唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 参考
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验
实验目的：
1、掌握用碘-淀粉比色法的方法精测唾液淀粉酶最适pH值。
2、学会常用的缓冲溶液配制的方法。
3、进一步熟悉分光光度计的使用。
一、实验原理：
1、酶催化活性最高时反应体系的pH值称为酶的最适pH值。人体正常唾液pH值为6.6～7.1，吸光度值在6.0～8.0范围内并且随着pH的增大先减小后增大。
2、在不同pH条件下，淀粉经淀粉酶水解后不同程度的水解产物能与碘液反应呈现不同颜色，可用分光光度计测量出反应后各溶液在660nm 处的吸光度A，由朗伯－比尔定律可知，吸光度A值越大，其相应的酶活力越低，从而可间接得出唾液淀粉酶的最适pH值。
三、仪器材料和试剂：
仪器材料：
1. 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、烧杯、漱口水
2. 37 C恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴
3.1ml吸量管、5ml吸量管，胶头滴管、100ul移液器
实验试剂：
0.02％淀粉溶液、 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水
四、实验步骤：
1、试剂的配制：
0.02％淀粉溶液—取2.5g/L的淀粉溶液4ml，置于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释到50mL。
0.2mol/L磷酸二氢钠溶液—准确称取14.200g，加入20ml蒸馏水溶解在烧杯，然后置于500ml容量瓶中稀释至刻度备用。
0.2mol/L磷酸氢二钠溶液—准确称取12.000g，加入20ml蒸馏水溶解在烧杯，然后置于500ml容量瓶中稀释至刻度备用。
根据下表，混合溶液至50.00ml后用蒸馏水稀释到100.00ml.
pH 值 0.2mol/LNa2HPO4(ml)（丁） 0.2mol/LNaH2PO4 (ml)（霞）
5.8 4.00 4
6.00
6.0 6.15 43.85
6.2 9.25 40.75
6.4 13.25 36.75
6.6 18.75 31.25
6.8 24.50 25.50
7.0 30.50 19.50
7.2 36.00 14.50
7.4 40.50 9.50
7.6 43.50 6.50
7.8 45.75 4.25
8.0 47.35 2.65
2、唾液的获取：
（1）蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.
（2）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号铭1～10。
试管号铭1 铭 2 铭 3 铭 4 铭 5 铭 6 铭 7 铭8 铭 9 铭 10 唾液(ml) 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 蒸馏水(ml) 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 （3）唾液稀释倍数的选取
另取10支试管，分别编上霞1～10号，分别精取上述稀释的唾液各
1.00ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1.00ml 的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出，滴加3d碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录
稀释倍数。(颜色应出现浅黄，蓝紫色，深蓝色，如果只出现黄色或者
蓝色应该扩大或缩小稀释倍数重新选取)
（4)、测量pH：取12支试管，分别标上号赵1～12，按下表操作
赵1 赵2 赵 3 赵4 赵 5 赵6 赵7 赵8 赵9 赵10 赵11 赵 12
淀粉溶液(ml) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
2ml缓冲冲溶液ph 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.00
稀释唾液(ml) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
充分混匀，放入37 C恒温水浴5分钟，加3d碘液，振荡混匀
以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管溶液的吸光度A值，做好记录
A660
五、实验数据及处理：
以pH值为横坐标，吸光度A为纵坐标，在坐标纸上作出平滑曲线，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。
六、实验讨论
1、唾液淀粉酶随食物进入胃内,能否继续将淀粉分解为麦芽糖？
不能，唾液淀粉酶的最适pH在7左右，而胃液的pH在2左右，会使唾液淀粉酶失活并以蛋白质的形式被胃蛋白酶水解
2、在唾液稀释倍数的选取中，如何挑出颜色变化适中的那管溶液？
七、实验分工
1、溶液的配制：
缓冲溶液的配制—吴金霞、黄彩丁
唾液淀粉酶的稀释—杨铭铭
需测量PH的溶液配制—赵凯丽
2、观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，大家一起完成（保证实验数据的可靠）
3、测A660：
黄彩丁负责测，杨铭铭负责倒溶液，吴金霞负责擦比色管，赵凯丽负责记数据
酶性质——最适pH选择
