金黄色葡萄球菌毒力基因检测及分子分型研究

金黄色葡萄球菌毒力基因检测及分子分型研究

王莹

【期刊名称】《中国实用医药》

【年(卷),期】2016(000)001

【摘要】目的：对金黄色葡萄球菌进行毒力基因检测以及分子分型情况的研究。方法488株金黄色葡萄球菌作为研究对象,采用琼脂稀释法作为测定苯唑西林以及头孢西丁对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC),以聚合酶链式反应(PCR)方法进行葡萄球菌染色体 mec 盒子(SCCmec)分型以及多位点序列分型,并以多重PCR 方法检测31个常规的金黄色葡萄球菌毒力基因。结果488株金黄色葡萄球菌中共检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)227株,检出率达46.5%,从分型上看,其中SCCmec Ⅲ占比最多,达81.5%,其次是Ⅳ型,占10.1%；另有261株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),其主要克隆型为 CC1,占34.1%,有109株(41.8%)的 MSSA 其同时携带超过15个毒力基因,明显要高于 MRSA菌株(28.2%)。结论本地区的 MRSA 流行率为46.5%,相对于全国平均水平基本一致,其中主要的流行克隆为SCCmec Ⅲ,占81.5%,而MSSA 菌株其主要流行克隆为CC1,占34.1%,从毒力基因来看MSSA 其毒力基因的检出率要明显高于MRSA,这种情况提示相关的医疗卫生部门需要根据实际情况采取有效的措施控制各种病菌的传播。

【总页数】1页(168-168)

【关键词】金黄色葡萄球菌;毒力基因检测;分子分型研究

【作者】王莹

【作者单位】111000 辽宁省辽阳市疾病预防控制中心

金黄色葡萄球菌危害评估报告

宁城县中蒙医院 SOP文件金黄色葡萄球菌危害评估报告 一．危害程度分类 金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，因排列的规则形似葡萄状，故称之为金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌为需氧或兼性厌氧，广泛分布于自然界中。如空气，土壤，水以及日用物品，在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将其列为第二类病原微生物，属高致病性病原微生物，引起人和动物的化脓性疾病。 二．背景资料 金黄色葡萄球菌呈球形，直径微米，无鞭毛、无芽孢，革兰氏染色呈阳性，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，最适生长温度37度，PH为，耐盐性强，培养24小时出现，表面光滑、湿润，有光泽，不透明菌落（1-2mm），产不同色素，如金黄、白色、柠檬色，对湿热敏感，在100度煮沸5分钟后杀死，浓汁中，紫外线敏感致病性和感染数量：金黄色葡萄球菌之所以能引起疾病是其产生多种毒素和酶，主要有a溶血毒素b杀白细胞素c肠毒素d剥脱性毒素e凝固酶f其他物质引起的局部的蜂窝组织炎等化脓性感染，还可引起如肺炎，心包炎，骨髓炎，肾盂肾炎等重症者可发展呈脑膜炎，败血症，脓毒血症，目前，耐药性菌株的增多，已成为医院内交叉感染的一个急待解决的问题 金黄色葡萄球菌有多种传播途径，主要为吸入带菌的飞沫及接触

带菌的感染伤口引起肺炎及伤口化脓性感染，传染源为带菌的物品，空气等。传播途径主要为接触。金黄色葡萄球菌对实验室人员以及其他可能暴露在实验室传染性气溶胶中的人员是一种危害，尤其是有伤口暴露在空气中，其传染的实验室人员发病率比其他人群高。三．实验活动及及其危害性与预防措施 四、实验室实验活动危害评估本实验室主要从事金黄色葡萄球菌微生物学的实验内容有： 1、金黄色葡萄球菌的培养与耐药检测，生化分型实验 2、金黄色葡萄球菌的涂片染色 金黄色葡萄球菌培养传代，药物敏感实验，生化分型、涂片、染色等工作中可产生气溶胶，培养物制剂的溅出，泼洒和容器的破碎等也可造成严重污染。 拟采取防护措施： 1在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。避免感染性物质的扩散。 2 为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2~3mm并完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振动，或者采用一次性灭菌棉签。 3 用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。 4 样品容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。

金黄色葡萄球菌检测方法

金黄色葡萄球菌检测方 法 Revised as of 23 November 2020

金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法 目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法 各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。 免疫学方法包括下面两个部分： （1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。 （2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。 基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多

