搜档网
当前位置:搜档网 › 综合实验步骤

综合实验步骤

综合实验步骤
综合实验步骤

RNA提取及逆转录步骤

组织RNA提取:

1、将标本约100mg放入研钵,立即加入液氮,研碎后,立即加入TRIZOL 1mL,研磨10min(清亮)后,转入1.5ml EP管,上下颠倒10次,室温静置5min。标本为组织时,12000转离心10min取上清,转下步。

2、每加入1ml TRIZOL 在EP管中加入氯仿0.2mL,震荡15s后,静置5min,然后12000转离心15min。

3、将上层水相移入另一EP管中(宁缺毋滥),并加入约0.5mL异丙醇,震荡混匀后静置5min,12000转离心10min.

4、弃上清加1mL 75%DEPC 乙醇(-20°C预冷),漂浮RNA沉淀,(脾脏需用Tip吹打以去尽杂质),以7500转离心5min。

5、弃上清,置于工作台开风机干燥30min,待RNA沉淀变成半透明时,加入DEPC水20uL/40uL,如果沉淀不溶解,置于55-60度温箱水浴5min 左右。-70度保存或立即逆转录。

静脉血RNA提取:

1、将5mL静脉血于EDTA抗凝管中,放4℃冰箱2h左右;

2、3000转离心5min,吸取上清置于1.5mL离心管;

3、加4mL NS于下层血细胞中,吹打混匀以悬浮细胞;

4、加4mL大鼠淋巴细胞分离液到15mL离心管中,将血细胞悬液缓缓加到

装有大鼠淋巴细胞分离液的离心管中;2000转离心25min;

5、小心吸取云雾层(即单个核细胞),7500转离心5分钟,去上清;

6、以1ml NS重悬细胞,吹打洗涤,6500转离心5min,吸尽上清,存于-80℃

或加入TRIZOL/裂解液。

逆转录步骤(MBI试剂盒):

1、05.mL EP管中加入

置于PCR仪中70℃ 5min (编号XIER101)

2、放入冰中5min

3、点离5秒,加入

置于PCR仪中37℃ 5min (编号XIER102)

4、加入逆转录酶1uL,用tip头吹打混匀,放入PCR仪中

42℃60min,70℃10min(编号XIER103),然后-20℃保存。

PCR步骤(25uL体系):

去离子水加至25uL

★★RNA浓度测定:取1uL RNA原液稀释至250uL,测定其A260和A280的值,一

般A260/280的比值在1.8-2.0之间满足实验要求

RNA原液浓度=A260×稀释倍数(250)×40(ng/μL)

Western blotting

一、主要试剂的配制(所有单位均为g/mL)

1、丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺丙稀酰胺29g+甲叉双丙稀酰胺1g= 100ml,储于棕色瓶,4℃避光保存。

2、10%SDS、10%APS

3、Tris-甘氨酸电泳缓冲液30.3gTris,187.7g甘氨酸,10gSDS,用蒸馏水溶解至1L,得10×缓冲液。

4、转移缓冲液 2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.375g SDS,200mL甲醇,定容1L。

5、丽春红染液储存液丽春红S 2g 三氯乙酸30g 磺基水杨酸30g 加水至

100ml 用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。6、考马斯亮蓝染色液1g考马斯亮蓝R-250用250mL的异丙醇搅拌溶解,再加入100mL的冰醋酸,均匀搅拌,再加入650mL的去离子水,均匀搅拌。滤纸过滤后室温保存。

7、考马斯亮蓝脱色液醋酸100mL,乙醇50mL,蒸馏水850mL

二、制胶

三、电泳浓缩胶70V,分离胶110V,2小时30分钟左右。(同时配封闭液)

四、转膜PVDF膜用100%甲醇浸泡5min,转膜液浸泡5min,视蛋白分子量决定电压,恒流300mA左右

五、封闭(室温1h)1g脱脂奶粉+20mL TBS-T(TBS:Tuween=1000:1)

六、一抗孵育(4℃过夜)2%脱脂奶粉(TBS-T溶解)稀释,;TBS-T洗膜10mi n×3次

七、二抗孵育(室温1h)10mL 5%脱脂奶粉(PBS-T溶解)1h,TBS-T 洗3×10min,再用TBS洗一次,以洗尽吐温。

八、显色ECL发光试剂盒:1:1混合;

九、曝光如有明显条带,30s足够。

石蜡切片-免疫组织化学

将神经组织切成3-4mm长片段,装入铜条盒,流水冲洗20min

一、梯度脱水

50%的酒精(3-4h)→70%的酒精(3-4h)→85%的酒精(过夜)→95%的酒精(1h)(同时融蜡,78℃)→100%的酒精(1h×2次)→1半酒精、1半二甲苯透明(20min)→二甲苯Ⅰ(20min)→二甲苯Ⅱ(20min)

二、浸蜡

56-58℃(20min)→58-60℃(20min)→60-62℃(60min)

三、包埋以60-62℃包埋(准备电烙铁、镊子)包埋好的蜡块最好放于4℃保存。

四、切片4μm切片,贴片

五、脱蜡至水

1、电吹风吹片或烤箱64℃烤1-2h,至溶蜡(此步后玻片可于4℃长期保存);

2、入二甲苯(I)中脱蜡5min,甩干;

3、入二甲苯(II)中脱蜡10min(此时切片应透明),甩干;

4、入100%乙醇(I)5 min,甩干;

5、入100%乙醇(II)5 min,甩干;

6、入95%乙醇5 min;

7、入85%乙醇10min

8、入70%乙醇10min

9、入流水2分钟,甩干水分;

免疫组化ABC法操作步骤:

(1 )石蜡切片脱蜡至水。

(2 )3%H 2O 2 (30% H 2O 2:甲醇=1:9)室温孵育5-10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性。

(3 )蒸馏水冲洗,PBS 浸泡5 min×2(如需抗原修复,可在此步后进行,常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液,3g柠檬酸二钠+0.4g柠檬酸+蒸馏水=1L)。

(4 )5% 正常山羊血清(PBS 稀释)封闭(免疫荧光用10%),室温孵育20min,倾去血清,勿洗。滴加一抗工作液,37 ℃孵育1-2 h或4 ℃过夜(如果选择4℃过夜,需37℃复温45min,防止脱片)。

★封闭血清最常用的是二抗动物的非免疫血清,用PBS稀释为3%-10%溶液孵育切片,以封闭吸附位点。其它无关蛋白,如牛血清白蛋白也常用。封闭时间一般为10-30min。一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果最佳;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。

★Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在细胞免疫组织化学或组织免疫组化(>10um厚切片)推荐使用,作为细胞通透剂,在膜上打孔。

(5 )PBS 冲洗,5min×3 次。

(6 )滴加适量生物素(biotin)标记二抗工作液,37 ℃孵育30min(同时配制链霉卵白素工作液,因其配好30min后才能使用)。

(7 )PBS 冲洗,5min×3 次。

(8 )滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素(avidin)工作液,37 ℃孵育30min。

(9 )PBS 冲洗,5min×3 次。

(10 )DAB显色剂显色3-15min。

(11 )自来水充分冲洗,苏木素复染(数秒或不染),脱水,透明,封片。

PK-4001试剂盒内容:

工作液的配制

1、稀释液:可以采用多种缓冲液对本系列产品进行稀释,最常用的的稀释液是中性的磷酸盐缓冲液(10mM PBS)。

2、封闭血清:稀释比例1:50

3、生物素化抗体:稀释比例1:200

4、ABC复合物:将试剂C和D按1:100的稀释比例等量混合,放置30分钟后方可使用。

贴心提示

1、本系列检测试剂盒适用于绝大多数组织,但对于内源性生物素含量比较丰富的组织(如肾脏、肝脏等),应选用非生物素检测系统。

2、本品为浓缩液,需预先稀释方可使用,稀释后的液体不能长期保存。

3、如以每张切片加入1滴(约50μl)计算,1/4Kit可做750张切片,1Kit可做3000张切片。

Weil髓鞘染色法

1.试剂配制

A液: 苏木精1g, 无水酒精100ml, 溶解后备用

B液:硫酸铁胺4g,蒸馏水100ml, 溶解后备用

C液:铁氰化钾12.5g, 硼砂2.5g, 蒸馏水1000mL

D 液:综合染液,A液1份,B液1份,蒸馏水2份,混匀

2.实验方法

(1)石蜡切片常规脱蜡入水,将切片转入D液染色20min;

(2) 取出切片充分水洗后,置于B液分色,至灰质和白质可以区别为止(3)自来水冲洗,蒸馏水洗涤2次;

(4)置于C液中分色片刻,取出后蒸馏水洗涤;

(5)常规酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固

3 结果判断正常神经髓鞘被深兰色至黑色,灰质至深黄色至无色,变性和溃变的髓鞘不着色。

1、石蜡切片和冰冻切片的比较?

(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。

(2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写着两者都可,那就都能做。

(3)石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构,且容易存放在室温,而冰冻切片比较麻烦,一定要存在-80度的低温冰箱中,尤其是用来做原位杂交的的切片,为了防止RNA降解,保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微

米左右,所以原位杂交探针容易渗透到组织中去,容易成功,而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

2、一抗的选择要点和技巧是什么?

(1)单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。

(2)应用范围的选择。有的一抗只能用于Western blotting,或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

(3)种属反应性的选择(species reactivity)。这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差异,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

(4)种属来源,一般兔来源的多是多克隆;而小鼠来源的多是单克隆,但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。

(5)生产厂家的选择。如santa Cruz公司抗体一般1ml,价格2100元左右;而chemicon公司一抗一般100ul,价格2800元左右。这两个厂家的同一种抗体它的实际效价稳定是不同的,我一般用后者抗体做免疫组化效果较好,而前者做Western blotting效果还可以。

3、在什么情况下使用Triton-X100

(1)Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um厚切片)和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂,在膜上打孔。

(2)其作用原理:Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。

(3)Triton X-100既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用。

4、封闭血清的选择原则是什么?

(1)膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性!

(2)封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。

(3)也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。

5、抗体孵育条件的比较?

(1)一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果最佳;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。

(2)二抗一般室温或37度30min-1h,具体时间需要摸索。

6、一抗4度孵育后为什么要进行37度复温?

(1)一方面,防止切片从4度直接放入PBS易脱片;

(2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。

(3)其实,我更赞同后一种说法,因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后,直接用PBS洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩!

7、DAB显色时间如何把握?

(1)DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗;

(2)DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间;

(3)此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间;

(4)DAB显色时间很长(如超过十几分钟)才出现阳性染色,一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短(最好一抗4度过夜);另一方面就是封闭时间过长。

8、免疫组化结果如何分析?

(1)阳性着色细胞计数法。在40*光镜下,随机选择不重叠的10个视野,人工或机器计数阳性着色细胞,每组3~6张不同动物组织切片,然后进行组间比较即可。

(2)灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析,然后进行统计分析即可。

(3)评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度(0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色)、阳性范围进行评分(1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),最终可以分数相加,再进行比较。

对于以上这几种方法,各有利弊,请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

9、在什么情况下进行组织抗原修复,抗原修复的条件是什么?

(1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。

(2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高pH的等)。

(3)微波修复,我们一般用6min*4次,效果不错

10、内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么?

(1)一般3%过氧化氢灭活时间短点,可以10min左右;而0。3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间,一般10~30min。

(2)用甲醇配置过氧化氢比双蒸水或PBS可能好在保护抗原和固定组织作用,过氧化氢孵育时间过长易引起脱片。

(3)现用现配,配好后4度避光保存。

11、如何才能充分脱蜡?

(1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;

(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。

(3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的切片,在染色前,还必须对切片进行加温10-20分钟,然后再行脱蜡,这样脱蜡速度加快,效果更好。

总之,操作时应根据不同的季节,不同的室温,不同的试剂来决定,脱蜡的时间,原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。

12、如何最大限度地降低组织非特异性染色?

(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。

(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。

(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;

(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;

(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;

(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;

(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。

13、苏木素复染时间的把握?

(1)苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况,一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即:染色深则分化时间稍长些即可;染色浅则再置于苏木素中染色即可。

(2)盐酸酒精是分化,氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗,然后置于盐酸酒精中数秒(一定动作要快)后拿出流水振洗,在放入氨水中返兰即可。

(3)如果分化的颜色过浅,可以复置于苏木素中染色。

14、PBS的清洗方式选择、次数和时间的选择?

(1)单独冲洗,防止交叉反应造成污染。

临床上每天检测的病例很多,所用的抗体种类及项目也多,如果在加入一抗孵育完后,将它们在一个缸内洗,这样就会造成交叉污染,影响最后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗,冲洗的PBS为一次性,保证切片没有相互交叉污染的机会。

(2)温柔冲洗,防止切片的脱落。

冲洗切片,取出切片,将PBS从上轻轻地冲洗,让PBS自上而下流下来,不要拿起切片将PBS对准切片冲洗,这样由于冲出的PBS有一定的冲击力,很容易使切片周边引起松动,导致切片的脱落。

(3)冲洗的时间要足够,才能彻底洗去结合的物质。

冲洗切片有人提出用微振荡器振染,振下未结合的各种物,使之不产生背景,此种做法一是浪费时间,二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为,用一小烧杯柔和地于切片上冲洗,就能彻底冲洗去未结合的物质,无需附加其它条件,冲洗好于切片上再注入PBS,持续2分钟左右就完全足够了。

(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求。

中性及弱硷性条件(PH7-8)有利于免疫复合物的形成,而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于免疫复合物的形成,而高离子强度则有利于分解。

(5)常用试剂的配制和使用。

在免疫组织化学的染色过程中,用得最多的试剂就是缓冲液,因为切片在整个染色中,抗体的加、换、切片的冲洗,DAB的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用,缓冲液的过酸或偏碱,都将影响染色的结果。

15、脱片产生的原因和如何防止脱片?

(1)多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的,迈新按说也是不错的,可是都脱成什么样子了。后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子,要好一点。

(2)组织切的不好,切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀,或者切片者手法不好等。

(3)组织的问题,我用的组织癌症的很多,越是癌症组织有坏死之类越容易脱。

(4)没烤好,时间短温度不够之类。

(5)操作的时候甩的太猛了,有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩,用卫生纸从边缘上慢慢吸水。

(6)修复的问题:抗原修复的时候高压时间过长了,或者放进100度的修复液时手法不好,咚的一声就丢进去了,这样超容易脱片。此外,用EDTA修复比柠檬酸容易脱片,但是你要用到EDTA的时候也没办法,只有从另外的问题上着手。

(7)此外,一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎,用PBS的时候尽量用泡的,不要冲。基本上把这些方面都注意到了,能改善的尽量改善,脱片可以减少很多。

16、背景染色较深的原因有哪些?