生物化学实验报告 题目：酶性质——最适pH选择 姓名：学号：班级：时间： 一、实验原理： 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH。高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。值得指出的是，不同的酶最适pH也不同，如胃蛋白酶的最适pH为1.5~2.5，胰蛋白酶的最适pH为8。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于同一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4~6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。 二、实验试剂： 1.0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液； 2.用0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液配制pH分别为5.4， 6.0，6.4，6.8， 7.2，7.6， 8.0的缓冲液。 表1 各pH值的缓冲液所需两种溶液配比 保温时间指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一段时间。摸准保温时间是实验的关键步骤之一。 取一支试管，加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液2ml，加入pH6.8磷酸氢二钠—柠檬酸钠缓冲液3ml，及稀释100~300倍的唾液2ml。充分摇匀后，放入37℃水浴中保温并记时，每隔1min用滴管取1滴混合液，至于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，待呈橙黄色时，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录所需保温时间。 若2~3min内，取出的保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数，若保温时间超过15min，说明酶活力太低，要提高酶的浓度。最佳保温时间8~12min以内，因此要掌握好唾液淀粉酶的稀释倍数，确定准确的保温时间才能进行下步实验。取7支试管按下表操作，保温时间参考以上操作：
唾液淀粉酶活性的测定
影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有 高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 （一）实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 （二）实验原理 人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下： 淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖 淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。 淀粉与糊精无还原性，或还原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应。麦芽糖与葡萄糖是还原性糖，与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。 唾液淀粉酶的最适温度为37-40°C，最适pH为6.8.偏离此最适环境时，酶的活性减弱。 低浓度的Cl-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。 （三）器材及试剂 1、器材：试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻璃棒、试管夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶 2、试剂：1％淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4％HCl溶液、0.1％的乳酸溶液、1％NaCl溶液、1％CuSO4溶液、0.1％淀粉溶液 （四）操作步骤
[最新]测定唾液淀粉酶的最适ph值
[最新]测定唾液淀粉酶的最适ph值测定唾液淀粉酶的最适PH值 制作人:叶小晴学号:201140095 班组:15-4 学院:护理学院 摘要:酶催化活性最大时相应的环境PH称为酶促反应的最适PH值。虽然不同酶的最适PH值各不相同，但大多数酶的最适PH值接近中性，本论文主要在一定浓度、温度等条件下研究唾液淀粉酶的最适PH值，从而知道唾液淀粉酶的最适PH 值，进而了解影响酶的活性的因素。关键词:唾液淀粉酶、最适PH值、活性前言:生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质或核酸，酶是机体内最重要的生物催化剂。在不同PH条件下，酶分子的许多极性基团的解离状态不同，受到PH变化的影响，从而影响酶对它们的亲和力。PH还会影响酶的活性中心的空间构象，从而影响酶的活性，因而PH的改变对酶的催化作用影响很大。 材料与方法: 1、材料:唾液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水、温水、 试管、试管架、洗耳球、烧杯、胶头滴管、水浴箱、分光光度计、吸量管、坐标纸 2、方法:(1)缓冲溶液的配置:根据各个PH值的缓冲溶液(用量:ml)表 1: PH5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 值 磷酸0.40 0.62 0.93 1.33 1.88 2.45 3.05 3.60 4.05 4.35 4.58 4.74 氢二 钠 磷酸4.60 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.95 0.65 0.43 0.27 二氢