金黄色葡萄球菌的危害评估

金黄色葡萄球菌的危害评估 （一）一般情况：葡萄球菌感染是一组常见的细菌感染性疾病，包括皮肤软组织感染、中毒性休克综合征、败血症、心内膜炎、肺炎、肠炎、脑膜炎及骨髓炎等。在医院感染的致病菌中，金黄色葡萄球菌(Staphylococcal aureus，金葡萄)仅次于大肠杆菌，处于第二位。金葡菌感染常对多种抗菌药物耐药。金葡菌以其存在的普遍性、致病的多样性及对抗菌药物的耐药性，已成为细菌性感染的主要病原之一。金葡菌感染一般呈散发，但也可呈流行或爆发，后二者多为毒力较强的菌株引起。全年均可发生，以夏秋季发病较多。目前血浆凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococcus, CNS)感染有逐渐增多的趋势。皮肤软组织感染、食物中毒、尿路感染及骨髓炎等预后良好。败血症在有效药物处理下病死率仍高，约30%。脑膜炎中死亡者可达50%～60%。治疗早晚对肺炎患者的影响较大，在积极治疗下病死率为15%～20%，否则可达50%左右，幼儿和老年患者的预后较差。当前TSS的病死率约3%。到目前为止，人类还未研制出有效的疫苗。 （二）致病性：金葡菌能产生金黄色色素，血浆凝固酶阳性，能分解甘露醇，致病性强。金葡菌产生多种外毒素和酶，如α溶血毒素除引起溶血外，尚可损伤血小板、巨噬细胞和白细胞，使血管平滑肌收缩而导致局部组织缺血坏死；杀白细胞素能破坏白细胞和巨噬细胞；血浆凝固酶可使血浆中纤维蛋白沉积于菌体表面，从而阻止吞噬细胞的吞噬和杀灭作用，并有利于血栓形成；透明质酸酶可溶解组织

间质中的透明质酸，易于病菌扩散。此外，某些菌株可产生肠毒素(有A、B、C1、C2、D和E6种)、剥脱性毒素、溶纤维蛋白酶、过氧化氢酶、磷酸酶及溶脂酶等。金葡菌主要寄殖于鼻前庭粘膜、腋下、腹股沟及会阴部等处，偶也寄生于皮肤、肠道、阴道及口咽部等，人群带菌者相当普遍，在一般人群中约15%正常人鼻咽部带菌，医护人员带菌率约30%，免疫缺陷疾病患者中带菌率也高。入侵途径主要为受损伤的皮肤粘膜，也可因进食含肠毒素的食物，或吸入染菌尘埃而致病。病房中凡可引起尘埃飞扬的操作(如整理床铺)，均易导致葡萄球菌的传播。染菌手直接接触易感者为传播金葡菌感染的重要途径，空气传播等其他途径较少见。医院中较易发生金葡菌感染的为有创伤的外科和烧伤科患者，还有营养不良，免疫缺陷、恶性肿瘤、肺部疾患、糖尿病及尿毒症等疾病患者，以及新生儿和老年人等。农民、工人、儿童因受伤机会多而易患金葡菌感染。病后免疫力不强，可反复感染。（三）抵抗力：本菌广泛分布于自然界，存在于正常人皮肤、鼻咽部及肠道等部位，对外界抵抗力较强，加热80℃30分钟可杀灭。金葡菌产生的肠毒素为一组热稳定性单纯蛋白质，能耐受100℃30分钟加热不被破坏。

