骨髓间充质干细胞及其向神经元细胞分化的研究进展_张俊山

实用医学杂志2012年第28卷第17期

早期的干细胞研究主要集中在骨髓造血干细胞（hematopoietic stem cell ，

HSC ）上。现在发现骨髓中除了造血干细

胞以外，还存在一类骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells ，BMSCs ）。

BMSCs 是与HSC 截然不同的一类干细

胞，具有自我更新和多向分化的潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞、成肌纤维细胞、软骨细胞、内皮细胞、心肌细胞，神经元样细胞［1－2］。在新近的研究中，人们还发现它可以向内胚层及外胚层的细胞分化

［3－4］

，具有很强的可塑性。现有研究指出BMSCs 可促进离体培养的小鼠卵母细胞的存活、发育及成熟［5］。BMSCs 还易被外源基因转染和表达，因而可能是细胞治疗和基因治

疗的理想靶细胞［6－8］。

1间充质干细胞的发现和来源

1987年Friedenstein 等［9］发现在培

养皿中培养的贴壁的骨髓单个细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。

骨髓中存在大量的MSCs ，是

BMSCs 研究的主要来源。实验证明，机

体内除了骨髓外，在脐血、外周血中也存在有MSCs ［10－12］。但也有学者认为，外周血只能产生非融合的贴壁细胞层，并且表达造血细胞的表面标志，所以外周血并不是MSC 丰富的来源。有研究显示脂肪组织也是MSCs 的来源之一［13］。另外，在造血系统以外，从骨滑膜组织、胚胎、成人以及老年人的肌肉、真皮中也可分离得到MSCs 。近年来，有研究显示MSCs 存在于出生后的所有器官和组织。

2BMSCs 的分离培养

目前，还没有一种方法被视为是

筛选BMSCs 的标准方法。但是，综合操作难易程度、所获细胞的纯度和费用

等诸多因素，常采用的是全骨髓贴壁筛选法与密度梯度离心法相结合的方法。因为密度梯度离心法所得细胞的纯度较好，但由于加入了有毒性的淋巴细胞分离液和多次的离心操作，使得细胞活力下降［14－15］；全骨髓贴壁筛选法细胞杂质细胞较多，纯度不够。故多采用这两种方法相结合。

3

BMSCs 的鉴定

BMSCs 具有多种标志，非单一性的特点。因此目前对BMSCs 主要是通

过将其形态学特征、表面标志及其向骨、软骨、脂肪及神经等多方向分化功能多方面结合起来鉴定。

3．1形态学鉴定体外培养的骨髓来

源的间充质干细胞贴壁生长，尤其易贴附于塑料器皿，至长梭形样生长，细胞密度较高时排列成漩涡状或放射状［16］。

3．2根据细胞表面标记进行鉴定利

用流式细胞仪的研究显示BMSCs 表面标志物具有非专一性，主要包括以下几类：（1）黏附分子，如CD44、CD54、CD102

doi ：10．3969／j．issn．1006-5725.2012.17.063作者单位：063000

河北联合大学附属

医学院骨科（张俊山，张柳）；050000

石家

庄市，河北医科大学附属医院骨科（田发明）

通信作者：张柳

E-mail ：zhliu30＠

sohu．com

骨髓间充质干细胞及其向神经元细胞分化的研究进展

张俊山

田发明张柳

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实用医学杂志2012年第28卷第17期

等；（2）生长因子和细胞因子受体，如IL-1R、IL-3R、IL-4R等；（3）整合素家族成员，如CD29、CD49a、CD49b、CD49c等；（4）其他，如CD90、CD105等。但是，BMSCs既不表达造血细胞的表面标志，如CD3、CD4、CD8等；也不表达与人白细胞抗原识别有关的共刺激分子B7-1、B7-2及主要组织相容性复合物（major histocompability complex，MHC）Ⅱ类分子等。总之，目前国内外学者尚未发现BMSCs具有特异性的表面标志物［17－18］。

3．3根据多系分化潜能进行鉴定体外扩增培养得到的BMSCs已经证实其具有很强的多系分化潜能。其中成骨、成软骨、成脂肪分化是BMSCs作为骨髓基质组织来源的间质干细胞最基本的特征，而且对这3种组织细胞体内外分化的研究已经得出稳定的体内外诱导条件，并且已证实有很好的重复性。在体内，BMSCs向成骨、软骨和脂肪细胞分化受多种细胞因子及信号通路调控，包括骨形态发生蛋白、胰岛素样生长因子和Hedgehog蛋白、Wnt蛋白等［19］。

4间充质干细胞的免疫学特征

BMSCs表达高水平的MHCⅠ类抗原，不表达MHCⅡ类抗原，低表达CD86，不表达CD80，所以机体对外来BMSCs不易产生免疫应答，因为只有在T淋巴细胞识别了BMSCs上的MHC类抗原后，才能对抗原产生免疫应答；再加之T淋巴细胞对BMSCs的表面标志识别能力差，BMSCs易于逃避机体的免疫监视，所以BMSCs具有较低的免疫原性。有研究表明，T细胞与BMSCs共培养时T细胞增殖明显受到抑制。同时，BMSCs还有抗炎、免疫增强及调节免疫反应的作用，也能调节异体移植的免疫耐受，亦具有传递基因的能力［20］。

5BMSCs胞向神经细胞诱导分化5．1化学诱导目前体外诱导BMSCs 向神经细胞分化的主要试剂有两大类：一类化学试剂，主要包括：抗氧化剂、脱甲基试剂、环磷腺苷试剂、视黄酸等；一类生长因子，包括神经生长因子，表皮生长因子，成纤维细胞生长因子，脑源性神经营养因子等。Woodbury 等诱导人和大鼠BMSCs分化为神经元样细胞和神经胶质细胞。Tzeng等双丁酰环磷腺苷和神经胶质细胞衍生营养因子联合诱导MSCs，预诱导后细胞