钠 蒸馏5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 水 (2)唾液的获取:温的水漱口，将蒸馏水含于口中2min后吐于烧杯中，取5ml 唾液20ml水配成1/5的唾液，从中取5ml的1/5的唾液再加入10ml水配成1/10 的唾液。 (3)测量PH:取12支管，分别标上1~12，按下表操作: 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1/50.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 唾液 淀粉0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 溶液 0.5ml5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 缓冲 溶液 PH 蒸馏3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 水 表2: 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1/100.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 唾液 淀粉0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 溶液 0.5ml5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 缓冲 溶液
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。 二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦
芽糖+少量葡萄糖 加碘后：蓝色 紫红色 暗褐色红棕色 黄色 三、试剂与器材 影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有 高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 实验原理 人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀
实验八_酶性质——最适PH选择
酶性质——最适PH选择 姓名：任建南 学号：201300140073 班级：13级生科四班 同组者：周光明 时间：2015年5月25日 【实验目的】 1、熟悉并掌握用酶最适PH选择的方法。 2、学会寻找酶最适反应时间的方法。 【实验原理】 酶的催化活性与环境PH有密切关系，通常各种酶只在一定PH范围内才有活性，酶活性最高时的PH，称为酶的最适PH。高于或者低于此PH时酶的活性逐渐降低。值得指出的是，不同的酶最适PH也不同，如胃蛋白酶的最适PH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适PH为8.0。 酶的最适PH不是一个特征性的物理常数，而对于同一个酶，其最适PH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶的最适PH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适PH为6.4-6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。 【实验试剂】 1.0.3%NaCl‘ 2.0.5%的淀粉 3.用0.2M Na2HPO4和0.1M的柠檬酸溶液配制的PH为5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0的缓冲液 【实验步骤】 1、确定合适的保温时间 保温时间是指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一般时间。 取一支试管，加入0.3%NaCl、0.5%淀粉各2ml，PH6.8的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液3ml和稀释
100-300倍的唾液2ml，充分摇匀，放入37度水浴保温。 计时，每隔1min滴一滴混合液于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，呈橙黄色时，加一滴碘液于试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录保温时间。 若2-3min内，保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数。若保温时间超过15min，说明酶活力太低，需要提高酶的浓度。最佳保温时间为8-15min内。 2、确定最适PH 取7支试管按下表操作，保温时间参考步骤1 从各管呈现的颜色，判断不同PH对淀粉水解和淀粉酶活性的影响，并确定其最适PH。 【实验结果】 实验用唾液淀粉酶稀释倍数为200倍，PH 6.8 37°C水浴的时间7min，各试管最终试剂颜色依次深→浅→深，且PH为6.8时颜色最浅，可见唾液淀粉酶最适PH在6.8左右且过高或者过低都会使其活力下降 【思考讨论】 结果分析： 由颜色梯度可以看出，在PH=6.8时，加入碘液后混合液的颜色最浅，因此，唾液淀粉酶的最适PH为6.8，PH值高于或者低于6.8，唾液淀粉酶的活力都会受到抑制。 注意事项： （1）本次实验成功的关键点之一就是缓冲溶液，一定要保证加入的Na2HPO4和柠檬酸的体积完全符合要求，并且充分混匀。 （2）实验操作过程中，一定要保证唾液淀粉酶酶液一直处于低温状态，这样有利于保证酶的活力，可以防止酶失活。
唾液淀粉酶最适pH值
唾液淀粉酶最适pH值的测定 陆绍龙 广西医科大学七年制临床医学10级4班 摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果:当pH=6.6时，唾液淀粉酶的活性最高。 关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计 前言：酶学与医学的关系密切。人体的许多疾病和酶都密切相关。酶分子中的许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。人的唾液中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至胃内容物变为pH值约为4.3~4.8的酸性反应为止。 正文： 1.材料与方法： 仪器：吸量管（5mL，1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722G分光光度计，恒温箱（含温度计），一次性纸杯，pH试纸。 试剂：2.5g/L淀粉，0.2mol/L Na2HPO4溶液，0.2mol/L NaH2PO4 溶液,蒸馏水，唾液，碘液。 2.操作步骤 1）1. 不同pH缓冲液配制 按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。
