风湿性疾病的实验诊断.ppt

感染性疾病实验室诊断技术及其研究进展_龙海燕

DOI ：10.7507/1002-0179.20150280作者简介：龙海燕（1989－），女，重庆人，在读硕士，E m a i l ：longhaiyan1989@https://www.sodocs.net/doc/4616080961.html, 通讯作者：冯萍，Email: fengp_62@https://www.sodocs.net/doc/4616080961.html, 网络出版时间：2015-05-14 15:16网络出版地址：https://www.sodocs.net/doc/4616080961.html,/kcms/detail/51.1356.R.20150514.1516.022.html 感染性疾病实验室诊断技术及其研究进展 龙海燕，冯萍 四川大学华西医院感染性疾病中心（成都 610041） 【摘要】 目前全球感染性疾病现状严峻，应用于感染性疾病诊断的实验室技术种类繁多，为了解感染性疾病实验室诊断技术及其最新进展，帮助临床工作者早期、快速、准确地诊断感染性疾病，降低感染性疾病暴发的危险性，及时启动感染性疾病的正确治疗等，现从病原学检测、免疫学技术、分子生物学技术、生物传感器、流式细胞术这几个方面对感染性疾病诊断技术进行综述。 【关键词】 感染性疾病；免疫学；分子生物学；生物传感器；流式细胞术 目前全球感染性疾病现状严峻，很多经典疾病卷土重来或出现了新特点，如新变异型克-雅病、重症急性呼吸综合征（SARS ）、新型冠状病毒感染、H7N9禽流感等。以前从未认识到的感染性疾病正在持续不断出现，包括人类免疫缺陷病毒（HIV ）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多重或广谱耐药的结核分枝杆菌、霍乱弧菌和登革热病毒所致疾病等[1]。从不断新发和再发的感染性疾病中可以看出，感染性疾病仍然给人类的生存带来了巨大的挑战，因此对感染性疾病的诊断技术提出了更高的要求。本文就现有的感染性疾病实验室诊断技术和最新研究进展进行综述，为临床工作者对感染性疾病的诊治 提供参考。 1　病原学检测 传统的病原微生 物实验室诊断技术以分离、培养、染色、生物化学鉴定为主，目前仍是许多病原体检测的“金标准”。传统人工病原学检测方法操作复杂、检测周期长（2～5 d ），干扰因素多，敏感性与特异性也有限。为了缩短传统细菌“鉴定”时间，微生物鉴定自动化技术也应运而生，如V i tek 系统、Mi c roScan 系统、Phoenix 系统、Mini API 系统等。自动化微生物鉴定系统是根据微生物代谢特点，如细菌分解底物后反应液中pH 值的变化，色原性或荧光原性底物的酶解，测定挥发或不挥发酸，或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌，鉴定时间约15～24 h 。Crowley 等[2]采用Vitek2自动化微生物鉴定系统和 Vitek2革兰染色阴性鉴定识别卡对707例G ?菌株进行鉴定，准确率98%，10 h 内可以出结果。此类鉴定系统大大缩短了检测时间，降低了劳动强度，为疾病的确诊争取了宝贵时间。 2　免疫学检测 免疫学技术是通过检测病原微生物的抗原或抗体来进行快速鉴定的技术。该方法简化了病原微生物的鉴定步骤，因此广泛应用于临床。感染性疾病传统的免疫学技术包括凝集反应、沉淀反应、中和反应等，如临床上常用的肥达反应、免疫固定电泳、抗链球菌溶血素O 试验等。近二十几年来，免疫学分析方法 发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，灵敏度和特异度显著提高。目前常用的标志物有放射性同位素、酶、荧光素、电子致密物、化学发光物质、DNA 等。 放射免疫沉淀实验是敏感性很高的免疫标记技术，精确度高且易标准化和自动化，但由于放射性同位素有一定的危害性，其临床应用受到一定限制。酶联免疫吸附试验（ELISA ）是目前免疫酶技术中应用最广泛的，由此发展出了阵列-ELISA （array-ELISA ），同时具备简便、高通量、快捷等特点[3]。时间 分辨荧光免疫分析及上转换发光免疫分析技术拥有灵敏度高、示踪物稳定、不受样品自然荧光干扰、无放射性污染、多标记等优点[4-6]。胶体金免疫层析技术操作简单、成本低、结果判读直观快速，虽然只能定性，但可用于基层单位，可进行现场诊断或大规模检测等[7]。免疫-聚合酶链反应（PCR ）是1992年Sano 等[8]建立的一种检测微量蛋白的免疫标记技术。它是用一段已知的DNA 分子来标记特定的检测抗体作为探针，然后用此探针与待检抗原结合反应，再通过 PCR 方法扩增吸附在抗原抗体复合物上的这段标记 ?综述?