甲氧西林耐药_敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测_王俊瑞

中国感染与化疗杂志２０１５年１月２０日第１５卷第１期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　 Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ｊａｎ．２０１５，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．１·论著· 甲氧西林耐药／敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测 王俊瑞１，　杜小莉２，　塔　拉１，　崔晶花２，　福　泉１，　韩艳秋 １ 摘要：　目的　分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金葡菌）（ＭＲＳＡ）和甲氧西林敏感金葡菌（ＭＳＳＡ）临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异，了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法　采用脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）方法和多位点序列分型（ＭＬＳＴ）方法对呼和浩特地区住院患者中分离的３０株ＭＲＳＡ和３０株ＭＳＳＡ进行分子分型，同步采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测菌株毒力基因。结果　６０株金葡菌ＰＦＧＥ分型共分１９个型，ＭＳＳＡ菌株分布在Ｉ和Ｈ型等１６个基因型中，而ＭＲＳＡ株主要集中分布在Ｋ和Ｍ２个基因型中。２０株不同ＰＦＧＥ型菌株ＭＬＳＴ分型结果显示，ＭＲＳＡ株主要为ＳＴ－２３９型；ＭＳＳＡ株呈多样性分布特征，主要以ＳＴ－５型、ＳＴ－７型、ＳＴ－ １５型为主。毒力基因在ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ中分布差异显著。ＭＳＳＡ毒力基因整体携带率明显高于ＭＲＳＡ（５３．９％对４０．０％，χ２ ＝３ ２．７，Ｐ＜０．０１）。ＭＲＳＡ株ｓｅａ、ｃｎａ和ｃａｐ８基因携带率明显高于ＭＳＳＡ携带率（Ｐ＜０．０１），而ｓｅｃ、ｓｅｇ、ｓｅｉ、ｓｅｍ、ｓｅｎ、ｓｅｏ、ｆｎｂＢ、ｅｂｐＳ、ｃａｐ５基因携带率明显低于ＭＳＳＡ（Ｐ＜０．０５）。结论　呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点，ＭＲＳＡ主要以ＳＴ－２３９型为主。ＭＳＳＡ毒力基因携带率高，特定毒力因子在ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ株中呈现一定聚集分布特征，金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。 关键词：　金黄色葡萄球菌；　耐药性；　毒力基因；　分子分型 中图分类号：Ｒ３７８．１１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００９－７７０８（２０１５）０１－００７０－ ０６　基金项目： 国家自然科学基金（８１２６０２４４）。　作者单位： １．内蒙古医科大学附属医院检验科，呼和浩特０１００５０； ２． 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。　作者简介： 王俊瑞（１９８１—），男，博士，主治医师，主要从事金黄色葡萄球菌感染致病机制研究。 　通信作者：韩艳秋，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｙ ｈ１０１６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　 ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｆｏｒ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ａｎｄ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅＳｔａｐｈｙ ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓＷＡＮＧ　Ｊｕｎｒｕｉ，ＤＵ　Ｘｉａｏｌｉ，ＴＡ　Ｌａ，ＣＵＩ　Ｊｉｎｇｈｕａ，ＦＵ　Ｑｕａｎ，ＨＡＮ　Ｙａｎｑｉｕ．　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ　０１００５０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ａｎｄ　ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）ｉｎ　ｔｅｒｍｓ　ｏｆ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＨｏｈｈｏｔ，ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｉｎｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＰｕｌｓｅｄ　ｆｉｅｌｄ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＦＧＥ）ａｎｄ　ｍｕｌｔｉ　ｌｏｃｕｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔｙｐｉｎｇ（ＭＬＳＴ）ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ｅｍｐｌｏｙｅｄ　ｔｏ　ｄｏ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｙｐｉｎｇ　ｆｏｒ　３０　ＭＲＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　３０　ＭＳＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｈｏｈｈｏｔ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ．ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄｔｏ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｔｈｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｓｅ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＰＦＧＥ　ｔｙｐｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　６０　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎｔｏ　１９　ｍａｊｏｒ　ｔｙｐｅｓ．ＭＳＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　１６　ｔｙｐｅｓ，ｍａｉｎｌｙ　ｔｙｐｅｓ　Ｉ　ａｎｄ　Ｈ．ＭＲＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　Ｋ　ａｎｄ　Ｍ．Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　２０　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＰＦＧＥ　ｔｙｐｅｓ，ＭＲＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｍａｉｎｌｙ　 ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ＳＴ－２３９　ｔｙｐｅ．ＭＳＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｄｉｖｅｒｓｅ　ＳＴｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐ ｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｔｙｐｅｓ　ｗｅｒｅ　ＳＴ－５，ＳＴ－７　ａｎｄ　ＳＴ－１５．Ｔｈｅ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｏｆ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＭＳＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄＭＲＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅ　ｏｖｅｒａｌｌ　ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎＭＳＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　 ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ＭＲＳＡｓｔｒａｉｎｓ（５３．９％ｖｅｒｓｕｓ　４０．０％，χ２ ＝３ ２．７，Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｅａ，ｃｎａ　ａｎｄ　ｃａｐ８　ｇｅｎｅｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇ ｈｅｒ　ｉｎ　ＭＲＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ＭＳＳＡ　ｓｔｒａｉｎｓ（Ｐ＜０．０１），０ ７