唾液淀粉酶活性观察实验报告范本(完整版)
报告编号：YT-FS-5572-78 唾液淀粉酶活性观察实验报告范本(完整版) After Completing The T ask According To The Original Plan, A Report Will Be Formed T o Reflect The Basic Situation Encountered, Reveal The Existing Problems And Put Forward Future Ideas. 互惠互利共同繁荣 Mutual Benefit And Common Prosperity
唾液淀粉酶活性观察实验报告范本 (完整版) 备注：该报告书文本主要按照原定计划完成任务后形成报告，并反映遇到的基本情况、实际取得的成功和过程中取得的经验教训、揭露存在的问题以及提出今后设想。文档可根据实际情况进行修改和使用。 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。 二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此
时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH 值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色 三、试剂与器材 这里填写您企业或者单位的信息 Fill In The Information Of Your Enterprise Or Unit Here
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验设计
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 小组成员:刘倍材何标才揭春晓李芮 实验目的： 1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 2.掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 3.熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理： 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm 处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH 对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。
实验步骤： 1.缓冲溶液的配制。取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。 2.唾液的采集。 先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。 3.唾液的稀释。取10支试管，进行编号1＇-10＇,进行稀释。
4.唾液稀释倍数的选取。 另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 5.最适PH的测定。 另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。
唾液淀粉酶的性质和活力测定
唾液淀粉酶的性质和活力测定 一．实验目的 （一）1 通过唾液淀粉酶性质的测定，了解酶的专一性和多种因素对酶粗反应的影响，pH，底物浓度，温度，激活剂，抑制剂等 2 学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定，加深对概念的理解； 3 学会用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量，学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量，熟练操作分光光度计。 二．实验试剂和器材器材：可见光分光光度计，试管，移液管，恒温水浴锅，pH 试 纸，1000ml 容量瓶和100ml 的容量瓶各一只；药品：可溶性淀粉，考马斯亮蓝试剂G-250，3,5-二硝基水杨酸， NaoH,HCL ，标准牛血清白蛋白溶液，醋酸，醋酸钠，蒸馏水，95% 乙醇，85%磷,;0.15molNaCL/ml, 0.15mol/L硫酸铜溶液，碘化钾- 碘溶液：将碘化钾20 克和碘10 克溶解在100ml 水中，使用前稀释10 倍。 注：（1 ）考马斯亮蓝G-250 试剂：考马斯亮蓝试剂G-250100mg 溶于95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，加水稀释至1000ml,过滤即 可。 （2）标准牛血清白蛋白溶液：结晶牛血清白蛋白用凯式定氮法测蛋白含量,根据其纯度用0.15mol/L Nacl 配置成0.1mg/L 的蛋白液； （3）配置0.01%g/ml,0.1%g/ml,, 0.5%g/ml,1%g/ml,2%g/ml,3%g/ml 的的溶性淀粉溶液;
（4）配置一系列pH2的缓冲溶液 0.2MOI/L磷酸氢二钠溶液为28.40g/L,Mr=141.98,称取2.84g溶于100ml的水中 0.1MOI/L 柠檬酸溶液21.01g/I,Mr=210.14,称取2.1 溶于100ml 水中; 锥形瓶 号0.2MOI/L磷酸氢二钠 （毫升） 0.1MOI/L柠檬酸 （毫升） 缓冲液pH 10.419.60 2.2 2 4.1115.89 3.0 37.7112.29 4.0 410.309.70 5.0 511.158.85 5.4 612.097.91 5.8 713.22 6.78 6.2 814.55 5.45 6.6 916.47 3.537.0 1018.17 1.837.4 1119.150.857.8 1219.450.558.0 5配置0.15moI/L的NaCL溶液和0.15moI/L硫酸铜溶液 三.实验步骤 （一） 1 pH的对酶的影响 1）葡萄糖标准曲线的制定 准确称取100mgAR纯的葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容于100ml的容量瓶中，配成1.0mg/L的溶液，水浴加热5min，迅速取出冷却，在向每管加入21.5ml的蒸馏水于550nm处测吸光度;
