原子荧光操作规程

氢化物发生-原子荧光法的原理

一．原子荧光法的基本原理

氢化物发生-原子荧光法是基于下列反应，先将分析元素转化为在室温下为气态的氢化物：

NaBH4+3H2O+HCl→H3BO3+NaCl+8H*+E-（待测元素）→EHn（气态氢化物）+H2↑反应所生成的氢化物被引入到特殊设计的石英炉中，并在此被原子化。受光源（高效空心阴极灯）的光能激发，原子处于基态的外层电子跃迁到较高能级，并在回到较低能级的过程中辐射出原子荧光。荧光的强度与原子的浓度（即溶液中被测元素的浓度）成正比。

汞离子可以与硼氢化钠生成原子态的汞，在“冷”条件下（不需要在石英炉中加热）可被激发出汞的原子荧光，一般称为冷原子蒸汽法。

二．分析方法的建立

要建立一个分析方法应考虑下列几个方面：

1. 样品的预处理

所用的处理方法要保证被测元素的完全分解；在处理过程中不应造成被测元素的损失和污染；样品处理时使用的试剂使用前要检查空白。

2. 最佳反应介质的建立

样品处理后必须在氢化物发生之前将溶液调整到被测元素的最佳反应介质。最好的情况是样品处理并定容后溶液已经处于最佳的反应酸度，被测元素也处于合适的价态。

3. 干扰的考虑

所有的元素灯光源必须有足够的光谱纯度；当灵敏度可以满足要求时，应尽量减小仪器条件如灯电流、负高压等。

4. 工作曲线的建立

AFS系列氢化物发生-原子荧光光度计属于痕量测量，因而不应当使用太高的标准系列曲线，标准浓度过高会造成工作曲线弯曲，不属于线性关系，严重时会造成仪器污染。

样品分析时，在处理样品时必须同时带有样品空白。

三．原子荧光法的检测全过程

蠕动泵样品、还原剂进样→载流进样→至一级气液分离器产生氢化物→载气推送至二级气液分离器→推送至原子化器→原子化→激发荧光→检测器检测→计算机数据处理

准确度：指测量值与真实值接近的程度，两者之差叫误差。准确度的高低常用误差表示，误差越小，分析结果的准确度越高。

精密度：指多次重复测定同一量时各测定值之间彼此相符合的程度。表征测定过程中随机误差的大小。分析时，常用相对标准偏差(RSD)表示精密度。

标准偏差(SD)：一种量度数据分布的分散程度的标准，用以衡量数据值偏离算术平均值的程度。

检出限：指产生一个能可靠地被检出的分析信号所需要的某元素的最小浓度或含量。检出限：一般有仪器检出限、分析方法检出限之分。D=3×SD/K （即3倍的标准偏差除以工作曲线斜率）

仪器检出限：是指分析仪器能检出与噪音相区别的小信号的能力。

方法检出限：不但与仪器噪音有关，而且还决定于方法全部流程的各个环节，如取样，分离富集，测定条件优化等，即分析者、环境、样品性质等对检出限也均有影响，实际工作中应说明获得检出限的具体条件。