论金黄色葡萄球菌

论金黄色葡萄球菌 思念水饺一出，大家的心又提到了嗓子眼儿，因为想大家对金黄色葡萄球菌有跟多的理解，还有对生物产品在葡萄球菌的检测一块能够更好的理解，所以出于这目的，还有也是一项老师的作业，只有好好的完成了。 细菌按形态可分为：球菌,杆菌,和螺旋菌.金黄色葡萄球菌就是球菌的一种.它是革兰氏阳性菌的代表。革兰氏阳性菌就是可以被结晶紫初染，碘液媒染,乙醇脱色，沙黄(红色)复染后呈现紫红色的细菌.而革兰氏阴性菌则呈现红色。这些差别源于金黄色葡萄球菌具有阴性菌所没有的细胞壁结构.金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密,染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色,相反,阴性菌没有细胞壁结构所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色.金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素.而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的. 生物学特性 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 显微图像 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 选择不同的培养基就可以分离鉴别了，而且可供选择的培养基种类非常之多。在不含氮的培养基中可生长的是圆褐固氮菌。在含盐量非常高或含氯霉素的培养基中可生长并且表面绒毛状的是青霉菌，可用的培养基：高盐察氏培养基、孟加拉红培养基等等。在伊红美蓝平板上为紫黑带金属光泽、在SS平板上为粉红色菌落、在XLD平板上为黄色菌落的是大肠杆菌。在MRS培养基上可生长、在改良MC培养基上为粉红色菌落、在改良TJA培养基上为底部黄色表面微白色菌

金黄色葡萄球菌的测定

金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义 金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：37℃～65℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 （2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌 一、生物学性状 1、形态与染色 革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。 2、培养特性 需氧或兼性厌氧。营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。 3、生化反应 多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性菌株能分解甘露醇，产酸。触酶阳性，可与链球菌相区分。 4、抗原 （1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。 （2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。 （3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。金黄色葡萄球菌中可提出A群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。 5、抵抗力 葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合

细菌毒力岛的研究进展

细菌毒力岛的研究进展 1 毒力岛基本特征及分类 1.1基本特征 毒力岛(virulenceisland)又称致病性岛(pathogenicity island),是近年来在细菌分子学研究领域出现的新概念。1997年Hacker等对毒力岛下了较为精确的定义:即毒力岛是编码细菌毒力基因簇的一分子量相对较大的染色体DNA片段。毒力岛具有下列基本特征[1～4]:(1)编码细菌毒力基因簇的一个相对分子质量较大的(20～100k左右)染色体DNA片段。(2)一些毒力岛的两侧具有重复序列和插入元件,但是也可以没有。(3)毒力岛往往位于细菌染色体的tRNA基因位点内或附近,或者位于与噬菌体整合有关的位点,肠致病性大肠杆菌(EPEC)的LEE毒力岛就位于转运RNAselC位点[2,3]。(4)毒力岛DNA片段的G+Cmol%、密码使用和宿主细菌染色体有明显差异,有的比宿主细胞的G+Cmol%明显高,有的明显低。(5)毒力岛编码的基因产物许多是分泌性蛋白和细胞表面蛋白,如溶血素、菌毛和血红素结合因子,一些毒力岛编码细菌的分泌系统(如Ⅲ型分泌系统)、信息传导系统和调节系统。(6)一种病原菌可以有一个或几个毒力岛。(7)一部分学者认为,细菌的毒力岛应该包括位于噬菌体和质粒上的、与细菌的毒力有关的、其G+C 百分比和密码使用与宿主细胞明显不同的DNA片段。(8)毒力岛可能与新发现的病原性细菌有关。 1.2 分类 目前发现的毒力岛根据其G+C百分比与宿主菌的差异,可分成两类:即高G+C 毒力岛,如小肠结肠炎耶尔森菌的毒力岛；低G+C毒力岛,如大肠杆菌、沙门氏菌以及幽门螺杆菌中的毒力岛。根据毒力岛编码的产物性质可分为致病性岛和共生岛两大类。 2 结构与功能 2.1 结构 毒力岛是由独特的DNA片段构成,其不同来源的毒力岛的分子量、密码使用、G+C百分比各异。毒力岛主要含有与细菌毒力有关的基因,此外,RS和IR在毒力岛上也比较常见,而且,IR的类型也多种多样。大多数毒力岛在染色体上的位置