唾液淀粉酶的活性观察
唾液淀粉酶的活性观察 【实验目的】 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性。 2.掌握酶定性分析和注意事项。 【基本原理】 酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，具催化率比一般催化剂高106~1013。在生物体内，过氧化氢酶能催化过氧化氢很快地分解成为H2O和O2，使H2O2不致在体内大量积累。铁粉也是过氧化氢分解反应的催化剂，但其催化效率仅为过氧化氢的100亿分之一。 酶的催化作用受到温度的影响。在一定的温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至最大值。由于酶是一种蛋白质，温度过高会导致酶的失活，因此，反应速度到达最高值以后，温度继续升高，酶促反应速度反而急剧下降，直至完全停止酶促反应。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。 酶活性受环境pH值的影响。通常各种酶只有在一定的pH值范围才表现出活力。酶活性达到最高的pH值，称为最适pH值。低于或者高于最适pH值时，酶的活性均降低或者失去活性。唾液淀粉酶的最适pH值为。 酶活性受环境中某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂。值得注意的是，激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，%的氯化钠是唾液淀粉酶的激活剂，但氯化钠达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活力。 本实验以唾液淀粉酶为材料来观察环境因素对酶活性的影响情况。唾液中含有α-淀粉酶，该酶属于内切酶。淀粉在该酶的催化作用下或随着时间的延长而出现不同程度的水解产物，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等产物。 而碘液能指示淀粉的水解程度，淀粉及淀粉不同程度的水解产物遇到碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，而麦芽糖遇碘液则不呈颜色反应。如图所示： 淀粉酶淀粉酶 淀粉紫色糊精暗褐色糊精红色糊精麦芽糖+少量葡萄糖 加碘后：
唾液淀粉酶实验
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 实验目的 1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 3．熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。
实验器材 仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。 试剂药品：0.02％淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。
实验步骤： 1、缓冲液的配置 pH 0.2mol/L 0.2mol/L NaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml) 5.7 93.5 6.5 5.8 92.0 8.0 5.9 90.0 10.0 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51.0 49.0
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文.doc
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文 篇一：唾液淀粉酶活性观察实验报告 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。 二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色
三、试剂与器材 篇二：唾液淀粉酶活性的测定 影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有 高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 （一）实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 （二）实验原理 人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下： 淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖 淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 参考
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 实验目的： 1、掌握用碘-淀粉比色法的方法精测唾液淀粉酶最适pH值。 2、学会常用的缓冲溶液配制的方法。 3、进一步熟悉分光光度计的使用。 一、实验原理： 1、酶催化活性最高时反应体系的pH值称为酶的最适pH值。人体正常唾液pH值为6.6～7.1，吸光度值在6.0～8.0范围内并且随着pH的增大先减小后增大。 2、在不同pH条件下，淀粉经淀粉酶水解后不同程度的水解产物能与碘液反应呈现不同颜色，可用分光光度计测量出反应后各溶液在660nm 处的吸光度A，由朗伯－比尔定律可知，吸光度A值越大，其相应的酶活力越低，从而可间接得出唾液淀粉酶的最适pH值。 三、仪器材料和试剂： 仪器材料： 1. 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、烧杯、漱口水 2. 37 C恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴 3.1ml吸量管、5ml吸量管，胶头滴管、100ul移液器 实验试剂： 0.02％淀粉溶液、 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水