X

SD

RSD =

1

)(1

2

--=

∑=n X X

SD n

i i

∑==1

1

1i i

X n X

AFS-230E原子荧光光度计操作规程及注意事项

一．操作规程

1.打开灯室，将待测元素的空心阴极灯插头仔细插入灯座；

2.将各种泵管连接好；

3.开启气瓶，使次级压力为0.2MPa~0.3MPa之间；

4.按微机、主机次序开启电源，运行AFS-230E操作软件；

5.将调光器放在石英炉原子化器上，调节原子化器高度旋钮，使调光器侧面十字线中

心与光电倍增管光栏中心位置一致（目测），然后分别调整灯位调节旋钮，使得A、B道光源的光斑与调光器的十字线中心对准，取下调光器；

6.打开原子化器室的前门，由去水装置的开口处用注射器或滴管加入少量水保持水封；

7.点燃点火炉丝，预热30min；

8.准备好标准系列及样品，按照软件操作进行测量；

9.注意保证各泵管无泄漏，定期向泵管和压块间滴加硅油；

10.在测试结束后，要在空白溶液杯和还原剂容器中加入蒸馏水运行仪器，清洗管道，

关闭载气，熄火，关闭软件，最后关闭主机电源。

二．注意事项

1.仪器的外部使用条件：实验室温度在15度至30度之间，湿度小于75%。

2.对气体、器皿和试剂的要求：氩气纯度大于99.99%。玻璃器皿应清洗干净用酸浸泡

且为原子荧光专用。试剂的纯度应符合要求，储备液应定期更换，使用液和还原剂应现用现配。

3.向去水装置中加入水时，加入应适当，以免形成倒流；

4.进行测量时注意在气液分离器中不要有积液，以防溶液水进入原子化器；

5.确保测量时载流液及还原剂够用的情况下，测量人员才能离开；

6.定期检查泵管，确保泵管在测量时不漏液，以免影响测量结果；

7.更换空心阴极灯时，确保主机电源处于关闭状态。

三．简单故障的排除

系统故障问题

1. 故障表现：通讯失败

解决方法：A.按照规定的开机顺序开机重试；B.检查串口电缆是否连接好，重装操作系统或仪器操作软件。

2. 故障表现：测量过程中死机

解决方法：A.软件干扰，卸载或关闭可能产生干扰的软件；B.元素灯干扰，更换元素灯或不插灯测试。

3. 故障表现：无信号

解决方法：A.检查元素灯是否亮，采样时点灯过程是否正常；B.检查灯能量反射是否正常，以此判断仪器电路问题还是进样系统问题；C.观察反应时原子化器炉口是否有火焰形成（炉芯突出可以造成无火焰）；D.检查样品或还原剂是否被吸进反应快，反应是否正常（有大量气泡产生）；E.排废泵管是否漏气，压块松紧是否合适；F.试剂是否失效、浓度是否准确，可按标准方法重新配置。

4. 故障表现：信号不稳

解决方法：A.仪器预热的时间不够；B.检查进样系统毛细管是否有堵塞；C.检查泵管是否被压扁或变形；D.检查气流量是否准确，选择设置是否合适。

5. 故障表现：测量时显示“无载气”

解决方法：更换氩气瓶或将气路装置上的气保开关顶丝拧松即可。

元素灯问题：

1. 故障表现：灯点不亮

解决方法：多为汞灯，汞灯开机后不会自动点亮，需要用点煤气用的放电装置点亮或用海绵擦拭灯表面。

2. 故障表现：光斑偏斜

解决方法：元素灯有四个螺丝固定，将调光器放置在原子化器上，调节螺丝，使光斑集中在调光器中央位置。

蠕动泵问题：

1.故障表现：不排液

解决方法：调节蠕动泵对硅胶管的压力，压力要适中，硅胶管一定要有卡子，否则会经常因为泵挤压硅胶管引起不排液。

2.故障表现：蠕动泵转动不停

解决方法：属系统故障，管机器，重新开启。

气液分离器问题

1.故障表现：泡沫过多

解决方法：消解不完全，有机物过多导致，可以采用继续消解的方法，同时适当降低还原剂硼氢化钾浓度，也可采用适当加入多元醇来消泡。

2.故障表现：二级气液分离器漏气

解决方法：查看管路是否接反，同时注意加水封的时候要快，加水量要大，一次堵住气孔，慢慢加会被载气吹出，导致水封加不上而漏气。

检测值问题

1.故障表现：检测值很低，相对恒定，曲线各点测出值相近

解决方法：A.查看灯有没有点亮，灯没有点亮的话会出现值很低且恒定的情况；B.查看有没有点火，没有点火也会出现类似情况；C.查看灯光斑位置是否在原子化器中央，如果偏离很多也会出现类似情况；D.查看管路是否进样，特别是用蠕动泵进样的机器，发生不进样的几率比较高；E.查看二级气液分离器水封是否加好，漏气的话，检测值也会很低，且不能检出。

