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逆相层析管柱移动相的转换与平衡

逆相层析管柱移动相的转换与平衡

举分析型层析管柱4.6 x 250mm,其内容积计算式 V = πr 2L 。经计算而得分析型4.6 x 250mm 层析管柱之内容积为4.2ml 。

1.) 当选用分析型C18 ( ODS ) 4.6 x 250mm 层析管柱准备分析,仪器系统换上新的MeOH / H2O, AeCN / H2O… 等不具酸,盐类移动相时,约须10倍该层析管柱内容量 - 即10 x 4.2约42ml 的流通量,用以作成换新移动相及彻底完成新移动相的平衡,准备为随后HPLC 可靠的定性定量分析。

2.) 若换新有机相 / (H2O +酸) 移动相时,约须15倍该层析管柱内容量即15 x 4.2约60ml 作为移动相转换及平衡新移动相的流通量。

3.) 若换新有机相 / (H2O + 酸 + 盐类) 移动相时,约须20倍该层析管柱内容量即20 x

4.2约80ml 作为移动相转换及平衡新移动相的流通量。若是调和“离子隅对试剂” Ion Pairing Reagent ,可能须要多些流通量,才能符合完整移动相转换与新移动相平衡的需求。

当换上新的移动相拟进行分析工作,若未能耐心等候“层析管完成转相及所须彻底平衡需求”,即试作注入分析,将会体验到以下的情况:

1.) 基在线下任移漂动,或逐渐规则性上扬或下移

2.) 注入分析观查到滞留时间(RT)规则性往前缩移,或往后延迟

3.) 所得图峰,难有Area, Height的再现性

只要层析管柱被彻底转相成为新的移动相,既可进行LC 可靠的分析。

试举Emedastine Difumarate准备进行分析移动相平衡与转换作法参考:

层析管柱Inertsil 5 C8-4 4.6x150mm之最终保存液为70 / 30 = AeCN / H2O。分析用移动相为17 / 83 = AeCN / Phosphate Buffer (PPB) 。 该Inertsil 5 C8-4 4.6x150mm先以移动相17 / 83 = AeCN / PPB流通约30分钟,即流通约30ml 移动相,接着设定Run Time:15分钟的20个样品分析程序。注入分析的第一针至第五针,由于分析移动相只有17%低AeC 仍然在逐渐稀释原高70%AeCN的转换平衡中,溶洗Emedastine Difumarate逐降,因此RT 逐渐规律性延后。直到第六针之后的分析,移动相完成转换才是Emedastine Difumarate 安全可靠的分析数据,请参考如下图标。

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