呈现神经元样形态，通过免疫组化和

WesternBlot检测到其表达神经元标志

物。虽然以上体外实验诱导分化产生

的神经元样细胞具备可兴奋性，但和

真正的神经元还有很大差别［21］。体内

实验研究也发现，BMSCs可在体内神

经组织中分化为神经元样细胞，诱导

后的细胞可表达神经元特异性烯醇化

酶、神经丝蛋白、巢蛋白等，阳性表达

率近80％［22］。

5．2生物诱导通过与神经细胞或组

织共培养方案诱导，或称之为生物诱

导，以区别于以上各种化学诱导剂。有

学者将BMSCs与海马脑片共同培养

后，BMSCs可分化为神经元样细胞。

Zurita等研究也发现，BMSCs与Schwann

细胞共培养4h后即呈现nestin阳性，

72h后强表达神经元标志物并可维持

2周。最近shichinohe等［23］将表达荧光

蛋白的BMSCs与新鲜小鼠脊髓切片共

培养48h后荧光显微镜下观察，发现

BMSCs丛集且形成神经样轴突，并表

达神经元特异性微管蛋白l。以上试验

表明，在这两种细胞共培养过程中，

神经元可以提供给BMSCs分化所必

需的因子，并且细胞间的相互接触在

BMSCs向神经元的分化过程中发挥着

重要作用。

6间充质干细胞治疗神经损伤现状

利用BMSCs移植治疗脊髓损伤已

引起众多学者的关注，希望通过移植

干细胞或基因修饰使干细胞表达外源

性基因，然后将其移植到受损部位，从

而分泌大量的治疗性神经营养因子，

填充损伤区，抑制瘢痕组织和胶质细

胞的过度增生，以防止神经细胞死亡

并促进神经再生［24］。Deng等［25］联合氯

化铝和间充质干细胞移入脊髓损伤的

大鼠，结果发现后肢运动功能明显改

善。Shi［26］将肝细胞生长因子基因修饰

的BMSCs经鞘内注射后，短暂性脊髓

缺血损伤的运动功能大大改善，效果

明显优于单独细胞移植。其作用机制

是神经营养因子修饰BMSCs后，可以

通过表达该基因，并保护神经细胞。

Mahay等［27］从大鼠骨髓分离MSCs与

脊髓背根神经节共同培养进一步支持

了BMSCs可以分化，证明具有Schwann

细胞样神经营养作用。Wang等［28］通过

体外联合培养模式及活体系统大鼠坐

骨神经再生来研究MSCs通过Schwann

细胞对细胞增殖和神经营养因子表

达产生的影响。移植的MSCs在微环

境存活、迁移并分化为Schwann细

胞，提示BMSCs在神经中可能受到局

部的细胞因子和生长因子的诱导而

分化为Schwann细胞。实验所得数据

共同证实了在周围神经再生过程中

BMSCs对Schwann细胞生物学特性

产生的影响。

7前景与展望

将BMSCs应用于临床前，BMSCs

向神经细胞分化的研究仍有一些问题

尚未解决：体外BMSCs向神经细胞诱

导分化模式和分子调控机制还不甚清

楚；体内是否还有更有效的神经细胞

诱导分化因子存在？BMSCs分化为神

经细胞表型后的维持培养需要什么条

件？尽管如此，BMSCs的出现仍有着跨

时代的意义，它不仅为组织工程和细

胞治疗提供了种子细胞，也为各种疑

难疾病的攻克带来了希望，必将引导

新的潮流。脊髓神经再生是一个复杂

过程，今后研究重点可放在以下几个

方面：（1）由于应用基因敲除、基因沉

默等基因工程技术对治疗脊髓损伤

不利，将细胞移植与基因工程结合［29］。

（2）结合多细胞的联合移植，创造脊髓

修复所需的微环境［30］。

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骨髓间充质干细胞研究进展(一)

骨髓间充质干细胞研究进展(一) 【摘要】骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展，但仍有很多问题有待进一步解决。本文主要对间充质干细胞的生物学特性、以及免疫耐受性、分化和促修复、间充质干细胞的标记等问题进行综述。 【关键词】骨髓间充质干细胞分化标记 骨髓间充质干细胞，BMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoieticstemcells，HSC)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，在体内外均具有支持和调控造血的作用。因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，因此也称成纤维细胞集落形成单位(Colonyformingunitfibroblast，。又由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也有人称其为骨髓基质细胞(Bonemarrowstromalcells，BMSCs)。 1骨髓MSCs的生物学特性 不同物种的BMSCs体外培养的形态学特征大致相同，主要表现为梭形、纺锤形，少数为多角形。目前，BMSCs的分离方法主要有以下几种：(1)全骨髓培养，是将无菌抽取的骨髓加入培养液制成细胞悬液并培养，原代培养培养物以造血细胞成分居多，为利于BMSCs的贴壁生长，可采用DMEM和胎牛血清培养。BMSCs对营养要求高，胎牛血清终浓度为10％～20％，有人认为红细胞会随着换液而逐渐被自然去除，对BMSCs影响不大。细胞融合后以1:2比例传代，3～4天换液一次〔1〕；(2)离心培养法，是根据骨髓中细胞成分比重的不同，采用离心分离法提取单核细胞进行培养。在新鲜无菌的骨髓抽取物中加入抗凝培养液稀释1500～2000r／min离心20～30min，采集交界处的单核细胞层，PBS洗涤2～3次后，加入培养液接种培养；(3)细胞表面分子标记分选法，主要是根据BMSCs的细胞表面分子特征来分离。一般采用流式细胞仪、免疫磁珠或免疫沉积法来进行分选。但由于目前仍未找到BMSCs 特异性的细胞表面标记物〔2〕该法较少采用。影响BMSCs扩增的主要因素：(1)血清：血清对大量扩增BMSCs起着重要的作用，不同浓度的血清对培养BMScs纯度的影响亦较大，常用1０%～20%的胎牛血清培养BMSCs;(2)接种密度：BMSCs的体外扩增速度与其接种密度也有关，一般认为较低密度种植有益于增殖。高密度接种后细胞生长较慢其原因可能是由于细胞间的接触抑制，或细胞释放到培养基中的因子影响了BMSCs的生长;(3)细胞因子：一些细胞因子对于维持BMSCs增殖和未分化状态亦十分重要;(4)动物种属：一般认为BMSCs的生长特性相似，但也有资料显示BMSCs生长特点有种属差异〔3〕。 2间充质干细胞移植后的免疫耐受性 在移植治疗中，一般情况下，移植物会引起宿主的免疫排斥反应。但对于间充质干细胞来说却不是这样。实验表明间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖从而导致免疫耐受〔4～7〕。T 细胞与其它细胞的相互作用可以通过混和淋巴细胞反应来观察。被标记的T细胞与其它细胞混合后，如果可以引起T细胞的免疫反应，则可以观察到T细胞的增殖现象。但当把间充质干细胞与T细胞混合后却观察不到T细胞的增殖反应，而且这种现象并不是由于T细胞凋亡或其它的有害作用引起的。因为在去除间充质干细胞后，这些T细胞仍然可以对其它物质进行反应。此外，使用趋化膜将两种细胞分隔开培养后，间充质干细胞对T细胞的抑制作用依然存在，表明这种抑制作用可能通过某种可溶性的小分子起作用。另外，除了未分化的间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖外，实验也表明，随着干细胞的分化，其抗原性并没有随之增加〔8〕。总之，间充质干细胞可以通过某种机制抑制T细胞的成熟来逃避免疫系统的清除。也暗示间充质干细胞可能在机体免疫系统的调节及骨髓中各种干细胞未分化状态的维持方面起作用。 3促组织修复和细胞分化 骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓组织中的一类成体干细胞(adultstemcells，AS)，在一