2.故障表现：检测值很低，相对恒定，可以做曲线

解决方法：A.查看灯光斑位置是否子啊原子化器中央，如果出现偏离会出现类似情况，少量的荧光被检测器检测到还可以做曲线，就是值很低；B.查看环境温度，5℃以下检测值低是正常情况，提高环境温度即可；C.预热时间，刚开机即检测，不仅值不稳定，而且值会很低。

3.故障表现：空白值高

解决方法：A.查看管路是否污染，一般来说汞40ug/L以上，砷100ug/L以上会造成管路污染；B.试剂污染，自查就可以解决。

4.故障表现：空白漂移

解决方法：A.延长元素灯预热时间，环境温度低时更要延长；B.曲线重测。

XGY-1011A原子荧光光度计操作规程及注意事项

一．操作规程

1.将选定待测元素的空心阴极灯装在灯座上，开启主机电源开关；

2.选定特种空心阴极灯（主电流）或高强度空心阴极灯（主电流和辅助电流）的灯电

流；

3.将点灯方式置于“预热”档，灯即发光；

4.将调光器置于原子化器上，调节空心阴极灯上下左右位置，使得光斑落在调光器的

中心位置，对光完毕后取下调光器；

5.按下“功能选择”键置冷原子（不点火）即为冷原子测定方式；

6.根据需要调节好负高压、积分时间、加液时间和炉温，预热15~20min；

7.仪器稳定性检查：开氩气之前，（检修档状态）不加溶液，按测量键，观测读数，如

多次读数稳定则把读数调零，即仪器空白调到零；

8.开启氩气，将钢瓶口定值装置中输出压力调节至0.02MPa，流量计设定所需载气流

量（800ml/min），按测量键了解氩气有无读数，若读数不大且稳定，则可调零；9.将选择开关置于“工作”档，用定量加液器（2ml）吸取空白溶液注入发生器，按

测量键（加入还原剂）观测空白溶液的读数（水、酸和容器污染引起）。如读数不大且稳定，即可进行灵敏度检查调节；

10.向发生器注入2ml标准溶液，按测量键，读出读数（荧光强度），计算灵敏度是否

符合工作要求。灵敏度调节符合要求后，即可进行测量工作。一般首先作校正工作曲线。

二．注意事项

1.测量工作中在氢化物/汞蒸气发生器内严禁加入有机溶剂溶液，防止发生器受损；

2.储液桶加入溶液后，在旋盖过程中请注意要对好丝口，且不要旋得太紧（旋盖内设

有密封垫），以避免旋盖丝口受损，通气后检查有无漏气现象；

3.开机前应检查氢化物发生器下端废液桶是否畅通，废液桶伸入废液桶内不宜太长，

防止废液管与桶内废液接触；

4.在开始测量工作时，先将主机观察窗取下，用空白溶液测试观察自动点燃氩氢火焰

是否正常，牢记正常工作时火焰的形状，对日后判断工作是否正常极为有用；

5.更换空心阴极灯时，应将主、辅灯电流调到零处，然后将主机电源关闭，方可换灯，

避免灯受损；

6.工作完毕后，先将“炉温”设定回零，然后将“炉温”开关关闭；

7.工作完毕后，请用干净的软布擦拭仪器表面，及时清除工作台面上和室内开口容器

中存放的各种酸性溶液，防止酸气对仪器中元件的侵蚀；

8.如需停止数日不用仪器，则应清洗储液桶以及发生器盖上KBH4入口，防止KBH4

沉淀结晶堵塞，造成下次工作的困难。清理的方法可在KBH4储液桶内装入清水，重复按测量键几遍即可。

三．简单故障的排除

原子荧光光谱法测试样品中砷、锑、铋、汞的含量

1试剂

