探讨流式细胞术检测胞浆抗原的方法及其 在白血病免疫分型中

探讨流式细胞术检测胞浆抗原的方法及其

在白血病免疫分型中的意义

刘艳荣,于　弘,常　艳,陈珊珊

(北京大学血液病研究所,北京100044)

摘要 为探讨用流式细胞术检测胞浆抗原的方法及其在免疫分型中的意义,采用三色或四色直接免疫荧光标记法检测56例患者17种膜抗原表达,并采用4种透膜剂处理细胞后用流式细胞仪测定胞浆(c)CD3,CD22,CD79a, CD13,CD33及髓过氧化物酶(MPO)的表达。结果显示,用FACS透膜液处理细胞后,胞浆抗原的阳性百分比最高,而细胞的光散射(SSC)及CD45的荧光强度不变。18例急性髓细胞白血病(AML)患者,16例MPO阳性;4例T2 ALL患者,虽然膜cCD3阴性,而胞浆cCD3均为阳性;13例B2ALL患者中,9例cCD22阳性。对5例B2ALL检测了cCD79a,结果全部阳性。38例急性白血病(AL)患者中,18例表达1个系列以上的膜标记;在21例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者中,8例表达CD7;17例ALL中,7例CD13阳性。经胞浆抗原检测后,只有2例分别符合双表型和混和型AL特点,提示cCD3,cCD22,cCD79a和cMPO为系列特异性标志,对诊断及鉴别双表型或双克隆AL尤为重要。

关键词 白血病;免役分型;胞浆抗原;流式细胞术

中图分类号 R44616;R73317

Detection of Cytoplasmic Antigens by Flow Cytometry and It′s Implication for Leukemia Immunophenotyping

L IU Yan2Rong,YU Hong,CHAN G Yan,CHEN Shan2Shan

(Instit ute of Hematology,The People′s Hospital,Peki ng U niversity,Beiji ng100044)

Abstract The purpose of this study was to optimize a fixation procedure for detection of cytoplasmic antigens by flow cytometry(FCM)and to evaluate the effect of intracellular CD3,CD22,CD79a and m yeloperoxidase(MPO)in lineage assignment.Four kinds of fixation procedure and three or four color direct immunofluorescence stainin g were used to permeate cell membrane and label cell surface and intracellular anti gens by means of FCM.Results showed that percentage of cytoplasmic antigens positive cells was the highest and cell scatter and fluorescence intensity of CD45were not changed after using of FACS Permeabilization S olution.MPO protein was positive in16/18acute myeloid leukemia(AML) patients.4cases of T cell2acute lymphoblastic leukemia(T2ALL)cases were positive for cytoplasmic CD3(cCD3)but surface CD3was https://www.sodocs.net/doc/577655595.html,D22was only detected in9/13of B2ALL and cCD79a was positive in5/5B2ALL.18/38 cases of acute leukemia were ex pressed in more than one lineage marker,8/21cases of acute non2lymphocytic leukemia (ANLL)were CD7positive.7/17cases of acute lymphocytic leukemia(ALL)expressed CD13.After further cytoplasmic antigens detection,one was considered to be a T/myeliod biphenotypic leukemia,another one was diagnosed a biclonal or mixed leukemia.The results suggest that intracellular CD3,CD22,CD79a and MPO are lineage specific markers,they are very important for biphenotypic and biclonal/mixed acute leukemia identification.

K ey w ords leukemia;immunophenotype;cytoplasmic antigen;flow cytometry

在白血病/淋巴瘤的免疫分型中,普遍检测细胞系列(cell lineage)相对特异的膜标记,而相当多的白血病细胞不仅表达髓细胞相关抗原,而且表达淋巴细胞相关标志,此类患者为双表型?双克隆急性白血病?或只是AML或ALL伴异常标志表达?单纯通过膜标记往往难以做出明确的诊断。正确诊断此类患者对他们的治疗和预后有至关重要的作用,因此需要选择更加特异的标志以确定诊断。文献报道胞浆CD3(cCD3),cCD22和cCD13的出现早于胞膜抗原,并认为cCD3和cCD22为T和B系列的特异性标志[1-3],而用单克隆抗体检测髓过氧化物酶(MPO)蛋白,被认为是髓系特异性标志[4,5]。本研究室虽然早已应用流式细胞术对胞浆的上述抗原进行检测,但选择的病例多为应用膜抗原诊断困难者,而胞浆抗原检测的结果有时仍令人困惑。本研究采用4种透膜方法检测比较了56例患者cCD3, cCD22,cCD79a,cCD13,cCD33和cMPO的表

　通讯作者:刘艳荣　电话:(010)68792787

?

7

1

?

中国实验血液学杂志　Journal of Ex perimental Hem atology2002;10(1):17-21

达,并对胞浆抗原的意义进行探讨。

材料与方法

病人

1999年8月至2000年9月在我室进行免疫分型检查的患者56例,男40例,女16例,中位年龄38 (4-80)岁。经形态及免疫分型检查后所进行的FAB分型如下:AML患者18例,其中AML2M01例,AML2M11例,AML2M24例,AML2M37例, AML2M4/M53例,AML2M71例,CML急髓变1例。急性未分化型白血病(AUL)1例,急性淋/粒双表型白血病(BiAL)1例,急性双克隆/混合型白血病(MAL)1例,B细胞2ALL13例(2例为治疗后标本),B细胞非霍奇金淋巴瘤(B2N HL)4例(3例为初治,1例为治疗后标本),T细胞(T)ALL4例,慢性髓细胞白血病慢性期(CML2CP)3例,骨髓增生异常综合征(MDS)4例(3例为初治,1例为治疗后标本,幼稚细胞占5.6%-20%)。多发性骨髓瘤2例,非白血病(NAL)患者5例,包括白细胞增多,血小板增多;白血病骨髓(BM)移植后BM未见异常者。

方法

取肝素抗凝的骨髓或外周血,经三色或四色直接免疫荧光标记法对下列细胞表面抗原进行标记: CD45/CD2/CD10,CD45/CD13/CD7,CD45/CD19/ CD34,CD45/CD117/CD33,CD45/CD14/HLA2DR及CD38/CD56,CD71,血型糖蛋白A(G lyA)和CD41等。

在胞浆抗原标记时首先采用直接免疫标记法标记细胞表面的CD45抗原,然后采用4种透膜法对cCD3,cCD22,cCD79a,cCD13,cCD33和cMPO进行检测。4种透膜法为:①IntraPrep(Immunotech)透膜试剂盒:主要含有 5.5%(v/v)多聚甲醛和皂甙(saponin)。②FACS Permeabilization s olution(FACS PS,Becton Dickins on公司)。③PT(Paraformadehyde T ween220)法[6]:加入2%多聚甲醛,0.5×溶红细胞液(lysing s olution.Becton Dickins on公司)室温作用10分钟,用0.5%T ween220PBS洗2次,采用直接免疫法标记胞浆抗原。④缓冲2甲醛2丙酮液(buffered2 formaldehyde2acetone,BFA)法[7]。