四、实验步骤： 1、试剂的配制： 0.02％淀粉溶液—取2.5g/L的淀粉溶液4ml，置于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释到50mL。 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液—准确称取14.200g，加入20ml蒸馏水溶解在烧杯，然后置于500ml容量瓶中稀释至刻度备用。 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液—准确称取12.000g，加入20ml蒸馏水溶解在烧杯，然后置于500ml容量瓶中稀释至刻度备用。 根据下表，混合溶液至50.00ml后用蒸馏水稀释到100.00ml. pH 值 0.2mol/LNa2HPO4(ml)（丁） 0.2mol/LNaH2PO4 (ml)（霞） 5.8 4.00 4 6.00 6.0 6.15 43.85 6.2 9.25 40.75 6.4 13.25 36.75 6.6 18.75 31.25 6.8 24.50 25.50 7.0 30.50 19.50 7.2 36.00 14.50 7.4 40.50 9.50 7.6 43.50 6.50 7.8 45.75 4.25 8.0 47.35 2.65
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇 An experimental report on salivary amylase activity
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇 小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。本文档根据实验报告内容要求展开说明，具有实践指导意义，便于学习和使用，本文下载后内容可随意修改调整及打印。 本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】 1、篇章1：唾液淀粉酶活性观察实验报告文档 2、篇章2：唾液淀粉酶活性的测定文档 3、篇章3：淀粉酶活性测定实验报告文档 篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档 2 唾液淀粉酶活性观察实验报告 一、实验目的 1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性； 2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。
二、基本原理 1.酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2，铁粉地H2O2分解也有催 化作用，但其效率远低于酶。 2.酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内，温度升高，酶的活性也会增大。当到了最大值后，此时温度为酶的最适温度，由于温度过高，酶开始失活，导致酶的效率降低，最后完全失活。 3.酶的活性受PH值的影响。酶在一定范围的PH值下才有活性，高于或低于最适PH，都会使酶的活性降低。 4.酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂，有些物质能使酶的活性降低，称为抵制剂。 5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后：蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验设计
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验设计
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 小组成员: 刘倍材何标才揭春晓李 芮 实验目的： 1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 2.掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 3.熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理： 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉
酶的最适PH。 实验步骤： 1.缓冲溶液的配制。取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。 2.唾液的采集。 先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。
3.唾液的稀释。取10支试管，进行编号1＇-10＇,进行稀 释。 4.唾液稀释倍数的选取。 另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 5.最适PH的测定。 另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。
测定α淀粉酶活力的方法