1. 1王水的配置（现用现配）盐酸（优级纯）∶硝酸（分析纯）∶水=3:1:4。

1. 2氯化亚锡溶液的配置氯化亚锡（分析纯，10%）+盐酸（V/V总=20%）+水

1. 3硼氢化钾溶液的配置氢氧化钾（分析纯，0.2%）+硼氢化钾（分析纯，2%）+水1. 4草酸（分析纯，1%）

1. 5高锰酸钾（分析纯，1%）

1. 6硫脲-抗坏血酸溶液的配置硫脲（分析纯，5%）+ 抗坏血酸（分析纯，5%）+水1. 7盐酸（载液，V/V总=5%）

2标准溶液的配制

2. 1砷标准溶液的配制

(1) 取砷标液（ρ(As)=50μg/ml）2ml于100ml的容量瓶中，用含硝酸为2%的水溶液定容，此溶液ρ(As)=1μg/ml（可贮存使用多次）；

(2) 分别移取0、0.5、1、2、3、5、6ml(1)中配制的溶液于25ml容量瓶中，用硫脲-抗坏血酸溶液定容，其中As元素含量分别为0、20、40、80、120、200、240ng/ml；

2. 1锑标准溶液的配制

(2) 取锑标液（ρ(Sb)=5μg/ml）5ml于100ml的容量瓶中，用含盐酸为10%的水溶液定容，此溶液ρ(Sb)=250ng/ml（可贮存使用多次）；

(2) 分别移取0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml(1)中配制的溶液于25ml容量瓶中，用硫脲-抗坏血酸溶液定容，其中Sb元素含量分别为0、2、4、8、12、16、20ng/ml；2. 3铋标准溶液的配制

(1) 取铋标液（ρ(Bi)=5μg/ml）2ml于100ml的容量瓶中，用含硝酸为5%的水溶液定容，此溶液ρ(Bi)=100ng/ml（可贮存使用多次）；

(2) 分别移取0、0.5、1、2、3、4、5ml(1)中配制的溶液于25ml容量瓶中，用含盐酸为20%的水溶液定容，其Bi元素含量分别为0、2、4

、8、12、16、20 ng/ml；

2. 4汞标准溶液的配制

(1) 取汞标液（ρ(Hg)=250ng/ml ）10ml 于100ml 的容量瓶中，加入40ml 王水用水定容，此溶液ρ(Hg)= 25ng/ml ；

(2) 分别移取0、0.5、1、2、4、6、10ml(1)中配制的溶液于50ml 容量瓶中，分别加入20ml 王水用水定容，其Hg 元素含量分别为0、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ng/ml ； 3分析步骤 3. 1溶样

准确称取试样0.2500g 于25ml 比色管中，加入10ml 王水摇匀并置于沸水水浴中。1小时后取出，冷却至室温，加入1ml1%的高锰酸钾溶液，摇匀后放置20min 。用1%的草酸溶液稀释至标线，摇匀后放置澄清，同时制作样品空白。 3. 2测试分析 3.2.1汞的测试

直接吸取上层清液用XGY-1011A 原子荧光光度计测量。（同时准备好氯化亚锡溶液）

3.2.2砷、锑、铋的测试

直接吸取上层清液用AFS-230E 测量铋元素。

准确移取5ml 清液于50ml 烧杯中，加入10ml 硫脲-抗坏血酸溶液，摇匀放置30min 后，转移至测试管中用AFS-230E 测量砷、锑元素。（同时准备好硼氢化钾溶液） 4分析结果计算 4. 1汞、铋的计算

