FISH操作步骤

【实验相关试剂配制】

甲醛固定液

蛋白酶K储存液（20mg/ml）：称取0.1g蛋白酶K干粉溶于5ml 2×SSC （pH7.0）中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解，不要涡旋混合。200μl/管分装，－20℃储存，避免多次反复冻融。

盖玻片：无水乙醇与盐酸（36%）混合液（1:1）浸泡30min后，自来水冲洗，三蒸水冲洗，无水乙醇浸泡备用。

擦镜液：无水乙醇与乙醚混合液（体积比3:7）。

血液透析操作流程

血液透析操作流程 1、透析前准备 1.1物品准备：血液透析器、一次性透析用血液回路、穿刺针、透析护理包、生理盐水、碘伏、酒精、棉签、一次性手套、A、B 透析液等物品。 1.2准备机器，开机，机器自检。 1.3血液透析器和管路的安装： 1.3.1 认真检查血液透析器及透析管路有无破损，外包装是否完好，查看有效日期。 1.3.2按照体外循环的血流方向依次安装管路。 1.3.3按照无菌操作原则。 1.4密闭式预冲： 1.4.1 启动透析机血泵80 - 100毫升／分钟，用生理盐水先排净透析管路和透析器血室（膜内）气体，生理盐水流向为动脉端一透析器一静脉端，不得逆向预冲； 1.4.2将泵速调至200-300毫升／分钟，连接透析液接头与透析器旁路，排净透析器透析液室（膜外）气体； 1.4.3生理盐水预冲量，应严格按照透析器说明书中的要求进行；进行闭式循环或肝素生理盐水预冲，应在生理盐水预冲量500毫升达到后再进行； 1.4.4推荐预冲生理盐水直接流人废液收集袋中，并且废液收集袋放于机器液体架上，不得低于操作者腰部以下；不建议预冲生理盐

水直接流入开放式废液桶中； 1.4.5 冲洗完毕后再次核对，根据医嘱设置治疗参数。 1.5动静脉内瘘穿刺： 1.5.1检查患者自身血管通路：有无红肿，渗血，硬结：并摸清血管走向和搏动； 1.5.2选择好穿刺点，用碘伏棉签消毒穿刺部位： 1.5.3根据血管的粗细和血流量要求等选择穿刺针； 1. 5.4采用阶梯式、钮扣式等方法，以合适的角度穿刺血管；先穿刺静脉，再穿刺动脉，以动脉端穿刺点距动静脉内瘘口3厘米以上，动静脉穿刺点的距离10厘米以上为宜，固定穿刺针； 1.5.5根据医嘱推注首剂量肝素（使用低分子肝素作为抗凝剂，应根据医嘱上机前静脉一次性注射）。 1.6中心静脉留置导管： 1.6.1 准备碘伏消毒棉签和医用垃圾袋。 1.6.2打开静脉导管外层敷料。 1. 6.3 患者头偏向对侧，将无菌治疗巾垫于静脉导管下： 1 6.4取下静脉导管内层敷料，将导管放于无菌治疗巾上。 1.6.5分别消毒导管和导管夹子，敢于无菌治疗巾内。 1. 6.6先检查导管夹子处于夹闭状态，再取下导管肝素帽。 1.6.7分别消毒导管接头。 1.6.8用注射器回抽导管内封管肝素，推注在纱布上检查是否有凝血块，回抽量为动、静脉管各2ml左右。如果导管回抽血流不畅

6.1同学之间怎么建立信任感

心理委员专题培训——同学之间怎么建立信任感为了引导心理委员认识信任在建立沟通关系中的重要作用，帮助他们学习建立信任感的准则和方法，进一步增强他们与同学沟通交流的能力，6月1日，心理老师对心理委员进行了“如何建立同学之间的信任感”专题培训，并取得了良好的培训效果。 信任对学生来说是一种稳定的信念，只有信任别人才能换得别人的信任。同学之间建立稳定的信任感，需要做到以下几点： 一、赤诚相待，互敬互重。赤诚相待，这是同学之间所必须要有的，我们不能欺骗更不能不尊重同学和朋友。同样的，你敬别人一尺，别人才有可能敬你一丈。 二、做人大方点厚道点。同学之间难免经常会有所冲突和冒犯，这时我们就要拿出一点气节出来，对人对事宽容为怀，坦诚对待，不能斤斤计较。 三、互帮互助同学情深。同学之间一定要互帮互助，生活当中谁不会遇到一些小小的困难呢?往往患难才能见真情，朋友有难的时候我们更应该伸出我们的双手去帮助他们，这样才能让别人看出我们的感情，也才能加深同学之间的友谊。 四、不争口舌之力，不好面子之功。同学之间常常会有一些意见的分歧，当意见不一致的时候往往就会起冲突，年轻气盛的我们经常都不会轻易的善罢甘休，从而引发一系列的问题，也因此会让朋友之间的关系变得尴尬。

五、多多鼓励和赞美别人。得到赞美会让人信心百倍。如果你经常赞美别人，或者经常说一些鼓励的话，往往会获得对方的好感，感到你是一个懂得尊重的人，理所应当地能够获得别人的尊重，从而拉近两人之间的关系。 六、多多为朋友着想。有什么好的事情，或者有什么糟糕的事情，一定要让你的朋友第一时间知道，不好的事情提前知道的话，能够让他们及时的处理及时的做出相应的应对方案，有什么好的东西及时分享给你的朋友的话也能让他们加深对你的友好印象，从而当他们有什么好的事情的话，也能第一时间想到你。 通过本次心理健康教育专题培训，心理委员们明白了信任在心理工作中的重要性和必要性，学习了同学之间建立信任感的准则和方法，并准备将这些方法在生活和工作中具体实践，提升自己与同学交往沟通的能力，争取为班级心理工作做出更大的贡献。