人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化

中国组织工程研究与临床康复 第14卷 第14期 2010–04–02出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 2, 2010 Vol.14, No.14 P .O. Box 1200, Shenyang 110004 https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, 2492 1 Biomedicine Research and Development Centre of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; 2 Guangzhou (Jinan)-Hong Kong Joint Laboratory of Cell Engineering, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; 3 Asia-Pacific Stem Cell Research Centre Co., Ltd., Hong Kong 999077, China; 4 Department of Obstetrics and Gynecology, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; 5 Department of Bioengineering, Clemson University, Clemson, SC 29634-0905, USA He Shao-qing ★, Studying for master’s degree, Biomedicine Research and Development Centre of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China; Guangzhou (Jinan)-Hong Kong Joint Laboratory of Cell Engineering, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China heshq106@https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, 人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化**★△○ 何绍清1， 2，罗振宇1， 2，刘秋英1， 2，周向荣△2， 3，邓铭权△2， 3，罗 新4，姚润斯4，高 志5，王一飞○1， 2 Isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells and differentiation into adipocytes and osteblasts He Shao-qing 1, 2, Luo Zhen-yu 1, 2, Liu Qiu-ying 1, 2, Zhou Xiang-rong 2, 3, Deng Ming-quan 2, 3, Luo Xin 4, Yao Run-si 4, Gao Zhi 5, Wang Yi-fei 1, 2 Abstract He SQ, Luo ZY, Liu QY, Zhou XR, Deng MQ, Luo X, Yao RS, Gao Z, Wang YF. Isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells and differentiation into adipocytes and osteblasts. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2010;14(14): 2492-2496. [https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html,] 摘要 何绍清，罗振宇，刘秋英，周向荣，邓铭权，罗新，姚润斯，高志，王一飞.人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(14):2492-2496. [https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html,] 0 引言 间充质干细胞具有自我更新能力，能分化成为成骨、软骨、肌肉和脂肪细胞等间质组织细胞[1-3]，甚至能分化为心肌、神经胶质和神经细胞[4-6]。近年来因其在组织工程和细胞替代治疗的临床前研究而备受关注。间充质干细胞分布在体内骨髓和其他组织与器官中，如脂肪组织、脐血，甚至外周血也发现有间充质干细胞 [7-10] 。 目前，骨髓间充质干细胞是最常用的种子细胞，但其数量和分化潜能随着年龄的增长显著减少 和降低[11-13]，并且取材时易对供体造成身体伤害。因此，非常有必要寻找新的自体和异体移植的细胞来源。这种新的细胞除了必须具备骨 髓间充质干细胞有更强的增殖力和多向分化潜能的特点外，还必须取材便利，不易造成病毒污染，且不受伦理道德限制等。 脐带由中胚层发育而来，是胎儿时期连接胎儿和母体的索状结构，外由羊膜包被，内有两条动脉和一条静脉及血管周围富含蛋白多糖和黏多糖的组织组成[14]。分娩后的脐带一直都被当废弃物丢弃，近年来因寻求更多来源的成体干细胞而受到关注。自Mitchell 等[15]提出

间充质干细胞研究进展及其临床应用前景

?２２８?生国篮旦匡煎！Ｑ塑生！！旦笠！鲞筮丝塑￡！ｉ塑旦墼丛鲤：堕！！！Ｑ嫂：Ｙ丛：堡：些！：１２ 病情持久不愈，气血郁滞，经脉失畅，化湿生痰，痰血瘀结而致。根据其病机，选用小金丸治疗，取得较好疗效，值得推广。５治疗乳腺囊性增生病悼３ 将５００例乳腺囊性增生病患者随机分为治疗组和对照组各２５０例，对照组单用三苯氧胺治疗，治疗组在对照组相同治疗的基础上加用小金丸治疗。结果：治疗组总有效率为９２．０％，对照组总有效率为６７．６％，两组有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。乳腺囊性增生病系内分泌障碍性增生病，一是体内女性激素代谢障碍，尤其是雌孕激素比例失调，使乳腺实质增生过度和复旧不全；二是部分乳腺实质成分中女性激素受体的质和量的异常，使乳房各部分增生程度参差不齐。三苯氧胺与此激素竞争受体，阻断过高的雌激素作用于乳腺组织，但部分患者临床效果甚微，或服药期间疗效较好，停药后复发。小金丸的药理实验证实对乳腺泡和导管增生有明显抑制作用，同时能抑制纤维母细胞摄取１４．甘氨酸减少胶原纤维合成，又能促进细胞吞噬胶原纤维及其断片，增强细胞溶酶体释放组织蛋白水解胶原纤维，从而消降纤维细胞的增生、粘连，疗效肯定，不良反应小，但疗程较长。中医学认为乳腺增生病主要是气机郁滞，痰瘀互结，冲任失调所致，治当理气化瘀散结，活血祛瘀为原则。小金丸方中麝香走窜通络，散结开壅，枫香脂调气血，土鳖消肿定痛，地龙通络，制草乌祛风湿，温经散寒，当归活血，香墨消肿化瘀，五灵脂、乳香、没药活血化瘀、消肿定痛。诸药合用有温通、活血、消壅、散结之效。可使气旺络通，痰散结消。配合三苯氧胺治疗乳腺增生病，标本兼治，故能取得较好疗效。 ６治疗慢性盆腔炎包块怕１ 将６０例患者（疾湿疥阻兼脾肾两虚型）分为２组各３０例，治疗组口服小金丸和血宝胶囊配合宫颈湿敷血竭粉治疗。对照组用西医抗炎治疗。治疗前后Ｂ超测量盆腔包块的大小、检测雌激素水平、观察临床症状消失的情况。结果：总有效率治疗组８６．６７％，对照组为６３．３３％，２组比较，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；随访半年复发率，治疗组为２３．０８％，对照组为６３．１５％，２组比较，差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；雌激素水平治疗前后比较及治疗后组问比较，差异均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。慢性盆腔炎包快属中医学瘢瘕范畴，多起于经行产后，胞脉胞络空虚，血室正开，痰湿之邪乘虚而入，蕴结胞宫；失治误治，余邪未净，迁延１３久，病及血分，致瘀积胞中，积聚成瘾。小金丸功能散结消肿，化瘀止痛，原用于痰气凝滞所致的瘰疬、瘿瘤、乳岩、乳癖，用于此药治疗盆腔炎包块属异病同治，有异曲同工之妙。现代药理研究表明小金丸具有抗炎、消肿、抗肿瘤和镇痛作用。血宝胶囊具有益肾健脾、补阴培阳之效。血宝既可助小金丸化痰散结、活血消ｊ｝毂之力，又可防止小金丸攻邪太过损伤正气。廊竭粉是伤科活血疗伤之圣药，取其破散瘾积宿血之功。内服外用双管齐下，共奏化痰散结、化瘀消瘕之功，使邪去而不伤正。本研究表明，用中成药扶正消瘾法治疗慢性盆腔炎包块具有无创性、服用简便、疗效好，复发率低的优点。 ７治疗结节性筋膜炎ｏ¨ ５例结节性筋膜炎患者，内服小金丸０．６ｇ，２次／ｄ。局部服用黄金膏（金黄散＋凡士林）＋四虎散（由生草乌、生半夏、生南星、狼毒组成）外敷，方法：根据肿块大小，先用金黄膏涂布于纱布上，再掺加四虎散，外面用单层纱布包裹，最后在药物表面撒少量蒸馏水，敷贴患处，每２ｄ换１次。结果５例均治愈。最短治愈时间２６ｄ，最长治愈时间３５ｄ，平均治愈时间３０．８ｄ。结节性筋膜炎又称为假肉瘤性筋膜炎，是一种发生于浅筋膜的良性增生性病变。小金丸具有消痰化坚、活血止痛、消结散毒的作用；金黄散清热、解毒、消肿、定痛；四虎散化痰散结止痛。内外治结合，共奏解毒化肿、化痰散结、活血止痛之效，故用于治疗本病能取得较满意的疗效。 参考文献 ［１］秦树光，等．小金丸联合甲状腺素片治疗甲状腺肿的ｌ｜缶床分析．现代中西医结合杂志，２００５，１４（８）：１０１８． ［２］屈江宁．小金丸治疗良性前列腺增生８０例．世界中医药，２００８，３（５）：２７７． ［３］马宝华，等．小金丸治疗带状疱疹后遗神经痛４４例．中国中医急诊，２００３，１２（５）：４７３． ［４］余勇．小金丸治疗聚合性痤疮２４例．医药导报，２０００，１９（３）：２６３． ［５］杨玉国，等．小金丸与三苯氧胺合用治疗乳腺囊性增生病２５０例分析．实用中医药杂志，２００５，２１（５）：２６１． ［６］邱明英，等．小金丸为主治疗慢性盆腔炎包块的临床研究．新中医，２００８，４０（４）：５５ ［７］吴亚旭．中药治疗结节性筋膜炎５例．江苏中医药，２００５，２６（１１）：２７． 间充质干细胞研究进展及其临床应用前景李玲玲李晶 【关键词】骨髓间充质干细胞；多向分化；组织工程 间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）通常是指从骨髓或其他组织中分离到的在体外具有多向分化潜能的一类细胞。自Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ等首次报道骨髓中有少量细胞在培养过程中能贴壁分化形成类似骨、软骨的集落后，人们对这些细胞产生了浓厚兴趣。随后从鼠、兔、犬、人等多种动物的骨髓中均分离到了这种贴壁细胞。它们具有多向分化潜能， 作者单位：１３００２１吉林省前卫医院（李玲玲）；吉林省人民医院中西医结合科（李晶）在体外不同诱导条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及神经细胞…。 与软骨细胞、骨髓基质细胞、胚胎干细胞等相比，ＭＳＣｓ具有强大的增殖力、较强的多向分化潜能，而且具有取材方便、便于自体移植、便于外源基因转染及表达调控等诸多优点。最近。还发现ＭＳＣｓ具有免疫调节功能嵋ｏ。因此，ＭＳＣｓ是组织工程的一种新的理想种子细胞。目前，已知ＭＳＣｓ是源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中¨１。本文就ＭＳＣｓ 万方数据