ω（Hg/Bi ）/10-6

=m

V C 3

10-??（C ：从标准曲线上查得的浓度，单位ng/ml ）

（报出值：Hg ≥0.01μg/g ，Bi ≥0.3μg/g ；） 4. 2砷、锑的计算 ω（As/Sb ）/10-6

=

m

V 10153

????-分试V C （C ：从标准曲线上查得的浓度，单位ng/ml ）

（报出值：As ≥0.5μg/g ，Sb ≥0.3μg/g ；）

荧光分析法练习题82675

第十二章荧光分析法（药学） 一、A型题 1.若需测定生物试样中的微量氨基酸应选用下述哪种分析方法（）。 A、荧光光度法 B、磷光光度法 C、化学发光法 D、X荧光光谱法 E、原子荧光光谱法 答案：A 2.分子荧光分析比紫外-可见分光光度法选择性高的原因是（）。 A、分子荧光光谱为线状光谱，而分子吸收光谱为带状光谱 B、能发射荧光的物质比较少 C、荧光波长比相应的吸收波长稍长 D、荧光光度计有两个单色器，可以更好地消除组分间的相互干扰 E、分子荧光分析线性范围更宽 答案：B 3荧光量子效率是指（）。 A、荧光强度与吸收光强度之比 B、发射荧光的量子数与吸收激发光的量子数之比 C、发射荧光的分子数与物质的总分子数之比 D、激发态的分子数与基态的分子数之比 E、物质的总分子数与吸收激发光的分子数之比 答案：B 4.激发光波长和强度固定后，荧光强度与荧光波长的关系曲线称为（）。 A、吸收光谱 B、激发光谱

C、荧光光谱 D、工作曲线 E、标准工作曲线 答案：C 5.荧光波长固定后，荧光强度与激发光波长的关系曲线称为（）。 A、吸收光谱 B、激发光谱 C、荧光光谱 D、工作曲线 E、标准工作曲线 答案：B 6.一种物质能否发出荧光主要取决于（）。 A、分子结构 B、激发光的波长 C、温度 D、溶剂的极性 E、激发光的强度 答案：A 7.下列结构中荧光效率最高的物质是（）。 A、苯酚 B、苯 C、硝基苯 D、苯甲酸 E、碘苯 答案：A

8.下列因素会导致荧光效率下降的有（）。 A、激发光强度下降 B、溶剂极性变小 C、温度下降 D、溶剂中含有卤素离子 E、激发光强度增大 答案：D 9.为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）。 A、激发光足够强 B、吸光系数足够大 C、试液浓度足够稀 D、仪器灵敏度足够高 E、仪器选择性足够好 答案：C 10.在测定物质的荧光强度时，荧光标准溶液的作用是（）。 A、用做调整仪器的零点 B、用做参比溶液 C、用做定量标准 D、用做荧光测定的标度 E、以上都不是 答案：D 11.荧光分光光度计与分光光度计的主要区别在于（）。 A、光源 B、光路 C、单色器 D、检测器

微生物检验实验室分枝杆菌属检验标准操作规程

微生物检验实验室分枝杆菌属检验标准操作规程 1. 概述 分枝杆菌属是一类细长的、具有分枝生长趋势的需氧杆菌，因具有耐受或抵抗酸和乙醇脱色的特点，又称为耐酸或抗酸菌。分枝杆菌属至今已发现80多个种，除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌外，其他分枝杆菌，如堪萨斯分枝杆菌、耻垢分枝杆菌等，统称为非结核分枝杆菌。 2. 标本类型 痰液、体液（包括脑脊液、腹水、胸水）组织，粪便等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色：菌体细长，或稍弯曲，两端钝圆，大小为（0.2~0.5um） ×（1~5um）。革兰染色不易着色，抗酸染色呈红色。以痰液直接涂片，结核分枝杆菌多为单个存在，有时呈V、Y、人字形排列，痰菌量多时可排列为束状或集聚成团。荧光染料金胺“O”染色，在荧光显微镜下观察呈金黄色荧光。 3.2 培养特性：结核分枝杆菌生长缓慢，繁殖一代约需18h，因此在罗氏固 体培养基上需要培养2~6星期方可见到菌落。菌落多为粗糙型，不透明，乳白为米黄色，呈干燥颗粒状，形似菜花。液体培养基中结核分枝杆菌生长较快，可形成表面菌膜或沉

