葡萄中白藜芦醇的含量及功能研究
成绩葡萄中白藜芦醇的含量及功能研究
摘要：白藜芦醇在人体中有降血脂、防血栓、抗癌、抗氧化、抗菌和预防老年痴呆等多种生理功能。在植物中也是一种抗毒素。本文总结了葡萄不同品种及部位白藜芦醇的含量差异，并对影响白藜芦醇含量的影响因素进行了总结。
关键词：葡萄白藜芦醇生理功能含量差异影响因素
白藜芦醇化学名称为芪三酚（Resveratrol，3,4',5-三羟基二苯乙烯），是植物界分布较广的羟基二苯乙烯芪类化合物，属于二苯乙烯衍生物。白藜芦醇有顺式和反式两种异构体。自然界中的白藜芦醇以游离态和化合态两种形式存在，化合态以糖苷和低聚物的形式存在，故白藜芦醇一般有4种存在形式：顺、反式白藜芦醇和顺、反式白藜芦醇糖苷。
1 Res对人类疾病的药理作用
流行病学调查发现，长期适量饮用红葡萄酒能够降低心血管疾病的发病率和死亡率，其中的Res是主要的活性物质，并发挥了重要作用。近年来，国内外越来越多的研究表明，Res 具有多种生物学效用。Res能与人体内雌性激素受体结合，调节血液中胆固醇水平，有效减少人罹患心血管病的危险[2]；Res还能抑制低密度脂蛋白过氧化和血小板凝集，调节脂类蛋白代谢水平，降低人体血脂，具有良好预防动脉粥样硬化和冠心病效果[3-4]。Res还具有强抗氧化和抗自由基功能，1.3 μg/mL的白藜芦醇能明显抑制大鼠红细胞的自氧化溶血和由H2O2引起的氧化溶血，并对小鼠心、肝、脑、肾的体内外过氧化脂质的产生有明显抑制作用[6]。Res具有抗突变以及抗癌作用，能抑制环加氧酶和过氧化氢酶的活性，在癌细胞的起始、增殖、发展3个主要阶段均有抑制乃至逆转作用[7]；Res可使老鼠皮肤癌细胞最多可减少98%[8]，能诱导人早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60的分化[9]，被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。Res具有明显的辐射保护作用[10]，并影响骨骼代谢[11]等。Res衍生物piceatannol具有和Res相同的抗癌[12]、免疫调节、抗菌、抗脂质氧化和抗癌细胞增殖的活
性[13]。此外，Res及其衍生物在肝脏保护、激活长寿基因、防治神经性疾病等方面也起着重要作用[14]。因此，Res广泛应用于医药、保健品、化妆品和食品添加剂等领域。
2 葡萄Res对植物病害的抵抗作用
Res作为葡萄属植物的一种抗毒素被发现后，引起了科学家的高度重视。Langcake[15]等首次在葡萄叶片中发现Res，并能抵抗灰霉病（Botrytis cinerea）的侵染。Pont[16]等认为白黎芦醇抗灰霉病的活性与其亲脂性大小、分子体积及电子特性相关，并破坏细胞膜的结构，影响电子的有效传递。Hain[17]等将分离出的葡萄茎STS基因转到烟草中，结果发现这些烟草在受到病原菌感染时，感染部位有大量Res的积累，并且其合成Res能力与烟草抗灰霉病的能力呈正相关。郜海燕[11]等研究发现，葡萄在遭到霜霉菌（Plasmopara viticola）侵染后，在没有被侵染且离坏死果实较近的部位其白藜芦醇的含量较高，说明Res作为植物抗毒素可以有效地抑制坏死区的扩展。Dercks[18]等发现了17个葡萄品种对霜霉病的抗性与紫外线诱导产生Res的能力正相关。John[19]等研究发现，Res与抗真菌能力相关。从野生葡萄中提取的Res对金黄色葡萄球菌（Slaphylococcus aureus）、耻垢分支杆菌（Mycobaeteriam smegmatis）、表皮葡萄球菌（S.epidermidis）有较强的抑制作用，且大量报道葡萄中Res含量的高低与抗真菌能力有关[20]。Schnee[21]比较研究了不同葡萄品种对白粉菌（Erysiphe necator）的抗性，发现敏感品种感染病菌后产生的大量Res迅速糖基化为较小毒性的白藜芦醇苷（piceid，PD），而抗性品种感染病菌后产生的大量Res则迅速氧化为更高毒性的白藜芦醇聚合体（viniferins）。
3葡萄Res含量研究
葡萄不同品种间Res含量不同。国内外大量学者对葡萄组织中Res含量进行研究，结果发现葡萄各品种间Res含量存在较大差异。葡萄Res含量可能与生长环境、果实性状、用途等相关联，研究发现有核品种Res含量显著高于无核品种。李婷[22]等用HPLC法测定14个葡萄品种Res含量，结果表明：酿酒葡萄中的Res含量明显高于鲜食葡萄，供试葡萄品种中以黑比诺的Res含量相对较高。Li[23]等从种质资源水平上评价葡萄Res含量，结果发现种间杂交的砧木品种果皮和种子的Res含量显著高于其他栽培品种（美洲种＞欧亚种）。
葡萄不同器官间Res含量也存在着显著差异。在正常生长状况下，葡萄果皮、种子含有较高的Res，果肉中很少，叶是检测Res最主要的器官，花和芽合成Res能力很低。谢红旗[24]等测定葡萄的生长器官的Res含量，结果表明：主藤＞侧藤＞支藤＞根＞叶片≈叶柄；各部位白藜芦醇在生长期含量变化趋势是先升后降，变化趋势较小。陈雷[25等对葡萄果肉、
叶柄、种子、叶片、果皮及穗轴的检测发现，果穗轴和果皮中的Res含量较高，叶片和种子中的含量相对较低，果肉部分最低，而李婷[26]等研究发现：Res含量为果梗、叶片＞果皮＞种子＞叶柄。赵权[27]等对山葡萄叶、茎、卷须、果实检测发现，卷须＞茎＞种子＞果皮果肉。叶中白藜芦醇含量最高，达20.12 μg/g。邓建平等研究了成熟度与Res含量之间的关系，结果表明成熟果皮＞成熟叶＞茎段；成熟果皮＞嫩果皮；成熟叶＞老叶＞嫩叶。萄植植株某些器官之间Res含量存在着一定的相关性，研究结果表明：葡萄浆果中Res的含量与叶子中的含量呈正相关[28]。
4葡萄中Res含量的影响因素
4.1影响葡萄中Res含量的内在因素
Res是植物在受到病原形进攻和在环境恶化时产生的一种植物抗毒素[29]。真菌细胞壁碎片常被用在刺激葡萄发生灰霉病感染的某些过程，例如通过酸的水解作用，葡萄属植物细胞从真菌细胞壁中可得到葡聚糖激发子、可溶性碎片、可溶性片段可阻断常规蛋白的合成，而启动一小部分与诱导抗性有关的蛋白的合成，经过诱导被强化的葡萄属植物细胞在葡聚糖激发子、可溶性碎片共同作用下产生Res及其衍生物[30]，末尾阶段是Res合成酶（简称RS）将一分子的对香豆酰辅酶A（P-coumarogl)）和三分子的丙二酰辅酶A（malonyl-CoA），经苯丙氨酸聚丙二酸盐路径，转化为几种Res[31]。在Res的生物合成过程中有5种酶已被发现：合酶（简称STS），是人们研究最透彻的一种酶，STS的合成在整个Res的合成过程中速度是最快的，从空间角度来说，STS呈现微观的不均一性，是带一个亚基的二聚体，分子量为43000，等电点RI=5.4[32]。进一步研究发现它是负责酚类形成及Res合成的，整段的STS的cDNA是从葡萄属植物的mRNA序列开始的，含有39种氨基酸的片段，用PSV25作载体片段再分别插入到载体PKK233-2和PDS12/RBSH-2所得到的cDNA基因库在大肠杆菌中的表达产生了一个单独展示STS活性的二聚体[33-34]。通过对臭氧在欧亚种葡萄品种上诱导STS 转录表达的研究（此研究是通过溶合TST启动子与β-葡萄糖苷酸酶（GUS）报告基因，再转化到烟草上），发现0.1mg/L臭氧处理10h可以使GUS基因表达提高11倍，GUS基因活性组织化学定位发现其活性表达呈斑点状分布于整个叶片。叶片的横切面组织化学定位表明STS的启动子（Vst1）在栅栏组织、海绵薄壁组织中被诱导，表皮组织细胞中表达较少。5＇端缺失表明部分启动序列在-430和-280处构建臭氧反应作用区，有效病原菌灰霉病诱导应从-280到-140[35]。Reniero等[36]从葡萄栽培品种霞多丽（Chardor-nay）的根中分离到Res的二聚体。Pool[37]等测试了15种葡萄成熟节间的木质部，发现其Res的含量不同。叶是检测