结 果

胞浆抗原检测特异性的鉴定

选过氧化物酶(POX)阳性的早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞,首先不使用透膜剂处理,而直接标记膜的MPO,结果为阴性。使用IntraPrep及FACS PS两种透膜剂处理后,再加入MPO抗体, MPO阳性细胞分别为82%和86%。MPO的平均荧光强度分别为9.77和26.25阳性,说明经两种透膜剂处理后抗体均可进入细胞膜内,但后者的透膜效果比前者好。

4种透膜法

采用IntraPrep及FACS PS透膜后标记cCD3, cCD22,cCD79a,cCD13,cCD33和cMPO,采用PT法标记除cCD3以外的几种抗原,用BFA法主要比较了cCD22的结果。FACS PS透膜剂对细胞的光散射及胞膜的CD45荧光强度影响最小,IntraPrep次之,而PT法和BFA法均对胞膜的CD45荧光强度和光散射值有影响。采用IntraPrep透膜,cCD3在正常T细胞及4例T2ALL的白血病细胞全部为阳性,而cCD22在B2ALL中有阳性也有阴性,因此选用文献报道对cCD22较敏感的BFA及PT法对4例患者细胞(2例B2ALL,1例AML和1例NAL)透膜处理,标记cCD22并与IntraPrep比较。结果AML和NAL患者cCD22为阴性,2例B2ALL患者中,1例经IntraPrep,PT和BFA3种方法透膜cCD22均为阳性,阳性细胞分别为37%,54%和64%,而另1例经3种方法透膜后,cCD22均为阴性,说明cCD22可能不够敏感。因此检测另一种胞浆的B细胞标志CD79a[8],经IntraPrep及FACS PS透膜后,同时标记5例B2ALL患者cCD22和cCD79a。结果1例患者经IntraPrep透膜后cCD22和cCD79a均为阴性,而经FACS PS透膜后,cCD22和cCD79a分别为21%及75%。其余患者均为双阳性,且CD79a阳性细胞明显多于CD22,说明FACS PS透膜强度大于IntraPrep,CD79a比CD22更敏感。3例CD13阳性及2例CD33阳性患者,经IntraPrep透膜检测cCD13和cCD33均为阴性,而经PT透膜后,均为不同程度阳性,亦提示IntraPrep法透膜强度似乎稍弱或者操作要求较高。由此在评定胞浆抗原的阴性结果时,首先需确定透膜是否充分。

因每例标本进行免疫标记时,采用3色或4色标记法,即每管均同时标记CD45抗原,根据CD45的荧光强度不同及细胞侧向角反射(SSC)值,首先将骨髓细胞分为淋巴细胞、单核细胞、髓细胞及幼稚细胞。因此,我们可分别观察成熟细胞与幼稚细胞群细胞膜及胞浆抗原的表达情况。以胞浆抗原在幼稚细胞群中>10%确定为阳性。

胞浆MPO的表达

38例急性白血病患者的免疫表型结果见表1。

?

8

1

?中国实验血液学杂志　J Ex p Hem atol2002;10(1)

T able1　Immunophenotyping results of38cases with acute leukemia

Leukemia n CD7CD2CD4CD19CD10CD13CD33cCD3cCD22cCD79a cMPO AML1861110171600016 AUL110000000000 Bi/Mi210011111001 B2ALL130001313410950 T2ALL441001104000

T able2　Immunophenotyping results of CD7positive patients with AN LL

Noumber Sex Age CD34CD117HLA2DR CD13CD7Other+marker cMPO cCD3cCD22Diagnosis 502M16-++-+---AUL 524M31++++++--AML2M0 547F43-++++CD2+--AML2M1 540M60++++++--AML2M2 539M38+++++CD33+--AML2M4Eo

124M34+---+CD10/CD41/

CD61

---AML2M7

173M25-+-++CD33---CML2M0 198M57-++-+CD38++-Bi2AL

其中18例AML患者中16例幼稚细胞cMPO阳性,1例AML2M7及1例CML2BC患者cMPO为阴性。后者骨髓幼稚细胞SSC值与正常淋巴细胞相似,但细胞膜表达CD117,CD33,CD13及CD7,胞浆CD3也为阴性,因而考虑为CML2急髓变,似为AML2M0。1例AUL患者cMPO为阴性。13例B2 ALL,4例T2ALL及4例B2N HL胞浆MPO均阴性。

4例MDS患者的骨髓细胞免疫分型检查可见5.4%-20%的细胞表达幼稚细胞标志CD34, CD117,HLA2DR及髓系标志CD13和CD33,3例患者幼稚细胞cMPO阳性,阳性细胞比例在幼稚细胞群中低于20%。1例患者因幼稚细胞较低为5.4%,故未进行计算。

所有56例患者标本,成熟粒细胞及单核细胞cMPO均为阳性。

胞浆CD3,CD22及CD79a的表达

4例T2ALL患者,cCD3均为阳性;而13例B2 ALL患者,9例cCD22阳性,其中5例采用IntraPrep 和FACS PS两种透膜法。经FACS PS透膜后cCD22和cCD79a均为双阳性,且FACS PS透膜后所得的阳性细胞明显高于IntraPrep法,CD79a阳性细胞亦明显多于CD22阳性细胞,说明FACS PS透膜强度大于IntraPrep,CD79a比CD22更敏感。

4例B2NHL患者,经IntraPrep透膜后,4例cCD22阳性。而所有56例标本,正常的T和B细胞cCD3和cCD22分别为阳性。

多系列膜标记的表达

在38例急性白血病患者中,共有18例患者表达一个系列以上膜标记。17例ALL患者中,7例表达膜和/或胞浆CD13,但MPO均阴性。21例急性非淋巴细胞白血病患者,8例表达CD7(表2),其中1例同时表达CD2和CD7,8例患者均表达干/祖细胞标志,即CD34和/或CD117和/或HLA2DR阳性。只有1例患者(表2#198)cMPO及cCD3双阳性,幼稚细胞群同时表达CD7,CD117,CD38和HLA2DR,倾向为双表型AL。其余7例cCD3均为阴性,4例cMPO阳性,诊断为AML伴CD7阳性;3例患者cMPO阴性,分别为AUL,AML2M7和CML急髓变。1例患者骨髓存在两群幼稚细胞,一群细胞表达CD34,HLA2DR, CD19,CD10和CD13,此群细胞SSC值与淋巴细胞相同;另一群细胞表达CD117,CD33,CD34,HLA2DR, CD13,CD19和CD10,SSC值比淋巴细胞大,此患者倾向于混合型白血病(见图)。

讨 论

用流式细胞术检测胞浆抗原起于80年代,主要用于检测胞核末端脱氧核苷酸转移酶(terminal

?

9

1

?