FISH技术在白血病中的应用~

FISH技术在白血病中的应用 目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。在临床应用中，荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度，已在产前诊断、实体瘤（乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌）以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。 血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一，随着对疾病发病机制的深入研究，发现细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。但常规的细胞遗传学分析（CC）方法只能分析中期染色体，而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。而FISH技术弥补了CC在这方面的不足，因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。 在临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面： ①染色体异位形成的融合基因检测 如慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）的BCR-ABL融合基因检测，急性粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）M3中的PML-RARA融合基因检测和M2b中的AML1-ETO融合基因检测。对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断，还能帮助我们估计患者预后情况以及选择有效的治疗方案。 ②基因缺失的检测 一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。但是目前的染色体显带技术分辨率低，只有大于4.5 Mb的缺失才能检测到，而FISH分辨率高，可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的不足。在临床应用中，如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53基因缺失提示患者的预后很差，疾病进展较早，且对联合化疗不敏感，多数生存期仅为3个月。而同样在慢性淋巴细胞性白血病患者中，如检测到13q单一缺失则提示患者预后较好，中位生存期可达到133个月。 ③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测 目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation，allo-HSCT)是治疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。移植后动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化判定移植是否成功，对指导移植后治疗和预测复发具有十分重要的意义。FISH技术具有操作简便、快速及结果敏感可靠等优点，通过性染色体计数探针动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化对异性异基因造血干细胞移植后植入状态进行检测。 ④微小残留病灶（minima residual disease，MRD）的检测 白血病患者经化疗缓解后，体内的白血病细胞并未完全清除，仍残留一定数目的白血病细胞，这些残留的白血病细胞是导致复发的根源。通过对肿瘤细胞特异的染色体异常进行跟踪监测，可间接了解体内白血病细胞负荷，便于预测疾病进展和有无复发迹象。 下面我们介绍CLL、MDS、MM相关的FISH探针。

血液透析滤过操作规程

血液透析滤过操作规程 一、透前准备 1. 个人仪容仪表准备：衣帽整洁，淡妆上岗，戴好手套、口罩，精神饱满，仪表端庄。 2. 透析机准备：开机自检。将A 、B 液插头分别轻轻插入A 、B 液桶内。并检查是否插好。 3. 三查七对：三查：操作前自查七对：看医嘱本.①遵医嘱查对透析液种类②查对透析器机号（是否单超、调钠） ③查对抗凝剂种类④查对血管通路的建立方式⑤查对透析器.管道和安全线等一次性包装物品有无漏气.有无破损及有效期。⑥查对透析器的有效期或消毒日期。 4. 抗凝剂准备：配备与透析机相匹配的抗凝剂一支（将空安 放入污物盘内）肝素盐水连接内瘘穿刺针,同时注满穿刺针1支备用。 5、透析物品准备： ①将无菌包装的透析器和透析管道及安全线放置透析机上。 ②穿刺包准备：治疗巾一块，A 、V （已连接注满的肝素盐水）穿刺针两支，止血带一根，并同时备上一污物盘打包放置治疗车上。 ④胶布准备：将９条胶布粘贴于床头。 ⑤治疗盘的准备：无菌持物钳，棉签一包，棉球罐，静脉穿刺消毒物品一套。 二、透析器及透析管路的冲洗（根据模组提示安装及冲洗） 1. 安装透析管路和透析器： ①透析机自检通过后，打开无菌包装的透析器和透析管道，依次安装透析器、A 、V 透析管道，将静脉端固定于桶沿上，动脉端固定于夹持器上。 ②接水路：将透析液水路的供液管与透析器的静脉端透析液接口连接，排液管与透析器的动脉端透析液接口连接。 ③安装安全线 左列操作规程均显示在ONLINE 模组上 显示 操作 目的 提示 按↑↓选择治疗模式 注：不可选择HD 选择模式HDF/HD 按Enter 键 确认所选治疗模式 按Enter 键 确认连接安全导管 连接置换液管路？ 请等待 提兰点柄顺时针旋转90度 安装置换液安全导管 Connect Sub.tubing? Please Wait!

第三代试管Fish技术与A-CGH技术的区别

选择第三代试管婴儿，到底选择什么样的技术合适，选择什么样的技术成功率更高， 具体的需要根据每个人的年龄，身体情况，还有需求来选择，在泰国，做第三代试管 婴儿，用的最多的是FISH技术，还有A-CGH技术。 PGS-FISH早在1990年就已经作为胚胎染色体检查的一种手段，一开始，科学家相信 通过FISH筛选出正常染色体的胚胎可能会增加试管婴儿的成功率。他们在胚胎初期，即胚胎在试管培育过程中的第三天，从已经发育到6-8个细胞的胚胎中抽出1个细胞，从而检测5种染色体以检查出胚胎的性别。但这项技术在技术上使不完善的，只能筛 查部分的染色体，所以对于有其他染色体异常或有遗传病的患者则没有办法真正解决 问题。 另一种更完善的基因检测PGD-aCGH，即囊胚移植前基因检测，则披世多年，而且被 广泛用在美国的试管婴儿医院。因为用aCGH这种检测方法，我们可以检测到更精确 的数据，从而可以知道人体/胚胎全部的24种染色体是否全部正常，因此更能提高试 管婴儿的成功率。 aCGH是胚胎在试管中培养到第5天到第6天时，对已经发育成的囊胚进行46条（22对+X+Y）染色体进行全部检测，只要有一根染色体有问题，就不再被移植，做这个 检测的淘汰率较高，但剩下的都是精英。被移植的精英囊胚着床率及生育率极高，从 而大大降低了胎停及流产风险。说实话，做试管成着床但停育的人非常多，包括现在 35岁以上的女性自然怀孕的流产率也高，就是因为高龄产妇的胚胎染色体更容易发生变异，因此，aCGH应该被以下人群强烈考虑： 1）想追求更高的试管婴儿着床率及生育率 2）习惯性流产的人群 3）纯粹是为了下一代优生考虑