Res使用最多、最方便的器官。芽和花合成Res的能力较低。果皮、果穗轴中含有较高的Res，尤其是果穗轴中，含量更可观，可达81.37mg·g-1[38]，是人类未来从饮食中摄取Res 的主要源泉。青铜色和黑色果皮的圆叶葡萄，种子和果实与其它部分相比，Res的含量约占总量的23.4~30.1%。果实的果肉部分Res的含量很低，有些品种根本就不含Res[39-40]。葡萄植株某些器官之间Res含量存在着一定的相关性。研究结果表明：葡萄浆果中Res的含量与叶子中的含量呈正相关[41]。葡萄植物仅在适当的时期才合成Res，并且能合成的时期较短暂。Res无论是否产生抗病作用，其含量都将呈下降趋势[42]。Dercks等[43]调查了对霜霉病呈抗性、中抗、感病3个类型的不同品种，认为抗病品种卡斯特在霜霉病发病期可以一直保持较高的水平；抗病中等的Rupestris6544接种病菌后的最初几个小时积累一定量的Res，但积累水平很快下降；感病品种雷斯令一直呈下降趋势。Res的明显动态变化期出现在果实成熟期，其含量下降很快[44-45]。Jeandet[46]调查了葡萄栽培品种黑比诺（Pinot noir），认为Res的含量是易变的。黑比诺与美洲葡萄（labrusca）浆果的Res含量在着色期后一直下降，黑比诺最后几乎接近于零。Res在果皮中的含量与果实成熟过程中糖的含量呈负相关[47]。Jeandet等[48]的研究认为，Res在果实成熟期骤然下降，这种源于葡萄不同生长期和花青素苷的消长关系，Res的前体为苯基苯乙烯酮，而此物的合成需要一种酶，这种酶又是花青素苷合成的关键酶，两种合成相抗争的结果，出现了Res合成能力的下降伴随着一系列花青素苷物质的升高。4.2影响葡萄中Res的外在因素
4.2.1紫外线（UV）
紫外线照射是Res产生的必要外部因素之一。紫外线最高峰值为260~270nm时可有效诱导Res的产生。用通量率为1W/m2的UV（270nm）照射10min，4h后Res的合成酶活性达到最大，在低通量率照射下，合成酶达到最大活性时所需时间加长[49]，254nm以下的UV 对Res有破坏作用。在照以高强度的UV时，溶于乙醇中的tras-Res能转变为cis-Res[50]。4.2.2温度、湿度
生长在湿热条件下的葡萄比生长在气候寒冷、干燥条件下的葡萄，由于病害侵染的压力较大，果实中所含的Res也较高[51]。
4.2.3病菌侵染胁迫
研究认为[52]，对每个栽培品种来说，增加菌种的密度都会导致Res合成能力的提高。
10.2.4机械损伤
果皮的机械损伤导致正常浆果合成Res能力下降。
4.2.5杀菌剂
Dercks等[53]在葡萄霜霉病方面研究了杀菌剂（Fosetyl）对Res的积累的影响，此研究包括两个内容，是否需接种病菌孢子及FosetyL-A1的使用时期。结论指出，接种与FosetyL-A1的使用，两种选择压力结合起来比单独用FosetyL-A1效果好；接种后使用FosetyL-A1可使Res的含量增加几倍。
4.2.6化学元素、化合物
使用粘酸（Mucic acid）可诱导Res的产生[54]；Coulmb-C等[89]在葡萄成熟后一天，喷布波尔多液和氢氧化铜，通过样品生化分析表明，浆果防御机能的综合指标提高，这些指标包括过氧化氢、酚、Res、花色素，得出铜可以帮助激发植物固有防御机能的结论。
5展望
Res不仅能够提高植物的抗病性，还具有多种生物活性和药理作用，有着广泛的研究和应用前景。提出几点今后的研究方向：（1）研究葡萄的种质，确定高Res含量基因型葡萄遗传规律，获得高含量Res葡萄新品种。运用现代分子技术以及遗传育种等手段深入研究葡萄种质，特别是野生葡萄种质Res含量特点及遗传规律，确定高Res含量基因型葡萄，通过遗传育种获得高含量Res葡萄新品种，以此来获取纯天然的Res。（2）Res抗病机理的研究。目前对于抗Res病机理研究尚不成熟，主要缺乏有效的工具来确定Res及其衍生物在植物细胞和组织中的转运/运输机制，因此对于Res及其衍生物在植物抗病中所起的作用很难评估。（3）由于不同的处理使得葡萄中白藜芦醇含量发生变化，因此可通过一定手段提高葡萄中白藜芦醇的含量。
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葡萄中白藜芦醇的含量及功能研究课稿
成绩葡萄中白藜芦醇的含量及功能研究 摘要：白藜芦醇在人体中有降血脂、防血栓、抗癌、抗氧化、抗菌和预防老年痴呆等多种生理功能。在植物中也是一种抗毒素。本文总结了葡萄不同品种及部位白藜芦醇的含量差异，并对影响白藜芦醇含量的影响因素进行了总结。 关键词：葡萄白藜芦醇生理功能含量差异影响因素 白藜芦醇化学名称为芪三酚（Resveratrol，3,4',5-三羟基二苯乙烯），是植物界分布较广的羟基二苯乙烯芪类化合物，属于二苯乙烯衍生物。白藜芦醇有顺式和反式两种异构体。自然界中的白藜芦醇以游离态和化合态两种形式存在，化合态以糖苷和低聚物的形式存在，故白藜芦醇一般有4种存在形式：顺、反式白藜芦醇和顺、反式白藜芦醇糖苷。 1 Res对人类疾病的药理作用 流行病学调查发现，长期适量饮用红葡萄酒能够降低心血管疾病的发病率和死亡率，其中的Res是主要的活性物质，并发挥了重要作用。近年来，国内外越来越多的研究表明，Res 具有多种生物学效用。Res能与人体内雌性激素受体结合，调节血液中胆固醇水平，有效减少人罹患心血管病的危险[2]；Res还能抑制低密度脂蛋白过氧化和血小板凝集，调节脂类蛋白代谢水平，降低人体血脂，具有良好预防动脉粥样硬化和冠心病效果[3-4]。Res还具有强抗氧化和抗自由基功能，1.3 μg/mL的白藜芦醇能明显抑制大鼠红细胞的自氧化溶血和由H2O2引起的氧化溶血，并对小鼠心、肝、脑、肾的体内外过氧化脂质的产生有明显抑制作用[6]。Res具有抗突变以及抗癌作用，能抑制环加氧酶和过氧化氢酶的活性，在癌细胞的起始、增殖、发展3个主要阶段均有抑制乃至逆转作用[7]；Res可使老鼠皮肤癌细胞最多可减少98%[8]，能诱导人早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60的分化[9]，被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。Res具有明显的辐射保护作用[10]，并影响骨骼代谢[11]等。Res衍生物piceatannol具有和Res相同的抗癌[12]、免疫调节、抗菌、抗脂质氧化和抗癌细胞增殖的活
大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：
将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋： 将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块： 待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。
白藜芦醇抗衰老研究新进展