流式细胞术检测胞浆抗原及其在白血病免疫分型中的意义

Figu re　A dot plot of C D452sid e scatter(SSC)of one acute leukemia p atients B M cells.The SSC of re gion3(R3)w as similar w ith norm al lymphocytes(LC),w hich expressed C D34,H LA2DR, C D19,C D10,C D13,but cytoplasmic MPO(cMPO)w as neg a2 tive.The SSC of R4w as larger th an LC,w hich expressed C D117, C D13,C D33,C D34,H LA2DR,C D19,C D10and cMPO.This p atient w as consid ered a biclonal/mixed acute leukemia deoxynucleotidyl trans ferase,TdT)。用免疫标记法检测MPO,出现于80年代末,当时普遍采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法(APAAP)。90年代初,出现用FCM 检测MPO的文章。而用FCM检测胞浆抗原的关键是透膜剂的质量,好的透膜剂即要使细胞膜通透,使抗体充分进入胞膜与胞浆抗原结合,又要保留细胞的完整性和颗粒性不变,即保持SSC及FSC值不变。经比较2公司提供的透膜试剂盒及另外2种透膜剂,我们发现FACS PS为较好的一种透膜剂。使用该试剂,胞浆抗原阳性细胞百分数最高,而SSC尤其是CD45荧光强度保持不变。

胞浆抗原检测的原理是某些抗原首先出现于胞浆,然后出现于胞膜,如:CD3,CD22,CD13。国际上提出的有关双表型/双克隆白血病的评分系统中,均给予胞膜或胞浆(m/c)CD3,m/cCD22,cMPO最高分,亦说明其系列的特异性。我们主要依据Catovsky评分系统及参考了欧洲免疫分型协作组[9,10]评分系统,即在髓系记分中加入CD117,记0.5分,每系列>2分,为双表型。如存在两种幼稚细胞则认为双克隆或混合型AL。以此为标准,18例表达一个系列以上标志的AL,只有1例被认为T/髓双表型; 1例为双克隆AL。

MPO为中性粒细胞内嗜苯胺蓝颗粒的主要成分,常用组织化学染色法对其酶活性进行检测,但部分AML细胞MPO活性为阴性,此类患者主要依据免疫法对MPO蛋白进行检测。MPO蛋白开始合成于早幼粒细胞阶段,首先合成酶的前体,约80kD,加工后变为酶的活性部分,具有α2β2结构,所用MPO抗体即可结合酶前体,亦可结合活性酶的α链,因此灵敏度更大。文献报道cMPO为AML细胞较为特异的标志。AML2M1,2M2和2M3患者MPO的阳性率在80%左右[11-12],AML2M4和2M5MPO的阳性率稍低,在50%左右。本组资料,18例初治的AML患者中,只有1例AML2M7患者及1例CML2BC患者MPO为阴性,与文献报道一致,但平均阳性细胞数偏低,不排除透膜强度低所致。

90年代FAB白血病分型提出的新的一类AML,即髓系分化较低的AML2M0的诊断标准。此类患者细胞化学POX染色阴性,免疫分型表达1-2个髓系抗原,包括CD13,CD33,胞浆MPO蛋白,CD11b和CD15[13]。Praxedes等[14]报道所有的AML2M0患者anti2MPO阳性。亦有文章报道AML2M0的患者胞浆MPO蛋白表达的阳性率为57%-78%[11,15]。对AML2M0的诊断,1999年Lemez[16]提出,只有CD13或CD33阳性对AML2M0的诊断是不够的,AML2M0的诊断必须有CD13,CD33,CDw65,CD117和Anti2 MPO中2个以上阳性。并建议采用体外培养法,加入分化剂14烷酰2佛波酯(tetradecanoyl2phorbol2ac2 etate,TPA)后培养4天,细胞向巨噬细胞分化为AML2M0。

从这些文献可知,部分AML2M0患者的胞浆MPO为阴性。因此仅胞浆MPO抗原阴性,不能排除AML的诊断,应综合分析。依我室的结果及文献报道,我们认同将CD117作为判断AML的指标之一。在本组资料中,2例组化POX为阴性患者被认为符合AML2M0诊断,1例膜抗原CD117和CD13阳性,胞浆MPO阳性;另1例CML急变患者,虽然胞浆MPO阴性,但膜表达CD13,CD33和CD117。1例AL 患者,胞浆cCD3,cMPO及cCD22均阴性,其骨髓细胞只表达CD117,CD7及HLA2DR,而CD13和CD33阴性,此患者符合AUL特点。

对cCD3的表达,我们的结果证明,不论是外周血还是骨髓,正常的T细胞均为cCD3阳性。而4例T2 ALL患者,尽管膜的CD3抗原为阴性,但cCD3阳性,因此cCD3阳性是诊断T2ALL的重要标志。

B2ALL患者中cCD22的阳性率似乎偏低。通过比较4种透膜剂及与cCD79a进行比较,考虑其原因有2种,一是透膜剂强度不够,二是cCD22本身不如cCD79a敏感。目前国际上新的诊断标准,推荐检测cCD79作为B系的特异标志,本研究证明有必要采纳此建议。

结论:①应用FACS PS透膜后,阳性细胞数最

?

2

?中国实验血液学杂志　J Ex p Hem atol2002;10(1)

高,且细胞的SSC值及CD45荧光强度保持不变。②cCD3,cMPO及cCD22为系列特异性标志,对正确诊断白血病提供非常有价值的依据。③cCD3,cMPO及cCD22即可表达于相应系列白血病细胞中,也可分别表达于成熟的T细胞、髓细胞及B细胞中。④对B 系AL的鉴别可选择检测具有较强特异性的CD79a。

⑤cCD13和cCD33的表达虽然早于胞膜,但即可表达于ALL,又可表达于AML细胞中,因此系列特异性不高。

参考文献

1van Dongen JJ,K rissansen GW,W olvers T ettero IL,et al.Cytoplasmic expression of the CD3antigen as a diagnostic marker for immature T2cell malignancies.Blood,1988;71:603-612

2Janossy G,C oustain Smith E,Campana D.The reliability of cytoplasmic CD3and CD22antigen expression in the immunodiagnosis of acute leukemia:a study of500cases.Leukemia,1989;3:170-181

3P ombo de Oliveira MS,Matutes E,Rani S,et al.Early expression of MCS2(CD13)in the cytoplasm of blast cells from acute myeloid leukemi2

a.Acta Haematol,1988;80:61-64

4van der Schoot CE,Daams G M,Pinkster J,et al.Monoclonal antibodies against myeloperoxidase are valuable immunological reagents for the diag2 nosis of acute myeloid leukemia.Br J Haematol,1990;74:173-178

5Storr J,Dolan G,C oustain Smith E,et al.Value of m onoclonal anti2myeloperoxidase(MP07)for diagnosing acute leukemia.J Clin Pathol,1990;43:847-849

6Drach D,Drach J,G lassl H,et al.Flow cytometric detection of cytoplasmic antigens in acute leukemias:implications for lineage assignment.Leuk Res,1993;17:455-461