4）做性别选择 5）高龄女性 泰嘉运刘顾问(weixin：laney8）总结：由于国内最近去国外寻求性别选择的越来越多，我从实际经验中也总结到，成功率最高是做aCGH，而第二则是没有做性别选择，直接移植囊胚的，最后一名则是做FISH性别选择的。究其原因，主要原因是做FISH是第 三天胚胎还未长成囊胚时，被生生抽出一个细胞，对还未发育完善成囊胚的胚胎多少 有点伤害，而如果是培育到囊胚阶段的胚胎，生长的潜力是比较强的，移植着床率也 更高。 PGD-aCGH的时间表示例： 1/1 月经的第2-5天，开始打促排针 1/11 取卵（如果要做子宫镜检查的，可以这一天做） 1/12 受精情况D1报告（看你取的卵实际受精了多少个胚胎） 1/16 囊胚情况D5天报告（看第5天出了多少囊胚，没长到囊胚的则再培养到第6天）1/17 囊胚情况D6天报告 (胚胎在试管中只能长到这一天，不能到第7天。这一天还没发展到囊胚，则不可再用) 1/25-30 左右出aCGH报告，可看出哪些胚胎染色体在哪一条是不正常的，不正常的胚胎是不可以用的，因为会导致流产或者其他异常结果。正常的胚胎则着床率非常高。

荧光原位杂交技术FISH技术在疾病分型诊断中的应用

荧光原位杂交技术(FISH)技术在疾病分型诊断中的应用.txt铁饭碗的真实含义不是在一个地方吃一辈子饭，而是一辈子到哪儿都有饭吃。就算是一坨屎，也有遇见屎壳郎的那天。所以你大可不必为今天的自己有太多担忧。荧光原位杂交技术（FISH）技术在疾病分型诊断中的应用 生命科学的发展，生物技术的进步使我们对疾病本质的认识不断地深入，也使我们拥有更多新的治疗方法和药物应对疾病的威胁。如何准确有效地利用这些新的治疗方法和药物治愈疾病是我们迫切需要研究的内容。如何对疾病进行正确的分型和诊断却是上述工作的基础。只有全面地把握病情，并在此基础上进行准确的判断和分析，才能为病患制定及时有效的治疗方案。因此我们要求疾病的诊断工作能提供更为准确和及时的结果。而古老的“望、闻、问、切”和传统的常规手段已远远无法满足我们对疾病诊断的要求，迫切需要将新的技术引入疾病诊断领域。 荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。自20世纪80年代末，Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域后，FISH技术就在临床诊断及科研工作中得到了广泛的运用，显示出与一些传统技术相比的明显优势。 与传统的免疫组织化学法（IHC）相比，FISH具有良好的稳定性和可重复性。目前免疫组织化学法正广泛应用于肿瘤等多个领域的临床诊断。免疫组化的检测对象是疾病相关的蛋白。由于蛋白的表达和本身的构象受各种因素的影响很大（例如酸、碱和变性剂），检测条件的稳定性对检测结果至关重要。此外，免疫组化检测结果的判断依赖于检测者对显色结果的主观判断，对于一些弱阳性的结果，不同的检测者容易产生分歧。上述的因素都可能影响医生对病情的最终诊断。荧光原位杂交技术检测的对象是细胞中的DNA，致密的双螺旋结构使DNA可以历经千百万年而依然保持良好，其结构稳定，不易被环境条件影响，为荧光原位杂交技术的稳定提供了良好的基础。此外，荧光原位杂交结果的判定借助于对荧光的颜色判断和信号计数，客观地量化了检测地结果。如果借助于相应的FISH操作系统（例如Abbott-Vysis公司的Hybrit杂交仪和VP2000样本预处理系统）和染色体成像系统（例如AI公司的CytoVision）就能实现整个FISH操作的自动化，最大限度的降低操作者和检测者的主观因素，确保结果的准确性。 PCR由于灵敏度高，操作简便快捷是近年来应用比较多的基因诊断技术，但PCR诊断技术的假阴性和假阳性的比例较高，对同一样本也只能作一次分析，不能重复实验结果。随着探针技术的不断发展，FISH目前的灵敏度已经接近或达到PCR的水

12血液透析上机操作流程

血液透析上机操作流程 1.透析前准备： 物品准备 血液透析器、血液透析管路、穿刺针、无菌治疗巾、络合碘、棉签、止血带、手套、快速手消毒剂、5ml注射器、废液桶、弯盘。 透析用药准备 1.透析用药：低分子肝素钠，低分子肝素钙，肝素盐水100mL （0.5mg/ml）、生理盐水1000ml。 2. 急救用药：地塞米 松5mg、50%葡萄糖40ml、10%葡萄糖酸钙20ml。 3. 透 析液 2.透析机准备 1. 检查透析机电源连线是否正常。 2. 打开机器电源总开关,连接透析液接头。 3. 按照要求进行机器自检。 3.病人评估 1.. 查对姓名，床号。 2.评估患者透析间期有无特殊不适,观察有无出血,有特殊情况立即报告医生。3测量患者生命体征及体重。 4.评估患者内瘘震颤是否良好，内瘘侧肢体有无红肿，渗血，硬结。 4.血液透析器和管路安装 1.检查血液透析器及管路有无破损，外包装是否完好，检查有效日期、型号。 2.按照无菌原则依体外循环的血流方向依次安装管路。