(1)抗体浓度过高:一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是,每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,既使是即用型的抗体也应如此,不能只简单的按说明书进行染色。

(2)抗体孵育时间过长或温度较高:解决办法是,严格执行操作规程,最好随身佩带报时表或报时钟,及时提醒,避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的时间不是传统的1小时,而是30分钟,因此,要根据染色结果进行调整。

(3)DAB变质和显色时间太长:DAB最好现用现配,如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长,因为在没有酶的情况下,过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控,达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时,这样做似乎不现实,但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控,避免显色时间过长。

(4)组织变干:修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细,

采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈,可以有效的避免液体流失,也能提高操作速度。

(5)切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长(大于24小时):原因上不清楚,但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复,第二天加抗体进行免疫组化染色,如果将装有切片和修复液的容器放在4?C冰箱过夜,对结果无明显影响,如果放在室温,特别是炎热的夏天,会出现背景着色,因此,不可存放时间太长。

(6)一抗变质、质量差的多克隆抗体:注意抗体的有效期,过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

17、苏木素复染后氨水返蓝这一步如何做、浓度多少、时间多长?

答:返蓝可以用碱性溶液(PBS/NA2HPO4/淡氨水)或45度温水、冷水蓝化均可。一般蓝化5~10 min。淡氨水有人用50ml自来水+三四滴的氢氧化铵。

简单的科学小实验

简单的科学小实验 (1)神奇的牙签 思考:放在水里的牙签,会随着放在水里的方糖游动,还是随着放在水里的肥皂游动? 材料:牙签、一盆清水、肥皂、方糖 操作: 1. 把牙签小心地放在水面上。 2. 把方糖放入水盆中离牙签较远的地方。牙签会向方糖方向移动。 3. 换一盆水,把牙签小心地放在水面上,现在把肥皂放入水盆中离牙签较近的地方。牙签会远离肥皂。 讲解: 当你把方糖放入水盆的中心时,方糖会吸收一些水分,所以会有很小的水流往方糖的方向流,而牙签也跟着水流移动。但是,当你把肥皂投入水盆中时,水盆边的表面张力比较强,所以会把牙签向外拉。 创造:请你试一试,如果将糖和肥皂换成其它物质,牙签会向哪个方向游去 (2)有孔纸片托水 思考:有孔的纸为什么能拖住水? 材料:瓶子一个、大头针一个、纸片一张,有色水一满杯 操作: 1、在空瓶内盛满有色水。 2、用大头针在白纸上扎许多孔。 3、把有孔纸片盖住瓶口。 4、用手压着纸片,将瓶倒转,使瓶口朝下。 5、将手轻轻移开,纸片纹丝不动地盖住瓶口,而且水也未从孔中流出来。 讲解: 薄纸片能托起瓶中的水,是因为大气压强作用于纸片上,产生了向上的托力。小孔不会漏出水来,是因为水有表面张力,水在纸的表面形成水的薄膜,使水不会漏出来。这如同布做的雨伞,布虽然有很多小孔,仍然不会漏雨一样。 手绢的秘密

思考:在水龙头下把手帕撑开摊平,打开水龙头,水是不是透过手帕而流下去呢?材料:玻璃杯1个、手帕1条、橡皮筋1条 流程: 1、把手帕盖住杯口,用橡皮筋绑紧。 2、让水冲在手帕上。 3、水流进杯子里约七、八分满后关闭水龙头。 4、杯口朝下,把杯子迅速倒转过来。 说明: 1、从杯子上面冲水时,水会透过手帕流入杯内。 2、杯子倒转过来时,由于大气压力的关系,水不会流出来。 延伸: 如果盖住杯口手帕的布料不同(例如棉布或是毛巾、麻布),水的进出情形会怎样呢? 1.做测量实验,体验生活 学了用天平测物体的质量后,先估计一个鸡蛋的质量,然后用天平进行测量,看你估计的是否准确。再用天平称出10个鸡蛋的质量,算出每个鸡蛋的平均质量,与你估计的值进行比较。 2.做惯性实验,有惊无险 在盛半杯水的玻璃杯口上放一张硬纸片,再在纸片上放一个鸡蛋,用手把硬纸片突然弹出去,鸡蛋会安全地掉进玻璃杯。 3.做惯性实验,判断准确 用生熟鸡蛋各一个,分别放在桌面上,同时以相同的速度旋转,因为熟鸡蛋的蛋黄和蛋清固定,所以旋转平稳,而生鸡蛋由于惯性,摇晃不定,很快停止转动,由此可准确判断生鸡蛋熟鸡蛋。 4.做压强实验,直观明了

配制溶液的一般实验步骤

配制溶液的一般实验步骤 配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同,现举两个例 子: 举例 1:配置 0.05mol/L ,400mL NaOH 溶液的步骤:要准确配置氢氧化钠的浓度,则要用容量瓶定容,实验室没有 400 毫升的容量瓶,则选用 500 毫升的容量瓶。 1.计算需要氢氧化钠的质量:0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000 克 2.称 1.000 克氢氧化钠于烧杯中,加少量水溶解,然后倒入 500 毫升容量瓶里,分 3 次洗烧杯,将溶液全部倒入容量瓶里,最后用水稀释至刻度线,摇匀,即,得到 0.05mol/L 的氢氧化钠溶液。 如果不需要很准确的话,可以直接用量筒量 400 毫升,称的时候只要称 0.8 克就可以了。举例 2:配置 1.5mol/L 的稀硫酸 200mL 步骤: 第 1 步:计算:根据 C1V1=C2V2 ,计算需要浓硫酸的体积;第 2 步:量取,利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积;第 3 步:稀释,将浓硫酸转移到小烧杯中,加少量水稀释;第 4 步:转移 , 待溶液温度降低后,将烧杯中的硫酸转移到 200mL 容量瓶中; 第 5 步:洗涤,洗涤小烧杯,和转移的时候用到的玻璃棒, 至少三次,将洗涤的水一并转移到容量瓶中; 第 6 步:定容,加水定容到刻度线,在距离刻度线一厘米左右改

用胶头滴管定容; 第 7 步:摇匀 ,将溶液摇匀 ,如果液面下降也不可再加水定容;第 8 步:将配得的溶液转移至试剂瓶中,贴好标签;举例 3:配制 500mL ,0.1mol/L 碳酸钠溶液步骤及注意事项所需的仪器:烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤:第一步:计算:所需碳酸钠的质量 =0.5*0.1*106=5.3 克;第二步:称量:在天平上称量 5.3 克碳酸钠固体,并将它倒入小烧杯中;第三步:溶解:在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,使其溶解;第四步:移液:将溶液沿玻璃棒注入 500mL 容量瓶中;第五步:洗涤:用蒸馏水洗烧杯2?3次,并倒入 容量瓶中;第六步:定容:倒水至刻度线 1?2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直;第七步:摇匀:盖好瓶塞,上下颠倒、摇匀;第八步:装瓶、贴签;误差分析:固体药品的称量与液体药品的量取是否准确;把溶液向容量瓶中转移,溶液洒了;未洗涤烧杯和玻璃棒;用待配液润洗了容量瓶;定容时水加多了或加少了;定容时未平视刻度线。仰视、俯视对溶液浓度有何影响?★俯视刻度线,实际加水量未到刻度线,使溶液的物质的量浓度增大;★仰 视刻度线,实际加水量超过刻度线,使溶液的物质的量浓度 减小。市售盐酸密度1.19,质量分数36%?38%以37%计 算:步骤: 1.计算:假若需要 2mol/L 的硫酸 100mL ,则需 37%