7S laper2C ortenbach IC,Admiraal L G,K err J M,et al.Flow2cytometric detection of terminal deoxynucleotidyl trans ferase and other intracellular antigens in combination with membrane antigens in acute lymphatic leukemias.Blood,1988;72:1639-1644

8Astsaturov IA,Matutes E,Morilla R,et al.Differential expression of B29(CD79b)and mb21(CD79a)proteins in acute lymphoblastic leukemi2

a.Leukemia,1996;10:769-773

9Catovsky D,Matutes E,Buccheri V,et al.A classification of acute leukemia for the1990s.Ann Hematol,1991;62:16-21

10Bene MC,Castoldi G,K napp W,et al.Proposals for the immunological classification of acute leukemia.European G roup for the Immunological Characterization of Leukemia(EGIL).Leukemia,1995;9:1783-1786

11Villam or N,Z arco MA,Rozman M,et al.Acute myeloblastic leukemia with minimal myeloid differentiation:phenotypical and ultrastructural characteristics.Leukemia,1998;12:1071-1075

12Lanza F,Latorraca A,Moretti S,et al.C omparative analysis of differ2 ent permeabilization methods for the flow cytometry measurement of cyto2 plasmic myeloperoxidase and lys ozyme in normal and leukemic cells.Cy2 tometry,1997;30:134-144

13Bennett J M,Catovsky D,Daniel MT,et al.Proposal for the recognition of minimally differentiated acute myeloid leukemia(AML2M0).Br J Haematol,1991;78:325-329

14Praxedes MK,De Oliveira LZ,Pereira W da V,et al.Monoclonal anti2 body anti2MPO is useful in recognizing minimally differentiated acute myeloid leukemia.Leuk Lymphoma,1994;12:233-239

15T sunoda S,Y oshida M.Diagnosis and treatment of acute undifferentiated leukemia and AML2M0.Rinsho K etsueki,1994;35:238-244

16Lemez P.A m ore precise diagnosis of AML M0,a part of which exhibits

a near2tetraploid karyotype.Leukemia,1999;13:145-146

(2001-01-22收稿;2001-10-31接受)

?

1

2

?

流式细胞术检测胞浆抗原及其在白血病免疫分型中的意义

218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析

【全科临床论著】 218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 赵皓,余晾,吕合作,郑宏波,项平 【摘　要】　目的　研究急性白血病(AL)免疫表型特征及诊断价值。方法　采用流式细胞术(FC M)对218例初诊急性 白血病患者进行免疫分型。结果　急性髓系白血病(AML)患者均表达两种以上髓系抗原,其中部分伴有淋系抗原 (C D7)表达。急性淋系白血病(ALL)患者均表达淋系抗原,部分表达一种或两种髓系抗原。14例混合型白血病同时表 达两种以上淋系和髓系抗原标志。4例慢粒急淋变既表达髓系抗原又表达淋系抗原。结论　FC M免疫分型是在细胞形 态学和细胞化学染色基础上对急性白血病诊断与分型的重要补充。 【关键词】　急性白血病;免疫表型;流式细胞术 【中图分类号】　R733.7　R446.63　【文献标识码】　A　【文章编号】　167424152(2010)1021239202 Ana lysis of Imm unophenotype in218Ca ses w ith Acute L eukem i a by Flow Cyto m etry　ZHAO Hao,YU L iang,LV He2zuo, et al.Central L aboratory,the First A ffiliated Hospital of B engbu M edical College,B engbu233004,A nhui,China 【Abstract】O bjecti ve　To exp l ore the acute Leukem ia i m munophenotype and its diagnosis value.M ethods　A ssay the i m mune phenotype in218patients with acute leuke m ia by fl ow cyt ometer.Results　The patients with acute myel oid leukem ia(AML)ex2 p ressed more than t w o kinds of myel oid antigens;part of the m exp ressed ly mphatic antigens(CD7).The patients with acute ly m2 phoblastic leuke m ia(ALL)exp ressed ly mphatic antigens;part of them exp ressed one or t w o kinds of myel oid antigens.Fourteen patients with m ixed acute leuke m ia(MAL)showed t w o kinds or more ly mphoid and myel oid antigens.Four patients with chr onic granular differentiated t o acute ly mphatic leukem ia not only exp ressed myel oid antigens but als o exp ressed ly mphatic antigens. Conclusi on　The i m munophenotype by fl ow cyt ometry is the i m portant supp lementary t o acute leuke m ia diagnosis and typ ing in mor phol ogy and cyt oche m ical dyeing foundati on. 【Key words】　Acute leuke m ia;I m munophenotype;Fl ow cyt ometry 白血病细胞是一种高度异源性、异质性并具有一定增殖活力的恶性细胞。传统的F AB(法国、美国和英国形态学标准)分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上进行的,对急性白血病诊断与分型有其局限性。流式细胞术(Fl ow cyt ometry,M)是根据白血病细胞表面和胞内的特异性抗原,采用单克隆抗体对白血病细胞的来源和分化阶段进行更精细的检测和判断,从而弥补F AB分型的不足,对确定诊断、选择治疗方案和判断预后具有重要意义[1]。本文采用FC M对218例AL患者进行免疫表型分析,现将结果报告如下。 1　资料与方法 111　临床资料　218例患者为我院2008年10月-2010年2月血液科住院患者,年龄10～79岁,男性132例,女性86例。112　研究方法 1.2.1　取材　E DT A2K2抗凝骨髓或血液标本1m l。 1.2.2　仪器与试剂　F ACSCalibur流式细胞仪,购自BD公司。单克隆抗体:F I T C标记的CD2、C D33、HLA2DR、C D15、CD10,PE 标记的CD7、C D13、C D34、C D11b、C D19,Per CP标记的CD45, APC标记的CD5、CD14、CD20、C D45,同型对照I gG1/I gG2a以及混合抗体CD3/M P O/CD79a,透膜剂F I X&PER M及溶血素,以上试剂均购自BD公司,鞘液为自配的P BS缓冲液。 1.2.3　试验方法　表面标志染色:在各试管中分别加入E D2 T A2K2抗凝骨髓或血液50μl,按表1中的抗体组合分别加入相应的抗体或同型对照(F I TC、PE及PercP标记的抗体为30μl, APC标记的抗体为5μl)室温避光孵育15m in,分别加1000μl 溶血素,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。胞内标志染色:先用CD452APC同上进行表面染色、溶血、洗涤,然后加200μl 作者单位:233004安徽省蚌埠医学院第一附属医院中心实验室 通讯作者:赵皓,电子信箱:icecool1980@https://www.sodocs.net/doc/577655595.html, 固定液室温固定细胞15m in,P BS洗涤细胞一次,去上清,加200μl透膜液及胞内染色抗体或同型对照30μl,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。检测结果采用Cell Q uest软件进行分析:首先,在FSC/SSC散点图中,根据细胞大小和颗粒度进行设门选中有核细胞群体;然后,在C D45/SS C散点图中,根据CD45表达强度和颗粒度,对有核细胞进行设门,选中幼稚细胞群体;最后,再对幼稚细胞群体进行分析,确定各种标志的阳性率。判断阳性的标准为:胞内染色标志CD3/M P O/CD79a>10%,其他表面标志>20%。 表1　AL流式细胞术免疫分型抗体组合 抗体A1A2A3A4A5A6B1B2 F I TC I gG1CD2CD33DR CD15CD10I gG1CD3 PE I gG2a CD7CD13CD34CD11b CD19I gG2a MP O Per Cp CD45CD45CD45CD45CD45CD45-CD79a APC I gG1CD5--CD14CD20CD45CD45 2　结果 119例经临床确诊的AML各种抗原表达的阳性率依次为M P O(95.80%)、C D13(90.76%)、C D33(81.51%)、HLA2DR (73.95%)、CD34(54.62%)、CD15(30.25%)、C D11b (22.69%)、CD14(10.92%),其中有19例AML患者伴有淋系抗原C D7的表达。 经临床确诊为ALL的83例患者中,经FC M免疫分型,有21例为T系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD3 (100.00%)、C D7(100.00%)、CD2(90.48%)、CD5(85.71%)、HLA2DR(61.90%)、C D34(42.86%),其中有4例患者伴有CD13等髓系抗原的表达;有62例为B系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD79a(100.00%)、CD19(93.55%)、CD20 (82.26%)、C D10(69.35%)、HLA2DR(83.87%)、CD34 (69.35%),其中有5例患者伴有CD13等髓系抗原的表达。

