293FT产病毒步骤

293FT细胞产病毒实验

实验要求：

1.每个小碟2ml 的终液体，106个细胞/碟

2.A液：9、10、11号和含目的基因的质粒各0.5ug，取0.25ml opt-MEM稀释+B液：用0.25ml的opt-MEM稀释6ul的Lipofectamine+1ml 的opt-MEM+0.5ml的细胞悬液

3.T25的培养皿→转染3个小碟

注意：尽量用微样抢加液体，避免损耗太大。

预准备：打开超净台，预热PBS、胰酶、DMEM 20min ，取出opt-MEM、Lipofectamine 2000和各种质粒(200ng /ul)室温放置20min，计数板，EP管，离心管

实验步骤：

质粒A液：1.将质粒全部放置于超净台的EP管架上，取一EP管，加0.75ml opt-MEM和 9、10、11号质粒各7.5ul(各种质粒需1.5ug)，上下倒置摇晃均匀。

2.取3个EP管，标记好含相应目的基因的质粒名称（12A、30、31），每EP

管个加入A液250ul和相应的目的DNA质粒2.5ul（0.5ug）,摇晃均匀，5min LipB液：将Lip先混匀后，取18ul Lip于一新的EP管中，加0.75ml opt-MEM，混匀放置5min.

处理细胞：在这期间把细胞拿出来，沿壁轻加入2ml PBS（不要使细胞冲掉下来），吸弃，加0.5ml胰酶消化

A+B液：混匀B液后，分别取250ulB液于标注12A、30、31的3个EP管中，混匀室温孵育15min.

处理细胞:1.待细胞消化好后，加3.5mlDMED吹打（共4ml），转移入离心管中，在离心管中吹打混匀后，用微样枪取一点液体计数，其余拿去离心5min

2.计数得每小格n个细胞，则n x104个细胞/ml,4ml悬液共4nx104个细胞,

而所需细胞密度应为106/0.5ml=2x106个/ml，故稀释后细胞悬液总体积V为

4nx104个/2x106个/ml ，离心好后加v ml opt-MEM 吹打混匀

种入碟子：取3个小碟子，分别标上“12A、30、31”，共吸3ml opt-MEM，每个小碟子中加1ml,摇晃下培养皿，使液体铺满底面，每皿再加入相应的DNA-Lip复合液

500ul(先混匀)，每皿加入0.5ml配好的细胞悬液（先吹打），加好后，盖上盖

子，摇晃下使细胞分布均匀，显微镜下查看后，放培养箱培养

后续：

换液：7~8个小时后，将细胞取出，弃上清，轻轻加入1.5mlDMEM,转染36~48小时后吸取含病毒的上清液用注射器过滤一下，暂放4℃冰箱存放或立即做转染其他细胞

实验。

如何干净清除病毒

如何干净清除病毒, 一些通用清除病毒方法(推荐) 本文只是针对常见的已知病毒的一些通用的基本的清除方法，并不专门讨论针对某种或者某类病毒的清除方法，如果按照这些清除方法仍不能干净清除病毒，请参见相关的文章。 一、使用正确的杀毒方法 1、在安全模式或纯DOS模式下清除病毒 当计算机感染病毒的时候，很多人都会图方便，在正常模式下清除病毒，但这种方法往往是不能干净清除病毒的。 这里说的正常模式准确的说法应该是实模式（Real Mode），这里通俗点说了。其包括正 常模式的Windows和正常模式的Windows下的"MS-DOS方式"或"命令提示符"。 在正常模式下，由于带毒的文件正在运行，是无法对这些文件直接进行操作的。从现今的反病毒技术和病毒来看，绝大部分病毒都不可能在正常模式下简单的就可以彻底清除了的。很多一些朋友误以为只要装上反病毒软件，软件可以彻底清除计算机上的病毒，当病毒无法彻底清除的时候就认为软件不好，这是很错误的！ 建议在查杀病毒的时候，要在安全模式（Safe Mode）或者纯DOS下进行清除。特别的，对于现在大多数流行的病毒，如蠕虫病毒、木马程序和网页代码病毒等，都可以在安全模式下清除，不必要像以前那样必须要用软盘启动杀毒；但对于一些引导区病毒和感染可执行文件的病毒才需要在纯DOS下杀毒（建议用干净软盘启动杀毒）。而且，当计算机原来就感染了病毒，那就更需要在安装反病毒软件后（升级到最新的病毒库），在安全模式（Safe Mode）或者纯DOS下清除一遍病毒了！ 2、不建议使用网页在线杀毒 我想这也是很多朋友使用的杀毒方法，其实这种方法也是和上述的一样，同样无法彻底清除病毒，同时，由于利用了IE的特殊功能，会带来更多的安全隐患，而且一般反病毒厂商也不会提供全面的病毒库文件，所以这种方法充其量只能查出计算机上是否感染流行的病毒，而不能实际的进行清除病毒。而且，换个角度来看，如果这样就能干净清除病毒的话，那么厂商就没必要销售反病毒软件了。^o^ 二、带毒文件存在于特定的目录或文件中的清除方法 这里所说的是由于某些目录和文件的特殊性，无法直接清除（包括安全模式下杀毒等一些方式杀毒），而需要某些特殊手段清除的带毒文件。以下所说的目录均包含其下面的子目录。 1、带毒文件在\Temporary Internet Files目录下 由于这个目录下的文件，Windows会对此有一定的保护作用（未经证实）。 所以对这个目录下的带毒文件即使在安全模式下也不能进行清除，对于这种情况，请先关闭IE等一些程序软件，然后选择IE中的"工具"\"Internet选项"，选择"删除文件"删除即可，如果有提示"删除所有脱机内容"，也请选上一并删除。 2、带毒文件在\_Restore目录下，*.cpy文件中 这是系统还原存放还原文件的目录，只有在装了Windows Me/XP操作系统上才会有这个目录，由于系统对这个目录有保护作用。 对于这种情况需要先取消"系统还原"功能，然后将带毒文件删除，甚至将整个目录删除也是可以的。