实验三 进程的创建和简单控制(学生

实验三进程的创建和简单控制 实验目的: 1.掌握进程的概念和进程的状态,对进程有感性的认识; 2.掌握进程创建方法; 3.认识进程的并发执行,了解进程族之间各种标识及其存在的关系; 4.熟悉进程的创建、阻塞、唤醒、撤销等控制方法。 实验内容: 1.了解有关Linux进程的属性和进程的层次结构; 2.学习有关Linux的前台和后台进程; 3.学习有关Linux命令的顺序执行和并发执行; 4.学习有关挂起和终止进程; 5.了解并发程序的不可确定性,进行简单并发程序设计。 实验步骤: (一)Shell下的进程控制 1.进入Linux系统。 2.用ps查看进程。 a)linux的ps命令是用来监视系统进程和资源使用情况的命令,可显示 瞬间进程的动态。 b)ps 的参数非常多,常用的参数有: i.-A 列出所有的进程; ii.-w 显示加宽可以显示较多的信息; iii.-au 显示较详细的信息; iv.-aux 显示所有包含其他使用者的进程。

3.用kill终止某些进程。 a)kill命令通过向进程发送指定的信号来结束进程。 b)先使用ps查到进程号,再使用kill杀出进程。

4.用pstree命令显示系统中进程层次结构。 a)pstree指令用ASCII字符显示树状结构,清楚地表达进程间的相互关 系。 b)语法格式pstree [-acGhlnpuUV][-H <程序识别码>][<程序识别 码>/<用户名称>]

(二)Linux简单进程编程 1.理解系统调用fork()的使用。 a)fork()会产生一个与父程序相同的子程序,唯一不同之处在于其进程 号,如图1所示。 图 1 系统调用fork() b)编辑下面的程序,要求实现父进程产生两个子进程,父进程显示字 符“a”、两个子进程,分别显示字符“b”、“c”,如图2所示。 #include main( ) { int p1,p2;

高考生物实验设计题的答题技巧

2019年高考生物实验设计题的答题技巧 生物实验设计,就是要求同学们能够根据实验原理,选择实验器材、安排实验步骤、进行数据处理及分析实验现象等。其主要考查学生是否理解实验原理,是否具有灵活运用实验知识的能力,是否具有在不同情境下迁移知识的能力。 实验设计题是高考热点题型,所占分值也比较高。许多同学觉得解这类题目难以下手,有时只是心里明白,却无法用准确的语言文字表达出来。其实只要理清思路,找准方法,就能化难为易,取得好成绩。解答高考实验设计题可遵循以下思路: 一、仔细审题,弄清实验目的和要求 1.确定实验目的,找出要研究的问题,这一点题目中都会给我们提示,诸如“研究、验证、探究”等字眼后面往往是试题将要研究的问题,也就是实验目的。 2.对应实验目的,运用所学知识,找准实验原理。 3.要弄清实验类型,即要设计的实验是验证性实验还是探究性实验。 4.依据实验原理确定实验变量以及影响实验结果的无关变量。 5.确定实验器材,对于生物实验题中已提供的实验材料和用具,主要分析“有什么用”“怎么用”,一般应全部用上,不可遗漏,除非试题是让你选择使用或者自行确定实验材料和用具。 二、精心设计实验步骤 书写实验步骤的“三步曲”: 1.分组标号:包括分组(实验组、对照组,其中实验组如果有浓度梯度,

至少要分三组,如果有必要,每组还要设多个相同处理)、编号、非条件处理等。 常用语言:选择长势相同、大小相似的同种植物随机等量分组,分别编号为A、B、C……取两支试管,分别编号为甲、乙,各加入等量的某溶液;选择年龄、体重(性别)、健康状况相同的某种动物随机等量分组,分别编号为1、2、3…… 本步骤强调分组的等量原则(器材的规格、生物材料的长势、分组的数量和随机性等),编号可以针对实验器具,也可以针对实验材料,有的非条件处理需在条件处理之后,则需写在第二步。 2.设置实验组(有单一变量)和对照组(无单一变量)。 常用语言:在A组中加入“适量的”……在B组中加入“等量的”……本步骤强调对照原则、各对照组条件处理的等量原则,通过“适量” 和“等量”表达出来。在具体的实验设计中,可用具体的量,如“在A 组中加入2 mL……在B组中加入2 mL……”。 3.培养或观察:放在适宜且相同的条件下培养,一段时间后观察现象,记录结果。 常用语言:将两套装置放在“相同且适宜的环境中培养一段时间”(或相应方法处理,如振荡、加热等) 本步骤强调各组外界处理的等量原则,两套装置必须放在相同且适宜的环境中,这样的实验结果才有可比性。培养的时间可根据具体的实验确定,也可以用“一段时间”描述。 特别提醒:a.最佳的书写步骤是1→2→3;b.用规范性语言准确地描

液体配制及实验方法

(一)液体配制 1.完全培养基 DMEM+10%FBS+1%双抗+(1%HAPS液) 若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺 2.PBS 1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO4 3.胰酶 用之前调节PH值至7.6 4.CaCl2 将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液 每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液(终浓度3μmol/L)用于激活胶原酶的活性 5.双抗 终浓度:青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml 青霉素0.6μg为1个单位链霉素 1.2195μg为一个单位 称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml 6.两性霉素B 100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中,制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液 每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液,稀释为终浓度2.5μg/ml 7.细胞冻存液 20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS) 8STZ溶液 STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中 称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液,调节PH值至4.5,4°避光保存,由于STZ水溶性不稳定,溶液最好在半小时内使用完毕. 9油红O 原液:油红O 0.6g溶于异丙醇(99% )100ml 。 稀释液:油红O 原液20ml ,蒸馏水20ml ,过滤后使用。 10茜素红 称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS,调节PH值到7.2,过滤后使用.