免疫分型 基础介绍

近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1．流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2．流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不好。 ⑶疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。 二、免疫分型常用的免疫标志及其意义 1．白血病系列分化抗原 T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。 NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。 髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。 红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。 巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。 2．白血病系列非特异性抗原 CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。 3．白血病分化阶段抗原 T细胞抗原CD4、CD8。 B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞浆免疫球蛋白）、CD11C。 4．白细胞共同抗原 CD45为白细胞共同抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。用SSC/CD45 PerCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色，经FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45 PerCP五参数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰。

免疫功能检查参考值及临床意义

免疫功能检查参考值及临床意义 2010-09-24 15:32:56 作者：佚名来源：网络转载 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12～16岁7.5～15.5克/升，成人7.6～16.6克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2.免疫球蛋白A(IgA) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿0～120毫克/升，1～6个月30～820毫克/升，6个月～2岁140～1 080毫克/升，2～6岁230～1 900毫克/升，6～12岁290～2 700毫克/升，12～16岁500～3 000毫克/升，成人710～3 350毫克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3.免疫球蛋白M(IgM) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50～200毫克/升，1～6个月150～700毫克/升，6个月～2岁250～1 300毫克/升，2～6岁350～1 500毫克/升，6～12岁400～1 800毫克/升，12～16岁500～1 800毫克/升，成人700～2 000毫克/升。 【临床意义】

白血病的分类及分型

白血病分类和分型 保定第七医院肿瘤科穆铁军 时间：年月日时分 地点：肿瘤科医办室 参加人员： 白血病是造血系统的一种恶性疾病。其特征为一种或几种血细胞成分的自发性、进行性异常增殖，具有质和量改变的异常白细胞（白血病细胞）在骨髓和其他器官的广泛浸润，导致正常血细胞进行性减少，临床以贫血、出血、发热、白血病细胞浸润为主要表现。 白血病的治疗是根据不同类型选择不同治疗方案，故今日讲解白血病的分类分型。 分类 一、按自然病程及细胞的成熟度分类 （一）急性白血病起病急、病情重、自然病程一般在六个月以内。骨髓及外周血中主要为异常的原始细胞和早期幼稚细胞。 （二）慢性白血病起病缓、发展慢，病程一般一年以上，骨髓和外周血以较成熟的细胞占多数。 二、按细胞类型分类 分为淋巴细胞型、粒细胞型、单核细胞型及一些少见类型，如红白血病、巨核细胞型、浆细胞型、嗜酸细胞型、嗜硷细胞型白血病等。 三、按外周白细胞的多少分类 （一）白细胞增多性外周血中白细胞明显增多，并有较多幼稚细胞出现。 （二）白细胞不增多性外周血中白细胞不增多或甚至低于正常。血片中没有或较难找到幼稚细胞。 分型 一、急性白血病分型 急性白血病分为急性淋巴细胞性白血病（ALL）和急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）两大类，结果如下： ①ANLL分为8个亚型：急性髓性白血病微分化型（M0）、粒细胞白血病未分化型（M1）、粒细胞白血病部分分化型（M2）、早幼粒细胞型（M3）、粒-单核细胞型（M4）、单核细胞型（M5）、红白血病（M6）、巨核细胞型（M7）； ②ALL分为三个亚型：FAB分型：L1、L2和L3型。

近年来又根据细胞的免疫学特点，ALL根据免疫表型不同可分为B-细胞和T-细胞两大类。2000WHO将急性淋巴细胞白血病（ALL）分为三种亚型：（1）前体B细胞急性淋巴细胞白血病（细胞遗传学亚型）：t（9；22）（q34；ql1），BCR/ABL；t（4；llq23），（MLL重排）；t（1；19）（q23；p13）；（E2A/PBX1）；t（12；21）（p12；q22），（ETV/CBFα）。（2）前体T细胞急性淋巴细胞白血病（T—ALL）。（3）Burkitt细胞白血病。FAB分型中的急淋形态学亚型分型方法，因可重复性较差，现已基本放弃，不再把急性淋巴细胞白血病分为L1、L2、L3。骨髓中幼稚细胞>25%时诊断采用ALL的名称，幼稚细胞≤25%称为母细胞淋巴瘤。我们这里介绍白血病的类型分类分型，主要是因为白血病治疗方式和治疗效果往往是根据病的类型而不同的。 二、慢性白血病分型 可分为：慢性淋巴细胞白血病(慢淋)；慢性粒细胞白血病(慢粒)；慢性粒－单核细胞白血病；单核细胞；红血病。 三、特殊类型白血病， 可分为：慢粒急变；低增生性；淋巴肉瘤；组织细胞肉瘤；浆细胞；多毛细胞；嗜酸性粒细胞；嗜碱性粒细胞；组织嗜碱细胞；巨核细胞；未分化型急性白血病。

WHO软组织肿瘤免疫表型大全

2013版WHO软组织肿瘤免疫表型大全2014-11-06艾迪康病理诊断 主要根据2013年“WHO肿瘤分类——软组织和骨肿瘤”翻译而来 第1章脂肪细胞肿瘤（adipocytictumours） 良性 1、脂肪瘤（lipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞表达S-100、leptin和HMGA2阳性。 2、脂肪瘤病（lipomatosis） 免疫表型：和正常脂肪相似。 3、神经脂肪瘤病（lipomatosisof nerve）