网络出版时间：2012-08-29 15:14 网络出版地址：https://www.sodocs.net/doc/3a11366596.html,/kcms/detail/51.1705.R.20120829.1514.002.html 白藜芦醇抗衰老研究新进展 楼旭丹1 汪海东1 夏世金2 （复旦大学附属华东医院：1.内分泌科；2.上海市老年医学研究所，上海 200040） 【摘要】白藜芦醇是一种植物抗毒素，主要来源于虎杖、葡萄及花生等植物中，具有抗肿瘤、 抗心血管疾病、抗炎、抗氧化、抗自由基、保肝、保护神经系统、调节雌激素及骨代谢等多 种药理学作用，还可以模拟热量限制（CR）的抗衰老效应，激活沉默信息调节因子1（SIRT1）， 参与有机生物平均生命期的调控。白藜芦醇对衰老的干预主要表现为抗氧化、抗自由基，免 疫调节，抗炎作用以及对神经系统的影响，本文就白藜芦醇及其抗衰老干预研究进行综述。 【关键词】白藜芦醇；抗衰老 【中图分类号】R285 【文献标志码】A 衰老是自然界一切生命由遗传因素和内外环境互相作用下的生物学过程，这个过程从出生、发育、成长直到死亡，是机体功能退行性下降及紊乱的综合变化，具有累积性、普遍性、 渐进性、内生性、危害性5个生理特征[1]。白藜芦醇是广泛存在于自然界的一种植物抗毒素， 作为沉默信息调节因子1（SIRT1）最强的激活剂，白藜芦醇可以模拟热量限制（CR）的抗 衰老效应，参与有机生物平均生命期的调控[2,3]。已有报道指出[4]白藜芦醇能增加酵母、后 生动物和其他动物的寿命，其抗衰老作用的细胞学和分子生物学机制也因此成为国内外学者 研究的一个新热点。本文综述了白藜芦醇的一般性质、代谢途径以及近年来白藜芦醇抗衰老 机制的研究进展，展望了白藜芦醇在临床应用中的良好前景及所存在的问题，为进一步开展 白藜芦醇生理药理活性研究提供参考。 1 白藜芦醇的一般性质 白藜芦醇（Resveratrol, Res）化学名为3,5,4’-三羟基-1,2-二苯乙烯 （3,5,4’-trihydroxystilbene），分子式C14H12O3，相对分子质量228.25，为无色针状晶体， 难溶于水，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂。早在1940年白藜芦醇首次 被发现存在于白藜芦（white hellebore）的根中，至20世纪70年代发现传统的中草药虎 杖（polygonum cupsidatum）中也含有该种物质，但受到越来越多学者的关注与青睐是源于 1992年Seimann和Creasy报道[5]在红葡萄酒中亦发现有白藜芦醇的存在，并提出白藜芦醇 是红葡萄酒中发挥心血管保护作用的主要功能因子。在对其自然资源进行广泛的研究后，白 藜芦醇被认为是一种重要的植物抗毒素，一种至少存在于包括葡萄、虎杖、花生、桑葚、松 树、朝鲜槐等12科、31个属的72种植物中含有芪类结构的非黄酮类多酚基化合物[6]。自然 界中白藜芦醇以顺式和反式两种同分异构体的形式存在，反式异构体可在紫外光照射下转化 为顺式异构体，这两种结构可分别与葡萄糖结合，形成顺式或反式白藜芦醇苷，发挥各自的 生物学功能。植物中白藜芦醇主要以反式形式存在，表明反式异构体的生理活性强于顺式异 构体，另有报道指出反式白藜芦醇才是红葡萄酒能抗动脉粥样硬化和冠心病的重要成分[7]。 2 白藜芦醇的代谢 无论在人类或者啮齿类动物，摄入的白藜芦醇吸收入血后70%以上具生物活性，其血浆 浓度一般在30min内达到高峰，但白藜芦醇及其他多酚类物质的生物利用度均较低，如口服 25 mg反式白藜芦醇其血浆浓度峰值仅为2 μmol/L，半衰期约8-14 min[8]。白藜芦醇的药 基金项目：上海市科委科技发展基金基础研究重点课题（No.10JC1404800）；国家自然科学 基金面上项目（No.31171129）
葡萄酒渣中白藜芦醇类生物活性物质研究报告进展课稿
葡萄酒渣中白藜芦醇类生物活性物质 最新研究进展 摘要：介绍了我国葡萄的发展历程及葡萄酒渣中的活性物质——白藜芦醇的生物学功能。阐述了白藜芦醇的提取、纯化方法，同时展望了以葡萄酒渣为原料提取白藜芦醇而产生的巨大的经济效益和社会效益。 关键词：葡萄；白藜芦醇；提取；纯化 0引言 葡萄有“水果皇后”之美誉，其味甜美又清爽且营养丰富，还有补益气血、强筋骨、通经络、通淋消肿、滋肾益肝等功效，因此深受人们喜爱。 葡萄浆果中除含水分外，还含有约15%～30%的糖类(主要是葡萄糖、果糖和戊糖)，各种有机酸和矿物质，以及各种氨基酸、蛋白质、碳水化合物、粗纤维、胡萝卜素等多种营养物质。现代研究发现，葡萄中还含有鞣质、甾类、超氧化物歧化酶等生物活性物质。很多文献报道，葡萄的医疗保健功效大都与这些生物活性物质的药理活性有关。每年世界葡萄总产量中80%用于酿酒，由葡萄的世界产量可知，
葡萄酒的世界年产量也是个庞大的数字。 中国的葡萄酒产业发展历史较短，但随着中国经济的腾飞，其葡萄酒生产的发展速度也是相当惊人。由于葡萄酒的大量生产和消费，同时也产生了大量的葡萄酿酒后的副产品——葡萄酒渣（葡萄皮渣、籽、梗）。一些发达国家如法国、意大利、西班牙等这些葡萄酒生产大国，其葡萄废弃物的70%以上均能得到很好的利用，但我国常年来由于葡萄酒生产季节性强、生产集中，导致这些废弃物往往来不及处理就被随意抛弃或作为废料处理掉，这不仅影响环境卫生，而且也是对资源的极度浪费。研究表明，酿酒后的葡萄废弃物中含有大量以植物多酚为主的生物活性物质，如白藜芦醇、酚酸、黄酮、原花青素等，这些物质具有非常重要的生理功能特性，因此有极大的开发前景。我国的葡萄生产量居世界前列，每年我国葡萄废弃物高达几十万吨，如何将这一大批明显有利用价值的物质充分开发出来，使其得到综合有效的利用将是食品科技工作者值得研究的问题。 1葡萄酒渣中的生物活性物质白藜芦醇 1.1白藜芦醇简介 白藜芦醇，又称芪三酚，起初在葡萄中发现，被认为它的产生与葡萄植株对真菌的感染或非生物刺激(如紫外辐射) 有关。它是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物,其分子式为C14H12O3 ,相对分子质量为228. 25 ,具有顺式和反式两种结构,为白色针状晶体,易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂。反式异构体的生理活性强于顺式异构体，在紫外线照射下反式白藜芦醇能转化为顺式异
实验大鼠取材方案
实验大鼠取材方案 [取材内容] 1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。 2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。 3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。 4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻 保存备用。 5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻 保存备用。 6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保 存。 9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液 氮冰冻保存备用。 10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保 存备用。 13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存 备用。 14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液） [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、