简单的个人网站实验报告

《动态网页制作》 课程设计 姓名: 学号: 日期:2011.6.10

一、实验目的与要求 1、实现一个比较实用的个人网站 2、使用DIV+CSS对界面进行设置 3、网页界面美观 二、实验内容 1、前台: ⑴网站首页(最新公告、最新新闻、友情链接、登录等) ⑷聊天室 ⑸留言板 2、后台管理(从数据库中提取): ⑴公告新闻的发布 ⑵留言的管理和回复 ⑶个人信息的设置(资料的更改、密码的找回等) 三、实验步骤 1、建立虚拟目录,用于存放你的所有网页及材料 2、新建站点,名称为站点1 3、创建数据库 4、登陆界面进入个人主页 5、个人主页界面包括:最新公告,最新新闻,最新电影,网上聊天室,留言板,涂鸦生活(身份证查询、email发送),网站计数器(记录该网站的点击次数)以及一些关于自己的信息链接功能。 6、实现各个功能。 Main.asp主页如下: ’数据库news的建立与打开 ’数据库gonggao的建立与打开 心的开始

遗传实验设计及解题方法归纳(超实用)

遗传实验设计 一、显、隐性性状判断 二、纯合子和杂合子的判断 三、基因位置的确定 四、可遗传变异和不可遗传变异的判断 五、显性突变和隐性突变的判断 六、基因突变和染色体变异的判断 一、显、隐性性状判断 1、相同性状个体杂交:(使用条件:一个自然繁殖的种群中,显隐性基因的基因频率相等) (1)实验设计:选多对相同性状的雌雄个体杂交(植物则自交)。 (2)结果预测及结论: ①若子代中出现性状分离,则所选亲本性状为显性; ②若子代只有一种表现型且与亲本表现型相同,则所选亲本性状为隐性。 例1、已知牛的有角与无角为一对相对性状,由常染色体上的等位基因A与a控制。在自由放养多年的一群牛中(无角的基因频率与有角的基因频率相等),随机选出1头无角公牛和6头有角母牛分别交配,每头母牛只产了1头小牛。在6头小牛中,3头有角,3头无角。(1)根据上述结果能否确定这对相对性状中的显性性状?请简要说明推断过程。 ⑵为了确定有角与无角这对相对性状的显隐性关系,用上述自由放养的牛群(假设无突变发生)为实验材料,再进行新的杂交实验,应该怎样进行?(简要写出杂交组合、预期结果并得出结论) 例1;答案:(1)不能确定。(2分)①假设无角为显性,则公牛的基因型为Aa,6头母牛的基因型都为aa,每个交配组合的后代或为有角或为无角,概率各占1/2,6个组合后代合计会出现3头无角小牛,3头有角小牛。(5分)②假设有角为显性,则公牛的基因型为aa,6头母牛可能有两种基因型,即AA和Aa。AA的后代均为有角。Aa的后代或为无角或为有角,概率各占1/2,由于配子的随机结合及后代数量少,实际分离比例可能偏离1/2。所以,只要母牛中具有Aa基因型的头数大于或等于3头,那么6个组合后代合计也会出现3头无角小牛,3头有角小牛。(7分)综合上述分析,不能确定有角为显性,还是无角为显性。(1分)(2)从牛群中选择多对有角牛与有角牛杂交(有角牛X有角牛)。如果后代出现无角小牛,则有角为显性,无角为隐性;如果后代全部为有角小牛,则无角为显性,有角为隐性。(6分)

计算机网络实验《交换机基本配置》

实验一交换机基本配置 一、实验目的 1.掌握桌面网络组建方法 2.掌握Quidway S 系列中低端交换机几种常见配置方法 二、实验内容 1.通过Console 口搭建配置环境 2.通过Telnet 搭建配置环境 3.熟悉VRP 的各种视图及各视图下的常用命令 三、实验原理、方法和手段 1. 交换机配置方式 交换机通常的配置方式有:Console 方式,telnet 方式,web 方式和modem 拨号方式 2. 命令行接口Command-line Interface 华为网络设备中运行的操作VRP向用户提供一系列配置命令以及命令行接口,方便用户配置和管理网络设备,包括以太网交换机。命令行有如下特性: 1)通过Console 口进行本地配置 2)通过telnet 进行本地或远程配置 3)通过modem 拨号登录到网络设备进行远程配置 4)配置命令分级保护,确保未授权用户无法侵入到网络设备 5)用户可以随时键入以获得在线帮助 6)提供网络测试命令,如tracert、ping 等,迅速诊断网络是否正常 7)提供种类丰富、内容详尽的调试信息,帮助诊断网络故障 8)用telnet 命令直接登录并管理其它网络设备 9)提供ftp 服务,方便用户上载、下载文件 10)提供类似Doskey 的功能,可以执行某条历史命令 11)命令行解释器对关键字采取不完全匹配的搜索方法,用户只需键入无冲突关键 字即可解释 四、实验组织运行要求 1.熟悉实验内容; 2.要求独立完成实验,教师可以给予一定的辅导; 五、实验条件 1.华为Quidway S/思科Catalyst 2960/中兴ZXR10 交换机 2.计算机一台即可 六、实验步骤 1.通过Console 口搭建配置环境 1)如图1-2,建立本地配置环境,只需将微机(或终端)的串口通过配置电缆与 以太网交换机的Console 口连接。

Seahorse-XF实验流程

Seahorse XF实验流程 (此为简略版实验流程,详细步骤参见培训手册) XF实验前一天 1.种细胞:将细胞接种到Seahorse XF细胞培养板中,在生长培养基中过夜培 养。注:细胞接种时间和培养时间可根据细胞处理要求进行选择。 2.预热仪器:打开Seahorse仪器和电脑,并打开软件,使仪器升温至37℃, 过夜预热。 3.> 4.水化探针:在Utility Plate中加入Seahorse XF校准液,将测试板放回 培养箱中过夜水化探针。 Utility Plate上,置于37℃无CO 2 XF实验当天 1.准备检测液:用Seahorse XF Base Medium配制检测液,加入所需要的底物, 将溶液加热至37℃,用NaOH调pH值至,过滤,置37℃水浴中备用。 注:检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细胞类型和实验设计,或者与生长培养基保持一致。 2.】 3.观察细胞:将细胞板从CO2培养箱中取出,在显微镜下观察细胞状态。 培养箱4.细胞换液:将生长培养基换为检测液,然后将细胞放置在37℃无CO 2中1小时。 5.配药:根据试剂盒说明书,配制并稀释药物至所需浓度。 6.加药:将稀释好的药物分别加入测试板上的A,B,C,D 四个加药孔中。 注:根据实验设计选择所用加药孔数量。 7.\ 8.设计实验模板:用软件记录实验条件和设计实验程序。 9.上机:开始运行实验程序,将加过药的测试板和装有校准液的Utility Plate 一起放置到仪器托板上。 10.仪器自动校准探针。 11.换细胞板:当软件出现提示信息时,将Utility Plate换为细胞板。

12.实验完成时根据软件提示信息退出测试板和细胞板,并在显微镜下观察细胞 状态。 13.数据分析:采用wave软件和report generator对实验数据进行分析。

实验1-UTM-web基本配置实验

实验1-UTM-web基本配置实验

步骤一. 接口加入安全区域 首先通过IE浏览器登陆UTM web界面:http://192.168.0.1 输入默认用户名/密码:admin/admin和验证码(不区分大小写)进入: 在左侧导航栏中点击“设备管理 > 接口管理”。

点击GE0/1栏中的按钮,进入“接口编辑” 界面。按照下图设置接口GE0/1,点击< 确 定 >返回“接口管理”界面。 GE0/1加入trust域 点击左侧导航栏“设备管理 > 安全域”。

点击Trust栏中的按钮,进入“修改安全域” 界面。按照下图将接口GE0/1加入Trust域, 点击< 确定 >返回“安全域”界面。 步骤二. 配置管理 2.1配置保存 在“设备管理 > 配置管理> 配置保存”页面, 点击< 确定 >按钮,即可将当前的配置信息保 存,页面提示设备正在保存当前配置。

如果想将配置文件加密,可以选中“加密配置文件”前面的复选框。 2.2配置备份 在“设备管理 > 配置管理> 配置备份”页面,点击< 备份 >按钮。 在弹出对话框中选择保存的路径,输入文件名保存即可。 2.3配置恢复 在“设备管理 > 配置管理> 配置备份”页面,点击< 浏览 >按钮,选择备份文件。