整理)慢病毒稳转细胞株步骤

稳转慢病毒 一、所需试剂 1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80℃保存2-3年，质粒-20℃保存2-3年，病毒液-80℃保存1年） （1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp的序列及位于env序列中的RRE，含宿主RNA聚合酶识别部分 （2）包装质粒（psPAX2）：包含了pol、gag包装成分 （3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了env基因. 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病毒载体。 2、包装细胞：293T细胞 3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒 4、转染试剂：XTREME-GENE（-20℃保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物 5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高压蒸汽灭菌 **也可直接从公司买来病毒液（-80℃封口膜封口冻存管保存，4℃保存3天）：滴度一般为108TU/ml 6、10mg/ml polybrene（-20℃分装保存）：溴化己二甲铵。是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene 能提高感染效率2～10 倍。有一定细胞毒性，需要摸索浓度（1～10μg/ml） 7、无血清培养基：optimen 8、贴壁细胞（复后3代以上的细胞） 9、puromycin：嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞 二、具体步骤 <一>病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转） 第一天 1、种板，10×105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml，过夜 2、配制5X PEG8000/NaCl溶液 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃ 第二天 2、加入2ml全培养基DMEM 3、将1加入2，孵育10h，换成5ml全培养基

XX公司信息安全事件处理流程

XX公司信息安全事件处理流程 一、信息安全事件分类 根据我市公司生产经营工作的实际运行情况，将信息安全事件从网络、系统、机房基础设施三方面按照重大信息安全事件和一般信息安全事件进行分类。 1、重大信息安全事件 1) 网络及网络安全方面 1.1通信链路中断、或通信设备故障持续时间超过4小时。 1.2重要网络设备、网络安全设备非正常停机或无法访问持续时间超过4小时。 1.3发生计算机程序、系统参数和数据被删改等网络攻击和破坏或计算机病毒疫情导致网络不能正常运行超过4小时不能恢复的。 2) 信息系统方面 2.1重要服务器（小型机）、数据存储设备非正常停机或无法访问超过4小时。 2.2应用系统大面积不能正常访问超过4小时。 2.3 重要信息系统数据损坏或丢失。 2.4信息系统遭受突发网络攻击，系统数据被破坏、篡改和窃密。 2.5备份数据不能正常使用。

2.6 发生传播有害数据、发布虚假信息、滥发商业广告、随意侮辱诽谤他人、滥用信息技术等信息污染和滥用，网络地址和用户身份信息的窃取、盗用。 3) 机房基础设施方面 3.1机房出现严重漏水。 3.2非计划断电或计划内长时间停电。 3.3机房或UPS室发生火灾或机房设备发生自燃。 3.4 UPS非正常工作3小时以上。 3.5 发生自然灾害性事件导致的信息安全事故。 3.6机房设施非正常停机超过4小时。 4）其它 4.1 各类设备损坏或失窃，直接经济损失达1万元以上的。 4.2产生的社会影响波及到一个或多个地市的大部分地区，引起社会恐慌，对经济的建设和发展有较大负面影响，或损害到公众利益。 2、一般信息安全事件 1) 网络及网络安全方面 1.1通信链路中断、或通信设备故障持续时间超过2小时。 1.2重要网络设备、网络安全设备非正常停机或无法访问持续时间超过2小时。 1.3发生计算机程序、系统参数和数据被删改等网络攻击和破坏或计算机病毒疫情导致信息系统不能提供正常服务超过2