免疫表型：因为病变的所有成分均存在于正常神经内，故免疫组化对诊断没有帮助。 4、脂肪母细胞瘤（lipoblastoma）/脂肪母细胞瘤病（lipoblastomatosis）免疫表型：脂肪细胞表达S-100和CD34，原始间叶细胞常表达desmin。 5、血管脂肪瘤（angiolipoma） 免疫表型：血管内皮成分CD31等内皮标记阳性，细胞性血管脂肪瘤增生的梭形细胞CD31阳性，证明为血管内皮。 6、软组织平滑肌脂肪瘤（myolipomaof soft tissue） 免疫表型：梭形细胞SMA和desmin染色弥漫强阳性，证明为平滑肌分化；ER 和PR阳性也有报道；HMB-45阴性。 7、软骨样脂肪瘤（chondroidlipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞S-100强阳性，脂肪母细胞S-100弱阳性，随脂肪细胞逐渐成熟S-100染色逐渐增强。无脂肪母细胞分化特征的细胞S-100阴性。少数病例角蛋白阳性，但EMA一致阴性。 8、梭形细胞脂肪瘤/多形性脂肪瘤（spindlecell lipoma/pleomorphic lipoma） 免疫表型：梭形细胞脂肪瘤和多形性脂肪瘤中的梭形细胞均为CD34强阳性， S-100罕见阳性，偶见desmin阳性。

常用细胞免疫检测方法及其用途

细胞免疫功能检测常用有哪几种方法 一、迟发型过敏反应的体外检测方法 皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应（DTH）的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答，而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。 1．皮肤试验用皮肤试验诊断DTH，常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原，24～48小后，测量红肿硬结的大小，硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验，若仍无反应即为阴性，需排除皮试技术误差，也可能受试者从未接触过此抗原，也可能由于细胞免疫功能缺损，或由于细胞免疫功能缺损，或由于严重感染（麻疹、慢性播散性结核）造成的无反应性。 2．接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）诱发接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导致DTH反应。在动物试验时，初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7～10天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。 二、细胞免疫的体外检测方法 体外检测淋巴细胞的数量和功能，最易采集的是血标本，首先需分离或纯化淋巴细胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液，当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时，由于红细胞（1.092）、多形核白细胞（1.090）、淋巴细胞（1.070）的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞，其中淋巴细胞占80%，单核细胞占20%，淋巴细胞中T细胞占80%，B细胞占4%～10%，其作为非DT、非B细胞。 1．T细胞计数

急性白血病分型

急性白血病分型 一、急性非淋巴细胞白血病（ANLL） 1、微小分化急性髓系白血病（M0型）骨髓有核细胞增生程度较轻，原始细胞大于30%，可达90%以上，核圆形，核仁明显。胞质小，嗜碱性，无颗粒，无Auer小体。 2、急性原始粒细胞白血病未分化型（M1）骨髓增生极度活跃或明显活跃，少数病例可增生减低，骨髓中I型加II型原始粒细胞大于90%（NEC），可见小原粒细胞（胞体小，与淋巴细胞相似，胞似圆形，核染色质呈细颗粒状，较正常原粒细胞密集，核仁1－2个，有伪足）。 3、急性原始粒细胞白血病部分分化型（M2）骨髓增生极度活跃或明显活跃，骨髓原粒I型II型大于30%－90%，单核细胞小于20%，早幼以下各阶段大于10%，约50%病例的白血病细胞内可见Auer小体。 分两个亚型： M2a：骨髓中原粒I型＋II型＞30%－90%，单核细胞＜20%，早幼以下各阶段＞1%。 M2b：骨髓中粒系统明显增生，异常的原始及早幼粒细胞增多，以异常的中性中幼粒细胞增多为主，常＞30%，这类中幼粒细胞有核仁1－2个，核浆发育不平衡。有的晚幼粒亦见有核仁。有核凹陷处常有淡染区，胞浆可见空泡。(亚急粒) 4．急性早幼粒细胞白血病(M3) 骨髓中以颗粒增多的或异常的早幼粒细胞增生为主，>30％，胞体呈椭圆形，核可偏向一边，大小不一，另一端为大小不等的异常颗粒，胞浆可见束状Auer小体，也可逸出胞体之外。 5．急性粒-单核细胞型白血病(M4) 骨髓增生极度活跃或明显活跃，粒、单核两系同时增生，红系、巨核系受抑制。根据原始粒和单核细胞的比例、形态不同以及嗜酸细胞的数量，分为下例四个亚型： M4a：以原始及早幼粒细胞增生为主。幼单核细胞>20％。 M4b：以原、幼单核细胞增生为主。原粒和早幼粒<20％。 M4c：原始细胞具有粒细胞系和单核细胞系共同的形态特征者>30％。 4EO：除上述特征外，骨髓中嗜酸细胞>5％一30％，外周血嗜酸细胞不一定增高。 6．急性单核细胞白血病(M5) 骨髓增生极度或明显活跃，原单幼单细胞大于30％，白血病细胞形态特点：体积小，不规则，质多有伪胞质，有空泡和被吞噬的细胞。 7．急性红白血病(M 6) 骨髓增生极度活跃或明显活跃，红系增生为主，原红、早幼红多见，常有中幼红细胞阶段缺如的红血病裂孔现象，且有形态学异常。后期发展为急性髓

(完整版)临床免疫学检验知识点

临床免疫学检验 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22 （成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。 B细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T细胞的标志是CD4；杀伤T细胞的标志是CD8；T细胞受体=TCR。 T细胞和NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋CD4＋CD8－ = 辅助性T细胞（Th） CD3＋CD4－CD8＋ = 细胞毒性T细胞（Tc或CTL）（T细胞介导的细胞毒试验） CD4＋CD25＋ = 调节性T细胞（Tr或Treg） T细胞功能检测：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。 T细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验； 6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志：CD16（ADCC）、CD56。 测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。 7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS，表面标志CD14，包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。（表达MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（sIg，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（mIg，作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL） 12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL（高变区）是抗原结合部位。

急性髓系白血病的免疫表型分析及临床意义

急性髓系白血病的免疫表型分析及临床 意义 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的探讨成人急性髓细胞白血病(AML)的免疫表型特征及临床意义。方法采用流式细胞仪对113例AML患者进行免疫表型分析。结果髓系抗原表达阳性率依次为CD13＞CD33＞CD15＞CD14，AML患者CD34阳性表达率为35.40％。113例患者中有28例(24.78％)伴有淋系抗原表达，以CD7多见，表达阳性率为71.43％，其次CD19表达阳性率为35.71％。Ly+AML与Ly－AML相比较，两者在个别形态学亚型、临床体征及CD34表达差异有统计学意义，而在异常染色体核型检出率方面无统计学意义。CD+34组CR率(69.23％)较其阴性组(78.05％)低，但两者差别无统计学意义；Ly+AML组CR 率为52.94％(9/17)，低于Ly－AML组78％(39/50)，其中，CD+7组CR率(41.67％)与其阴性组(80％)相比差别有统计学意义。结论 AML 患者高表达CD13、CD33，部分患者同时表达髓系、淋系抗原；CD34及CD7阳性与治疗反应显著相关。 【关键词】急性髓系白血病免疫表型骨髓细胞 随着系列单克隆抗体的应用，白血病细胞免疫分型的广泛开展，使白

