双酚a
标准/法规学习摘要
?标准名称
食品接触材料和制品 - 塑料物质的限制–第13部分：食品模拟物中 2,2 –二（4 - 羟基苯基）丙烷（即双酚A）的测定
?范围
1、EN13130其中的文件，规定了双酚A在食品模拟物水，3％w / v的乙酸水溶液（即质量
浓度为30g/L的乙酸水溶液），15％V / V乙醇水溶液（即体积分数为0.15的乙醇水溶液）和精制橄榄油中的测定方法。双酚A含量水平表示为一毫克双酚A/千克食品模拟物。该方法适用于定量测定双酚A最低水平在0.2mg/kg ~ 0.7mg/kg。注意：该方法也适用于其它水性食品模拟物以及其他脂肪食品模拟物，葵花籽油和合成甘油三酸酯的混合物。
?原理
2、双酚A在水性食品模拟物的含量水平由高效液相色谱法（HPLC）和紫外分光光度法
（UV）测定。橄榄油试验样品通过水/甲醇的混合液提取并用HPLC分析所得溶液。校准是通过分析含有已知量双酚A的相关模拟物完成的，双酚A的确认是通过二极管阵列检测器得到。
试剂
4、试剂
备注：所有试剂应在公认的分析质量，除非另有说明
4.1、被分析物
2,2 - 双（4 - 羟基苯基）丙烷（双酚A或者4，4`-（1-甲基亚乙基）双酚或者4，4`-异亚丙基双酚），C15H16O2 ，分子量：228,28，纯度> 99％。
4.2、化学试剂
4.2.1 正己烷
4.2.2 甲醇
4.2.3 去离子水
4.3、溶液
4.3.1 萃取溶剂，甲醇/水= 1:1
称量100ml甲醇（2.2）和100ml水（2.3）混合
4.3.2 高效液相色谱的流动相，甲醇/水= 70:30
称量500ml甲醇（2.2）的和215ml水（2.3）混匀。
4.3.3 双酚A原液在甲醇中的限定浓度大致为0,38 mg/ml
称取精确到0.1mg大约37.5mg的双酚A（1.1）到100ml容积烧瓶中。使双酚A溶解在甲醇中并用甲醇（2.2）补至刻度。
计算在每毫升溶液中双酚A的浓度。
重复此步骤，以获得第二储备液
备注：该溶液可以被存储在一个密闭容器内于黑暗中在温度+20°C和-20°C之间最多3个月。
?需要的仪器、设施
5、设备
备注：仪器或设备项目只列出了它的特殊或特定制作规格，常用的实验室玻璃器皿及设备被认为是可用的。
5.1高效液相色谱仪，最好是配备有自动的20μl环喷射器，和连接到一个积分器的可变波
长UV检测器。
5.2高效液相色谱柱，从模拟物和/或溶剂开始使用能够从峰完全分离双酚A。
适当的操作条件，应根据测定时用的特定设备而建立。
备注：下面的色谱柱已经被发现为合适的
色谱柱：不锈钢250×4.6mm填充有C18的包衣的球形硅胶，粒径为5μm，（负载9％的碳和端基封端）
流动相：甲醇/水=70：30
流量：1ml/min
检测：UV 280 nm
5.3 机械式振动筛（涡）
5.4微型注射器，10μl，50μl和1000μl
5.5试管，体积10ml，大小为10cm×1.5cm。
?样品的数量和尺寸
6、样品
6.1 实验样品的制备
6.1.1 概括
食品模拟待分析的实验室样品应如EN13130-1中描述所得。样品应冷藏保存在+4℃的密闭容
器中，避光。那些要被分析的同种类型的相关食品模拟物的无分析物样品也可用于校准
6.1.2水溶液
转移约1mL的从迁移试验中获得的食品模拟物（见EN13130-1）到适合高效液相色谱进样的小瓶。
6.1.3橄榄油
称取1g±0.01g从迁移实验中得到的橄榄油（见EN13130-1），到试管（5.5）。用移液管添加3.0ml正己烷（4.2.1），拌匀，再用移液管加入2.0ml甲醇/水（4.3.1）。用机械振荡器混合振荡1分钟（5.3）。允许相分离30分钟。借助移液管的下部分回收水层并转移溶液倒入适合高效液相色谱进样的小瓶。
6.2空白样品的制备
按6.1描述中的同样的方式处理与包装材料接触的食品模拟物。
6.3校准样品的制备
6.3.1 水性食品模拟物校准样品