招警考试行测言语理解练习题及详解

招警考试行测言语理解练习题及详解 【例题】在西斯廷礼拜堂的天花板上，文艺复兴时期的艺术巨匠米开朗基罗把他笔下的人物描绘得如此雄壮、有力。在意大利，每当我们看到这些魁伟强劲、丰满秀美的人体艺术作品时，就会深深地感到人类征服自然、改造自然的勇气和力量，使我们对文艺复兴运动与现代体育的渊缘有了更深刻的理解。 这段文字是在谈文艺复兴运动与（）。 A．意大利 B．现代体育 C．人体艺术 D．米开朗基罗 【例题】近日，有能源专家指出，目前全国不少城市搞“光彩工程”，在当前国内普遍缺电的形势下这是不适宜的。按照上海电力部门的测算，上海的灯光工程全部开启后，耗电量将达到20万千瓦时，占整个城市总发电量的2%，相当于三峡电厂目前对上海的供电容量。 这段文字的主旨是（）。 A．搞光彩工程对国家和人民无益 B．现在不宜在各地推广光彩工程 C．上海整个城市的总发电量不高 D．上海的灯光工程耗电量惊人 【例题】现代心理学研究认为，当一个人感到烦恼、苦闷、焦虑的时候，他身体的血压和氧化作用就会降低，而当他心情愉快时整个

新陈代谢就会改善。 根据这段文字我们知道（）。 A．人们可以通过调节心情来调节血压 B．心情好坏与人的身体健康存在密切关系 C．血压和氧化作用降低说明该人心情不好 D．只要心情愉快就可以改善整个新陈代谢 【例题】俄罗斯防病毒软件供应商——卡斯佩尔斯基实验室于6月15日宣布，一个名为29a的国际病毒编写小组日前制造出了世界上首例可在手机之间传播的病毒。卡斯佩尔斯基实验室说，29a小组于15日将这个名叫“卡比尔”的蠕虫病毒的代码发给了一些反病毒厂商，后者确认该病毒具备在手机之间传播的功能。 该段文字作为一则报纸上的新闻，最适合做该段文字题目的是（）。 A．“卡比尔”蠕虫病毒在俄诞生 B．29a的国际病毒编写小组的新贡献 C．世界首例在手机之间传播的病毒诞生 D．反病毒厂商确认手机之间可传播病毒 【例题】有一种很流行的观点，即认为中国古典美学注重美与善的统一。言下之意则是中国古典美学不那么重视美与真的统一。笔者认为，中国古典美学比西方美学更看重美与真的统一。它给美既赋予善的品格，又赋予真的品格，而且真的品格大大高于善的品格。概而言之，中国古典美学在对美的认识上，是以善为灵魂而以真为境界的。

勒索病毒简介及处理

Cryptowall、locky、cerber等勒索病毒 的运行原理及预防杀毒普及贴 勒索病毒概述： 勒索病毒从2014年开始兴起，2015年开始逐步流行，到2016年已经开始波及全球了。黑客勒索的金额估计已经超过4亿。对企业公司造成了巨大损失。美国FBI悬赏300万缉拿比特币敲诈者”木马家族的作者名叫艾维盖尼耶米哈伊洛维奇波格契夫。 从2015年开始，国内陆续发现勒索病毒，到2015年底开始达到高峰，日中病毒数超千台。有很多企业局域网内电脑集体中毒，造成巨大损失。 由于被加密文件都是用的比较高级的加密算法，所以受害者除了付款买回，没有别的办法解密文件。 勒索病毒传播 黑客通过邮件、漏洞或者挂马网站，传播病毒。一但用户点击中毒，病毒便加密客户的文档，然后上传私钥，留下勒索信息，限期付款赎回，否则中毒者的文档将永远无法找回。