人骨髓间充质干细胞的贴壁分离与体外培养

万方数据

ＩＳＳＮ１６７３—８２２５ＣＮ２１．１５３９／Ｒ赵凌云，等人骨髓间充质干细胞的贴壁分离与体外培养ｗｗＭ．ｚｇｌｃｋｆ，ｃｏｍｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ ０引言 骨髓间充质干细胞是具有形成骨、软骨、脂肪、神经和成肌细胞能力的多种分化潜能的细胞亚群，取材方便，易于体外扩增，可进行自体移植，而不存在组织配型和免疫排斥的问题，被认为是骨组织工程中最佳的种子细胞。本实验目的在于建立一种可行的骨髓间充质干细胞取材和分离扩增的培养方法。 １材料和方法 设计：开放性实验。 单位：解放军济南军区总医院脊髓修复科。 材料：实验于２００６—０２／１２在解放军济南军区总医院脊髓修复科完成。骨髓来源于解放军济南军区总医院脊髓修复科收治的脊髓完全性损伤患者，对本实验均知情同意。基础培养液由含体积分数为０．１５胎牛血清和低糖仪一ＭＥＭ配置。低糖ｄ－ＭＥＭ培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ）；淋巴细胞分离液（密度１．０７７ｇ／ｍＬ，上海试剂二厂生产）；胰蛋白酶，胎牛血清（Ｇｉｂｉｃｏ）；Ｃ０２培养箱（上海力申科学仪器有限公司，ＨＦ９０）；生物安全柜（上海力申科学仪器有限公司，ＨＦｓａｆｅ一１２００／ｃ）；倒置显微镜（Ｌｅｉｃａ）；离心机（ＪＯＵＡＮＢ４ｉ多功能台式机）。 设计、实施、评估者：设计、实施为第一作者，评估为第二、三作者，均经过系统培训，未使用盲法评估。 方法： 骨髓间充质干细胞的分离及传代培养：在无菌条件下，以含５ｍＬ肝素钠生理盐水的２０ｍＬ注射器，于患者髂后上棘穿刺抽取骨髓组织６ｍＬ，移入含５ｍＬ肝素钠生理盐水的试管内，混匀，而后沿管壁缓慢加入含１０ｍＬ淋巴细胞分离液的离心管中，２０００ｒ，ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，小心吸取界面层细胞，用Ｄ—Ｈａｎｋｓ平衡盐溶液洗２次，２０００ｒ／ｍｉｎ离心８ｍｉｎ，加入基础培养液，血细胞计数板计数，调整细胞的浓度，将细胞悬液按１０９—１０１０Ｌ－１接种于培养瓶，放置３７℃、体积分数为０．０５的Ｃ０２饱和湿度孵箱中培养。于培养后的两三天更换培养液，并用Ｄ－Ｈａｎｋｓ平衡盐溶液冲洗２次，以去除未贴壁的造血细胞，以后每３ｄ换液一次，进一步去除未贴壁的细胞。观察细胞生长情况，待细胞融合成片、长满培养瓶底部后，用质量浓度为２．５ｇ／Ｌ的胰蛋白酶流过所有细胞表面，盖好瓶盖，将培养瓶放在倒置显微镜下观察，发现细胞变圆，部分脱壁，控制消化时间不超过３ｍｉｎ，立即加入２ｍＬ有血清培养液终止消化，用弯头吸管轻轻吹打细胞生长区域，吹打过程中不要用力，结束后再用少量培养液漂洗一遍，然后加入适 ５６５０量培养液计数，分别接种在新的培养瓶内。 骨髓间充质干细胞的生长曲线的绘制：取第３代生长状态良好的细胞，用质量浓度为２．５ｇ／Ｌ的胰蛋白酶消化制成细胞悬液，接种至２４孔培养板，３孔／组，细胞１×１０４／孔，每孔加入培养液１ｍＬ，放置３７℃、体积分数为０．０５的Ｃ０２孵箱中培养。以细胞数为纵坐标，时间为横坐标，绘制细胞生长曲线。 骨髓间充质干细胞贴壁率的测定：取第３代生长状态良好的细胞，用质量浓度为２．５ｇ／Ｌ的胰蛋白酶消化制成细胞悬液，接种至２４孔培养板，３孔／组，细胞１×１０４／孔，每孔加入培养液１ｍＬ，放置３７℃、体积分数为０．０５的Ｃ０２孵箱中培养，每隔２ｈ进行细胞贴壁率检测。 主要观察指标：①骨髓间充质干细胞的形态学观察。②骨髓间充质干细胞的生长曲线。③骨髓间充质干细胞的贴壁率。 统计学分析：由第一作者采用ＥＳＡ４．０软件进行统计处理，数据以娃ｓ表示。 ２结果 ２．１骨髓间充质干细胞的形态学观察倒置显微镜下，骨髓间充质干细胞接种１ｄ即贴壁，２ｄ时贴壁细胞较多。经冲洗和换液去除悬浮细胞后，贴壁细胞继续培养３ｄ开始增殖，伸展为椭圆型、短梭型、多角型及不规则型等（图１）。至１４ｄ细胞密集在集落中心，基本铺满瓶底，第３～５代细胞呈均匀一致的长梭型，排列成旋涡状或放射状（图２）。 图１原代培养的骨髓间充质干细胞贴壁后３ｄ开始增殖，伸展为椭圆型、短梭型、多角型及不规则型等（倒置显微镜，ｘ２０） ２．２骨髓间充质干细胞的生长曲线骨髓间充质干细胞传代后３ｄ内处于潜伏期，３ｄ后进入生长期，７ｄ后进入平台期。第３代骨髓间充质干细胞生长曲线见图３。 Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ１２００。Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０００４ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ 　万方数据