用微量注射器（5.4）转移0μl，20μl，100μl，200μl，300μl和400μl的标准储备溶液到一系列的六个25ml容量瓶中（4.3.3），并用相应的无分析物食品模拟物，水，3％w / v 的乙酸水溶液或15％V / V含水乙醇定容至刻度，彻底混匀。由此获得的校准溶液含有
0μg/ml和约0.30μg/ml，1.5 μg/ml，3.0μg/ml，4.5μg/ml或6.0μg（双酚A）/ml（食品模拟物）。
计算校准样品中双酚A的确切浓度微克每毫升对应多少毫克每千克。
注意：委员会指令90/128 / EEC号指令[1]规定，所有仿制品的比重通常应被假定为“1”。每升模拟物释放的物质毫克数将因此对应数值为每千克模拟物释放的物质毫克数，并考虑到在指令82/711//EEC [3]中规定，也对应数值为每千克食品释放的物质毫克数。
对于至少一个食品模拟物，使用所述第二原液重复上述过程（4.3.3）
6.3.2 橄榄油校准样品
称取1g±0.01g橄榄油到一系列的六个试管，并用微量注射器（5.4）分别加入0 μl，1 μl，4 μl，8 μl，12 μl和16 μl标准储备溶液（4.3.3）到试管中。由此所获得的校准样品含有0μg，约0.30μg/g，1.5μg/g，3.0μg/g，4.5μg/g和6.0μg（双酚A）/g（橄榄油）。
用移液管添加3.0ml正己烷（4.2.1），混合，再用移液管加入2.0ml甲醇/水= 1:1（4.3.2）。使用机械振荡器振摇（5.3）1分钟。允许相分开的。借助移液管的下部分回收水层并转移溶液倒入适合高效液相色谱进样的小瓶。
计算校准样品中的双酚A的确切浓度微克每克对应多少毫克每千克。
利用第二储备液（4.3.3）重复上述步骤。
?样品的制取、抽样、样品的储存
?测试条件
?测试步骤/过程
7 过程
7.1 高效液相色谱分析
当开始测量时，检查检测器的基线稳定性和响应的线性度。
检测器应能够在信噪比为3:1检测到色谱柱至少6ng双酚A。
必须保持整个高效液相色谱系统的操作条件一致的情况下测量所有的样品和校准溶液。各试验溶液应注入，至少一式两份。
备注：在5.2中给出的条件下双酚A的保留时间被确定为4，5分钟。
7.2校准
分析每个在6.3.1和6.3.2中重复进样的校准溶液。在280nm处测量双酚A的峰高或峰面积。根据测得的双酚A浓度（mg/kg）绘制校准溶液的标准曲线。
校准曲线应为相关系数为0.996或更高的直线。
两组由独立制备的原液制成的校准溶液应通过绘制所得的两个校准曲线在峰值比测量的基础上，在±5％范围内彼此进行交叉检查。
7.3测定的执行
分析按6.1和6.2所述制备的测试样品溶液，采用用于校准溶液的高效液相色谱条件。注入各一式两份测试样品溶液。测量双酚A的峰高或峰面积后读取双酚A的浓度，单位为毫克每千克，从校准曲线或从回归系数计算得出。
7.4高效液相色谱干扰
以下描述的方法，没有干扰在含水食品模拟物中被检测到。在从橄榄油中获得的提取物中，一些干扰会在0.3mg/kg的水平上被检测出来。其他批次的油可能会有不同程度的干扰组分。
如果零点校准样品（6.3）的分析表明，根据8.1.1计算所得的双酚A的峰区域对应小于
0.3mg/kg和副本的绝对面积不会因超过10％而不同，峰高或零点校准样品的面积应减去这些试验样品和校准样品和在7.2绘制所得的数据。如果该干扰超过0.3mg/kg，应使用标准加入法。
8、结果的表达
8.1 分析物水平的计算
备注：下面的计算是假设所有测量完全相同的质量或体积的水，3％w / v的乙酸水溶液，15％V / V含水乙醇和橄榄油。
8.1.1 图解测定法
按照7.3中所得的测试样品中计算出峰面积/峰高的平均值并从校准曲线图（7.2）读取测试样品中双酚A的的浓度。
8.1.2 回归参数计算法
如果回归直线方程是：y = (a ? x)+ b
y —双酚A的峰面积;
a —回归线的斜率，mg/kg
x —双酚A在食品模拟物的浓度，mg/kg;