勒索病毒图解 1、关于病毒传播方式： 由于现在技术的发展，黑客也开始讲求分工合作。制作病毒跟传播病毒都开始由专门的人士负责，CERBER就是典型，根据最新的病毒样本分析，CERBER附带的一个.json格式的配置文件。通过研究这个文件，我们发现这种特别的勒索软件是可以定制的，黑客自己可以改变赎金的数额大小，定制特定的文件扩展列表，当然还有需要感染国家的黑名单。这表明CERBER本身就是为了卖给二手黑客贩子而设计，量身定制勒索需求服务的。 现在的病毒传播一般黑客都是外包给专门的病毒传播机构，一般通过邮件钓鱼、网站挂马和电脑漏洞传播。 2、关于加密算法： 现在的勒索病毒加密方式一般用的RSA算法和AES算法。 AES算法（英语：Advanced Encryption Standard简写），在密码学中又称Rijndael加密法，是美国联邦政府采用的一种区块加密标准。这个标准用来替代原先的DES，已经被多方分析且广为全世界所使用。经过五年的甄选流程，高级加密标准由美国国家标准与技术研究院（NIST）于2001年11月26日发布于FIPS PUB197，并在2002年5月26日成为有效的标准。2006年，高级加密标准已然成为对称密钥加密中最流行的算法之一。 RSA算法是一种非对称加密算法。在公开密钥加密和电子商业中RSA被广泛使用。RSA 是1977年由罗纳德·李维斯特（Ron Rivest）、阿迪·萨莫尔（Adi Shamir）和伦纳德·阿德曼（Leonard Adleman）一起提出的。当时他们三人都在麻省理工学院工作。RSA就是他们三人姓氏开头字母拼在一起组成的。 理论上，这2种算法只要超过15位数就基本无法破解，而黑客一般用的是128位，用现在的电脑技术破解的话需要几十万年。这也是黑客之所以嚣张的底气。

蠕虫病毒有什么危害如何杀

蠕虫病毒有什么危害如何杀 时间:2013-01-15 19:26来源:https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,作者:xp系统下载点击:170次电脑的蠕虫病毒是什么，会给电脑系统造成什么危害呢？“2003蠕虫王”（https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,Killer2003）感染该蠕虫病毒后网络带宽被大量占用，导致网络瘫痪，该蠕虫是利用SQL SERVER 2000 的解析端口1434的缓冲区溢出漏洞，对其网络进行攻击。由于“2003蠕虫王”具有极强的传播能力，目前在亚洲、美洲、澳大利亚等地迅速传播，已经造成了全球性的网络灾害。由于1月25日正值周末，其造成的恶果首先表现为公用互联网络的瘫痪，预计在今后几天继续呈迅速蔓延之势。 小编建议您使用360免费杀毒进行查杀，然后再根据查杀情况进行相应措施。 蠕虫病毒传播过程 2003蠕虫病毒是一个极为罕见的具有极其短小病毒体却具有极强传播性的蠕虫病毒。该蠕虫利用Microsoft SQL Server 2000缓冲区溢出漏洞进行传播，详细传播过程如下： 该病毒入侵未受保护的机器后，取得三个Win32 API地址，GetTickCount、socket、sendto，接着病毒使用GetTickCount获得一个随机数，进入一个死循环继续传播。在该循环中蠕虫使用获得的随机数生成一个随机的ip地址，然后将自身代码发送至1434端口（Microsoft SQL Server开放端口），该蠕虫传播速度极快，其使用广播数据包方式发送自身代码，每次均攻击子网中所有255 台可能存在机器。易受攻击的机器类型为所有安装有Microsoft SQL Server 2000的NT系列服务器，包括WinNT/Win2000/WinXP等。所幸该蠕虫并未感染或者传播文件形式病毒体，纯粹在内存中进行蔓延。病毒体内存在字符串 “h.dllhel32hkernQhounthickChGet”、“Qh32.dhws2_f”、“etQhsockf”、“toQhsend”。该病毒利用的安全漏洞于2002年七月被发现并在随后的MS SQL Server2000补丁包中得到修正。 蠕虫病毒的特征 该蠕虫攻击安装有Microsoft SQL 的NT系列服务器，该病毒尝试探测被攻击机器的1434/udp端口，如果探测成功，则发送376个字节的蠕虫代码。1434/udp 端口为Microsoft SQL开放端口。该端口在未打补丁的SQL Server平台上存在缓冲区溢出漏洞，使蠕虫的后续代码能够得以机 会在被攻击机器上运行进一步传播。 该蠕虫入侵MS SQL Server系统，运行于MS SQL Server 2000主程序sqlservr.exe应用程序进程空间，而MS SQL Server 2000拥有最高级别System 权限，因而该蠕虫也获得System级别权限。受攻击系统：未安装MS SQL