血液透析器和管路的预冲 1.将所有管路和透析器安装在血透机上，夹闭所有侧管夹子。启动透析机血泵80—100ml/min，用生理盐水排净透析管路及其侧管内和透析器血室气体。生理盐水流向为动脉端→透析器→静脉端，不得逆向预冲。当生理盐水到达静脉壶时，按压液面上升键，使生理盐水充盈静脉壶，关泵。 2.将泵速调制200—300ml/min，连接透析器旁路，排净透析器透析液室气体。 3.一次性透析器预冲量为生理盐水1000ml。 5.冲洗完毕后根据医嘱设置治疗参数。 6.建立体外循环（上机） （1）查对姓名、床号 （2）血管通路准备 1.用快速手消毒剂擦手或更换手套。 2.检查血管通路有无红肿、渗血、硬结，内瘘震颤是否良好，并摸清血管走向。 3.根据血管粗细和血流量要求选择穿刺针。 4.选择穿刺点，用碘伏消毒穿刺部位。 5.选择绳梯式以合适角度穿刺血管，先穿刺静脉，再穿刺动脉，以动脉穿刺点距内瘘吻合口3cm以上，动静脉穿刺点的距离10cm以上为宜，固定穿刺针。6.根据医嘱推注首剂量肝素。 （3）用快速手消毒剂擦手或更换手套 （4）设置血泵流速100ml/分 （5）连接动脉端 （6）打开血泵

建立信任的7个方法

上回书说到有效授权的方法，但是还是觉得不够充分，因为信任如果不能建立，授权还是难以真正的有效。团队工作需要团队成员间的彼此信任才能真正有效运转，因此信任问题将是今后我们组织面临的重大问题，也是领导力的一大挑战。 再看看我们现在的沟通方式，组织即将淹没在通讯工具中，淹没在论坛、博客、电子邮件、语音邮件、传真与电话中。我们比过去都更需要信任和我们一同工作的人。“信任”听起来美好，不过行之不易。信任管理有赖于清楚的规则与原则。我们看看查尔斯对建立信任定义的七大原则： 1、信任不是盲目的。信任一个你十分不了解的人，一个没有长期观察其所作所为的人是非明 智之举。因此，大组织现在纷纷进行重组，组建许多小的单位，像ABB在全球有5000个业务单位，每个单位平均有45名员工属于他的核心员工。对于大型的官僚组织，即使不能这样，也可以考虑组建各种团队，通过团队的方式运作。在一个命令与控制型组织中，员工基本上都是角色占有人，不需要有创造力。那样的地方真像是一个牢笼，而在牢笼里，人们极少能得到成长。而且呆在牢笼里不仅乏味，而且还会榨取人的精力。 2、信任需要界限。无限信任实行起来是不实际的。组织里的“信任”其实指的是信心，对于 一个人的能力与他们对目标鞠躬尽瘁的信心。只要目标清楚，受信任的个人或者团队就可以放手去做。控制是借助评估结果的方式在事后进行，而不是在事前或事中。这种信任需要组织再造，组建能够明确组织目标，并把工作与其联系在一起的团队。 3、信任需要不断学习。固定的群体内容易建立信任，但是固定群体必须在适当的时机或顾客 有所要求的时候，有足够支持变革的弹性。换言之，群体必须时时掌握变化，不断探讨新科技与新的可能性，以求创造一个学习文化。因此，群体对人的选择十分重要，每个人必须能够自我更新，有能力追寻自我，并且视学习为人生持续不断的一部分，这些既是一开始新人他人的理由，也是成功的一大关键。 4、信任是很艰难的。信任就象玻璃，一旦碎了，永远也无法恢复原状。碰到不能信任的对象， 就得一再核查，让所有的控制系统发挥作用。因此，为了整体利益，个人必须离开。然而力图表现的压力，却可能是正面的。我们大多数人都需要期限或是目标，才能激发出自己最好的一面，在个人成长或创意两个方面，足够是永远也不够的。 5、信任需要密切的结合。在一个以信任为基础的组织中，自给自足的单位及是其不可缺少的 基石，负责交出指定的结果，不过，也可能衍生出自己的问题，造成组织中另有组织的现象。 因此，各小单位的目标必须与整体目标融为一体。企业的愿经、使命正是应付这个要求的做法。 6、信任需要接触。无论领导着多么能言善道，仍然是不够的。共同的承诺依然需要人际间的 接触才能使承诺有真实的感觉。矛盾的是，一个组织变得越虚拟，其员工越是需要会面。不过，这些会面不仅仅是与工作、过程有关，重点在于员工间能够彼此认识。

销售七步骤-建立信任

销售七步骤－建立信任 建立信任前的准备： 一、首先销售：是满足客户需要。 需求是什么： 马斯洛五层需求理论。 1、自我价值实现 2、尊重 3、社交 4、安全 5、生存 客户分类： 霸王型：先跟后带，你说的很对，你比专家还专家。我以一个专业的角度，我的建议是。。。。。 取悦型：强势成交，就他了，拿上吧。 保守型：保证安全，从众、畅销款、卖的非常好。 积极型：各项知识过硬。与众不同。就是不一样。

用提问的方式了解客户需求，再有针对性的用产品（事业）的利益点来匹配客户需要。 需求显性需求和隐性需求。 销售做的好不是“说的好”而是“问的好”。 销售的过程就是发现客户需要，解决客户抗拒的过程。 当客户有疑问推脱拒绝是很正常的事情。 客户的抗拒就是客户的提问，解答提问。 总之： 第一、 要满足客户需求。 第二、 要找产品的利益点。 只有客户相信了他的梦想可以透过产品来实现，他才购买我们的产品。 二、积极的心态准备。 80％销售成交都是在第4-11次跟进中完成的。 也就是说一次成功的销售通常会被拒绝3次以上。 销售铁三角： 缺一不可。 技能Skill 态度 Attitude 知识 Knowledge