点击< 确定 >按钮,配置文件导入成功后,页 面会显示下面的提示信息,恢复的配置文件在 设备会下次启动后生效。 2.4恢复出厂配置 在“设备管理 > 配置管理> 恢复出厂配置”页面,点击< 恢复出厂配置 >按钮,选择备份文件。 步骤三. 软件升级 在“设备管理 > 软件升级”页面,点击< 浏览 >按钮,选择升级版本的路径,点击< 确定 >按钮。

实验二 观察一个简单的WEB过程

实验二观察一个简单的WEB过程 一、实验目的和要求 ?进一步掌握Ethereal的使用方法 ?能对捕获到的包进行较深入的分析 ?简单的运用filter设置过滤 ?通过Ethereal抓包和分析,了解HTTP协议 二、实验内容 启动Ethereal并设置相应的选项,进行一次简单的WEB访问,观察捕获到的数据包,过滤出HTTP数据包,分析每个分组的细节,了解HTTP的工作过程,查看整个跟踪记录的统计摘要。 三、实验设备 PC机、Ethereal软件、WinpCap软件 四、背景知识 1、HTTP相关概念 万维网 WWW (World Wide Web)并非某种特殊的计算机网络,它是一个大规模的、联机式的信息储藏所。万维网用链接的方法能非常方便地从因特网上的一个站点访问另一个站点,从而主动地按需获取丰富的信息。这种访问方式称为“链接”。 在万维网客户程序与万维网服务器程序之间进行交互所使用的协议,是超文本传送协议 HTTP (HyperText Transfer Protocol)。HTTP 是一个应用层协议,它使用 TCP 连接进行可靠的传送。 超文本传输协议(HTTP,HyperText Transfer Protocol)是互联网上应用最为广泛的一种网络协议。所有的WWW文件都必须遵守这个标准。设计HTTP最初的目的是为了提供一种发布和接收HTML页面的方法。 HTTP 是面向事务的客户服务器协议。HTTP 1.0 协议是无状态的(stateless)。HTTP 协议本身也是无连接的,虽然它使用了面向连接的 TCP 向上提供的服务。 HTTP/1.1 协议使用持续连接。万维网服务器在发送响应后仍然在一段时间内保持这条连接,使同一个客户(浏览器)和该服务器可以继续在这条连接上传送后续的 HTTP 请求报文和响应报文。这并不局限于传送同一个页面上链接的文档,而是只要这些文档都在同一个服务器上就行。目前一些流行的浏览器(例如,IE 6.0)的默认设置就是使用 HTTP/1.1。 2、万维网使用HTTP协议的工作过程 HTTP协议定义了浏览器(即WWW客户进程)怎样向万维网服务器请求万维网文档,以及服务器怎样把文档传送给浏览器。 每个万维网网点都有一个服务器进程,它不断的监听TCP的端口80,以便发现是否有浏览器(即万维网客户)向它发出连接建立的请求。一旦监听到连接建立请求并建立了TCP连接后,浏览器就向万维网服务器发出浏览某个网页的请求,服务器接着就返回所请求的页面作为响应。最后,TCP连接就被释放了。

校园网设备配置的操作步骤

校园网设备配置的操作步骤 路由器A的配置: 1.配置路由器主机名 R e d-G i a n t>e n a b l e(注:从用户模式进入特权模式) R e d-G i a n t#c o n f i g u r e t e r m i n a l(注:从特权模式进入全局配置模式) R e d-G i a n t(c o n f i g)#h o s t n a m e A(注:将主机名配置为“A”) A(c o n f i g)# 2.配置路由器远程登陆密码 A(c o n f i g)#l i n e v t y04(注:进入路由器v t y0至v t y4虚拟终端线路模式) A(c o n f i g-l i n e)#l o g i n A(c o n f i g-l i n e)#p a s s w o r d s t a r(注:将路由器远程登陆口令设置为“s t a r”) 3.配置路由器特权模式口令 A(c o n f i g)#e n a b l e p a s s w o r d s t a r(明文方式进入) 或:A(c o n f i g)#e n a b l e s e c r e t s t a r(加密方式进入) (注:将路由器特权模式口令配置为“s t a r”) 4.为路由器各接口分配I P地址 A(c o n f i g)#i n t e r f a c e f a s t e t h e r n e t0注:进入路由器f a s t e t h e r n e t0的接口配置模式A(c o n f i g-i f)#i p a d d r e s s172.16.1.1255.255.255.0 注:设置路由器f a s t e t h e r n e t0的I P地址为172.16.1.1,对应的子网掩码为255.255.255.0 A(c o n f i g-i f)#n o s h u t(注意要打开端口,不要忘记操作) 注:手工打开物理接口。 A(c o n f i g)#i n t e r f a c e f a s t e t h e r n e t1注:进入路由器f a s t e t h e r n e t1的接口配置模式A(c o n f i g-i f)#i p a d d r e s s172.16.2.2255.255.255.0 注:设置路由器f a s t e t h e r n e t1的I P地址为172.16.2.2,对应的子网掩码为255.255.255.0注:手工打开物理接口。 测试结果 §1.查看路由器端口为u p,u p. §2.两台主机分别p i n g与其直连的路由器的F a s t e t h e r n e t口,应为通. §3.从A d m i n i s t r a t o r主机p i n g W W W服务器,结果应为通。 验证命令 1、s h o w r u n 2、s h o w c o n t r o l l e r s s0 3、s h o w i n t 4、s h o w i p i n t b r i e f 5、p i n g 6、t e l n e t 注意事项 §通过s h o w c o n t r s0来查看该端是D C E还是D T E,D C E端需要配置时钟速率,否则接口线协议为d o w n。 交换机操作 V L A N配置: §实验名称:V L A N-本交换机隔离 §实验设备:S3550-24(1台) §实验目的:通过划分P O R T V L A N实现本交换端口隔离 §实验时间:30分钟