白藜芦醇及其衍生物和类似物抗肿瘤研究进展
CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS 2014年第33卷第6期·1526· 化工进展 白藜芦醇及其衍生物和类似物抗肿瘤研究进展 韩雪莲 （江苏省安全生产科学研究院，江苏南京 210042） 摘要：白藜芦醇具有广泛的生物学活性，尤其是抗肿瘤作用备受关注，得到了广泛研究。同时，为了提高生物利用度，并获得更高的抗肿瘤活性，有关其衍生物与类似物的研究也大量开展。本文对白藜芦醇的结构及理化性质、抗肿瘤作用机制、毒性、代谢动力学、白藜芦醇衍生物和类似物的抗肿瘤活性及作用机制，以及制备方法进行了回顾。作为一类很有希望的的新型抗肿瘤药物，有关白藜芦醇及其衍生物和类似物还存在许多需要继续研究的问题，包括生物作用机制、结构与活性的关系不明确、生物利用度与疗效之间存在的矛盾以及体内药代动力学研究的缺乏等，还需要系统开展作用机制、毒理学和代谢动力学研究以及动物体内试验。 关键词：白藜芦醇；衍生物；类似物；抗肿瘤活性；作用机制 中图分类号：O 625.2 文献标志码：A 文章编号：1000–6613（2014）06–1526–07 DOI：10.3969/j.issn.1000-6613.2014.06.028 Progress in anti-tumor research on resveratrol and its derivatives and analogues HAN Xuelian （Jiangsu Research Institute of Safety Production Science，Nanjing 210042，Jiangsu，China ）Abstract：Resveratrol has extensive biological activities，especially its anti-tumor effect，so its pharmacological properties have been studied. At the same time，in order to improve the bioavailability，and obtain a higher antitumor activity，studies on their derivatives and analogues have been widely carried out. In this paper，the items of chemical structure，physical and chemical properties，antitumor mechanism，genetic toxicity，kinetics of resveratrol and the antitumor activity and mechanism of resveratrol derivatives and analogues were reviewed. There are still many needs to continue to study in this area. Its biological mechanism of action，relationship between structure and activity，bioavailability and efficacy，and pharmacokinetics studies need to be further investigated. As a new promising anticancer drug，a systematic study on its effect mechanism，toxicology， pharmacokinetics，animal experiment of resveratrol，its derivatives and analogues need to be carried out. Key words：resveratrol；derivatives；analogues；anti-tumor activity；mechanism 白藜芦醇（resveratrol，Res）于1940年由日本Tokaoka首次从毛叶藜芦的根部分离得到并被命名，至今已经在21个科、31个属的72种植物中得以发现。在葡萄、虎杖等植物中含量较为丰富。目前人们已经发现Res具有多种生理活性，包括抗癌、心血管保护、抗菌、神经保护、免疫调节、肝细胞保护，以及抗肝纤维化、抗衰老、治疗休克、美容减肥等多种作用。由于Res 的生物利用度较低，Res 的衍生物和类似物研究也得到了广泛开展。 1 Res的结构及理化性质 1.1 Res的结构 Res为蒽醌萜类（非黄酮类）多酚化合物，又 收稿日期：2013-11-24；修改稿日期：2014-02-26。 作者：韩雪莲（1973—），女，博士，高级工程师，目前从事环境致癌及抗肿瘤药物研发工作。E-mail han.x.l@https://www.sodocs.net/doc/3a11366596.html,。
大鼠取材方案
实验大鼠取材方案 ［取材内容］ 1. 取大歸脉血分离血衆血清-80 C保存。 2. 取大鼠门静脉血分离血清-80 C保存。 3. 取大鼠甲状腺组织.制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用〃 4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化孵标本其余组织液氮冰冻保存备用。 5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本，免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰搽 保存备用。 6. 取大鼠肝脏组级制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 7. 取大鼠觴组级制备康腺组织电镜观察标芯免疫组化观察标本其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。 9. 取鳩胃部组级制备胃粘膜组织电飙察标本免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 10. 取大鼠空肠组级制备肠道粘膜组级电镜观察标本■免疫组化观集标本其余组级分装
液氮冰冻保存备用。 11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观舉标技免疫组化观察标本其余组 织分装 液氮冰冻保存备用。 12. 取大關组织制备左肾组级电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮 冰探保 存备用。 13. 取大嵐肾上腺组织左侧制备肾上腺组级免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保 存 备用。 14. 取大鼠睾丸组级左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 ［试剂及药品］ 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、 3 应二醛 磷酸 盐缓冲液（PBS0.01mol/LP pH7.4）或 4 戍二肚肝素撤m器械清洗消毒液 ［器材］ 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、 眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存氤肝麹真空采血管、微量移液議高速敲杠注射器10ml、5ml、