金黄色葡萄球菌的生长及抑制

金黄色葡萄球菌的生长与抑制姓名：梁小丽学号：20142033 班级：食质201403 摘要 为了发展和研究微生物群体的生长和生长抑制，我们选用金黄色葡萄球菌为例，作为研究对象，映射关于微生物的生长及抑制。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。因此研究金黄色葡萄球菌的生长及抑制有着重大的作用，稀土离子、甜菜碱、黄连与黄芩、甘草配伍对金黄色葡萄球菌生长都有不同程度的抑制效果。 关键词微生物群体葡萄球菌甜菜碱生长与抑制 前言 微生物生产与动植物生产并列为生物产业的三大支柱。 在工业中许多产品利用微生物来生产，如各种生物活性物质(抗生素等)、化工原料(酒精等)。微生物在农业生产中也有着多方面的作用。微生物在食品加工中有广泛用途，发酵食品和许多调味品都离不开微生物。微生物是消除污染、净化环境的重要手段。 因此，对微生物的研究具有深远的意义，而在微生物群体生长规律的研究，在人、畜传染病和植物病害的防治上也有着重要的意义，也是进行微生物生态学和数量遗传学研究的基础。将引领着人类社会的发展和进步。【1】 微生物生长的概念 微生物在适宜的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按自身代谢方式进行新陈代谢，如同化作用大于异化作用，其结果是原生质的总量（包括重量、体积、大小）不断地增加，称为微生物的生长现象。 单细胞微生物如细菌的生长，往往伴随着细胞数目的增加。当细胞增长到一定程度时，就以二分裂方式，形成两个相似的子细胞，子细胞又重复上述过程，使细胞数目增加。当细胞增长到一定程度时，称为繁殖。在多细胞微生物中，例如某些霉菌，细胞数目的增加如不伴随着个体数目的增加，只能叫生长，不能叫