而态度更是一切的基础。如果没有态度知识跟技能就豪无用武之地。因此积极的心态是必须的。 积极的人像太阳找到哪里哪里亮，消极的人像月亮初一十五不一样。 三、建立信任。 健康食品销售七步骤： 1、建立信任。 2、挖掘需求。 3、下危机。 4、提供解决方案。 5、异议处理。 6、销售促成。 7、完善服务。 平时学习专业知识，保持积极的态度。 见到顾客先寒暄、赞美等拉近彼此的距离，取得顾客的信任。 为什么要建立信任呢？ 信任是销售的第一步 只有相信我们的人才是我们的顾客。 没有信任就没有买卖。 销售过程是： 让顾客了解你——喜欢你——信任你（成交）——信赖（忠诚顾客）。 在商业行为中主要有三个层次的信任，由低到高依次是： 1、品牌信任。 就是对我们无限极品牌的信任。无限极积极传递健康理念，品牌价值

荧光原位杂交技术FISH

荧光原位杂交技术FISH 1 目的 通过FISH实验检测两条Brd2基因cRNA探针的效价。 2材料与仪器 2.1材料 件为：95℃预变性3 min；95℃变性30 s；50℃退火45 s；72℃延伸45 s；循环30次； 72℃再延伸8 min。 2) 将所有PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，采用凝胶回收试剂盒回收并纯化PCR产 物，并用微量分光光度计测定其浓度。 3) 进行体外转录反应合成Brd2 cRNA探针，20 μL体外转录反应体系如下：RNase

inhibitor 1μL，10×NTP dig labeling mixture 2μL，10×transcription buffer 2μL，Template DNA 13μL，RNA polymerase 2μL。 4) 37℃水浴孵育2 h，取0.5μL于1%琼脂糖凝胶电泳检测。 5) 加入2μL无RNase污染的Dnase I 37℃水浴孵育15 min来消化模板DNA。 6) 加入EDTA 0.8μL，加入5.6μL NH4Oac终止反应，再加入56μL无水乙醇并混匀，于 -80℃放置20 min。 7) 15000 r/min,4℃离心15 min，弃上清，加入700μL 80%的无水乙醇混匀，15000 r/min,4℃ 离心10 min沉淀RNA。 8) 干燥后用DEPC处理的水50μL溶解RNA。合成的两条探针经1%琼脂糖凝胶电泳鉴 定并用微量分光光度计测定探针浓度，于-80℃保存备用。 3.2荧光原位杂交实验检测探针的效果 1) 正常C57BL/6小鼠用1%戊巴比妥钠深麻后，依次以30 mL 0.01 mol/L DEPC-PBS和 100 mL含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液（PB）行左心室灌注，小心剥离脑组织，于4℃环境下用上述相同固定液进行后固定过夜，后将组织转移浸没于含30%蔗糖的PB溶液中脱水至沉底。 2) 最后取出组织用OTC包埋，冰冻切片机连续切片至需要的层面，切片厚度30 μm。 3) 选取上述脑组织切片于室温条件下经含有2%H2O2的0.1 mol/L DEPC-PB处理10 min 以阻断内源性过氧化物酶，再用0.1mol/L DEPC-PB室温漂洗10 min，接着用含 0.3%Triton X-100的0.1 mol/L DEPC-PB处理20 min，在用乙酰化液处理10 min，后 于0.1mol/L DEPC-PB中清洗2次，每次10 min，后加入预杂交液，60℃预杂交1 h 以封闭非特异结合位点。 4) 分别于两组切片中加入探针并使探针终浓度为1 μg/mL。于60℃杂交炉中恒温孵育 16-20 h，同时设立省略探针的空白对照，以上操作严格在无RNA酶环境下进行。 5) 杂交后组织切片置于wash buffer中60℃浸洗2次，每次20 min，接着切片在RNase buffer中室温孵育5 min，后加入终浓度为20 μg/mL的RNase，37℃作用30 min以消化未结合的cRNA探针。 6) 接下来恒温37℃条件下依次用2×SSC，0. 2×SSC溶液各浸洗切片2次，每次20 min， 再在TS7.5溶液中室温孵育5 min，后置于TBS溶液中室温封闭1 h，加入地高辛抗体（POD-anti-DIG,1:100）室温孵育过夜。

快速让客户信任你的4种方法

快速让客户信任你的 种方法 快速让客户信任你的4种方法

如何让客户对你产生信任感?有了信任感客户才会你的产品比较信赖， 才会有更多的签单机会。销售人员快速提升信任感可以从以下四个方面进 行有目的的训练。
不愿意当妇女的美女们，冲着半天假忍了吧！
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专业形象：让客户感觉你有安全感
专业形象不仅仅是你的那身行头，还包括商务礼仪、行为举止等诸多影响客 户感官信任的东西。比如准时开会、言出必践(哪怕像带份资料这样的承诺)。 这些东西之所以重要，在于客户对你有期望。在客户心目中，他希望自己即 将接见的这个家伙是专业的、对自己有帮助的。你必须满足这种期望。 如果客户第一眼看到你的时候心理有落差，后边再想弥补就太难了，因为你 只有一次机会给客户留下第一印象。
不愿意当妇女的美女们，冲着半天假忍了吧！ 说到这，大家就容易理解为什么那些外企的销售们大热天捂着西服、扎着领
带、满头大汗、人模狗样地去见客户了吧。其实他们也热!
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专业形象：让客户感觉你有安全感
我做销售的时候，内部流传 个潜规则：穿不穿西装， 个 我做销售的时候，内部流传一个潜规则：穿不穿西装，一个100万的项目会 万的项目会 差20万。当然，我不是鼓励销售们都穿西装，很多行业你穿了西装反而会和客户 疏远了，显得生分。 穿衣服的原则是得体。所谓得体，就是指让客户感觉你是来干正事的，不是 来度假的。你穿着正式，客户才觉得你能干正事。你头顶大草帽，身穿小背心， 腿着花裤衩，脚踏人字拖，谁跟你谈生意?
不愿意当妇女的美女们，冲着半天假忍了吧！ 一定记住，客户都是外貌协会的，只是他不看帅不帅，而是看你有多大担当，
你必须让客户感觉你是个有安全感的家伙。
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FISH技术全攻略