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
反相高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量 白祖海，文刚，张艳 （长沙市疾病预防控制中心，长沙410001） 摘要：采用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量。以聚酰胺柱对样品进行 预处理，排除其它成分的干扰，获得较好分离度和高回收率。选用自填 装ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)，以乙醇-水(2：3,v/v)作流 动相，流速为0.6 ml/min，紫外光检测波长304nm，柱温为25℃。白藜 芦酵在0.05-0.40μg/mL 范围内具有良好的线性关系。r=0.9996，平均回 收率为98.51%(n=5)。结论：该方法简便、准确可靠，适合于中药材虎 杖中白藜芦醇含量的测定。 关键词：白藜芦醇；虎杖；反相高效液相色谱法 Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum by Reversed-Phase HPLC BAI Zu-hai, WEN Gang, ZHANG Yan (Changsha Municipal Center for Prevention and Control of Diseases, Changsha 410001, China) Abstract：A simple and sensitive Reversed-Phase HPLC method for the determination of resveratrol in the roots of Polygonum cuspidatum was described，including the pretreatment of samples by poamide colutah. The separation was performed on an ODS column(200 mm×4.6 mm，5μm)，with the mobile phase of
白藜芦醇制备方法及其生物活性研究进展
食品科学 H A I X I A K E X U E 年第期（总第6期）5 海峡科学 白藜芦醇制备方法及其生物活性研究进展 福建农林大学食品科学学院 冯瑞陈继承林好薛丽华赖明耀庞杰 [摘要]白藜芦醇是蒽醌萜类化合物，一种植物体内产生的天然二苯乙烯类活性多酚物质。该文通过查阅国内外相关文献，从提取方法和生理活性方面对白藜芦醇的制备技术进行了综述，以期对白藜芦醇制备研究和开发利用提供参考。 [关键词] 白藜芦醇 提取方法 生理活性 研究进展 0引言 白藜芦醇（Resveratrol ，简称Res ）又称芪三酚，化学名称为3,4,5-三羟基二苯乙烯（3,4,5-trihy-drolystilbence ），是含芪类结构的二苯乙烯芪类、非黄酮类多酚物质[1-2]。白藜芦醇首次从毛叶藜芦(Veratrum grandiflorum)的根部分离得到 [3] ，研究表明，它在抗菌、抗氧化、抗肿瘤、治疗炎症、脂 质代谢紊乱、心脏疾病等方面发挥重要作用[4]。目前发现在虎杖、葡萄、花生、桑葚等72种植物中均含有白藜芦醇。白藜芦醇在自然界中的存在形式有：顺式、反式白藜芦醇和顺式、反式白藜芦醇苷，在紫外光照射下，白藜芦醇苷反式异构体能够转化为顺式异构体，其中反式异构体的生理活性大于顺式异构体，单体活性大于糖苷，植物中白藜芦醇通常以稳定的反式糖苷形式存在[5] 。随着白藜芦醇提取纯化技术和生理、药理活性研究的不断深入，在食品、药品和化妆品等方面的应用前景更为广阔。 1白藜芦醇的提取 白藜芦醇为无色针状结晶，熔点：256℃～258℃，较难溶于水，易溶于丙酮、乙醇、甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂。在366nm 激发产生紫色荧光，遇氨水等碱性溶液显红色，遇醋酸镁的甲醇溶液显粉红色，并能和三氯化铁-铁氰化钾起显色反应[6]。白藜芦醇应在低温、避光条件下保存，碱性环境中不稳定。在紫外光210nm 处有强吸收，次强吸收峰分别在305nm~330nm 和280nm~295nm 处[6-7]。 从天然植物中提取白藜芦醇的传统方法为有机溶剂提取法和加热回流法。有机溶剂浸提法所需时间较长，溶剂用量大，生产成本高；而加热回流法所需的温度较高，易造成活性成分的分解或挥发，提取效率低[8] 。随着对白藜芦醇研究的深入和高新提取技术的应用，从植物中提取白藜芦醇的先进工艺不断涌现。新工艺不仅大大提高了白藜芦醇的提取率，而且减少提取时间，缩短生产周期。 1.1有机溶剂提取法 有机溶剂提取法是利用白藜芦醇易溶于有机溶剂的特性，包括：浸渍、回流、索氏抽提及恒温水浴等方法。提取溶剂主要有水、乙醚、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯和丙酮等。酸性醇法提取白藜芦醇效率较高，一般采用60%～80%酸性乙醇进行回流提取。俸灵林等[9]研究发现甲醇提取效果最好，提取率最高，且用高效液相色谱（HPLC ）测定时，杂质峰干扰少。但由于有机溶剂提取时间长，对热不稳定成分易被破坏，杂质含量高，不易纯化，萃取溶剂消耗量大以及污染环境等缺点，许多学者都在研究开发新型提取方法。1.2酶法提取与转化 酶解提取法是天然产物提取的新兴技术，酶可作用于细胞壁，使之破裂、疏松，减小传质阻力，加速有效成分的释放。白藜芦醇酶法提取条件温和，并能够减少中间环节，因此可以提高原料利用率和产物得率。目前用于提取的酶主要有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、鼠李糖苷酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、葡萄苷酶等。在实际应用中一般都采用多种酶复合，以提高白藜芦醇得率，同时也促进白藜芦醇苷的转化。应用较多的是纤维素酶和糖苷酶，纤维素酶能够水解纤维，使植物细胞壁破坏，充分释放细胞内含物，而糖苷酶可水解白藜芦醇苷促进其转化。李梦青[10]将虎杖粗粉加入到纤维素酶和水中进行酶解，滤渣采取乙醇回流提取可获得白黎芦醇的收率高达1.5%。黄志芳等[11]采用纤维素酶、β-葡萄苷酶、复合酶提取虎杖中的白藜芦醇，得到复合酶的水解效果最佳，酶解后的提取物经分步溶解沉淀白藜芦醇粗品，含量可达65%，工艺稳定可行。1.3超临界C O 2萃取法 超临界CO 2萃取是以超临界状态下的CO 2流体为溶剂来提取分离混合物的过程，具有很强的溶解能力和渗透能力以及良好的流动性和传递性，正逐步应用于植物有效成分的提取分离及分析中。周锦珂等[12]采用超临界CO 2萃取虎杖中白藜芦醇，以95%乙醇作夹带剂，萃取物中白藜芦醇的含量可 2012884
大鼠系统解剖简述
大鼠系统解剖简述