初三化学实验设计题的解题思路和方法

初三化学实验设计题的解题思路和方法 一、思考问题的顺序 1、围绕主要问题思考。例如:选择适当的实验路线、方法;所用药品、仪器简单易得;实验过程快速、安全;实验现象明显。 2、思考有关物质的制备、净化、吸收和存放等有关问题。例如:制取在空气中易水解的物质(如32S Al 、3AlCl 、23N Mg 等)及易受潮的物质时,往往在装置末端再接一个干燥装置,以防止空气中的水蒸气进入。 3、思考实验的种类及如何合理地组装仪器,并将实验与课本实验比较、联系。例如:涉及到气体的制取和处理时,实验的操作程序及装置的连接顺序大体可概括为:气体发生→除杂质→干燥→主体实验→尾气处理。 二、仪器连接的顺序 1、所用仪器是否恰当,所给仪器是全用还是选用。 2、仪器是否齐全。例如:制有毒气体及涉及有毒气体的实验是否有尾气的吸收装置。 3、安装顺序是否合理。例如:是否遵循“自上而下,从左到右”;气体净化装置中不应先干燥,后又经过水溶液洗气。 4、仪器间连接顺序是否正确。例如:洗气时“进气管长,出气管短”;干燥管除杂质时“大进小出”等。 三、实验操作的顺序 1、连接仪器。按“气体发生→除杂质→干燥→主体实验→尾气处理”的顺序连接好实验仪器。 2、检查气密性。在整套仪器连接完毕后,应先检查装置的气密性,然后装入药品。检查气密性的方法要依装置而定。 3、装药品进行实验操作。 例题:在实验室里制氧气时常用氯酸钾作原料,用二氧化锰作催化剂,根据催化剂的含义,二氧化锰的质量和化学性质都不发生改变。试设计一个实验,证明二氧化锰在氯酸钾分解前后的质量不变,并说明实验程序和主要操作步骤。 解析:要证明二氧化锰在氯酸钾分解前后质量不变,就必须测定两个质量,一个是加到反应器中的二氧化锰的质量,另一个是反应后剩余固体中的二氧化锰的质量。 加到反应器中的2MnO 的质量可以在加入前测得,而反应后的质量,必须从反应后剩余固体中将2MnO 分离出来才能测得。因此,整个实验便以如何解决2MnO 的分离为实验目的。 根据学过的知识,2MnO 不溶于水,而KCl 溶于水,由此可应用溶解过滤的方法将它们分离开。 (1)用天平称量31KClO g w 和22MnO g w ,混合均匀,放入大试管中; (2)组装成制氧气的装置,加热,至不再有气体放出为止; (3)待大试管冷却后将剩余固体取出放入一小烧杯中,加水搅拌使KCl 溶解; (4)取一张滤纸对折后剪去多余部分,称量其质量为3w ; (5)用该滤纸做成过滤器,过滤(3)制成的液体,全部过滤完后,再用清水洗涤不溶物; (6)取下滤纸,小心干燥后称量,滤纸连同滤纸上滤出的不溶物的质量共为4w ; (7)将滤液蒸干称量其质量为5w ; (8)将收集到的氧气换算成质量为6w ;

高中物理简易实验

高中物理几个简易实验 摘要:物理学是以实验为基础的科学。物理实验是根据一定的研究目的,运用科学仪器、设备,人为地控制、创造或纯化某些物理过程,使之按预期的进程发展,同时在尽可能减少干扰的情况下进行定性或定量的观察和研究,以探求物理现象、物理过程变化规律的一种科学活动,也是检验物理教学理论是否正确的标准。物理实验是物理教学的内容的重要组成部分,也是物理教学的重要手段。物理实验教学是物理教学的有机组成部分,无论从教学目的、任务还是物理学科的特点以及学生的年龄特征方面等诸多方面考虑,实验教学中物理教学中都占有极其重要的地位,对提高物理教学质量,培养创造性人才具有极其重要的作用。 关键词:物理实验教学简易实验重要性 一、物理实验教学的作用及意义 物理实验教学作为物理教学的有机组成部分,无论是从物理教学的目的、任务还是物理学科的特点等方面考虑,物理实验教学都占有极其重要的地位,对提高物理教学质量、培养创造性人才都具有十分重要的作用。 1.实验教学能激发学生学习物理的兴趣与求知欲望 “激发学习兴趣”是中学物理教学的任务之一,实验教学是“激发学习兴趣”的最好方法。因为实验真实、形象、生动,对中学生有很强的吸引力,极易呼唤起他们的直觉兴趣。实验教学也正符合了中学的心理特征,极易被学生接受。比如在中学讲发电机时,如果单纯只讲知识,学生则容易产生枯燥、乏味的感觉;反之,如果老师能实验的方式讲授,那么课堂的效果就要好很多。 2.提高感知效果,优化学习环境 处于中学阶段的学生,大脑发育还不成熟,理性思考能力也不是很强,对抽象性较强的内容往往很难理解。通过实验教学可以使学生掌握必要的感性材料,从而对一些物理概念、规律加深理解。理性认识是建立在感性认识的基础上,所以说,在物理教学中,要使学生形成概念、认识规律,教师必须想方设法创造一种以学生为主体的学习物理环境,让学生在物理世界中通过各种活动去认识世界。而观察、实验则是创设物理环境最主要的方法,是获得物理知识的源泉。 3.实验教学是发展学生能力和技能的重要途径 实验是首脑并用的实践活动。在实验过程中,通过阅读实验资料、操作实验仪器、观察实验现象、排除实验故障、记录实验数据、分析试验结果等活动、使学生的阅读能力、思维能力、操作技能和手脑并用能力以及语言和文字的表达能力等都得到了锻炼。并且由于实践与思维、动手与动脑相联系,使学生的实际技能以及创造能力都得到发展。所以说,做实验的过程是一种综合能力的培养过程。而且,这种综合训练过程,也是创造能力得以产生的基础。 4.实验有利于培养学生良好的科学作风和道德风尚 实验本身是一个严格的科学过程,要获得实验的成功,必须一丝不苟,认真严谨,这对培养学生实事求是的态度和严谨的科学作风是十分有益的。此外,实验对磨练学生的意志、培养学生遵守纪律、爱护公物的优良传统都具有十分重要的作用。物理实验最重要的作用是在平时实验中形成的一些优良品格对学生日后人生的影响,严谨的科学作风必然会使学生在生活中成为做事严

实验一溶液的配制教学总结

实验一溶液的配制 【实验目的】 1. 掌握几种配制一定浓度溶液的方法和液体、固体试剂的取用方法。 2.熟悉量筒、容量瓶、托盘天平的正确使用方法。 3.了解溶液配制的一般原则。 【实验原理】 溶液浓度有几种不同的表示方法:物质的量浓度、质量浓度、质量摩尔浓度、质量分数、体积分数等等。 物质的量浓度=溶质的物质的量/溶液体积; 质量浓度=溶质质量/溶液体积; 质量摩尔浓度=溶质的物质的量/溶质的质量 质量分数=溶质质量/溶液质量; 体积分数=液体溶质的体积/溶液体积。 要配制一定浓度的溶液,首先要弄清楚是配制哪种类型浓度的溶液(根据浓度的单位判断),再根据所需配制溶液的浓度、体积与溶质的量三者的关系,计算出溶质的量。如果求出的是溶质的质量,则用天平称取溶质;如果求出的是溶质的体积,则用量筒量取溶质的体积。最后加水至所要求的溶液的质量或体积即可。 配制溶液还包括稀释溶液:根据溶液稀释前后溶质的量不变,首先利用稀释公式(如:c1V1=c2V2)计算出浓溶液的体积,然后用量筒量取一定体积的浓溶液,再加蒸馏水稀至所需配制的稀溶液的体积,混合摇匀即可。 配制一般溶液(即溶液浓度准确度要求不高的溶液),可以用量筒、托盘天平等仪器进行配制;但如果要配制标准溶液(即溶液浓度准确度要求高的溶液),则应采用分析天平、移液管、容量瓶等精密仪器进行配制。 【仪器与试剂】