感染性疾病检查

感染性疾病检查 感染性疾病是由病原微生物（细菌、病毒、真菌、支原体、立克次体、螺旋体）和寄生虫（原虫或蠕虫）感染人体后产生的疾病。实验室检查对感染性疾病的诊断具有特殊的意义。病原学检查包括病原体直接检出和病原体分离培养，可直接确定诊断。而免疫学检查抗原或抗体亦可提供重要依据。荧光定量PCR 检测快速、特异、灵敏，被用于感染性疾病的早期快速诊断。 第一节感染性疾病一般检测 一、白细胞常规检查 白细胞总数显著增多常见于化脓性感染（尤其是革兰阳性球菌），如流行性脑脊髓膜炎、败血症和猩红热等；某些病毒感染（如传染性单核细胞增多症）。革兰阴性杆菌感染时白细胞升高不明显甚至减低，如布鲁菌病、伤寒及副伤寒等。病毒咸染时白细胞通常减少或正常，如流行性感冒、登革热和病毒性肝炎等。蠕虫感染时嗜酸粒细胞通常增多，如钩虫、血吸虫、肺吸虫等。 二、血清C反应蛋白检验测定 【参考区间】成人和儿童：0~8. 0mg/L. 【临床意义】C反应蛋白（CRP) 是一种能与肺炎链球菌C多糖体反应的急性时相反应蛋白，由肝细胞合成，是一种经典的、灵敏的、急性时相蛋白，此反应不受放射治疗、化学治疗、皮质激素治疗影响。 （1) CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死、手术创伤、器官移植排斥、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，峰值可达500mg/L.病变好转时，又迅速降至正常。其升高幅度与疾病的程度呈正相关。 （2) 细菌和非细菌感染（病毒、支原体等）的鉴别诊断：细菌感染发生炎症后6~8小时CRP即可明显上升，CRP升高与感染的程度呈正相关。非细菌感染（病毒、支原体等）大多正常。 （3) 鉴别风湿活动期和稳定期：风湿活动期CRP含量可高达200mg/L.病情好转逐渐下降到正常，稳定期不升高。 （4) 鉴别器质性与功能性疾病：前者升高，后者不升高。 （5) CRP测定有助于孕妇并发感染的观察，对羊膜破裂早产并伴有绒毛膜炎的孕妇，CRP测定具有准确和早期预报作用。 （6) 恶性肿瘤患者CRP大都升高，如CRP与 AFP的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。 三、降钙素原测定 【参考区间】健康人群小于100ng/L. 【临床意义】降钙素原（PCT) 是一种糖蛋白，是降钙素（CT) 的前肽，在正常