第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮 和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺，大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对，胸部3对，腹部1对，鼠蹊部2对。个别的大 鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中，由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第 二章骨 一．脊柱大鼠的脊柱由57－61块脊椎骨组成，包括颈椎7、胸椎13、腰椎6、荐锥4、 尾锥27－31块。锥式C7T13L6S4Cy27 －31。骨性标志为第二胸椎，其棘突最 高，超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样，恒为7块，全无 肋骨相连，横突上具有横突孔，供锥动 脉通过。 2、胸椎13块，椎骨的长度由前向后逐渐增加（由 2毫米增加到4毫米），锥管的直径平 均为3.3毫米，较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块，每块锥体的长度比较一致，约6
－7毫米。锥管直径由前面的4毫米向 后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节，最前一节为胸骨柄，第二到第五 节称为胸骨体，最后一节为剑突，棒状 的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨 柄长约10毫米。 第三章肌 肉系统（省略） 第四章消 化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可 分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。 附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和 胰。 第一节消化管 一、口腔 1、舌全长约30毫米，不具有正中系带， 但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈－胸段长度约75毫米，腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米，食管外径约2毫米。 位置：食管主要是沿气管背侧走行，仅在颈部稍偏左侧。 一、胃 位置：横位于腹腔的左前部，其壁 面几乎完全为肝的左叶所覆盖。 大小：胃重为体重的0.5％，属单室 胃。
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量 摘要:采用高效液相色谱法测定了虎杖不同生长条件及不同部位的白藜芦醇含量?建立了以色谱柱为Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(35∶65,V/V),流速为0.8 mL/min,检测波长为306 nm,柱温为室温,进样量为80 μL 的高效液相色谱方法?结果表明,白藜芦醇浓度在2~100 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为99.1%,RSD=1.2%(n=6)?野生虎杖和组织培养虎杖白藜芦醇含量存在较大差异,虎杖不同部位白藜芦醇含量也存在较大差异,其中以野生虎杖根中白藜芦醇含量最高?虽然在不同培养条件下,虎杖的不同部位都含有白藜芦醇,但与野生虎杖根相比含量差距较大,不能代替野生虎杖根的药用价值? 关键词:虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法 Determination of Resveratrol in Polygonum cuspidatum by HPLC Abstract: The contents of resveratrol in different growing condition and different part of Polygonum cuspidatum were detected by HPLC. The separation was performed on Zorbax CB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) in methanol-water (V/V=35/65)with the flow rate of 0.8 mL/min and detected at 306 nm in room temper ature after injecting 80 μL sample. The linear range of resveratrol was 2~100 μg/mL with an average recovery of 99.1% (RSD=1.2%,n=6). The content of resveratrol in wild and tissue culture of Polygonum cuspidatum were different, and the contents of resveratrol in different parts of Polygonum cuspidatum also varied. The highest resveratrol in Polygonum cuspidatum was observed in wild plants. Though resveratrol of Polygonum cuspidatum differed in different culture conditions, the highest resveratrol content was detected in the roots of wild Polygonum cuspidatum, which indicated that the medical value of wild Polygonum cuspidatum was irreplaceable. Key words: Polygonum cuspidatum; resveratrol; HPLC 白藜芦醇(Resveratrol)又称芪三酚,现代药理研究证明:白藜芦醇具有抗肿瘤?抗氧化?抗菌?抗炎?抗自由基?保护肝脏?保护心血管和抗心肌缺血?免疫调节?降血糖?降血脂等作用[1,2]?另外白藜芦醇还有抗衰老?皮肤保健和美容功效[3,4]?朱鸿津采用HPLC法测定虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)中白藜芦醇含量,测定结果表明,虎杖根中白藜芦醇含量可高达千分之一,可作为白藜芦醇的提取原料[5]?然而,由于虎杖根的野生资源有限,大量采挖使野生资源日趋减少,近年来有一些利用组织培养快速繁殖虎杖的报道?文涛等[6]测定发现虎杖愈伤组织中也含有白藜芦醇,并对虎杖不同部位白藜芦醇含量进行分析,结果发现虎杖根?茎?叶中均含有白藜芦醇,其中多年生根中含量最高[7]?综上所述,虎杖不同生长条件?不同部位均含有白藜芦醇?准确测定虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量,将
HPLC法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究