间充质干细胞临床研究进展

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 间充质干细胞临床研究进展 间充质干细胞临床研究进展自 1867 年德国病理学家Cohnheim 在研究伤口愈合过程时，首次提出成纤维细胞可能来源于骨髓，即骨髓可能含有非造血干细胞的观点。 1869年，Goujon 发现自体红骨髓异位移植后具有成骨作用，也证实了骨髓具有成骨能力。 但直到 1976 年，Friedenstein 和 Petrakova 首先报道，通过帖壁培养的方法分离得到间充质干细胞（MSCs）。 1987 年，Friedenstein 等将骨髓放置在塑料培养皿中培养，发现骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，由于能分化为多种中胚层来源的间充质细胞，因此被称之为间充质干细胞。 1991 年 Caplan 把骨髓中具有黏附于塑料培养皿表面、在体外能高度扩增、并可多向分化的细胞群命名为骨髓间充质干细胞。 1999 年，Pittenger 等在《Science》（科学）杂志上发表文章，对从骨髓标本中分离得到 MSC，应用流式细胞分析术分析 MSC，结果表明分离的细胞群体表型单一，在体外不同分化条件诱导下，可以形成成骨细胞、成软骨细胞或脂肪细胞，而且克隆化得到的细胞具有类似的分化特性，这充分证明骨髓基质中的间充质干细胞是多能干细胞。 一系列的研究已经证明 MSC 可以分化为神经、心脏、肝脏、 1 / 4

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记(一)

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记(一) 作者：吴晓林,李冬民,马德茂,张晓田,黄石,宋天保 【关键词】骨髓 【Abstract】AIM:Tostudythedifferentiationcharacteristicsandtheoptimaldosageandtimingforbromodeoxyuridi ne(Brdu)labelingofratbonemarrowderivedmesenchymalstemcells(MSCs)invitro.METHODS:Therat marrowstemcellsisolatedbyusingPercoll(1.073kg/L)wereculturedandproliferated.Thethirdpassage cellswereinducedwithdexamethasome,βglycerophosphate,ascorbicacid2phosphate,IGF1andinsuli n.Onday21,thecellswereanalyzedbyimmunohistochemistryfortypeⅠcollagenandbyhistochemistry foralkalinephosphatase(AKP).ThepurifiedMSCswereincubatedwithBrduatdifferentconcentrations( 5,10and15μmol/L)fordifferenttimeperiods(12，24，48，72and96h),followedbyimmunohistochemistryforBrdutoidentifytheoptimalBrduconcentrationandi ncubationtimeperiod.RESULTS:Afterincubationfor21dforinduceddifferentiationintoosteoblasts,ty peⅠcollagenandAKPwerepositivelyexpressed.Theincubationwith10μmol/LBrdufor72hachievedov er98%ofthelabelingratewithoutproducingobviouscelldamages.CONCLUSION:MSCscanbeinducedt odifferentiateintoosteoblastsundercertainconditionsinvitro.TheoptimalBrdulabelingconcentration andtimeperiodare10μmol/Land72h,respectively. 【Keywords】MSCs;induceddifferentiation;osteoblast;Brdu 【摘要】目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在体外的诱导分化及5溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记MSCs的可行性.方法：利用密度为1.073kg/L的percoll分离骨髓的单个核细胞，体外培养与扩增MSCs；取生长良好的第3代细胞，用成骨细胞分化培养液培养21d，Ⅰ型胶原免疫组化染色和碱性磷酸酶（AKP）组化染色；分别以浓度为5，10和15μmol/L的Brdu溶液标记MSCs，孵育12，24，48，72和96h后免疫组化检测Brdu，确定最佳标记量和最佳标记时间.结果：诱导分化第21日,AKP染色呈强阳色,Ⅰ型胶原免疫染色呈阳性.10μmol/LBrdu 标记MSCs的效果最好，随着孵育时间的延长，Brdu标记率逐渐增高，标记72h后标记率在90%以上.结论：MSCs在体外一定条件下可定向诱导分化为成骨细胞，用Brdu标记MSCs的最佳浓度为10μmol/L，最佳时间是72h. 【关键词】骨髓间充质干细胞；诱导分化；成骨细胞；5溴脱氧尿嘧啶核苷 0引言 骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是一类具有多向分化潜能的组织干细胞.因MSCs取材方便、对机体的损伤小、具有较强的传代增殖能力和免疫耐受性等特点而受到越来越多的关注.本实验的目的是利用MSCs具有分化潜能的特点，在体外诱导该细胞定向分化为成骨细胞.并用Brdu标记连续传代的MSCs，观察最佳标记时间及标记剂量，从而为追踪Brdu标记的MSCs移植入体内后的存活、生长及分化奠定基础. 1材料和方法 1.1材料健康雄性SD大鼠，体质量55～70g.由西安交通大学医学院实验动物中心提供. 1.2方法 1.2.1大鼠骨髓MSCs的体外分离培养将大鼠引颈处死后置于750mL/L乙醇浸泡约5min，无菌条件下分离出大鼠的股骨和胫骨.用PBS冲洗出骨髓细胞，经5mL针管反复吹打制成单细胞悬液，用200目的不锈钢网过滤，收集滤液.在密度为1.073kg/L的percoll（Phamacia）分离液上缓慢加入收集的滤液，2500r/min离心20min，收集滤液与分离液之间的白膜层细胞，用DMEM（Gibco）洗涤两次，1000r/min离心5min.用加有100mL/L胎牛血清（杭州四季青公司）的DMEM重悬细胞，1×108个/L种于两个直径为6cm的培养皿中培养，2d后更换培养液，加入完全培养基.并将吸出的旧培养液分别移入另两个平皿中继续培养，再过2d更换