烧杯、洗瓶、容量瓶(100mL、250mL、1000mL各一个)、玻璃棒、胶头滴管、托盘天平、药匙、量筒(100mL)、电子天平。 NaCl固体(AR),95%酒精、40%甲醛溶液、碘、碘化钾、重铬酸钾固体(AR)、浓硫酸-重铬酸钾洗液、蒸馏水、NaOH固体(AR)。 【实验步骤】 一、移液管的洗涤 移液管和刻度吸量管一般采用橡皮吸耳球吸取铬酸洗涤液洗涤,沥尽洗涤液后,用自来水冲洗,再用蒸馏水洗涤干净。(具体步骤详见“实验四十六滴定分析基本操作”)。 二、容量瓶的准备与洗涤 1. 容量瓶的准备 使用前要检查是否漏水。检查方法是:往容量瓶中加入约1/3体积的水,盖好瓶塞,瓶外水珠用布或滤纸擦拭干净,左手按住瓶塞,右手拿住瓶底,将瓶倒立2 min,观察瓶塞周围是否有水渗出。如不漏水,将瓶直立,将瓶塞转动约180°后,再倒立试一次。 2. 容量瓶的洗涤 容量瓶一般不用刷子机械地刷洗,其内壁的污渍最好用浓硫酸-重铬酸钾洗液来清洗,小容量瓶可装满洗液浸泡一定时间;容量大的容量瓶则不必装满,注入约1/3体积洗液,塞紧瓶塞,摇动片刻,隔一些时间再摇动几次即可洗净。然后用水冲洗掉洗液,对着光亮检查一下是否已被洗净,内壁水膜是否均匀。如果发现仍有水珠,则应再用洗液浸泡后再检查,直到彻底洗净为止。最后用去离子水(或蒸馏水)洗去自来水。去离子水每次用量约为被洗仪器体积的1/3,一般洗2~3次。 三、溶液的配制 1. 配制250mL生理盐水(9g/L的NaCl溶液) (1)计算:所需NaCl的质量=0.25×9=2.25克。 (2)称量:在天平上称量约2.25克NaCl固体,并将它倒入小烧杯中。 (3)溶解:在盛有NaCl固体的小烧杯中加入适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,

简单DNA提取实验

实验材料 透明杯子、筷子、盐、洗洁精、冰箱冷藏的白酒、冰块、隐形眼镜护理液、蒸馏水、牙签等 实验步骤 1.获取口腔上皮细胞。含一口蒸馏水,开始漱口,试着用自己的舌头舔口腔内壁,大约2分钟; 2.用透明的杯子收回口腔中的液体; 3.在杯中加入半勺盐,缓慢搅拌10圈,记住动作要慢哦; 4.在杯中加入洗洁精5~6滴,均匀慢速地搅拌3分钟,切记越慢越好; 5.加入5滴隐形眼镜清洗液,继续缓慢搅拌10圈,加入冰块静置5分钟; 6.再次搅拌10圈,从冰箱拿出冷藏的白酒,缓慢倒入杯中,于是酒精便自然分层游离在唾液上方,唾液则沉淀在杯底; 7.由于DNA不溶于酒精,此时在上清下浑的酒精和唾液分层中间,能看到固态絮状的DNA。用筷子轻轻搅拌,将DNA缠绕起来,缓缓拉出水面,就能目睹DNA的真容了。这就是你的DNA哦! 8.将DNA放入小瓶中,也可加入一些精油或酒精。这样,一条兼具观赏价值与特殊含义的精油项链就做好了。 实验原理:

DNA主要存在于真核生物的细胞核中,动物、植物都属于真核生物。在高温的条件下,DNA会变性(被破坏),而在常温和低温条件下,则可以保存。由于哺乳动物成熟的红细胞不含有细胞核,因此人类的血液当中含有的DNA是比较少的,如果想要在非实验室环境下提取自己的DNA,建议选择其他容易获得的细胞,比如口腔的上皮细胞等。 下面我们就对具体操作步骤中涉及的原理进行解释 1.获取细胞:用漱口的方式,获取的是口腔的上皮细胞。 2.盐的作用:在漱口时细胞已经破碎,加盐可吸附DNA。带正电的钠离子会和DNA分子中带负电的区域发生反应,可使DNA分子聚到一起。 3.洗洁精的作用:洗洁精中含有十二烷基硫酸钠,它可以破坏细胞膜,这样就可以将细胞内的物质溶解于溶液当中,从而释放DNA,也可用牙膏、洗发香波等来代替。 4.缓慢搅拌:防止用力太大,速度太快会使DNA断裂。 5.隐形眼镜清洗液的作用:去除镜片上的蛋白质,主要是依靠清洗液中含有的蛋白酶,蛋白酶可以分解溶液中的蛋白质。加入隐形眼镜清洗液,其中蛋白酶的成分就可去除溶液中蛋白质的干扰,使DNA 更容易被提取出来,也可用菠萝或嫩肉粉来代替。 6.冰块和冷藏酒:在低温环境下,由于DNA不溶于酒精,因此可以析出DNA。 如果是植物细胞,就先要加洗洁精,然后再加盐。因为植物细胞有细胞壁,清水中不能吸水胀破。所以要先去除细胞壁。另外,在实验室提取DNA的过程中,会进行多次的氯化钠(NaCl)浓度调节,并且

实验设计题的解题思路和方法

实验设计题的解题思路和方法 杨立江 一、思考问题的顺序 1、围绕主要问题思考。例如:选择适当的实验路线、方法;所用药品、仪器简单易得;实验过程快速、安全;实验现象明显。 2、思考有关物质的制备、净化、吸收和存放等有关问题。例如:制取在空气中易水解的物质(如32S Al 、3AlCl 、23N Mg 等)及易受潮的物质时,往往在装置末端再接一个干燥装置,以防止空气中的水蒸气进入。 3、思考实验的种类及如何合理地组装仪器,并将实验与课本实验比较、联系。例如:涉及到气体的制取和处理时,实验的操作程序及装置的连接顺序大体可概括为:气体发生→除杂质→干燥→主体实验→尾气处理。 二、仪器连接的顺序 1、所用仪器是否恰当,所给仪器是全用还是选用。 2、仪器是否齐全。例如:制有毒气体及涉及有毒气体的实验是否有尾气的吸收装置。 3、安装顺序是否合理。例如:是否遵循“自上而下,从左到右”;气体净化装置中不应先干燥,后又经过水溶液洗气。 4、仪器间连接顺序是否正确。例如:洗气时“进气管长,出气管短”;干燥管除杂质时“大进小出”等。 三、实验操作的顺序 1、连接仪器。按“气体发生→除杂质→干燥→主体实验→尾气处理”的顺序连接好实验仪器。 2、检查气密性。在整套仪器连接完毕后,应先检查装置的气密性,然后装入药品。检查气密性的方法要依装置而定。 3、装药品进行实验操作。 例题:在实验室里制氧气时常用氯酸钾作原料,用二氧化锰作催化剂,根据催化剂的含义,二氧化锰的质量和化学性质都不发生改变。试设计一个实验,证明二氧化锰在氯酸钾分解前后的质量不变,并说明实验程序和主要操作步骤。 解析:要证明二氧化锰在氯酸钾分解前后质量不变,就必须测定两个质量,一个是加到反应器中的二氧化锰的质量,另一个是反应后剩余固体中的二氧化锰的质量。 加到反应器中的2MnO 的质量可以在加入前测得,而反应后的质量,必须从反应后剩余固体中将2MnO 分离出来才能测得。因此,整个实验便以如何解决2MnO 的分离为实验目的。 根据学过的知识,2MnO 不溶于水,而KCl 溶于水,由此可应用溶解过滤的方法将它们分离开。 (1)用天平称量31KClO g w 和22MnO g w ,混合均匀,放入大试管中;