品完成后，还要进行实践检验与改进。即将作品拿去使用一段时间，在使用中发现问题，并向家长老师和同学广泛征求意见，看还有没有改进或不合理的地方。然后综合各方面的意见，对小发明加以改进。几乎每件优秀的小发明都是"改"出来的 （四）成功 至此，你将会享受到成功的喜悦。接下来，就可申报参加各级青少年发明创造比赛、申请专利或向报刊投稿了。参赛的申报文件主要包括组委会提供的申报表、项目说明和证明材料，其中，项目说明内容为：发明的选题是怎样发现的、发明方案是怎样设计的、发明作品是怎样制作的？这项发明如何体现出新颖性、创造性和实用性？你的创造性贡献是什么？进一步完善该发明的建议和设想。附上外观图（最好还有黑白照片）、结构图、原理图和其它必要的图表资料。凡涉及医疗保健用品、动植物新品种和国家保护的动植物的小发明项目，还必须提供有关部门的证明材料。 【科技创新小发明过程指南】 1、找一找。找课题。创新课题来自需要。课题就在你身边，身边的日常生活、学习、各种活动等都可能成为你找