血病得到正确的诊断和分型，而免疫标记结合FAB(法、美、英三国学者制定)形态学分型［1］，对急性髓系白血病(AML)各亚型的鉴别及特殊类型急性白血病(AL)的发现、指导治疗及判断预后有重大意义。本文对113例急性髓系白血病的免疫分型及临床特点进行分析，现报告如下。 1 资料和方法 1.1 病例资料宁夏医科大学附属医院血液科2002—2007年间的住院初治AML患者113例，男58例，女55例，年龄14～76岁，中位年龄39岁。根据骨髓细胞形态学、细胞化学染色及免疫分型而确诊。FAB分型：M04例，M114例，M230例，M318例，M49例，M528例，M65例，CML急变5例。 1.2 免疫表型分析受检者抽取骨髓或外周血经肝素抗凝，采用活细胞三色免疫荧光法标记，流式细胞仪检测(型号为FACS Calibur，美国Becton-Dickinson公司生产)，通过二维点图分析抗原表达情况；所用单克隆抗体均为美国BD公司产品。B淋巴细胞系单抗：CD10、CD19、CD20；T淋巴细胞系单抗：CD3、CD5、CD7；髓系单抗：CD13、CD14、CD15、CD33；造血干/祖细胞单抗：CD34。结果判定用Cell Quest 软件分析，CD45/SSC设计中的白血病细胞群表面标记检测阳性率≥20％判断为阳性。 1.3 细胞遗传学检查染色体标本采自治疗前骨髓，用直接培养法和24h短期培养法，按常规制备染色体并进行R显带染色分析20～30个中期分裂相，根据《人类细胞遗传学国际命名制(ISCN)》(1995)

常见的恶性淋巴瘤的免疫表型特征

临床上常见的恶性淋巴瘤免疫表型特征: 1、T细胞和NK细胞淋巴瘤 (1)前体T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)：此型淋巴瘤TDT，CD7，cCD3表达最具特征。同时还可表达CD38，CD2，CD5，CD10;LCA，CD3常阴性。髓系相关抗原CD13和/或CD33在此型中常有表达。 (2)T前淋巴细胞淋巴瘤(T-PLL)：表达T细胞相关抗原，约60%病例CD4+/CD8-，而CD4+/CD8+或CD4-/CD8+较少，不表达TDT，CD10可与T-LBL区别。 (3)成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)：表达T细胞相关抗原，绝大部分病例呈CD4+/CD8-，通常不表达CD7，特征为几乎全部病例CD25阳性，粒酶B，TIA-1阴性。 (4)NK-T细胞淋巴瘤：瘤细胞表达CD56、CD3，多数病例表达粒酶B、穿孔系，约90%以上病例表达细胞毒性颗粒相关蛋白TIA-1。一般不表达CD4/CD8、CD25、CD57，B细胞和组织细胞分化抗原阴性。 (5)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)：CD45R0、CD3阳性，通常CD4阳性细胞多于CD8+，滤泡树突状细胞标记物CD21阳性，常可异常表达CD5、CD7。 (6)外周T细胞淋巴瘤(PTL)：T细胞相关抗原阳性，但常有部分丢失，尤以CD7、CD5多见，以大细胞为主者，可见CD30+/-，但ALK、EMA阴性可与ALCL区别。 (7)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)：特征性肿瘤大细胞表达CD30，多数表达EMA，约10-20%表达CD15，须注意与HL区别。60-80%表达ALK，据报导此标记物阳性表达者5年生成率可达80%，儿童常ALK、EMA共表达，成人多为ALK+/EMA-或ALK-/EMA+。ALCL 在多数情况下仅表达少数T细胞相关抗原，通常CD45R0，CD2、CD4阳性，而CD3、CD5、CD7常不表达。 2.B细胞恶性淋巴瘤： (1)前B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)：瘤细胞表达TdT、HLA-DR，CD79a，几乎全部病例表达CD19、大多数病例表达CD10，还不同程度表达cCD22。LCA、CD20常阴性。 (2)B前淋巴细胞淋巴瘤(B-PLL)：强表达B细胞相关抗原，1/3病例可异常表达CD5，SIg阳性。不表达CD23可与CLL/SLL鉴别。 (3)慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(CLL/SLL)：同时表达CD5、CD23、CD43及B 细胞相关抗原，但CD20表达可能很弱。不表达CD10、CyclinD1。CD5异常表达为其持征，但CD5对组织处理，尤其是组织固定要求较高，要注意假阴性。 (4)套细胞淋巴瘤(MCL)： 同时表达CyclinD1、CD5和B细胞相关抗原，但CyclinD1敏感性较差，组织固定和抗原修复方式是染色的关键。近年推出的兔源性单抗效果好些。KI-67的高表达与不良预后有关。此型不表达CD10、CD23，可与CLL/SLL、FL鉴别。