脂质体转染的实验原理与操作步骤大全

脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy，Propyl]-n， n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 一、脂质体(liposome)转染方法原理 脂质体(liposome)转染方法原理：脂质体((Iiposome)作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。 中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 二、脂质体转染操作步骤 1、操作步骤[方法一]： (1)细胞培养：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃CO2培养至40%~60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释2-50μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。 (3)转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入1mL不含血清培养液。

蠕虫的行为特征描述和工作原理分析

蠕虫的行为特征描述和工作原理分析* 郑辉＊＊　李冠一　涂菶生　 （南开大学 20-333# ，天津，300071） E-mail: zhenghui@https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html, https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,/students/doctor/spark/zhenghui.htm 摘要：本文详细讨论了计算机蠕虫和计算机病毒的异同，指出它们除了在复制和传染方面具有相似性之外，还有很多不同点，如蠕虫主要以计算机为攻击目标，病毒主 要以文件系统为攻击目标；蠕虫具有主动攻击特性，而病毒在传播时需要计算机 使用者的触发。通过详细区分它们的不同行为特征，确定了在计算机网络安全防 范体系中不同角色的责任。然后描述了蠕虫发展的历史，从中可以看到，蠕虫产 生了越来越大的危害。通过分析计算机蠕虫的工作原理、功能结构、实体组成， 提出了蠕虫的统一功能结构模型，并给出了有针对性的对计算机蠕虫攻击进行防 范的措施。最后本文分析了一些新的蠕虫技术发展趋势，指出计算机蠕虫本质上 是黑客入侵行为的自动化，更多的黑客技术将被用到蠕虫编写当中来，由此可以 看出对蠕虫攻击的防治和对抗将是长期而困难的工作。 关键词：蠕虫，计算机病毒，计算机网络安全，蠕虫定义，蠕虫历史，行为特征，功能模型 一、　引言 计算机病毒给世界范围内的计算机系统带来了不可估量的危害，给人们留下了深刻的印象。同时给人们一种误解，认为危害计算机的程序就是病毒。从而不加区分把计算机病毒（Virus）、计算机蠕虫（Worm）、木马程序（Trojan Horse）、后门程序（Backdoor）、逻辑炸弹（Logic Bomb）等等这些概念都称为计算机病毒。这种误解不仅体现在媒体的宣传中，而且体现在病毒技术研究人员的文章[1][2]中，反病毒厂商对产品的介绍说明中，甚至政府部门制定的法律法规[3]当中。这种相近概念上的误解导致不能有效的给出针对不同类型危害计算机安全的程序的有效防治措施，也为整体的计算机安全防护带来了一定困难。另外，同一程序的不同分类也不利于对其性质的进一步研究和分析。 计算机病毒和计算机蠕虫在传播、复制等特性上非常相似，尤其容易造成人们的误解。导致误解的原因有很多，一方面由于反病毒技术人员自身知识的限制，无法对这两种程序进行清楚细致的区分；另一方面虽然病毒的命名有一定的规范[4][5]，但病毒编写者在为自己的程序起名字的时候并不一定遵循这个规范，利用网络功能如电子邮件进行传播的病毒常常被病毒编写者冠以蠕虫的名字，这也给人们带来一些误导。为了照顾这种病毒的命名，曾有文献试图将蠕虫细分为活动蠕虫和邮件蠕虫[6]。由于用计算机病毒这个称谓不能涵盖所有危害计算机的程序的特征，而且容易产生误导，所以有的文献采用了含义更广泛的称谓“恶意软件”（malware）[7]来统一称呼它们。从蠕虫产生开始，十几年来，很多研究人员对蠕 *高等学校博士点学科点专项科研基金资助课题（编号：2000005516）。 **作者简介：郑辉（1972～），男，吉林伊通人，博士研究生，主要研究领域为网络与信息安全。李冠一（1978～），女，辽宁鞍山人，硕士研究生，主要研究领域为模式识别，计算机视觉与图像处理等。涂奉生（1937～），江西南昌人，博士生导师，主要研究领域为CIMS， DEDS理论，制造系统及通讯理论。

