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promega公司全血DNA提取试剂盒说明书

promega公司全血DNA提取试剂盒说明书
promega公司全血DNA提取试剂盒说明书

高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.sodocs.net/doc/2f19034055.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号:PL03 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存 50次 (PL0301) 100次 (PL0302) 200次 (PL0303) 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA(10mg/ml)-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管(2ml)室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml) 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分 钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍:

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附 量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机, 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基,过夜培养14-16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-

DNA提取试剂盒步骤--最新

组织基因组DNA提取试剂盒(离心柱型) 储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。 注意事项 1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。2.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 3.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。 4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。 操作步骤 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 1. 处理材料 用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织,体积约两个绿豆大小,放入DNAase-free的1.5ml EP中。向EP管中加入等体积的磁珠,以及加入200 μl缓冲液GA,振荡悬浮。置于组织破碎仪中运行5mins/次,共3次。每破碎一次,需将含组织的EP管放入离心机中短暂离心来沉淀组织和磁珠,使其在下次破碎时更好的接触。可根据观察匀浆的效果来决定匀浆的次数,目标是“碾磨均匀”,不能有较大体积的组织块(>2mm的组织块)。 如果需要去除RNA,需加入4 μl RNaseA(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min。 2. 加入20 μl Proteinase K溶液,混匀。提取组织基因组时,加入Proteinase K混匀后,在56℃放置1~3 h,直至组织溶解,每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可。放入10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。将上清转移至新的EP管中。 3. 加入200 μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 4. 加人200 μl 无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。 6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 8. 重复操作步骤7。

自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意:Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴,严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中,按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品: 除上表所列试剂外,还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览:

产品概述: 特异性:TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂,从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰:假阴性:在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻, 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性:在坏死晚期,可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式,应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式,因此,对于可以结果进行解释时, 细胞形态评估是一项重要的参数 样本:细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间:2-3小时,除外培养、固定和渗透 检测次数:一个试剂盒50T

步骤和所需材料: 1 流程图: 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂:Washing buffer:磷酸盐缓冲液(PBS) Blocking buffer封闭溶液:甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液:PBS配制的4%多聚甲醛,ph ,新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液:%Triton1)X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中,新鲜配制 步骤:下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理:可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K,不含核酸酶,浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意:只用罗氏应用科学的蛋白酶K,因其经检测不含核酸酶, 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述(step 2) 需准备的其他试剂:二甲苯和乙醇(浓度:95%,90%,80%,70%,溶于双蒸水中)

Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS )只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS )由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI )是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注:1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃,避免反复冻融; 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存,Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ,Propidium Iodide (PI )避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份,建议您在收到产品之后,分装为小份避光保存于-20℃,即用即取。 3. Propidium Iodide (PI )有毒,操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心(2000rpm 离心5min )收集;贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不 易过长,否则容易引起假阳性); -20℃避光 4℃避光 4℃

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm )孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合,以免使染色体DNA 断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀,加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼.... 的吸取上清液,加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入500μl HB 缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl (取决于终产物的期望浓度) 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量:分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下: DNA 浓度=A 260×50×(稀释倍数)μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA 的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译

中量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

中量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN03 目录编号包装单位 DN0301 20次×3ml DN0302 50次×3ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存20次×3ml 50次×3ml 10×红细胞裂解液室温20 ml 45ml 细胞核裂解液室温60 ml 150 ml 蛋白沉淀液室温20 ml 50 ml DNA溶解液室温10 ml 20 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA, 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量3ml全血可提取出50-150μg),OD260/OD280典 型的比值达 1.7~1.9,长度可达50Kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳15ml离 心管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量3ml全血可提取出75-150μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中中 白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500μg),OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 (20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号:T2190 规格:20次 保存:-20oC保存,荧光标记液需避光保存。 产品简介: 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP),从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。产品内容: 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl

组织基因组DNA提取试剂盒磁珠法

组织基因组DNA提取试剂盒(磁珠法) 使用说明书(Cat#Yu-TD02-1) 【产品介绍】 组织基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系,能从样品中分离纯化高质量DNA。在一定条件下,磁珠表面修饰的基团高效吸附目的DNA,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、无毒、便利,提取的DNA质量稳定、纯度高。纯化后的DNA适用于多种后续实验。本试剂盒可以从少量动物组织中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。 【产品特点】 1. 效率高:DNA提取得率高,操作简便。 2. 安全、无毒害:整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质,提取环境更加安全。 3. 高纯度:OD260/230在1.5左右,OD260/280在2.0左右。可直接用于各种分子生物学实验。 【试剂盒组成】 【规格】50T/盒 【自备试剂】无水乙醇,异丙醇 【贮藏与有效期】 裂解吸附液和Buffer AW1必须室温(15-25℃)避光保存;磁珠室温保存;其他所有试剂室温保存,有效期为1年。 【注意事项】

1、Buffer AW1使用前,加入18mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前,加入21mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为70%。★ 3、磁珠使用前必须充分混匀。★ 4、组织最好置于组织核酸(DNA/RNA)保存液(Cat#Yu-TP01)或液氮中保存。【操作步骤】 1、样本的处理 1.1、液氮中保存的组织将组织在液氮中磨成粉末后,使液氮充分挥发。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 1.2、组织保存液中保存的样本取出在组织保存液中保存的组织,加入1mL无水乙醇洗涤组织两次。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 2、吸取400μL研磨后的裂解吸附液转入1.5mL的EP管中,加入5μL蛋白酶K,60℃1500rpm10分钟。 3、取出EP管,加入250μL异丙醇和10μL混匀的磁珠,闭盖,充分混匀。室温1500rpm振荡10min。 4、取出EP管,瞬时离心,将EP管放于磁力架上,吸附磁珠4分钟。 5、在磁力架上,打开EP管盖,吸弃液体,保留磁珠。 6、加入600μL Buffer AW1,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 7、将EP管放回磁力架,吸附磁珠3分钟至液体清澈(吸附磁珠2分钟后,颠倒磁力架3次,使EP管盖上残留的磁珠被充分回收)。打开EP管盖子,吸弃液体,保留磁珠(需吸干EP管底和管盖中的残留液体)。 注:由于各个实验室磁力架磁力不尽相同,吸附时间可以延长,直至液体清澈。 8、加入600μL Buffer AW2,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)(BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本) 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况,其原理是生物素(biotin)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH 形成,很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便:使用Ready-to-Use型试剂,并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性:能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作:整体操作约需3小时。 ●用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性:有阳性对照片的制备方法,可以确认试剂盒的有效性

使用注意事项 1.使用前请认真阅读本说明书,提前准备好相关试剂。 2.因本试剂盒中组分均为微量,使用前请离心集液。 3.为避免试验误差、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4. TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制,再分别滴加于各样本片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜,以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时,以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末,使用前加入PBS配制成20×DAB(10 mg/ml)后,按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号:HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 (注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存) 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜(Spin Columns PA )吸附。通过去蛋白液(Buffer PD )和漂洗液(Buffer PW )的清洗可去除蛋白及其他杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA,可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。 2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇,即开即用。 3. 纯度高:所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。 (注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次) 2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 (注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低) 3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。 (注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组DNA片段的污染,所用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏,如未完全变得清亮,可能是菌体太多,可增加Buffer P2的用量,在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加) 4. 加入350 ul Buffer P3,立即温和颠倒混匀6 ~ 8次,可见白色沉淀物产生,室温静置2 min,然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 (注意:Buffer P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清) 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中,静置2 min,让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min,弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液,12,000 rpm离心1 min,弃收集管中废液。 (注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α若TOP10,此步骤可省略。如果宿主菌是endA+,如TG1、BL21、HB101、JM101等,此步骤不可省略,因这些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号:DN26 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍: DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟,DNA 回收率可达70-100%,得到的DNA 不需再纯化,可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存: 室温保存至少一年。 注意事项: DNAzol 有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 1.裂解,匀浆 a.组织:25-50mg 组织加1ml DNAzol ,使用匀浆仪处理5-10 次。少量 (5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打

混匀,室温放置5-10 分钟。 b.细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol 用取样器吹 打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 c.细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复 吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。 2.离心 4 -25℃,10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA 的DNA 时,可加此步骤。其他样品可省略此步。 3.沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8 次,混匀样品至出现DNA 沉淀,室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上,仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug),无法缠绕到枪头上,可在4 -25℃,4000g 离心1-2分钟沉淀DNA,弃上清。 4.漂洗 用0.8-1ml 75%乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时,将DNA 悬浮在乙醇中,颠倒离心管3-6 次,然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底,尽可能吸弃上清。 如果需要,可在4 -25℃,1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时,如需去除其他内含物,第一次漂洗可用70%DNAzol 和30%乙醇的溶液代替75%乙醇。