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH 对酶活性的影响 一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α- 淀粉酶活力的方法。 二、实验原理 酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。酶催化的反应称为酶促反应。生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。 能提高酶活力的物质，称为激活剂。激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。 酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH 值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。同样，反应中某一PH 范围内酶活力可达最高，在最适PH 的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。 食品级α- 淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH 、对 淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。α- 淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4 糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α- 淀 粉酶为液化淀粉酶。α- 淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6 糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6 键的寡糖。 本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6 个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α- 淀粉酶作用于淀粉基质的水 解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。 三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响 （一）试剂及材料 1、1：30 唾液淀粉酶配置用蒸馏水漱口，1min 后收集唾液，以1：30 倍蒸馏水稀释。 2、0.2%可溶性淀粉称取可溶性淀粉0.2g，预加20mL 蒸馏水调匀，然后倒入80mL 沸水中，继续煮沸至溶液透明，冷却后
唾液淀粉酶最适pH值
陆绍龙 广西医科大学七年制临床医学10级4班 摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果:当pH=时，唾液淀粉酶的活性最高。 关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计 前言：酶学与医学的关系密切。人体的许多疾病和酶都密切相关。酶分子中的许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。人的唾液中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至胃内容物变为pH值约为~的酸性反应为止。 正文： 1.材料与方法： 仪器：吸量管（5mL，1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722G 分光光度计，恒温箱（含温度计），一次性纸杯，pH试纸。 试剂：L淀粉，L Na2HPO4溶液，L NaH2PO4 溶液,蒸馏水，唾液，碘液。 2.操作步骤 1）1. 不同pH缓冲液配制 按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。 pH L Na2HPO4溶液(mL) L NaH2PO4 溶液(mL) 注：应用pH值试纸来确定所配溶液pH。 2）唾液的获取 先漱口1~2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。
关于唾液淀粉酶的最适PH
关于唾液淀粉酶的最适PH 姓名邱远学号201150716 摘要：为了探究唾液淀粉酶的最适宜PH值，通过配置不同PH值的基质液作为酶与底物反应的环境，再加碘液与未反应的底物作用成色，用分光仪测定溶液吸光度来比较底物的剩余量，以此推断出唾液淀粉酶的最适宜PH的范围。 关键词：唾液淀粉酶最适PH值 前言：作为一名医学生，未来的医生，通过实验来学习获得科研的基础知识，熟悉一些基本原则和操作，更是为了完成老师布置的作业。此次实验具有重要意义。 实验原理：淀粉经样品中淀粉酶的水解，生成糊精和麦芽糖。在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物。其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。即颜色越浅，吸光度越低，淀粉酶的活力越高。 操作步骤： 一：基质液的配置： 1：取十一支规格相同的干净试管，分别编号1到10.置于试管架的第一排。 2：按下表加入试剂。
二：酶液的配置： 1：实验者用蒸馏水漱口，洗去残留食物，然后含一口蒸馏水在口中三分钟，时间到后将唾液吐在一个干净的纸杯。 2：取两个干净烧杯，分别标注为1:5和1:10. 三：反应进行。
1：去20支规格相同的试管，平均分成两组,分别编号1到20 其中1到10号试管加入1:5号烧杯的酶液置于试管架第三排11到20号试管加入1:10号烧杯的酶液置于试管架第二排。 2.按下表在各试管中加入试剂。
3:因为用肉眼感觉各试管区别不是很明显，故在每一只试管中注入2ml的蒸馏水。 4：混匀后用分光度法在660nm波长下用蒸馏水调零，测量各管的A660。测得的读数已并入上表。 绘制成图：
唾液淀粉酶的性质和活力测定_