b —回归线的截距
双酚A在食品模拟物的浓度由下式给出：
C BISfs =（ y - b）/ a
C BISfs是双酚A浓度，mg/kg
这两个计算方法可以直接得到的双酚A在食品模拟物中的浓度，单位是mg/kg。
回归参数计算法是应用中首选的方法。
8.1.3 双酚A特定迁移的计算
根据测试材料的填充体积、表面积和食品模拟比，由8.1.1或8.1.2测定得到的测试样品中的双酚A浓度，可能需要通过与特定迁移限制（SML）进行比较用数学变换方式来计算特定迁移值。指导见EN13130-1：2004，第13条。
8.2 精确性
8.2.1 验证
这个方法是在1994年至1995年通过三个实验室的合作试验预先评估得到的; 每个实验室内的实验室精密实验是在使用四个欧盟官方食品模拟物等限制条件下建立精确数据的，以及迁移试验是用聚碳酸酯6样品在40℃下分别接触15％V / V含水乙醇和橄榄油维持10天。
8.2.2 重复性
评价三个实验室内精密度试验结果，按照ISO5725，在4mg(双酚A)/kg(食品模拟物)的浓度下，产生了以下性能特点（实验室1/实验室2/实验室3）在95％概率水平：
重复性：r=0.06/0.05/0.40 mg(双酚A)/kg(水)
r=0.11/0.10/0.30 mg(双酚A)/kg(3％w / v的乙酸水溶液)
r=0.14/0.14/0.10 mg(双酚A)/kg(15％V / V含水乙醇)
r=0.11/0.38/1.1 mg(双酚A)/kg(橄榄油)
限值
8.2.3 检测限
按照DIN32645的实验室内的检测限（WDL），基于校准曲线的方法，被认为是在0.05mg/kg至0.7mg/kg的范围内，因此，该方法能够定量测定双酚A最低水平在0.7mg/kg。
9 证明
9.1 证明要求
如果双酚A的特定迁移，根据来自8.1中EN13130-1中给出的程序来计算出的分析物水平，超过该限制条件，e.g. SML= 3mg/kg，该测定所得结果应通过9.2描述的方法确认。该证明是定性的，在某种意义上说，它应证明出所测量的分析物的正确身份和没有干扰。对于定量应该依据8.1.3计算得出，其结果应取真值。
9.2 采用二极管阵列检测器通过HPLC分析确认
重新分析的测试样品，空白和校准样品是由6.1至6.3里面用相同的连接着二极管阵列检测器的HPLC系统测得的。双酚A可被识别为具有一吸收峰最大值在230和283nm。测试样品根据校准样品，必须提供相同的UV光谱。吸光度在220nm、230nm、283nm的测量下比率是100：108：25。检查峰纯度，记录光谱曲线在200nm至350nm范围内保留了双酚A峰的前部，顶部和尾部。如果峰值是纯粹的，重叠的光谱范围内峰的前部，顶部和尾部应该是相同的。如果这三个曲线被标准化它们会叠加在彼此的顶部上。
备注：轻微的干扰在橄榄油提取物进行分析时在双酚A的前峰值会被观察到，。这种干扰可能使双酚A的光谱出现偏差。
10 试验报告
试验报告应包括以下内容（如适用）：
a)所有必需的完整的鉴定样本，如信息化学类型，商标，等级，批号，厚度等；
b)塑料的形状，例如薄膜，瓶，罐等；
c)样品需要接触的食物的用途和类别，在已知的，并在可能的情况下食品分类编号；参考表EN13130-1表2：2004;
d)使用目的，条件，其中已知，如时间、温度；
e)测试的条件;
1）EN13130内部分使用;
2）用于食品或食品模拟物;
3）持续时间和温度，并与有关“在可预见的最坏的接触使用的条件”，参考表3 EN13130-1：2004;
4）区域和测试样品的几何形状;
5）食品或食品模拟物酌情使用量
f)标准方法的任何偏离，偏离的原因;
g)本文档所有部分的任何特定要求;
h)关于测试结果的任何相关意见;
i)任何确认程序的详情;
j)个别一式三份或一式四份的测试结果，以及这些结果的平均值表示为mg（双酚A）/kg(食品模拟物)。
?质量控制
?评估