质粒提取试剂盒 说明书 翻译

E.Z.N.A.?质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml的LB培养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm)孵育12-16h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌室温10,000 x g离心1min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入250μl溶液II,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。可能需要孵育2min。不要用力混合,以免使染色体DNA断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl溶液III,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免形成局部沉淀,加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼 ....的吸取上清液,加入装配在2ml收集管中的小量纯化柱I中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入500μl HB缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA清洗液稀释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g离心2min,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl(取决于终产物的期望浓度)洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min。≥13,000 x g离心1min洗脱DNA。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA。 13. DNA的产量和质量:分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下: DNA浓度=A260×50×(稀释倍数)μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强翻译

植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)培训资料

植物基因组D N A提取试剂盒(北京天根)

植物基因组DNA提取试剂盒 1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg,加入液氮充分研磨。 2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中(实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管放在65℃水浴20 min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。 3 加入700 μL氯仿,充分混匀,12,000 rpm(~13,400×g)离心5 min。 注:若提取富含多酚或淀粉的植物组织,可在第3步前,用酚:氯仿/1:1进行等体积抽提。 4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中,加入700 μL缓冲液GP2,充分混匀。 5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中,12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,弃掉废液。(吸附柱容积为700μL左右,可分次加入离心。) 6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 8 重复操作步骤7。 9 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂

洗液。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。 10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于50 μL,体积过小影响回收率。洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

通用基因组DNA提取试剂盒使用说明

通用基因组DNA提取试剂盒使用说明 货号:D2100 规格:50T/100T 保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。开封后请将RNase A,蛋白酶K于-20℃保存。 试剂盒内容:D2100-50T D2100-100T RNase A1ml1ml×2 蛋白酶K1ml1ml×2 溶液A25ml50ml 溶液B25ml50ml 漂洗液15ml15ml×2 洗脱液15ml30ml 吸附柱50个100个 收集管50个100个 说明书1份1份 产品简介: 本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。 使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤: 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1、样品的处理: 1)土壤:称取0.1-0.3g(根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使土壤颗粒研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 2)粪便:称取0.1-0.3g(根据干湿)粪便,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 3)昆虫:称取0.1-0.3g昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul 溶液A,如为块状,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 2、向悬浮液中加入20ul10mg/ml的RNase A,55℃放置10min。 3、加入20ul10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。 4、加入500ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(Insitucelldeathdetectionkit-POD法) 一、原理: TUNEL(TdT-mediateddUTPnickendlabeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdTEnzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端,并与连接辣根过氧化酶(HRP,horse-radishperoxidase)的荧光素抗体特异性结合,后者又与HRP底物二氨基联苯胺(DAB)反应产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂,因而没有3‘-OH形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价,以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材:光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒(塑料饭盒与纱布)、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等; 试剂:试剂盒含: 1号(蓝盖)EnzymeSolution酶溶液:TdT10×、 2号(紫盖)LabelSolution标记液:荧光素标记的dUTP1×、

3号(棕瓶)Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP; 自备试剂:PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇(100、95、90、80、70%)、 DAB工作液(临用前配制,5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS)、 ProteinaseK工作液(10-20μg/mlin10mMTris/HCl,pH7.4-8)或细胞通透液(0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠,临用前配制)、 苏木素或甲基绿、DNase1(3000U/ml–3U/mlin50mMTris-HCl,pH7.5,10mMMgCl2,1mg/mlBSA)等。 三、实验步骤 操作流程图:制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加converter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。 具体操作步骤(石蜡包埋切片的检测): 1.用二甲苯浸洗2次,每次5min; 2.用梯度乙醇(100、95、90、80、70%)各浸洗1次,每次3min;注:上面两步是针对石蜡切片样本的处理 4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在21–37°C(温度、时间、浓度均需摸索)如果凋亡细胞染色较弱时,可用高浓度的ProteinaseK(400μg/mL)处理5分钟。其它替代方法:石蜡切片的预处理也可根椐实际情况可采用下述三种替代方法之一,即 蛋白酶K处理的步聚改用下述方法,其余步聚均相同:

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