_骨髓间充质干细胞在骨科中的应用

第9卷第18期·总第122期 2011年09月·下半月刊 87骨髓间充质干细胞在骨科中的应用※ 陈亮1陈跃平1,2* 摘要：骨髓间充质干细胞（BMSC）是一种来自中胚层发育的早期干细胞，具有多向分化潜能的特性，可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。临床上还运用BMSC治疗骨科疾病大量的体外实验已获成功。 关键词：骨髓间充质干细胞；骨科学；文献综述 doi：10.3969/j.issn.1672-2779.2011.18.055 文章编号：1672-2779（2011）-18-0087-03 骨髓中含有2类干细胞，①造血干细胞，它为循环血液提供前体细胞；②非造血性干细胞，它是骨髓中造血结构性和功能性支持细胞，在调节造血干细胞的长期存活，生长分化中起重要作用。早期分离培养时，发现其形状呈成纤维细胞样而称其为“成纤维细胞集落形成单位”或“骨髓基质成纤维细胞”。随着研究的深入，人们发现其对骨髓造血干细胞起支持诱导作用，又因其来自于骨髓基质，因而称其为“骨髓基质细胞”。因其在不同的诱导条件下，有向中胚层组织细胞分化的能力，又称其为“骨髓间充质干细胞”。 1 骨髓间充质干细胞多向分化特性 多向分化潜能被认为是BMSC最重要的生物学特征。大量体外实验证明，在不同诱导条件下，BMSC可以向多种中胚层来源的组织细胞分化，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。 1.1 BMSC向成骨细胞的定向诱导分化BMSC在体外培养中，通过地塞米松、β磷酸甘油和抗坏血酸等的诱导，能够分化为成骨细胞。Ouyang等[1]在培养基内加入抗坏血酸后BMSC排列紧密呈片状生长，将BMSC片与去除矿物质的移植骨片结合植入受损部位，3周后形态学、组织学、免疫组织化学观察显示，植入物的结构与正常骨膜相似，并向成骨、软骨分化。 1.2 BMSC向软骨细胞的定向诱导分化BMSC向软骨细胞的定向诱导分化将此分离的BMSC加入无血清培养体系中培养，培养体系中加入转化生长因子β、软骨来源形态形成蛋白及整合素可促使BMSC向软骨细胞分化。舒朝锋等[2]实验证明，在单层诱导培养条件下，人骨髓BMSC能分泌软骨细胞特征性细胞外基质如Ⅱ型胶原、糖胺多糖等，具有作为软骨组织工程种子细胞来源的可能。 1.3 BMSC向脂肪细胞的定向诱导分化 1999年，Pittenger等[3]人的BMSC培养体系中加入甲基异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素和茚甲新等，结果成功地诱导出脂肪细胞，细胞内聚集脂滴，并表达过氧化物酶体增殖物激活受体，脂蛋白脂酶和脂肪酸结合蛋白aP2。在这种培养条件下，约95%的细胞向此系分化，细胞内的脂质小泡持续增加直至充满细胞，这些物质可被油红染成红色。 ※基金项目：广西壮族自治区科技厅自然基金[No：2010GXNSFA013223] 作者单位：1 广西中医学院附属瑞康医院骨科（南宁530011） 2 南方医科大学在读博士（南宁530011） *通讯作者 2 骨髓间充质干细胞的分离方法 骨髓中BMSC含量很少，仅占骨髓内单个核细胞总数的0. 001%～0.01%，并随年龄的增加而减少，因此，必须实现其体外分离培养、扩增。目前BMSC的分离方法主要以下几种：①密度梯度离心法：主要根据骨髓中细胞成分的比重不同，清除红细胞，分离提取骨髓单个核细胞进行贴壁培养。目前较常用Percoll 液（1.073 g/ml）和Ficoll 液（1.077 g/ml）进行密度梯度离心。值得注意的是，不同密度的分离液对BMSC的纯度影响极大。这种方法分离培养的BMSC大小均匀，纯度较高，Pittenger等[4]在过密度梯度离心法分离培养的BMSC在第1代纯度可达95%，第2代达98%。因此该法被广泛采用。②贴壁筛选法：即全骨髓法，是根据BMSC贴壁生长而造血系细胞悬浮生长的特性，通过定期换液除去不贴壁细胞，收集贴壁生长BMSC，其纯度可达95%。目前多用这两种方法，细胞的粘附特性仍是分离和纯化BMSC的最基本原则，物理性富集后塑料器皿内的贴壁培养仍是分离BMSC的最基本方法，更好的分离方法还有待于进一步的探索。 3 BMSC的表面标志及鉴定 3.1 表面标志到目前为止，BMSC的表面抗原具有非专一性，它表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志。主要包括：①粘附分子，如CD166、CD54、CD102、CD44、CD106等。②生长因子和细胞因子受体，如IL-1受体、IL-3受体、IL-4受体、IL-6受体、IL-7受体、干扰素γ受体、肿瘤坏死因子α等。③整合素家族成员，包括CD49a、CD49b、CD49c、CD29、CD104等。④其它，如CD90、CD105等。不表达造血细胞的表面标志，如CD34、CD45、CD14、CD3、CD4、CD8等，也不表达与人白细胞抗原识别有关的共刺激分子B721、B722及主要组织兼容性复合物Ⅱ类分子如人白细胞DR 抗原等[5,6]。此外，BMSC自身还能产生一些造血及非造血的生长因子、白细胞介素和化学激动因子，但除细胞因子是持续性产生外，其它的仅仅在受到刺激后表达，BMSC还能产生一系列的基质分子，包括纤维连接素、胶原、蛋白聚糖，还能表达基质2细胞，细胞2细胞等相互作用的反受体，其中特别有关的是对CD44强表达，CD44是多种配体的受体，其分别在骨、骨髓中对细胞外基质构建起着重要的作用[7,8 ]。 3.2 鉴定对BMSC进行鉴定可联合细胞化学和流式细胞分析方法[9]。细胞化学方法，BMSC具有独特的代谢特点，几乎所有细胞酸性萘酚酸酯酶及糖原阳性，酸