中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查

中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查 来源:https://www.sodocs.net/doc/577655595.html,时间:2007-10-06 字体:[大中小] 收藏我要投稿 文章出处：朱敏转载请注明出处 【摘要】目的建立健康中国成人血液淋巴细胞免疫表型分析参考值。方法用Simultest IMK-Lymphocyte试剂盒的荧光抗体对102例健康中国成人血液进行染色，以FACSort流式细胞仪进行分析，Simulset程序获取数据并分析结果，SPSS软件进行统计。结果18～65岁健康中国成人淋巴细胞参考值范围CD+3细胞是50%～84%（955～2 860/μl），CD-3CD+19细胞为5%～18%(90～560/μl)，CD+3CD+4细胞为27%～51%(550～1 440/μl)，CD+3CD+8细胞为15%～44%(320～1 250/μl)，CD-3、CD+16和/或CD+56细胞为7%～40%(150～1 100/μl)，CD+3CD+4/CD+3CD+8比值为0.71～2.87。随着年龄增长CD+3CD+4细胞略有升高，CD+3CD+8细胞略有降低。NK细胞在大年龄组女性低于男性，且有统计学差异(P＜0.05)。与高加索人和美国人相比，中国人的CD+3CD+8细胞和NK细胞(CD-3，CD+16和/或CD+56)的相对值(百分率)与绝对值均高，CD-3CD+19细胞和CD+3CD+4细胞仅相对值较低，但绝对值不少。CD+3CD+4/CD+3CD+8比值向低值漂移。结论种族、性别、年龄和环境因素可影响健康人淋巴细胞表型分布。 Reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adult Zhu Lihua, Wang Jianzhong, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing,100034 【Abstruct】Objective To establish the reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adults.Method Staining whole blood with fluorescein-conjugated monoclonal antibodies supplied by simultest TM IMK lymphocyte kit, we analyzed 102 healthy Chinese residents (age range 18～65 years) by FACSort flow cytometer, acquired results by Simultest programme, and performed statistical analysis by SPSS software.Results The 95% reference ranges in absolute counts per microliter of whole blood (percentage of lymphocytes) for CD+3, CD+3CD+4, CD+3CD+8, CD-3CD+19, CD-3/CD+16 and/or CD+56 cells were 955 to 2 860 (50% to 84%), 550 to 1 440 (27% to 51%), 320 to 1250 (15% to 44%), 90 to 560 (5% to 18%), 150 to 1 100 (7% to 40%) respectively. The CD+3CD+4/CD+3CD+8 ratio was 0.71 to 2.87. CD+3CD+4 cells increased and CD+3CD+8 cells decreased slightly with age. Women were compared to men in old age group, NK cells (CD-3/CD+16 and/or CD+56) were lower (P＜0.05). Compared with Caucasians and Americans, Chinese had higher percentage and absolute numbers of CD+3CD+8 and NK cells, but had lower percentage of CD-3CD+19 and CD+3CD+4 cells without absolute number change. So CD+3CD+4/CD+3CD+8ratio skew to the lower values.Conclusion The race, age and environment could influence the reference value of lymphocyte immunophenotype. 【Key words】Lymphocyte immunophenotype Reference value Flow cytometry 淋巴细胞免疫表型分析在原发或获得性免疫缺陷病、自身免疫性疾病的辅助诊断和移植免疫的监测中具有重要作用。随着流式细胞仪的广泛应用，采用流式细胞术进行淋巴细胞免疫表型分析已逐渐成为临床检验的常规工作之一。各国的流式细胞术实验室均建立了自己的参考值，并对其种族、性别、年龄等影响因素进行了探讨。目前我国还没有用流式细胞术、采用双染色分析淋巴细胞免疫表型参考值的报告。为此我们对102例健康成人进行了淋巴细胞免疫表型分析，现报告如下。材料和方法 一、研究对象 102例标本均取自于无免疫性疾病、无现症、不吸烟、体检健康、血细胞计数及肝、肾功能检查正常的成人。年龄18～65岁，其中男性54人，女性48人。首先按男女性别分为两大组，每组中又以40岁为界，≤40岁者为小年龄组（男24人，女19人），＞40岁者为大年龄组（男30人，女29人）。

流式细胞仪在白血病免疫分型诊断的概述

一、流式细胞仪在白血病免疫分型诊断的概述 近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或 APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM ）。流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。 1.流式细胞仪诊断白血病的依据 ⑴ FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜、浆、核的抗原表达 ⑵至今尚未发现白血病的特异抗原。 ⑶能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说。即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现岀与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。 2.流式细胞仪诊断白血病的意义 ⑴骨髓血细胞是形态学分型的基础，FCM白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化，国 际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的，对下列情况意义更大：①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL ）或急性未分 化白血病（AUL ）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病。 ⑵ 临床预测；可根据抗原的表达情况预测病情的预后：如白血病患者有CD7+与CD34+共表达，预后不 好。 ⑶ 疾病监测：可监测病程的发展，疗效，可进行微小残留白血病的检测。 二、免疫分型常用的免疫标志及其意义 1?白血病系列分化抗原 T淋巴细胞白血病：CD3 CD5 CD7。 B淋巴细胞白血病：CD10 CD19 CD22 NK淋巴细胞白血病：CD16 CD56 CD57。 髓系白血病：CD13 CD14 CD33 MPO（髓过氧化物酶）。 红白血病：GlyA （血型糖蛋白A）o 巨核细胞白血病：CD41 CD42 CD61o 2?白血病系列非特异性抗原 CD34 HLA— DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34^、HLA- DF^、CD38-，原始细胞CD34^、HLA- DR+、CD38^，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34 —、HLA- DR-、CD38^o 3?白血病分化阶段抗原 T纟田胞抗原CD4 CD8 B细胞抗原：CD10 Cy g（胞浆卩链）、SmIg （表面膜免疫球蛋白）、CD38和Cylg （胞浆免疫球蛋白）、CD11C 4?白细胞共同抗原

免疫学检验复习题选择题

一、单选题(A1／A2型题) 1．最早将抗原抗体反应原理及方法应用于临床血清学诊断的学者是(A ) A．Widal B．Landsteiner C．KOhler D．ManciniE．Coons 2．下列各项用于反映B细胞功能的试验是( B) A。淋巴细胞转化B．血清免疫球蛋白检测C．迟发型超敏反应皮肤试验D．移动抑制试验E．CD3检测 3．对流免疫电泳的沉淀线出现在抗原抗体之间且靠近抗原孔可说明(B) A．抗原强阳性B．抗原弱阳性C．抗原阴性 D．抗体弱阳性E．抗体阴性 4。下列何种抗原是触发移植排斥反应的首要抗原(D) A．HLA-A、B 、C B．HLA-DP C．HLA-DQ D．HLA-DR E．HLA-D 5．人类MHC基因位于第几对染色体上(B ) A．第1对B．第6 对C．第9对D．第12 对E．第19 对 6．机体的免疫系统具有杀灭或排斥突变细胞功能称为(C ) A．免疫防御B.免疫自稳 C.免疫监视D.免疫应答 E.兔疫识别7．用异硫氰荧光色素(FITC)作标记时其激发光波长近于(D ) A．365nm B．435nm C．450mn D．490nm E．500nm 8.血清中含量最高的补体分子是( C) A．C1 B．C2 C．C3 D．C4 E．C5 9．检测不完全抗体可使用的凝集反应(D ) A．协同凝集反应B．间接凝集反应C．间接血凝试验 D．Coombs试验E．直接凝集反应

10．ELISA试验时易造成空白值增高的原因主要来自于(C ) A．加样不准B保温时间短C洗涤不彻底D比色误差E包被不好11．GVHR的中文全称为( B) A．宿主抗移植物反应B移植物抗宿主反应C补体依赖的细胞毒作用D．荧光偏振免疫分析E人类白细胞抗原 12．为提取高纯度特异性IgG通常采用的方法是(C) A．区带电泳B．凝胶过滤C．亲和层析D．选择性沉淀E．超速离心13．初次应答中首先产生的抗体是(C ) A．1gA B．IgG C．IgM D．IgE E．IgD 14．用于前列腺癌初筛的首选肿瘤标志物是(B ) A．AFP B．PSA C．CEA D．CAl9-9 E．HCG 15．不完全抗原的特点是(B ) A．仅具有免疫原性B仅具有反应原性C具有免疫原性及反应原性D．与抗体不产生沉淀反应E．不可能是病原微生物的产物16．化学发光的基本原理是发光物由于(D ) A．在一定波长激发光照射下发光B．在化学反应中获得能量而发光C．在电子激发态时发光D在电子激发态返回基态时释放能量而发光E．某物在化学反应中生成发光物而发光 17．组织相容性抗原指的是(C ) A．同种异型抗原B．隐蔽的自身抗原C同种移植抗原 D．有核细胞表面抗原E．N曾异性抗原