FISH（荧光原位杂交）技术全攻略 荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示核酸序列位置的方法。该技术问世与70年代中期左右，其曾多于与染色体异常的研究，近年来随着FISH探针种类的不断增多，使得该技术逐步应用于各种领域。该技术具有快速，安全，灵敏度高以及探针可长期保存等特点，目前已广泛应用于细胞遗传学，肿瘤生物学，基因定位，基因作图，基因扩增及分子诊断等领域。 1对于FISH操作来说，那些因素比较重要？ 在FISH中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率；光照影响了荧光染料的强度，因此探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬灭剂封片且避光保存；各种试剂pH也要精确达到要求，这也直接关系到FISH的稳定性。 2 如何保证FISH操作中的温度？ 最佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作，如Vysis的Hybrit FISH杂交仪。如果是手工操作，首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查，如水浴锅、孵箱，对其中不符合要求的要进行更换（疾病诊断中的探针要求温控精度在0.5度以内）。其次，要尽可能地保持操作环境温度在20度以上，对于在冬季进行的FISH操作尤为重要。此外对于需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。同时检测的样本最好不能超过4块。操作中的行动一定要迅速。操作者还往往忽视一些小部件的温度，诸如载玻片和盖玻片。特别是在冬季，盖玻片本身温度就低，加之探针的量本就不多（10ul），因此事先没有

血液透析机操作及流程试题

1、血液透析操作流程哪一项是正确的（）；A、开机自检--安装管路及透析器—密闭式管路预冲—物品准备—建立体外循环—血液透析—密闭式回血；B、物品准备—开机自检—安装管路及透析器—密闭式管路预冲—建立体外循环—血液透析—密闭式回血；C、物品准备—安装管路及透析器—开机自检—密闭式管路预冲—建立体外循环—血液透析—密闭式回血；D、安装管路及透析器—开机自检—物品准备—密闭式管路预冲—建立体外循环—血液透析—密闭式回血 2、下列哪一项不是血液透析操作前准备的物品（）； A、穿刺针 B、血液透析器及管路 C、一次性手套 D、灌流器 3、血液透析管路密闭式预冲完成后（）； A、尽快连接病人 B、5分钟后连接病人 C、15分钟后连接病人 D、30分钟后连接病人 4、责任护士血液透析上机操作血流量正确的是（）；A、120ml/min B、150ml/min C、＜100ml/min D、200ml/min 5护士进行密闭式回血操作，先夹闭血泵前动脉管路，打开动脉管路预冲侧管，将存留在管侧内的血液回输（）； A、10—20秒 B、20—30秒 C、40—50秒 D、50—60秒 6责任护士在进行密闭式回血操作过程中哪项不正确（）； A、回血过程中注意力集中，不能离开病人； B、全程生理盐水回血，严禁空气回血； C、回血过程中，可以使用锤子、血管钳等工具协助回血； D、拔针后，评估内瘘正常，病人方可离开血透室； 7、液透析结束后，透析机器外部如何消毒（）；A、采用清洁毛巾擦拭 B、采用消毒毛巾擦拭 C、采用500mg/L的含氯消毒剂擦拭；D、采用一次性湿纸巾擦拭。 8、血液透析机器外部被血液污染后，如何处理（） A、采用500mg/L的含氯消毒剂擦拭 B、采用1000mg/L的含氯消毒剂擦拭 C、采用1500mg/L的含氯消毒剂擦拭 D、采用2000mg/L的含氯消毒剂擦拭

建立团队信任的5种方法

建立团队信任的5种方法 明阳天下拓展培训 我们在工作场合需要专业上面的信任。专业上面的信任指我相信你能胜任这项工作，你会与大家分享相关的信息，而且你对整个团队有良好的动机。从广义上讲，这是对沟通、承诺以及能力的信任。 １、坦率地解决问题 像优秀的敏捷团队一样紧密工作，每个人的个性就会不可避免地凸现出来。信任的建立依赖于团队成员具备相当的勇气去与“给他们带来麻烦”的人进行坦率的沟通，而不是压根不与对方沟通，就直接找到经理大倒苦水。Esther 认为： 当人们不知道如何处理不快的对话……或者认为维护工作关系与他们无关的时候，团队的信任就受损害了。这是为什么人们需要一个讨论人际反馈的框架。 ２、分享相关的信息 换句话说，要敢于说出你的想法。如果你不赞同，说出来。当然，有建设性地说出想法对有效地沟通是很重要的，可以去想想如何才能做到，但不管怎样，说出来。就像Esther总结的： 当团队里某人在讨论问题的时候保留自己的观点和想法，之后又批评说“我认为这主意从头就是错的”。其他团队成员就会觉得措手不及。这伤害了彼此的信任感。

３、信守承诺，当不能守诺时提早告知 非常简单，当事态发展不合计划时，尽力做到透明和提前告知。尽管如此，可以参考#4，减少这种意外的发生频率。 ４、不同意就说不 抛弃那些通常认为的“对每个请求必须都答应才算团队精神”等想法。Esther 建议： 没有原则的说“是”，只会让其他人不再信任你的言词。如果你从不说“不”，你说“是”又能说明什么呢？ 这看上去有点自相矛盾，但是要建立彻底的信任，有时就需要承认你并不是什么都懂。 ５、把你知道的和你不知道的都展现出来 简单地讲，就是把自己掌握的信息和别人大方分享，可以意识到哪些东西自己不知道，并对其保持开放的心态。 信任是人们普遍讨论的东西，但能有效地做好这一点的团队却不多见。 本文转自明阳天下拓展培训官网，转载请注明出处