HP LC 法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究 Ξ C AO Y 曹 庸1,2,于华忠2,张 敏2,李国章2,萧浪涛1 (1.湖南农业大学省教委植物激素重点实验室,湖南长沙410128;2.吉首大学湖南省林产化工工程重点实验室,湖南张家界427000) 摘 要: 白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一。由于白藜芦醇对光、热不稳定,本研究建立了一套简单而提取率高的从虎杖中提取白藜芦醇的样品处理方法,研究了高效液相色谱法测定虎杖白藜 芦醇的条件。采用色谱柱:岛津Shim 2park C LC 2ODS (150mm ×6.0mm ,i.d.5μm ),以乙腈∶水(体积比为41∶59 )溶液为流动相,流速1.0m L/min ,检测波长306nm 。在此条件下,样品溶液进样质量浓度范围在500～1000μg/ m L 时,白藜芦醇含量与峰面积呈良好的线性关系。检出限为10ng/m L ,且回收率高。 关键词: 虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法 中图分类号:T Q91;S789 文献标识码:A 文章编号:0253-2417(2004)02-0061-04 HP LC DETERMINATION OF RESVERATRO L CONTENT IN PO L YG ONUM CUS PIDATUM AND THE ST ABI LITY OF RESVERATRO L C AO Y ong 1,2,Y U Hua 2zhong 2,ZH ANG Min 2,LI G uo 2zhang 2,XI AO Lang 2tao 1 (1.Hunan Provincial K ey Laboratory o f Phytohormones ,Hunan Agriculture Univer sity ,Changsha 410128,China ;2.K ey laboratory o f Hunan Forest Product &Chemical Industry Engineering ,Jishou Univer sity ,Zhangjiajie 427000,China ) Abstract :Resveratrol is one of the m ost feasible medicine for preventing human cancer.It is unstable against light and heat.An extracting method was established in this study ,which is simple ,and of high yield.S tudy on theconditions of high perfor 2mance liquid chromatography for the determination of resveratrol content was investigated to be as follow :Shim 2park C LC 2ODS column (150mm ×6.0mm ,i.d.5μm ),m obil phase CH 3CH 2C N ∶H 2O (14∶59),flow rate 1.0m L/min ,wavelength 306nm.The lineal correlation between content of resveratrol and peak area is g ood.The lower detection limit was 10ng/m L.K ey w ords :Polygonum cuspidatum ;resveratrol ;HP LC 虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc )为蓼科蓼属小灌木,为传统中药。其根茎有祛风利湿,散痰定痛,止咳化痰的作用[1]。白藜芦醇的化学名称为反-3,4′,5-三羟基二苯乙烯,分子式C 14H 12O 3,分子质量228.25[2]。存在于虎杖、葡萄等植物中,虎杖中白藜芦醇含量远远高于葡萄等其他植物[3]。现代药理学试验表明白藜芦醇对人体具有许多医药保健作用。主要包括降低血脂[4],抑制血小板活性[5],对动脉粥样硬化、冠心病具有保护作用[6],对癌症具有预防作用[7～8],实验证明它对5种人体肿瘤细胞模型均有抑制作用[9],并具有雌激素样作用[10]。20世纪90年代以来,国外对葡萄酒中白藜芦醇的保健作 Ξ 收稿日期:2003-09-28 基金项目:湖南省科技厅重点科技攻关资助项目(03J ZY 3020) 作者简介:曹庸(1966-),男,湖南泸溪人,副教授,博士生,从事天然产物开发及生物化学的研究。 第24卷第2期2004年6月 林 产 化 学 与 工 业Chemistry and Industry of F orest Products V ol.24N o.2June 2004
白藜芦醇的研究现状及应用前景_李延华
!""!#$%"&’()*+#$%,!# -.)/*0(’1)/2 ＦｏｒｕｍａｎｄＳｕｍｍａｒｙ 白藜芦醇的研究现状及应用前景 李延华１!王伟君１＊!张兰威２!马 薇３!陈丽安１ "１．通化师范学院制药与食品科学系!吉林通化１３４００２#２．哈尔滨工业大学食品科学学院! 黑龙江哈尔滨１５００８６#３．东宁出入境检验检疫局!黑龙江东宁１５７２００$ 摘 要%介绍了白藜芦醇的资源分布及化学结构，阐述了其生理、药理活性及相应的营养保健功效及其在食品、化妆品及药品方面的 应用，提出开发富含白藜芦醇的植物，加快其有效地分离和纯化技术，增加临床应用，注重实用产品的研制，具有重要意义。关键词%白藜芦醇；分离；保健功能；应用 中图分类号%$%&’()文献标识码%*文章编号%"!3453"6, &&++!$ +",++-+,+)ＬＩＹａｎｈｕａ１，ＷＡＮＧＷｅｉｊｕｎ１＊，ＺＨＡＮＧＬａｎｗｅｉ２，ＭＡＷｅｉ３，ＣＨＥＮＬｉａｎ１ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＴｏｎｇｈｕａＮｏｒｍａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｔｏｎｇｈｕａ１３４００２，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ ＩｎｄｕｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００８６，Ｃｈｉｎａ；３．ＤｏｎｇｎｉｎｇＥｘ－ｉｍＱｕａｒａｎｔｉｎｅ，Ｄｏｎｇｎｉｎｇ１５７２００，Ｃｈｉｎａ） Ｔｈｅｒｅｓｏｕｒｃｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｗｅｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ａｓｗｅｌｌａｓｉｔｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏ－ ｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｈｅａｌｔｈｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｆｏｏｄ，ｃｏｓｍｅｔｉｃａｎｄｍｅｄｉｃｉｎｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄａｌｓｏ．ＴｏｐｒｏｍｏｔｅｃｌｉｎｉｃａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄＲ＆Ｄｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ，ｉｔｗｏｕｌｄｂｅｍｅａｎｉｎｇｆｕｌｔｏｅｘｐｌｏｉｔｂｏｔａｎｉｃｒｅｓｏｕｒｃｅｓｗｉｔｈｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｅｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ． ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｈｅａｌｔｈｙ；ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ 白藜芦醇作为葡萄、虎杖等植物的天然产物，可预防动脉粥样硬化、防止冠心病、降低血清和肝脏的脂质、抑制肝脏癌细胞组织变异［１－２］。目前，白藜芦醇成为抑制、治疗组织癌变和肿瘤最有前途的药物之一［３］，已被喻为新的绿色抗癌药物，被美国《抗衰老圣典》列为１００种最有效的抗衰老物质之一。研制天然、保健、无毒副作用、纯度高且成本低廉的白藜芦醇，并开发出富含白藜芦醇的食品、药品、化妆品等具有广阔的市场前景。-白藜芦醇的资源分布及化学结构 白藜芦醇（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ，简称Ｒｅｓ）又称芪三酚，化学名称为３，４，５－三羟基二苯乙烯（３，４，５－ｔｒｉｈｙ－－ｄｒｏｌｙｓｔｉｌｂｅｎｃｅ），是含芪类结构的二苯乙烯芪类、非黄酮类多酚物质［４－５］。目前已经在２１科、３１属、７２种植物中发现Ｒｅｓ，如葡萄科的葡萄属、蛇葡萄属，豆科的落花生属、决明属、槐属，百合科的芦醇属，桃金娘科的桉属，蓼科的蓼属等。存在Ｒｅｓ的植物多是常见的药用植物，如决明、藜芦、虎杖等，有的是食物，如葡萄［６］。 Ｒｅｓ存在形式主要有４种：顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇以及顺式白藜芦醇糖苷、反式白藜芦醇糖苷。后２种形式在肠道中糖苷酶的作用下可释放出Ｒｅｓ，反式异构体的生理活性强于顺式异构体，在自然界中主要以反式存 在［５，７］ ，其结构式如下： &白藜芦醇的提取’合成及检测技术２．１白藜芦醇的粗提’纯化 目前，生产和销售Ｒｅｓ的企业一般以天然植物为原料，从中提取、分离出Ｒｅｓ粗品，再进行纯化。粗提技术主要有机溶剂萃取法、碱提取法、酶提取法，微波辅助提取法、ＣＯ２超临界萃取、超声波辅助提取等新型方法也有应用。 纯化的目的主要是对提取Ｒｅｓ粗品中的白藜芦醇顺、反异构体及白藜芦醇苷进行分离，以获得反式白藜芦醇。常用的纯化方法有层析法、硅胶柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法［８］等。２．２合成方法制得白藜芦醇 由于Ｒｅｓ在植物中的含量很低，且提取成本高，所以利用化学、生物、基因工程等方法制得Ｒｅｓ已成为其开发过程中不可或缺的手段。Ｐｅｒｋｉｎ反应［９］，Ｈｅｃｈ反应［１０］，Ｗｉｔ－ｔｉｎｇ－Ｈｏｒｍｅｒ反应［１１］是较成熟的合成Ｒｅｓ的化学方法，得率分别为５５．２％，７０％，３５．７％。利用基因工程技术控制或改良Ｒｅｓ的生物合成途径来获得高产植物株系；利用诱变途径选育高产细胞株等方法可将Ｒｅｓ产率提高１．５￣３．０倍。２．３白藜芦醇的检测方法 常用的检测Ｒｅｓ的方法有高效液相色谱法、气－质联用法、毛细管电泳法、薄层荧光扫描法、紫外分光光度法。高效液相色谱法检测结果准确、精度高，但步骤繁琐、耗时长、成本高。气－质联用法检测耗时少、样品用量少、待测组分损失少，但如果不衍生化而直接进样，色谱峰拖尾严重，且处理后的样品容易带水。薄层荧光扫描法的检测灵敏度较低，适用范围较窄。紫外分光法操作简单、成本低，但检测 收稿日期%２００７－０４－２５ 作者简介%李延华（１９７９－），女，讲师，主要从事发酵食品与乳制品工艺学的研究工作；王伟君＊，通讯作者。 Ｒ＝Ｈ．ｔｒａｎｓ－Ｒｅｓｔｅｒａｔｒｏｌ Ｒ＝Ｇｌｃ．ｔｒａｎｓ－Ｐｅｃｅｌｄ４－２５Ｒ＝Ｈ．ｃｉｓ－ＲｅｓｌｅｒａｔｒｏｌＲ＝Ｇｋ．ｃｌｓ－Ｐｃｃｅｉｄ -+??
大鼠肝组织RNA提取策略与注意事项
第一部分RNA 提取策略 1、RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。针对它们我们应该戴帽子，口罩，橡胶无菌手套，在清洁灰尘少的地方提取RNA。我上面说了内源性RNAase污染才是关键，所以有些同志没有注意这些对外源性RNAase的防护RNA也提取的很出色。但是如果你运气不太好的话外源性RNAase污染影响很大的。 2、样品的取材我们抽提RNA往往都是需要其mRNA，而mRNA的表达量和细胞或者组织的生长状态息息相关，我们取组织块应该避免取到坏死组织，而细胞我们应该在其处于生长旺盛的时期收集（贴壁细胞消化要迅速，离心要稍为快些，甚至可以不消化下来直接进入裂解步骤；此外还可以采取先震荡敲击培养瓶的方法使细胞和培养瓶的结合下降，然后用吸管吹打培养基地方法把细胞吹打下来，这样细胞的代谢不会明显的受到抑制。注意在平时传代的时候就要注意观察细胞除了用胰酶消化下来以外是否还有其他比较简单的方法）（此外还可以把培养液倒掉后迅速的加入裂解试剂开始抽提ＲＮＡ）。 3、待提取样品保存方法这些保存方法温度从4度到零下196度不等，选择哪一种保存方法关键是要对这些保存方法的优缺点有清醒的认识。根据你需要的RNA种类可以做简单的分类。包括RNA病毒RNA ，mRNA（各种），rRNA 等其中最容易降解或者破坏的就是mRNA，最不容易损失的就是RNA病毒RNA （因为有蛋白壳保护）。超低温保存：特指液氮保存不管组织还是细胞如果需要其中的mRNA必须在液氮中保存，-70度等方法都是错误的方法，在很短的时间内或许可以，但是长期是不可能的。-20~~~-70摄氏度保存：RNA病毒的RNA 可以在这个温度段安全的保存。但是其产生的mRNA还是必须超低温保存。 4度保存：有特殊的保护试剂存在地情况下组织的保存：应该是离体后在1min 内就放入液氮或者保护试剂中。由于提取RNA对组织块有一定量的要求，大约100mg居多（脂肪细胞需要的量多的多，因为细胞是大大膨胀的），所以在取材前就需要明确到底你需要的组织大概多大是100mg，令少勿多。如果是取临床的标本，就应该带上液氮罐子，DEPC处理的器械，锡箔纸，线等在手术室外等候，标本一切下就尽快进行切割（大概100mg一块），包装（锡箔纸内），捆扎（方便在液氮罐子中寻找），迅速丢入液氮罐子中，最好是1min内完成（所以大家取材前一定要好好联系一下，不要到时候手忙脚乱的^_^）细胞的保存：比较麻烦些，所以大多都是直接提取RNA再保存。建议离心收集后用特殊保护试剂重悬后保存。 4、RNA提取提取RNA可以分为总RNA，mRNA，Virus RNA（RNA病毒）几类Trizol即异硫氰酸胍-苯酚法，这种方法的原理是：首先用强变性剂异硫氰酸胍裂解细胞，同时使核蛋白复合体中的蛋白变性，释放出核酸。释放出来的DNA 和RNA由于在特定pH时溶解度不同，分别位于整个体系中的中间相和水相，