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展

３７８陕西中医２０１０年第３１卷第３期 药杂志，２００４，３２（３）：１８０—１８２， ［７３金静愉，郁仁存．乳腺癌中西医结合诊治方案口］．中国肿瘤，１９９５，４（５）：７－１０。 ［８］刘胜，吴雪卿，陈前军．４０７乳腺癌术后患者辨证分型规律探析口］．辽宁中医杂志，１９９９，２６（９）：３８７—３８８．［９］唐汉钧，高尚璞，郑勇．中医药治疗乳腺癌术后２８８例临床观察口］．上海中医药大学报，２００２，１６（３）：２３．［１０］刘燕珠，王泳，吴丹红，等．中西医结合治疗乳腺癌６８例［Ｊ］．福建中医药，２０００。３１（３）：３０—３１． ［ｎｌ万华，吴雪卿，陆德铭．扶正祛邪在治疗乳腺癌中的运用［Ｊ］．上海中医药大学学报，２００２，１６（１）：３０—３１．［１２］朱华宇，司徒红林．林毅辨治乳腺癌经验撷菁［Ｊ］．辽宁中医杂志，２００７，３４（４）：３９５—３９６． ［１３３武自力．金静愉治疗乳腺癌经验［Ｊ］．四川中医，２００７，２５（８）５—６． ［１４］刘胜，赵倩，刘佳，等．乳腺癌术后方对乳腺癌术后５年复发转移率的影响［Ｊ１．中西医结合学报，２００８，６（１０）：１０００—１００４． ［１５］刘胜，花勇强，孙平，等．乳移平抗乳腺癌术后复发转移的临床研究［Ｊ］．中西医结合学报，２００７，５（２）：１４７—１４９． ［１６］卓斌．乳康汤治疗３６例乳腺癌术后或放、化疗后的临床观察口］．湖南中医学院学报，１９９５，１５（２）：２３． ［１７］陈英．益气养血、清热解毒治疗乳癌术后４１例［Ｊ］．浙江中医学院学报，１９９９，２３（６）：３０１． ［１８］李增战，陈捷，苗文红，等．鹿仙散结汤治疗晚期乳腺癌３０例［Ｊ］．陕西中医，２００７，２８（５）：５２６—５２７． ［１９］喻伟国，程进明．抗癌汤结合化疗治疗肿瘤术后４８例总结口］．湖南中医杂志，２００３，１９（１）：１１—１３． ［２０］李景鹏，贾英杰．贾英杰治疗乳腺癌术后的经验［Ｊ］．湖北中医杂志，２００７，２９（７）：２３． ［２１］黄智芬，刘俊波，陈强松，等．健脾消积汤联合化疗对晚期乳腺癌患者生活质量及免疫功能的影响［Ｊ］．新中医，２００７，３９（５）：８８—８９． ［２２］樊淳理．中药治疗乳腺癌术后化疗患者４１例［Ｊ］．中医杂志，２００６，４７（３）：２２６． ［２３］张卫红．卞卫和教授治疗乳腺癌经验举隅［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００７，２３（２）：１２６－１２８． ［２４１黄梅，杨海燕．益气活血汤改善脾虚挟瘀型乳腺癌患者化疗毒副作用的临床研究口］．湖北中医杂志，２００５，２７（７）：９－１０。 ［２５］周明，吴勇华，刘永达．中西医结合治疗晚期乳腺癌１４例分析口］．中国中西医结合杂志，１９９５，１５（４）：２３７．［２６］罗雪冰．益气祛邪汤治疗乳腺癌术后７６例疗效观察［Ｊ］．华夏医学，２００７，（２）：２４７—２４８． ［２７］沈哗华，宋明志，黄雯霰．中西医结合治疗７１例乳腺癌术后患者的疗效分析［Ｊ］．中西医结合学报，２００３，１（１）：３０－３１． ［２８１向丽萍，欧阳恒，肖毅良．菊藻丸抗乳腺癌术后复发转移的临床观察［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学，２００２，７（１）：６３—６４． ［２９］王义程，丁凌，鲁志诚．三苯氧胺加中成药治疗绝经后晚期乳腺癌［Ｊ］．肿瘤研究与临床，１９９６，８（４）：２６５．［３０］ＣｏｈｅｎＩ，ＴａｇｌｉａｆｅｒｒｉＭ，ＴｒｉｐａｔｈｙＤ．ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ口］．ＳｅｍｉｎＯｎｃ０１．２００２，２９（６）：５６３—５６４． ［３１］ＣｕｉＹ，ＳｈｕＸＯ，ＧａｏＹ，ｅｔａｌ．ＵｓｅｏｆｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙａｎｄａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅｂｙＣｈｉｎｅｓｅｗｏｍｅｎｗｉｔｈｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ口］，ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓＴｒｅａｔ．２００４，８５（３）：２６３—２７０． ［３２］刘叙仪，孟松娘．杨敬贤，等．中药Ｒ３对耐阿霉素人乳腺癌细胞ＭＣＦＴａｄｒ多药耐药的逆转ｉ－Ｊ］．中国肿瘤临床，１９９７，２４（５）：３２５—３３０ ［３３１姜晓峰，甄永苏．大黄素逆转肿瘤细胞多药抗药性的作用［Ｊ］．药学学报，１９９９，３４（３）：１６４—１６７． ［３４］ＷａｎｇＬ．ＹａｎｇＣＨ，ＨｏｒｗｉｔｚＳＢ，ｅｔａｌ．Ｒｅｖｅｒｓａｌｏｆｔｈｅｂｕｍａｎｍｕｒｉｎｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｐｃｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｗｉｔｈｍｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ．ＣｈｅｍｏｔｈｅｒｐｈａｒｍＡｃｏｌ，１９９４，３４：９６． ［３５３李忠．临床中医肿瘤学［Ｍ］．辽宁科学技术出版社，２００２，１２４—１２５． （收稿２００９—１２—１０；修回２０１０－０１—２４） 骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展’秦安清刘黎青△于娜◇周盛年△▲山东中医药大学基础医学院（济南２５０３５５） 【中图分类号】Ｑ２５【文献标识码】Ａ【文章编号】ｌＯＯＯ一７３６９（２０１０）０３～０３７８—０３ ＊山东省科技攻关课题（ＮＯ：２００７ＧＧｌ０００２０１７）；山东省中医药管理局资助课题（ＮＯ：２００７—００６） △通讯作者：刘黎青周盛年 ▲山东大学齐鲁医院神经内科（济南２０００１２） ◇山东省昌乐县中医院（昌乐２６２４００） 骨髓问充质干细胞（ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）又称骨髓基质干细胞，是骨髓细胞中除去造血干细胞（非粘附细胞）之外的细胞部分，作为成体干细胞之一，具有多项分化潜能，能向骨、软骨、肌肉、神经、角膜上皮细胞等中胚层或外胚层组织细胞分化，是组织工程中重要的种子细胞之一，并且具有取材方便，扩增迅速，可自体移植等特点，因 万方数据