Conficker清除方法

Conficker清除方法 清除Conficker蠕虫病毒详细步骤 2011-01-15 17:00 Conficker简介： Worm:Win32/Conficker.B.9.831 ，利用0867漏洞的蠕虫。 conficker蠕虫传播主要通过运行windows系统的服务器服务的缓冲区漏洞。它使用特定当在一台电脑中成功执行，它会禁用一些系统服务，比如windows系统更新，windows安全中心，告。然后他会连接一个服务器，在那里他会接到进一步传播的命令，收集个人信息，和下载安装附它还会把自己添加到必然会有的windows活动进程中，像是svchost.exe，explorer.exe和serv 被conficker蠕虫感染症状： 帐户锁定政策被自动复位。某些微软Windows服务会自动禁用，如自动更新，后台智能传和错误报告服务。域控制器对客户机请求回应变得缓慢。系统网络变得异常缓慢。这可以从检测的中看出。跟杀毒软件，windows系统更新有关的网站无法访问。另外它发射暴力密码破解攻击管理员共享。最好是把密码更换成更好的。 友情提示: 为了能更完整杀掉 win32.conficker病毒, 在打开本文中的连接时,请先点右键, 再在弹出的菜单中选"在新窗口中打开"。 清除Conficker蠕虫1(此方法适用于普通网民) 1:下载最新Conficker免疫补丁 https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,/downloads/details.aspx?displaylang=zh-cn&FamilyID=0d5f9b 支持的操作系统：Windows XP Service Pack 2; Windows XP Service Pack 3 https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,/downloads/details.aspx?displaylang=zh-cn&FamilyID=f26d39 Windows Server 2003 Service Pack 1; Windows Server 2003 Service Pack 2 2:打好补丁后,使用MSRT进行清除企业环境中MSRT的部署 Conficker蠕虫清除工具下载--conficker蠕虫专杀工具 https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,/kb/890830 （Windows 2000/XP/2003/）

转染步骤及经验(精华)

转染步骤及经验（精华） 一、基础理论 转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。 二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养： 取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备： 在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL； 轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基， 或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS） 抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血

网络病毒应急预案

应急预案 一、编制目的 为了应对网络安全突发事件，提高各级人员对事故的应急处置能力，消除事故隐患或最大限度地减少事故造成的危害和损失，保障职工生命及财产安全，维护正常的生产和工作秩序，特编制本预案。 二、编制依据 本预案依据《中华人民共和国安全生产法》、《中华人民共和国消防法》《中华人民共和国网络安全法》等其他有关法律法规制定。 三、适用范围 公司办公计算机及机房网络设备的事故应急处置工作。 四、应急工作组织流程图及方案

应急处置机构框架图 组(以下简称：项目部应急处置领导小组) 组长：姓名（电话） 副组长：姓名（电话）、姓名（电话） 成员：姓名（电话）、姓名（电话） 姓名（电话）、姓名（电话） 姓名（电话）

计算机病毒防治管理应急预案 发现病毒后，应及时通知公司管理部或本部门病毒防 治工作负责人，相关负责人应采取以下措施： (一）隔离受感染主机：当出现计算机病毒传染迹象时，立即隔离被感染的系统和网络，并进行处理，不应带"毒"继续运行；对于重要服务器，要先确定被感染情况，不要盲目断网； 确定病毒种类特征：采用多种手段确定病毒的类型和传播途径，如查看防病毒软件的报警信息、搜索互联网相关信息、和防病 毒厂商沟通等途径。对于未知病毒，可以尽快提交给有关部门 或厂商。一旦出现传播速度快，威胁大的新病毒，应该立即进 行手工升级； (二）防止扩散：如果出现大面积传播的趋势，要根据病毒的传播形式，采取网络访问控制、内容过滤等手段控制病毒的扩散； (三）查杀病毒：尽量使用专杀工具对病毒进行查杀，完成后，重启计算机，再次用最新升级的防病毒软件检查系统中是否还存在该病毒，并确定被感染破坏的数据是否确实完全恢复。 (四）查找中毒原因，改进和完善防护措施，对造成严重影响的应填写《病毒查杀分析报告》交信息技术部存档。 将进行有关操作如实记录，并有相关领导或部门签字确认后存档。