PNA-FISH技术

医学科学设计与研究作业 姓名：王祥璞 学号：20166020268 班级：16届口腔基础医学

检测并定位牙周致病菌的创新型方法：PNA-FISH技术 Luzia Mendes 、Catarina Ferreira、 Miguel Goncalves Pinto 均毕业 于波尔图大学牙科学院的牙周部。 Rui Rocha、Andreia Sofia Azevedo 、Nuno Filipe Azevedo毕业于波尔 图大学工程院化学工程系的能源、生物科技、环境、工艺学实验室。 关键字 PNA-FISH技术（肽核酸-荧光原位杂交技术）、组织浸润、伴放线放线杆菌（Pg）、牙龈卟啉单胞菌(Aa)、牙周疾病 摘要 目的：我们的目的是通过应用FISH(荧光原位杂交技术)开发肽核酸（PNA）探针，用以检测龈下菌斑和牙龈组织中的伴放线放线杆菌以及牙龈卟啉单胞菌，并对其位置进行定位。 方法：针对每种微生物设计各自的PNA探针，优化之后的PNA-FISH方法 可以使得每种微生物和它们各自的探针（也就是PNA-FISH复合物）同时杂交。在对Pg和Aa代表菌株进行测试之后，PNA-FISH方法就可以用来对患有重度牙 周炎的患者收集的龈下菌斑和牙龈样本中的微生物进行监测。 结果：对于（Pg PNA1007和 Aa PNA235）两种探针而言最佳的杂交环境是59℃ 150分钟。Pg PNA1007探针和 Aa PNA235探针的特异性和敏感性分别都 达到了100%和99.9%。临床样本的结果表明PNA-FISH方法可以监测并区分位于龈下菌斑和牙周组织内混合微生物群中的目标细菌。 讨论：这项研究为监测并定位临床样本中的Pg和Aa细菌提供了一种新的高 精度的方法，并且仅需要短短的数小时。通过使用这种方法我们就可以观测微 生物菌落中的这些菌种在牙周袋内的空间分布，并且在活体牙龈组织中首次应 用了FISH（荧光原位杂交技术）技术。 1.介绍 牙周炎是由易感个体的龈下菌斑和宿主防御系统之间的失衡所导致的。过 去十年来有关牙周膜的研究都非常的重要，然而，因为多种微生物复杂的性质 以及进行体内研究的困难，有关科研和诊断目的方面的性质依然具有挑战性。 现代的分子生物学方法已经取代了传统的培养方式，并且提供了一些新的资源，这些资源不仅仅可以区分单一的微生物，还对所有具有潜在致病性的群体也具 有非常的重要作用。 在这种情况下，生物膜研究中FISH（荧光原位杂交技术）的应用得到了重视，因为它可以通过标记的DNA探针和细菌核糖体RNA进行杂交对微生物进行 原位鉴定。一些人已经通过使用这项技术在体内观测到了龈上、龈下牙龈生物 膜中牙周病原菌的空间分布，以及他们入侵宿主上皮细胞的能力。

血液透析装置常规操作规程

血液透析装置常规操作规程 1、开主电源开关，将透析液吸管分与透析液A、B 桶联接 2、安装透析器及血液回路至透析装置上。 3?、用0.9%注射用生理盐水500ML予冲血液回路支脉端、肝素管、动脉壶、透析器、静脉壶，并排气； 4. 、按照仪器提示操作仪器，根据医嘱设定目标除水量、除水速度、会素维持量、机温36 －37 摄氏度之间，设置气泡监测、动脉负压监测于工作位； 6、无菌操作下穿刺内瘘动脉，见回血后，排气，接通动脉穿刺针管口与血液回路动脉端口 并固定。开血泵80ML/MIN,待血液上行至肝素管前时，快速注入肝素首次量，并确定肝素维持量。7、穿刺内瘘静脉，排气。当血液流至静脉壶时，关血泵。消毒血液回路静脉端管口，排气，夹紧止血钳。排尽空气，连接静脉穿刺针管口与血液回路静脉端口。检查全路通畅，固定稳妥。 8、开血泵由小至200ML－300ML/MIN 之间，按“开始”键，设定监测静脉压及液压的报警限项。调节器整透析器的动脉端向上； 9、再次检查各项设定值，穿刺部位无渗血，固定方法正确、无缠，血液回路通畅，拧紧各连接口，检查各止血钳到最紧部位。经第二人核对无误，确认透析开始； 10、测量病人血压、脉搏无异常，登记在透析记录纸上； 11、透析过程中每小时监测血压，发现异常立即报告医生，随时对症处理。遇故障及时排除。保证透析顺利进行，除水准确无误。

血液透析装置日常维护保养及使用安全事项 1、个人透析机及管路：每日透析后消毒一次，时间 1 小时，浓度：原液5%金星消毒液，入 机后稀释成1000PPM消毒后用反渗水冲洗30分钟，次日透析前冲选30分钟，每周一次用枸椽酸清洗。 2、集中供液系统及管路：每日透析后消毒一次，时间6090 分钟，浓度：原液2.5%金星消毒液，入机后35 倍稀释，消毒后用反渗水冲洗1 小时，次日透析前冲洗45 分钟，每周二次用枸椽酸清洗 3、水处理系统：RC水24小时红外线照射杀菌，每月用浓度5%畐尔马林消毒一次，隔月用枸椽酸清洗一次。 4、A液、B液桶及与透析液接触的容器每周一次1%畐尔马林泡24小时。 5、室内每日红外线消毒一次，每月进行空气培养。 6、室内空气消毒（畐尔马林40ml/+pp 粉30%）/m3 熏24小时。 7、透析机及管路浓度为5%畐尔马林每月消毒一次。 8、每6 个月联系资装办维修人员对输液泵进行全面保养、检测 9、做好仪器使用及保养的记录，以便核查。