动物源性肠出血性大肠杆菌O157：H7毒力基因的多重PCR快速检测研究_陈雅君

中国人兽共患病学报 Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　 Ｚｏｏｎｏｓｅｓ　 ２０１３，２９（７ ）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｃｊｚ．ｊ ．ｉｓｓｎ．１００２－２６９４．２０１３．０７．００９动物源性肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７及 其３个毒力基因的多重ＰＣＲ快速检测研究 陈雅君１，２，王亚宾１，张莉娟１，张龙现１，２，陈丽颖１，刘中原１，申　果１，胡　慧１， ２， 摘　要：目的　建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７及其３个主要毒力基因（ｈｙｌＡ、ｅａｅＡ和ｓｔｘ２基因）的多重ＰＣＲ方法。方法　根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７菌体抗原ｒｆｂＥ基因、鞭毛抗原ｆｌｉＣ基因、溶血素（ｈｌｙＡ）基因、紧密黏附素（ｅａｅＡ）基因和志贺样毒素２（ｓｔｘ２）基因为靶基因，设计５对特异性引物，在同一扩增体系中进行ＰＣＲ，优化反应体系，测定特异性和灵敏度，并进行了临床样品的检测。结果　该方法扩增目的基因片段分别为３２７ｂｐ、２４７ｂｐ、４９４ｂｐ 、３８４ｂｐ和７ ７９ｂｐ，特异性和灵敏度均高，细菌纯培养物的检测灵敏度为１０４ ｃｆｕ／ｍＬ。结论　初步建立了快速、灵敏、特异的检测肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７及其３个毒力基因的多重ＰＣＲ方法，可用于临床动物携带大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的分子流行病学调查及食品微生物检测。 关键词：动物源性；肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７；毒力基因；多重ＰＣＲ 中图分类号： Ｓ８５５．１文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－２６９４（２０１３）０７－０６８６－０６ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｉｍａｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　 Ｏ１５７∶Ｈ７ａｎｄ　ｉｔｓ　ｔｈｒｅｅ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｂｙ　 ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅＣＨＥＮ　Ｙａ－ｊｕｎ１，２，ＷＡＮＧ　Ｙａ－ｂｉｎ１，ＺＨＡＮＧ　Ｌｉ－ｊｕａｎ１，ＺＨＡＮＧ　Ｌｏｎｇ －ｘｉａｎ１，２ ，ＣＨＥＮ　Ｌｉ－ｙｉｎｇ１，ＬＩＵ　Ｚｈｏｎｇ－ｙ ｕａｎ１，ＳＨＥＮ　Ｇｕｏ１，ＨＵ　Ｈｕｉ　１，２ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇ ｚｈｏｕ４５０００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｚｏｏｎｏｔｉｃ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２，Ｃｈｉｎａ）河南省重大公益科研项目（８１１００９１２３００） ；漯河市科技计划项目（０８１２０３ ）通讯作者：胡慧，Ｅｍａｉｌ：ｈｕｈｕｉ２００１＠１６３．ｃｏｍ 作者单位：１．河南农业大学牧医工程学院，郑州　４５０００２； ２．河南省动物性食品安全重点实验室，郑州　４５０００２ ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ａ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｏ１５７：Ｈ７ａｎｄｔｈｒｅｅ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ（ｈｙｌＡ，ｅａｅＡａｎｄ　ｓｔｘ２ｇｅｎｅｓ）．Ｆｉｖｅ　ｓｅｔｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆｒｆｂＥｇｅｎｅ，ｆ ｌｉＣｇｅｎｅ，ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ　ｇｅｎｅ（ｈｌｙＡ），ｉｎｔｈｎｉｎ　ｇｅｎｅ（ｅａｅＡ），ａｎｄ　ｓｈｉｇａ－ｌｉｋｅ　ｔｏｘｉｎ　ｇｅｎｅ　２（ｓｔｘ２）ｏｆ　Ｅ．ｃｏｌｉ　Ｏ１５７．Ｔｈｅｙｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ａｄｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｏｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｔｏ　ｐｅｒｆｏｒｍ　ＰＣＲ．Ｔｈｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｅｎ－ｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ａｎｄ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｔｈｅ　ａｓｓａｙ　ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｔｏ　ａｍｐｌｉｆｙ　ｔｈｅ　３２７ｂｐ，２４７ｂｐ，４９４ｂｐ，３８４ｂｐ，ａｎｄ　７７９ｂｐ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　 ｇｅｎｅｓ　ｒｆｂＥ，ｆｌｉＣ，ｈｌｙＡ，ｅａｅＡａｎｄ　ｓｔｘ２．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｓｓａｙ　 ｗａｓ　１０４ ｃｆｕ／ｍＬ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｓａｍｐｌｅｓ．Ｉｔ＇ｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ａ　ｒａｐｉｄ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅ．ｃｏｌｉ　Ｏ１５７：Ｈ７ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｈａｓｂｅｅｎ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｐｒｉｍａｒｉｌｙ．Ａｎ　ａｖａｉｌａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅ．ｃｏｌｉ　Ｏ１５７∶Ｈ７ｆｒｏｍ　ｔｈｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ｆｏｏｄ　ｓａｍｐ ｌｅｓ． ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ａｎｉｍａｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ；ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｏ１５７∶Ｈ７；ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ；ｍｕｌｔｉｐ ｌｅｘ　ＰＣＲＳｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｈｅｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｍａｊｏｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｕｎｄ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｗｅｌｆａｒｅ（Ｎｏ．８１１００９１２３００），ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｐｒｉｏｒｉｔｙ　Ｐｒｏｇｒａｍｓ　ｉｎＳｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｈｅ　Ｃｉｔｙ（ Ｎｏ．０８１２０３）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　 ａｕｔｈｏｒ：Ｈｕ　Ｈｕｉ，Ｅｍａｉｌ：ｈｕｈｕｉ２００１＠１６３．ｃｏｍ 肠出血性大肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇ ｉｃ　Ｅｓｃｈｅ－ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ，ＥＨＥＣ）Ｏ１５７∶Ｈ７是一种重要的人兽共患传染病病原菌， 该菌主要定居于一些反刍动物的肠道内，通过污染的水源及食物造成人与动物的感染。ＥＨＥＣ　Ｏ１５７∶Ｈ７感染宿主后主要引发腹泻、出血性结肠炎，还可引发溶血性尿毒综合征及血 ６ ８６