感染性疾病病原的诊断策略(讲座)参考模板

感染性疾病病原的诊断策略 在我们的日常生活中，小到一个皮肤创卫，大到肺炎，肝炎，性传播疾病，都有感染声音的存在。在感染性疾病的诊疗过程中，对于其感染性病原体的诊断处于一个非常重要的位置，因为他既帮助我们确定疾病的病原，又指导我们后期的治疗与用药，可以说是一个不可或缺的因素。但我们都知道，造成感染性病原体的千差万别，他们都具有不同的生物学特性，这就迫使我们用策略和手段去寻找他们。随着科学技术的发展，微生物学的鉴定和专断技术也有了长足的进步 一、病原诊断策略的分类 如今病原学的诊断技术多种多样，从最简单的手工平板划线分离到最常规的自动化细菌鉴定仪，到最新的DNA测取技术，病原学的诊断技术几乎覆盖了医学微生物学、分子生物学、生物化学的方方面面，具有很长的交叉性，这个问题看起来似乎复杂，没有头绪，但是我们能够认真梳理还是很容易的理出一条主线，其实无论什么方法，都能归入两个大类。一类是以病原体表现型为基础的方法；另一类是以病原体基因型为基础的方法，所以表现型就是病原体直接表型出的一些性状，其物理学性状、生化反应特性、免疫学特性，特性可以通过平板划线分离，生化反应，血性型实验的检测出来。从分子微生物学的角度讲，表现型是病原体基因组，特别是一些活跃的基因经过转入翻译后的外在表现，虽然只能体现病原体基因组的部分特征，但是由于针对其实验技术成熟，操作方便，成本相对低廉，因此，仍然是当今病原体诊断的常规技术，相比之下以基因型为基础的方法更加接近病原体的本质，因为基因组的存在了病原组的全部遗传信息，以基因性为基础的方法大致可以分为基于退性基因的检测，以及基于测序的两大手段。前者主要针对退役性基因，这些基因包含了病原体的某些种系特征，该方法快速特异，但鉴于临床标本千差万别，有时会出现敏感性问题。而后者主要基于病原体ＤＮＡ剪辑系列，可以说做到了触及病原体的本质，是当今所有检测技术的基因标准，但是由于经济成本和标准化的问题还很难广泛推广，不可否认它将是未来诊断技术的趋势和发展方向。

感染性疾病是急诊科常见的疾病之一

降钙素原（PCT）急诊临床应用的专家共识 感染性疾病是急诊科常见的疾病之一，由感染引起的全身炎症反应综合征是脓毒症最根本的病理生理学改变。由于全身炎症反应的复杂性，至今尚无理想的诊断、分层、预后工具和效果显著的治疗方案。已有不少研究证实，脓毒症早期的病理生理改变是功能性的、可逆的。因此，早期准确地诊断脓毒症并监测是改善预后的决定性因素之一。降钙素原（procalcitonin，PCT）与感染和脓毒症的相关性很好，经过近20年的研究和实践，已经被推荐用于细菌感染性脓毒症的诊断、分层、治疗监测和预后评估。 1 PCT简介 1.1 PCT主要的生物学效应 PCT的生物学效应目前尚无明确的结论，主要的生物学效应有：次级炎症因子的作用、趋化因子的作用、抗炎和保护作用。 1.2 PCT的检测方法和稳定性 目前PCT可通过半定量和定量方法检测。半定量方法有胶体金标志检验，定量方法包括放射免疫分析法、免疫荧光法、双抗夹心免疫化学发光法、酶免法等。 PCT在血样中非常稳定，采血后在室温下放置24h，PCT质量浓度仅下降12％左右，如果在4℃保存仅下降6％。冰冻、抗凝剂、血清或者血浆、动脉血或者静脉血对检测结果的影响均微乎其微。如果需要长时问存放后检测，则需要低温或者冰冻保存血样。 1.3 PCT的正常值及参考范围 健康人的血浆PCT质量浓度低于0.05ng/ml。老年人、慢性疾病患者、以及不足10％的健康人血浆PCT质量浓度高于0.05ng/ml，最高可达0.1ng/ml，但一般不超过0.3ng/ml。脓毒症患者PCT的诊断界值为超过0.5ng/ml，严重脓毒症和脓毒性休克患者PCT质量浓度波动在5~500ng/ml之间。极少数严重感染患者血浆PCT水平超过1000ng/ml。 PCT质量浓度的临床意义和处置建议见表1。