和客户建立信任关系的三个方法

和客户建立信任关系的三个方法 和客户建立信任关系的三个方法：和客户建立信任关系的方法一、当好客户的知己 主动热情：热情犹如阳光，会快速融化我们和客户之间的陌生感，营造出一种好的氛围。这就要求我们，一方面，见到客户以后要主动、热情打招呼，同时语调要爽朗、厚重，不能有气无力;另一方面，要表达出见面以后喜悦的感受，比如：你好，王总，很荣幸见到你，同时我也感觉特别开心。 巧用称呼：实际业务过程中，至少有50%以上的拜访发生在非正式场合，这就意味我们对客户的称呼不能总是那么官方和正式，否则容易让客户感觉疏远，比如可以尝试一些非正式的称呼，比如：刘哥、张姐、兄弟、哥们……，运用得当的话，会让客户感觉舒服和亲切，从而拉近彼此的距离。 善选话题：话题选择上，初期切入时，可以选择一些热点话题，近期的比如：股市、拐卖儿童该不该判死刑;中期深入时，要选择一些客户关心或喜欢的话题，比如：做电商的客户更喜欢政府对互联网的政策，处于转型拐点的实业客户更关心传统实业如何转型;后期收尾时，可以找到一些双方共同在意的话题，比如：产品本身或者是曾经相似的经历，从而找到更多的共鸣。 移情聆听：移情不是同情，而是从情绪和理智上双向理解客户并接纳客户，移情的基本步骤是：首先，抛去成见，把自己放

在客户的角度上;其次，通过复述和确认，理解客户的思维和感受，在充分理解的基础上，表达自己的观点和情绪;比如：客户抱怨：你们的产品有时挺让人烦的!你可以说：遇到产品中有没达到预期的地方，确实容易让人产生烦躁的情绪，我有过同样的经历，也会同样烦躁，您能不能告诉我，是因为我们产品的那些部分让您烦的? 和客户建立信任关系的方法二、打造属于自己的个性标志 设计自己的标志性动作：独一无二的标志动作会增加你本身的记忆点和魅力，比如丘吉尔的v字型手势、nba球星艾弗森的侧耳倾听、张学友的兰花指都让人印象深刻。在设计标志性动作的时候要注意，第一、动作本身要具有正面意义，同时贴合自身性格，比如：你不能说你的标志性动作是对人竖中指，那简直是在找打;第二、动作要简洁易展示，比如：你不能说你的标志性动作是打完一整套咏春拳，那样的话，估计等你打完拳，客户都睡着了;只要符合以上特点，想要设计什么动作就要看你自己的喜好了。 佩戴标志性饰品：标志性饰品是什么?是曾荫权的蝴蝶结领带!是叶茂中从未摘过的帽子!是王家卫一直戴着的墨镜!是让人无法忘记的鲜明记忆点!我认识的一个销售员，他给自己设计的标志性饰品，是经常戴一条红色领带，以至于到后期，尽管一些客户都不知道他的全名，但都会说：那个带红色领带的小李。小李成功打造了属于自己的独一无二的客户记忆点。 和客户建立信任关系的方法三、巧妙呈现实力 巧讲客户：人是社会动物，因而都具有从众性。所以，适当讲一些自己做过的一些比较成功的客户，会很大程度上刺激客户

血液透析滤过操作流程

血液透析滤过操作流程 1、物品准备 血液透析滤过器、血液透析滤过管路、安全导管补液装置、穿刺针、无菌治疗巾、生理盐水、一次性冲洗管、消毒物品、一次性手套、一次性护理包、透析液等。 2、开机自检 2.1 检查透析机电源线连接是否正常。 2.2打开机器电源总开关。 2.3按照要求进行机器自检。 3、血液透析滤过器和管路的安装 3.1 检查血液透析滤过器及管路有无破损，外包装是否完好。 3.2查看有效日期、型号。 3.3按照无菌原则进行操作。 3.4安装管路顺序按照体外循环的血流方向依次安装。 3.5 置换液连接管安装接曼置换液流向顺序安装。 4、密闭式预冲 4.1启动透析机血泵80—lOOml/min用生理盐水先排净管路和血液透析滤过器血室膜内、气体。生理盐水流向为动脉端→透析器→静脉端，不得逆向预冲。 4.2将泵速调至200~ 300ml/min，连接透析液接头与血

液透析滤过器旁路，排净透析器透析液室膜外、气体。 4.3 机器在线预冲通过置换液连接管，使用机器在线产生的置换液，按照体外循环血流方向密闭冲洗。 4.4生理盐水预冲量应严格按照血液透析滤过器说明书中的要求；若需要进行闭式循环或肝素生理盐水预冲，应在生理盐水预冲量达到后再进行。 4.5 推荐预冲生理盐水直接流入废液收集袋中，并且废液收集袋放于机器液体架上，不得低于操作者腰部以下；不建议预冲生理盐水直接流入开放式废液桶中。 4.6 冲洗完毕后根据医嘱设置治疗参数。 5、建立体外循环上机、 5.1 血管通路准备 5.2动静脉内瘘穿刺 5.3检查血管通路：有无红肿，渗血，硬结；并摸清血管走向和搏动。 5.4选择穿刺点后，用碘伏消毒穿刺部位。 5.5根据血管的粗细和血流量要求等选择穿刺针。 5.6采用阶梯式、纽扣式等方法，以合适的角度穿刺血管。先穿刺静脉，再穿刺动脉，动脉端穿刺点距动静脉内瘘口3cm以上、动静脉穿刺点的距离lOcm以上为宜，固定穿刺针。根据医嘱推注首剂量肝素使用低分子肝素作为抗凝剂，应根据医嘱上机前静脉一次性注射、。