【开题报告】金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究

开题报告 食品质量与安全 金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究 一、选题的背景与意义 金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）(以下简称金葡)是动物和人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中分布广泛，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可能存在［8］，因而食品特别是牛奶及奶制品受其污染的机会很多。金葡菌最常见的污染是通过化脓性皮肤疾病、上呼吸道炎症、口腔内疾病的人，以及健康人咽喉和鼻腔内带菌，经与食物接触或者通过空气传播而污染食物，并在其中繁殖和产毒。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶的数量，当金葡菌污染了含淀粉和水分较多的食品时，在温度等条件适宜时，经10小时左右即可产生相当数量的肠毒素，据估计，进食者吃下约100g的肠毒素A即可出现食物中毒的症状。因此食品和食品原料中污染有金葡菌就有可能产生肠毒素，就有食物中毒的潜在危险。葡萄球菌毒素（SE）是食物中毒最常见的原因之一，它引起的食物中毒症状主要是呕吐和腹泄，这些毒素蛋白质的结构主要为金葡菌的次生代谢产物。 虽然热处理可破坏葡萄球菌，但致病毒素对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，100℃加热30分钟仍不失去其活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠毒素破坏，必须加热100℃两小时才能破坏其毒性。而对于冷冻食品，由于其制作及保藏处于温状态，所以更易感染金葡菌。金葡菌肠毒素还有一种特点是对蛋白酶有耐性，在活性阶段可抗蛋白水解酶水解，故在水货道中也不易被破坏，因而食品极易被金葡菌污染极易引起食源性疾病的爆发。 金葡菌繁殖、是否产毒和产毒程度与食品的性质和组分密切相关，金葡菌污染食品后，如果被污染食品具备产毒条件时，就会产生肠毒素，对产品造成更进一步的污染，一般地，在PH6.0- 8.0、水分含量较多、蛋白质或者淀粉比较丰富的食品中，在温度等条件合适的情况下，该菌最容易繁殖并产生毒素，并且当氧分压较低时肠毒素较易形成，而冻虾仁具备金葡菌的繁殖和生产的主要条件。即使通过物理或者化学的方法将产口中的金葡菌完全灭活，但其中肠毒素仍不容易被破坏，因此产品也你存在肠毒素污染的危险。 如今，国内外贸易增多，国外食品和食品原料大量进入我国市场，检验局经常从进口的冷冻虾仁中检验出金葡菌，因此该产品也有存在金葡菌肠毒素的危险，而对于此肠毒素未做过相应的检测。因此研究冻虾仁中金葡菌和产生金葡菌肠毒素之间的关系，研究虾仁中金葡菌的产肠毒素条件，对于预示冷冻虾仁中是否有肠毒素，防止金葡菌产生肠毒素和改进虾仁后加工工序步骤有指导

副溶血弧菌与溶藻弧菌毒力基因分布与抗生素耐药性分析

目录 摘要.......................................................................................................................................... I ABSTRACT .......................................................................................................................... I II 目录........................................................................................................................................ V 第一章前言 (1) 1.1弧菌 (1) 1.2副溶血弧菌和溶藻弧菌 (2) 1.3 副溶血弧菌和溶藻弧菌的致病因子 (5) 1.4弧菌的耐药性 (8) 1.5弧菌的分型方法 (9) 1.6本论文立题依据及研究内容 (13) 第二章副溶血弧菌与溶藻弧菌毒力基因的分布调查 (14) 2.1实验材料 (14) 2.2实验方法 (16) 2.3实验结果与讨论 (18) 2.4本章小结 (25) 第三章副溶血弧菌O3、O4 型菌株的PFGE分型 (26) 3.1实验材料 (26) 3.2实验方法 (28) 3.3实验结果与讨论 (32) 3.4本章小结 (36) 第四章副溶血弧菌与溶藻弧菌的耐药性研究 (37) 4.1实验材料 (37) 4.2实验方法 (38) 4.3实验结果与讨论 (39) 4.4本章小结 (42)

实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验

实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。 二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶

金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活常识分享金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些 导语：金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人 金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人员暂时寄居细菌的手进行传播，尤其是在新生儿童症监护病房(NICU)金葡菌是最常见的毒力最强的致病原。那么金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？看过下面的文章相信你就会明白。 金黄色葡萄球菌脑膜炎是指由金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎，起病急，常有全身感染中毒症状，如畏寒、发热，伴持久而剧烈的头痛，颈强直较一般脑膜炎明显，除有脑膜炎症状外，尚有局部感染病灶，败血症患者还有其他迁徙性病灶，出现皮疹，如荨麻疹样、猩红热样皮疹或小脓疱疹，皮肤可见出血点，很少融合成片。 金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎多继发于金葡菌败血症，尤其多见于合并左心内膜炎的患者，通过细菌栓子经血流侵袭脑膜。面部痈疖并发海绵窦血栓性静脉炎可进一步导致脑膜炎，颅脑损伤、颅脑手术后及腰椎穿刺时消毒不严也可并发脑膜炎。脑膜附近的感染病灶如中耳炎，乳突炎、鼻窦炎等亦可引起本病，新生儿脐带和皮肤的金葡菌感染也可继发脑膜炎，发病时间多在产后2周左右。 金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？上面的内容已经让我们知道了答案.为了您和家人的健康，如有发现类似感染的症状请及时就医，如果您还有什么需要咨询的请随时向我们提问，我们的专家24小时在线回答您的问题接军您的疑惑给您提供一个最佳的治疗方案，相信一定能给您满意的答复。