w32.downadup.b蠕虫病毒详解及清除攻略

w32.downadup.b蠕虫病毒详解及清除攻略 最近经常到几个工厂走动，发现有的局域网都感染受了W32.Downadup.B蠕虫病毒。杀毒软件可以查杀，但是都不彻底，一边清除，一边又继续生成，让人不胜其烦。发这篇日志，就是让今后遇到该问题的朋友能够舒心点。 W32.Downadup.B可利用Microsoft Windows服务器服务RPC的远程代码执行漏洞进行传播，也可利用弱密码保护的网络共享进行感染。W32.Downadup.B会在硬盘上新建autorun.inf 文件，若用户进入硬盘空间，恶意代码便会自动运行。同时，它还会监控是否有其他可移动存储设备连接到已感染病毒的计算机上。一旦连接，此蠕虫病毒会在这个新硬盘空间建立一个autorun.inf文件。此外，W32.Downadup.B还会监测计算机发出的DNS请求中是否有某些特定字符串，并以“超时，访问不成功”的方式阻止计算机访问某些网站（如安全更新网站）。这意味着受感染的计算机可能无法安装补丁或更新杀毒软件，从而无法清除病毒威胁。 W32.Downadup.B病毒介绍 Worm:W32/Downadup.AL [F-Secure], Win32/Conficker.B [Computer Associates], W32/Confick-D [Sophos], WORM_DOWNAD.AD [Trend], Net-Worm.Win32.Kido.ih [Kaspersky] 蠕虫 Windows 2000, Windows 95, Windows 98, Windows Me, Windows NT, Windows Server 2003, Windows Vista, Windows XP W32.Downadup.B是蠕虫病毒，通过攻击 Microsoft Windows Server Service RPC Handling 远程编码执行漏洞 (BID 31874) 进行传播。它还尝试传播到弱密码保护的网络共享，并阻止访问与安全相关的网站。W32.Downadup.B病毒会修改 tcpip.sys 文件。 一旦执行，蠕虫会检查下列注册表项是否存在，如果不存在将创建这些注册表项： * HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Applets\"dl" = "0" * HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Applets\"dl" = "0" * HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Applets\"ds" = "0" * HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Applets\"ds" = "0" 然后，它会将其自身复制为下列文件中的一个或多个： * %ProgramFiles%\Internet Explorer\[RANDOM FILE NAME].dll * %ProgramFiles%\Movie Maker\[RANDOM FILE NAME].dll * %System%\[RANDOM FILE NAME].dll * %Temp%\[RANDOM FILE NAME].dll * C:\Documents and Settings\All Users\Application Data \[RANDOM FILE NAME].dll 它创建具有下列特征的新服务： 服务名称：[PATH TO WORM] 显示名称：[WORM GENERATED SERVICE NAME] 启动类型：自动 接下来通过创建下列的注册表项注册为服务： * HKEY_LOCAL_MACHINE\SYSTEM\CurrentControlSet\Services\[WORM GENERATED SERVICE NAME]\Parameters\"ServiceDll" = "[PATH TO WORM]" * HKEY_LOCAL_MACHINE\SYSTEM\CurrentControlSet\Services\[WORM GENERATED SERVICE NAME]\"ImagePath" = %SystemRoot%\system32\svchost.exe -k netsvcs

勒索病毒防范方法

勒索病毒防范方法 一、系统补丁更新 从官方下载适配自己电脑操作系统的MS17-010补丁～本压缩包中也会包含。在安装补丁过程中出现“此更新无法适配本系统”问题时～因为电脑操作系统未更新到SP3～请下载sp3补丁将操作系统更新到SP3～然后再更新MS17-010补丁。 二、端口关闭 1、关闭 445、135、137、138、139 端口～关闭网络共享也可以避免中招。方法如下: ,1,运行输入“dcomcnfg” ,2,在“计算机”选项右边～右键单击“我的电脑”～选择“属性”。 ,3,在出现的“我的电脑属性”对话框“默认属性”选项卡中～去掉“在此计算机上启用分布式COM”前的勾。 ,4,选择“默认协议”选项卡～选中“面向连接的TCP/IP”～单击“删除”按钮 2、关闭 135、137、138 端口 在网络邻居上点右键选属性～在新建好的连接上点右键选属性再选择网络选项卡～去掉 Microsoft 网络的文件和打印机共享～和 Microsoft 网络客户端的复选框。这样就关闭了共享端 135 和 137 还有 138端口 3、关闭 139 端口 139 端口是 NetBIOS Session 端口～用来文件和打印共享。关闭 139 的方法是在“网络和拨号连接”中“本地连接”中选取“Internet协议(TCP/IP)”属性～进入“高级 TCP/IP 设置”“WINS设置”里面有一项“禁用 TCP/IP的NETBIOS ”～打勾就可关闭 139 端口。