唾液淀粉酶的性质和活力测定 (一) 1通过唾液淀粉酶性质的测定，了解酶的专一性和多种因素对酶 粗反应的影响，pH，底物浓度，温度，激活剂，抑制剂等 2学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定，加深对概念的理解； 3学会用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量，学会用3,5-二硝基水 杨酸测定还原糖的含量，熟练操作分光光度计。 二.实验试剂和器材 器材：可见光分光光度计，试管，移液管，恒温水浴锅，pH试纸，1000ml容量瓶和100ml的容量瓶各一只； 药品：可溶性淀粉，考马斯亮蓝试剂 G-250, 3,5-二硝基水杨酸，NaoH,HCL,标准牛血清白蛋白溶液，醋酸，醋酸钠，蒸馏水，95% 乙醇，85%磷,;0.15molNaCL/ml, 0.15mol/L硫酸铜溶液，碘化钾- 碘溶液：将碘化钾20克和碘10克溶解在100ml水中，使用前稀释 10倍。 注：(1)考马斯亮蓝G-250试剂：考马斯亮蓝试剂G-250100mg 溶于95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，加水稀释至1000ml,过滤即可。 (2)标准牛血清白蛋白溶液：结晶牛血清白蛋白用凯式定氮法 测蛋白含量，根据其纯度用0.15mol/L Nacl配置成0.1mg/L的蛋白液； (3)配置 0.01%g/ml,0.1%g/ml,, 0.5%g/ml,1%g/ml,2%g/ml,3%g/ml 的的溶性淀粉溶液；
（4）配置一系列pH2的缓冲溶液 0.2MOI/L磷酸氢二钠溶液为28.40g/L,Mr=141.98,称取2.84g溶于100ml的水中0.1MOI/L 柠檬酸溶液 21.01g/I,Mr=210.14,称取 2.1 溶于 100ml 水中; 锥形瓶 号0.2MOI/L磷酸氢二钠 （毫升） 0.1MOI/L柠檬酸 （毫升） 缓冲液pH 1 0.4 19.60 2.2 2 4.11 15.89 3.0 3 7.71 12.29 4.0 4 10.30 9.70 5.0 5 11.15 8.85 5.4 6 12.09 7.91 5.8 7 13.22 6.78 6.2 8 14.55 5.45 6.6 9 16.47 3.53 7.0 10 18.17 1.83 7.4 11 19.15 0.85 7.8 12 19.45 0.55 8.0 5配置0.15moI/L的NaCL溶液和0.15moI/L硫酸铜溶液 三.实验步骤 （一） 1 pH的对酶的影响 1）葡萄糖标准曲线的制定 准确称取100mgAR纯的葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容于 100ml的容量瓶中，配成1.0mg/L的溶液，水浴加热5min，迅速取出冷却，在向每管加入21.5ml的蒸馏水于550nm处测吸光度;
酶性质——最适pH选择
酶性质—最适pH选择 高熹 168615140001 一、实验原理： 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH。高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。值得指出的是，不同的酶最适pH也不同，如胃蛋白酶的最适pH为1.5~2.5，胰蛋白酶的最适pH为8。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于同一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4~6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。 二、实验试剂： 1、0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液； 2、用0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液配制pH分别为5.4，6.0，6.4，6.8，7.2，7.6，8.0的缓冲液。 各pH值的缓冲液所需两种溶液配比 三、实验仪器： 1、恒温水浴锅 2、试管若干 3、移液管 4、量筒 5、胶头滴管 6、烧杯 7、容量瓶 四、实验操作： 保温时间指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一段时间。摸准保温时间是实验的关键步骤之一。 取一支试管，加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液2ml，加入pH6.8磷酸氢二钠—柠檬酸钠缓冲液3ml，及稀释100~300倍的唾液2ml。充分摇匀后，放入37℃水浴中保温并记时，每隔1min用滴管取1滴混合液，至于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，待呈橙黄色时，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录所需保温时间。 若2~3min内，取出的保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀
唾液淀粉酶活性测定1
一、实验原理： 酶促反应速率受多种元素的影响，如温度、PH、激活剂和抑制剂等。在温度等其他条件相同时，唾液淀粉酶的活性在最适PH处达到最大，在最适PH的反应体系中，淀粉被消耗最多，剩余的淀粉与碘液显色最浅，在660nm波长吸光度也最小，最后以吸光度值为纵坐标，PH值为横坐标作图，从而得到唾液淀粉酶的最适PH值。 二、实验仪器： 吸量管，试管，试管架，小烧杯，722型分光光度计，恒温箱，洗耳球 三、实验试剂： 0.01mol/L碘液，0.2mol/L Na2HPO4，0.2mol/L NaH2PO4，2.5g/L淀粉溶 液，唾液，蒸馏水 四、实验思路： 相同时间内，在温度，酶浓度相同，PH不同的条件下，唾液淀粉酶的活性不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量的碘液作用所显示的颜色 也不同，并通过测定吸光度，得出唾液淀粉酶的最适PH范围。 五、操作步骤： 1、唾液的获取及稀释以备取者蒸馏水漱口2～3次，然后含大口蒸馏水于口腔内并反复做咀嚼动作，一段时间后以烧杯承接唾液；而后分别进行4、8、1 2、16、20倍数稀释； 2、唾液稀释液稀释倍数的确定取若干洁净试管，按表1添加试剂并进行实验操作 表1 唾液稀释液稀释倍数的确定（用量:ml） 试剂 1 2 3 4 5 空白管 唾液稀释液倍数/2ml 20 40 60 80 100 0 淀粉溶液 1 1 1 1 1 1 振荡混匀后37℃水浴10分钟 碘液/滴 2 2 2 2 2 2 振荡混匀后观察颜色变化，以“＋”表示颜色深浅 颜色变化深浅 由此表中数据确定稀释倍数为______的唾液稀释液作为下一步步骤试剂 3、淀粉用量的确定按表2进行操作