间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展

间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展 【摘要】心肌梗死等缺血性心脏病严重威胁人类生存和生活质量,组织工程技术为根治心肌梗死等心脏病提供了一种新的方法,近年来,心肌组织工程有了较大的进展,但在种子细胞等方面的难题还远没有解决。本文对关于间充质干细胞分化为心肌细胞的研究作了一下综述,为细胞替代治疗的研究提供一定的参考。 【Abstract】Ischemic heart disease such as myocardial infarction endanger human health and life,cardiac tissue engineering is one of the new radical therapy for myocardial infarction.In recent years,researchers have made great progress in cardiac tissue engineering,but the problems of seed cells and scaffold materials are far from resolved.This paper reviews research advances of mesenchymal stem cells induced into cardiomyocyets so that it may contribute to Cell therapy. 【Key words】 Mesenchymal Stem Cells;Cardiomyocyets;Cell therapy 在成人肌肉组织中,心肌细胞(Cardiomyocytes,CMs)属于终末分化期永久性细胞,不具有再生能力[1],其对有丝分裂信号作出的反应是细胞肥大[2]而不是再生,致使损伤后心肌再生和修复严重受限,由于心肌损伤后无法通过自身的增殖、分化进行修复,坏死的心肌则由纤维疤痕组织取代[3,4]。研究发现心肌中也含有干细胞[5-7],在心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后这些细胞会发生分裂增生,但数量极少,增殖能力太小,不能完整地修复心肌组织,更不能满足心肌组织再生的需求,致使具有收缩功能的CMs减少,最终发展成充血性心力衰竭、死亡,严重影响患者的生活质量。临床上缺乏对病变冠状动脉的再造和梗死心肌的再生、重建的根本治疗方法,而细胞替代治疗通过移植功能细胞,替代、修复或加强受损的组织或器官的细胞的生物学功能已成为治疗多种组织坏死性疾病的新策略。 1 心肌细胞和间充质干细胞的特点 心肌细胞在出生后就进入了有丝分裂的后期,基本丧失了增生和再生的能力,不再进入细胞周期,而目前尚无证据支持心肌中含有干细胞[1]。成人骨髓中含有造血细胞和非造血细胞,非造血细胞与细胞外基质一起形成了支持造血的骨髓微环境(Bone marrow microenvironment,BMME)[8]。骨髓微环境中的细胞成分包括网状内皮细胞、巨噬细胞、脂肪细胞、成纤维样细胞[9],这些细胞通过分泌各种细胞因子、生长因子、以及自身细胞表面受体的表达,对造血细胞的附着、分化、自我更新起到了重要作用[10]。目前,普遍认为,在骨髓中至少存在两种干细胞群即造血干细胞(Haematopoietic stem cells,HSCs)和MSCs,前者是所有造血细胞的祖细胞[11,12],后者则是中胚层发育的早期细胞,这类细胞可以通过体外贴壁培养加以分离,不仅能分化为造血实质和基质细胞等,还分化为多种造血以外的组织,

间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt信号通路

中国组织工程研究 第17卷 第40期 2013–10–01出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research October 1, 2013 Vol.17, No.40 doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.40.019 [https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html,] 潘京华，黄浩，查振刚. 间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt 信号通路[J].中国组织工程研究，2013，17(40):7144-7149. P .O. Box 1200, Shenyang 110004 https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, 7144 www.CRTER .org 间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt 信号通路*★ 潘京华1，黄 浩1，查振刚2 (1暨南大学第一临床医学院，广东省广州市 510000；2暨南大学附属第一医院，广东省广州市 510632) 文章亮点： 1 此问题的已知信息：在间充质干细胞向成骨细胞分化增殖的过程中，转化生长因子β/骨形态发生蛋白、MAPK 和Wnt 等信号传导通路途径在整个成骨细胞分化中起着重要的作用。 潘京华★，男，1988年生，广东省阳江市人，汉族，暨南大学在读硕士，主要从事骨关节的研究。 394805331@https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, 2 文章增加的新信息：文章从Wnt 蛋白、Wnt 信号传导通路、Wnt 信号通路的调控、Wnt 参与间充质干细胞自我增殖及wnt 信号传导通路与骨生成等方面进行了详细叙述。研究已经证明了经典Wnt 信号传导通路与非经典Wnt 信号传导通路能联合调控人间充质干细胞的多向性分化，其中Wnt 信号传导通路在参与在间充质干细胞向成骨分化的过程中，Wnt11，FZD6，sFRP2，sFRP3和Ror2等因子的表达升高，而Wnt9a 和FZD7的表达下降。 通讯作者：查振刚，博士，教授，博士生导师，暨南大学附属第一医院，广东省广州市 510632 3 临床应用的意义：经典Wnt 信号、非经典Wnt 信号以及其内部多中因子都参与间充质干细胞增殖和分化的调控。 中图分类号:R318 关键词： 干细胞；干细胞综述；Wnt 蛋白质；间充质干细胞；Wnt 信号通路；成骨细胞分化；经典Wnt 信号传导通路；非经典Wnt 信号传导通路；省级基金 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2013)40-07144-06 收稿日期：2013-04-11 修回日期：2013-05-30 (2 01304127/W ·W) Pan Jing-hua ★, Studying for master’s degree, First Clinical College of Jinan University, Guangzhou 510000, Guangdong Province, China 394805331@https://www.sodocs.net/doc/5e2957091.html, Corresponding author: Zha Zhen-gang, M.D., Professor, Doctoral supervisor, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China Received: 2013-04-11 Accepted: 2013-05-30 主题词： WNT 蛋白质类；间质干细胞；成骨细胞；细胞分化 基金资助： 广东省科技计划(2011B050300013)* 摘要 背景：研究表明Wnt 信号通路在间充质干细胞向成骨分化中具有重要作用。 目的：归纳总结Wnt 信号通路的机制、调控以及其参与间充质干细胞成骨分化的作用。 方法：应用计算机检索Pubmed 和CNKI 数据库中1998年9月至2013年3月相关文献，在标题和摘要中以“Wnt ，间充质干细胞，Wnt 信号通路，成骨细胞分化，经典Wnt 信号传导通路，非经典Wnt 信号传导通路”或“Wnt ，Mesenchymal stem cells ，Wnt signaling pathways ，osteoblastic differentiation ，canonical Wnt signaling ，non-canonical Wnt signaling ”为检索关键词进行检索。最后选择31篇符合标准的文献进行综述。 结果与结论：Wnt 信号传导通路在间充质干细胞向成骨细胞中充当着关键的角色，包括经典Wnt 信号、非经典Wnt 信号以及其内部多种因子都参与间充质干细胞增殖和分化的调控。经典Wnt 信号传导通路与非经典Wnt 信号传导通路能联合调控人间充质干细胞的多向性分化，其中Wnt 信号传导通路在参与在间充质干细胞向成骨分化的过程中，Wnt11，FZD6，sFRP2，sFRP3和Ror2等因子的表达升高，而Wnt9a 和FZD7的表达下降。但Wnt 信号的各因子如何相互影响，如何利用Wnt 信号的机制促使间充质干细胞更快、更准确地分化值得更进一步探讨与研究。 Wnt signaling pathways in osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells Pan Jing-hua 1, Huang Hao 1, Zha Zhen-gang 2 (1First Clinical College of Jinan University, Guangzhou 510000, Guangdong Province, China; 2First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Studies have shown that Wnt signaling pathways play an important role in the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. OBJECTIVE: To review the mechanism and regulation of the Wnt signaling pathways, as well as Wnt signaling pathway effects on osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. METHODS: A computer-based search of PuMed database and CNKI database from September 1998 to March 2013 was performed to search related articles. The key words of “Wnt, mesenchymal stem cells, Wnt signaling pathways, osteoblastic differentiation, canonical wnt signaling pathway, non-canonical signaling pathway” in English or Chinese were used to search the articles in the title and the abstract. A total of 31 articles were included to review. RESULTS AND CONCLUSION: Wnt signaling pathways play a critical role in the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Canonical Wnt signaling pathway, non-canonical Wnt signaling pathway, and their