4、关闭 445 端口 ,1,注册表关闭。开始-运行输入 regedit. 确定后定位到 HKEY_LOCAL_MACHINE\SYSTEM\CurrentControlSet\Servi ces\ NetBT\Parameters～新建名为“SMBDeviceEnabled”的DWORD值～并将其设置为 0～则可关闭 445 端口。 ,2,关闭Server服务。检查系统是否开启Server服务: 按“WIN+R”键～打开运行窗口, 输入”services.msc”～回车, 查找service～查看service服务状态～如果开启～请右击属性选择关闭。 ,3,手动关闭445端口。打开开始按钮～点击运行～输入cmd～点击确定,输入命令:netstat -an 回车,查看结果中是否还有445端口,依次输入下面命令:net stop rdr 回车,net stop srv 回车,net stop netbt 回车,再次输入 netstat -ano～成功关闭 445 端口。如果还不有445显示～需要重启电脑就好了。 ,4,配置主机级 ACL 策略封堵 445 端口。通过组策略 IP 安全策略限制Windows 网络共享协议相关端口 开始菜单->运行，输入 gpedit.msc 回车。打开组策略编辑器 在组策略编辑器中，计算机配置->windows 设置->安全设置->ip 安全策略下，在编辑器右边空白处鼠标右键单击，选择“创建IP 安全策略”

新发病毒处理及样本提取方法

新发病毒处理及样本提取方法 1、首先确定病毒源，断开其网络（蠕虫病毒，ARP病毒），阻断传播途径： 2、检查可疑进程： 利用Icesword工具或系统“任务管理器”查看进程，其中Icesword工具可有效显示可疑进程调用文件目录，根据此目录，提取此文件样本，并可直接通过右键中的“结束进程”杀死可疑进程；或在“命令提示符”中输入“ntsd –c q –p PID（进程ID）”结束进程。 注：如果系统EXE文件无法打开，可将Icesword.exe改为https://www.sodocs.net/doc/6c2177977.html,再执行。

3、检查注册表启动项： HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Run HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunOnce HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunonceEx HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunServices HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Run HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunOnce HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunServices 在以上表项中检查是否有可疑启动项目，如果有，针对启动项目中提供的路径查找文件，也可根据这些文件名查找其它相关注册表项； 查找文件后，可手动删除可疑表项，或通过使用HijackThis等工具清理注册表启动项； 注意：删除前先导出备份注册表，以备删错重新导入。

勒索病毒操作流程.doc

关于应对勒索病毒相关事宜的紧急通知 各研究所、中心、室、厂、站、队、机关及各直属部门： 5月12日晚开始，在国内外网络中陆续出现针对windows 操作系统的勒索病毒，该病毒基于网络途径传播，对计算机文件进行加密破坏，部分服务器和个人计算机收到攻击，部分系统目前不能正常使用。根据** 公司和局信息管理部要求，关闭办公网络及相关服务器，对于各办公室机器，具体安排如下：一、对于未中毒的设备 1、断网。 2、关闭445 端口。（具体操作见附件） 3、按照windows 版本运行相应的补丁。 4、安装NAS免疫工具。 5、使用查杀工具杀毒。 二、对于中毒的设备 1、断网、登记。 2、原则上全盘格式化，重新安装操作系统。 3、关闭445 端口。（具体操作见附件） 4、按照windows 版本运行相应的补丁。（以分发至各所） 5、安装NAS免疫工具。 注：补丁、免疫工具及查杀工具已分发至各所

技术支持电话：7805870

注意：实施之前请拔掉网线。进行如下两步操作：1、关闭445端口，2、打补丁 关闭445端口流程 一、单击开始”一一运行”，输入“regedit ”，单击确定”按钮，打开注册表。 、找到注册表项 HKEY_LOCAL_MACHINE \System\Curre ntCo ntrolSet\Services\NetBT\Parame o ters

paiqeu3eo!Aaag|/\IS… adOMQ # '同 侑》莹邂帥(7)>S C3)g$? 宿)扫苴 ■ (5)18 SMS? ■ ? ㈢則宙捷去翌 (3)串右 讯)曰塞母古金 0)a}QyOMa ⑻g ：題 ⑺劇H (5?s&± …0烘蔓 h 的冋 [ 1 9^ ° a IKldOMQ … —— “iOg 仲寅韜孚顶 a sjejaiiiejed… t? '三 501 fl w rn '* Axojdorj rn * “柄补n 由 测裁o + icfeism rj !+ SICBM O 卡 【IP “声w n > 【姮】归；中阻? L + 5w rj 匡 5Ct|qW55LU 厂 + WbdSW 1+ SDcro 却 n ：+ S sacejjaim | TTS — mt 电:押i —- umug W\ - 193?N LI

脂质体转染实验原理与操作步骤总

脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 日期：2012-06-25 来源：互联网作者：青岚点击：3644次 摘要： 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 找产品，上生物帮>> >> 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy，Propyl]-n，n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 一、脂质体(liposome)转染方法原理 脂质体(liposome)转染方法原理：脂质体((Iiposome)作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。 中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 二、脂质体转染操作步骤 1、操作步骤[方法一]：