金黄色葡萄球菌的检查

金黄色葡萄球菌的检查 同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。 金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。 所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样： 在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。 接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划

线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。 当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。 若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。 1. 革兰染色镜检 革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。 2. 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。

N 病毒毒力测试实验

毒力测试技术路线 前言: 虫媒病毒（Arbovirus ）是指由吸血昆虫传播的病毒，其特点是病毒可在昆虫体内繁殖，但昆虫本身不发病，昆虫通过叮咬将病毒传播给人、畜引起疾病，因此虫媒病毒可以引起人畜共患传染病（1）。套式病毒（Nidoviruses ）包括了冠状病毒（Coronaviridae ）和动脉炎病毒（Arteriviridae ）及罗尼病毒（Roniviridae ），主要感染哺乳动物、少数禽类及无脊椎动物（虾），由于其独特的套式转录机制和

较长基因组（12.7~31.7bp）的特征，被认为是最复杂的单股正链RNA病毒（2）。 国内，深圳市龙岗区疾控中心开展了虫媒监测项目，从医院监测点捕获的成蚊标本中首次发现昆虫套式病毒NDiV，并应用C6/36细胞成功地分离到NDiV 病毒，是目前国内对NDiV的研究仅有这一篇报道（3）。 国外,2011年，mBio报道了首篇昆虫套式病毒的研究（4），在科特迪瓦的原始森林的库蚊中首次发现了昆虫套式病毒，命名为Cavally virus（CA VV）。同年，PlOS Pathogens刊登（5）同为昆虫套式病毒的研究，病毒于2002年在越南急性脑炎病人的脑脊液中分离成功（6），在当地库蚊标本也分离得到，作者Phan Thi Nga 根据病毒的分离地点将其命名为Nam Dinh Virus（NDiV）。由于NDiV和CA VV 的宿主与分子特性相似，与套式病毒中的已有家族存在差异，故Phan Thi Nga 将其归类为Nidoviruses的新家族，命名为Mesoniviridae（7）。传统意义的套式病毒（Nidoviruses）包括冠状病毒（Coronaviridae）、动脉炎病毒（Arteriviridae）及罗尼病毒（Roniviridae），主要感染哺乳动物、少数禽类及无脊椎动物（虾），由于其独特的套式转录机制和较长基因组（12.7~31.7kb）的特征，被认为是最复杂的单股正链RNA病毒。在科特迪瓦与越南发现的昆虫套式病毒填补了套式病毒存在于节肢动物的空白。目前最长的单股正链ssRNA+节肢动物病毒，NDiV 与CA VV核酸序列长度约为20.2kb，这显示它们可能是套式病毒中如猪生殖与呼吸综合征病毒的短基因病毒（small genomes）与SARS冠状病毒的长基因病毒（large genomes）之间的进化连接。目前，国外关于NDiV的研究报告仅有Phan Thi Nga发表的两篇论文（5,7），国内的研究报告有“中国国内首次发现Nam Dinh 病毒”。研究程度只涉及病毒的分子结构学领域。虽然该病毒曾在越南急性脑炎病人的脑脊液中分离得到，但尚未有具体的病理因果证据证明该病毒的致病性。 NDiV是否为新的虫媒病毒仍然需要进行深入的研究与论证，后续研究将有助于我国新分离虫媒病毒的致病性的研究，对探讨病毒与人类疾病的关系，对新发病毒的危害作出更客观的评估。 NDiV毒力测试实验步骤： 1．1 NDiV 乳鼠脑病毒悬液制备与保存 1~2 日龄健康乳鼠（昆明品系），脑内接种NDiV C6/36 细胞病毒悬液