于管底。 3.3 生化反应：不发酵糖类，耐热触酶、耐热磷酸酶和吐温80水解试验均 阴性，尿素酶、中性红、结核分枝杆菌烟酸、烟酰胺酶和硝酸盐还原试验均阳性。 3.4鉴别要点： 3.4.1 本菌特征：菌体细长，抗酸染色呈红色；生长缓慢，菌落乳白或米黄 色，呈干燥颗粒状，形似菜花状；不发酵糖类，尿素酶、中性红试验阳性。 3.4.2 与牛分枝杆菌的鉴别：结核分枝杆菌菌体细长，烟酸、烟酰胺酶、硝酸盐还原试验均为阳性；牛分枝杆菌菌体较短、较粗，烟酸、烟酰胺酶、硝酸盐还原试验均为阴性。 3.5 操作步骤 3.5.1 中性培养基 3.5.1.1 标本的处理 痰液：挑取约5ml痰液至已标记的50ml离心试管中，加等量的2%N-乙酰 半胱胺-氢氧化钠前处理液（去污染）；漩涡振荡20秒；静置15分钟，勿超过20分钟；加无菌PBS（pH6.8）至约50ml,盖紧盖子；离心3000r/min，15分钟；倒掉上清液；添加1-3mlPBS(pH6.8)以中和pH至6.8.

AFS-230E原子荧光光度计操作规程

AFS-230E双道原子荧光光度计 操作维护规程 编制：日期： 审核：日期： 批准：日期：

1.技术参数： 1.1精密度RSD<1.0% 1.2检出限D.L(?g/L) :As Se Pb Bi Sb Te Sn <0.01、Hg、Cd <0.001、Zn<1.0、Ge<0.05、Au<3.0 1.3线性范围：大于三个数量级 1.4工作电源：220V±10% 50Hz 1.5主机功耗：≤200W 1.6工作温度：5~35℃ 1.7工作湿度：≤90%重量：约60kg 1.8外型尺寸：1000*330*358mm 1.9双泵断续流动氢化物发生反应系统 1.10单点配置工作曲线和自动稀释高含量样品功能 2. 方法来源与使用范围： 2.1方法来源：仪器使用说明书。 2.2使用范围：食品厂、药品厂、化妆品厂、饲料厂、高校、研究所等单位对十二种重金属含量的分析。 3.操作步骤 3.1打开Ar瓶使次级压力0.2～0.3MPa，一般在0.25 MPa。 3.2开启计算机、打印机。 3.3安装所需元素灯，注意灯的插口，更换元素灯时一定确保仪器不通电的情况下进行。

3.4打开主机、自动进样器，开启自动进样器之前确认自动进样臂位于下端。 调节原子化器高度Hg灯调节至10mm，其他元素灯调节至8mm。用调光器调节灯位置，使光斑位于调光器的中心位置。检查水封中是否有水，针对有水封仪器。 双击AFS—2100/230E/3100操作软件，进入操作系统。 3.5在“文件（F）”菜单中依次进行“气路自检”、“断续流动和自动进样器自检”、“空芯阴极灯和电路自检”。 3.6在“文件（F）”中选择“生成新数据库”在“文件名”栏中输入新数据库的名字，单击“保存”按钮，即可生成一新数据库，或“连接数据库”打开所需文件名称。 3.7用鼠标左键单击“条件设置”钮，进入条件设置对话框，在其中可以对“仪器条件”、“测量条件”、“断续流动程序”、“自动进样器参数”和“A道标准样品参数”、“B道标准样品参数”等内容进行相关参数的设定。详见仪器操作软件说明书。 3.8用鼠标左键单击“运行”“点火”。 3.9用鼠标左键单击“运行”“样品测试”，用载流进行测试，通过调节“负高压”、“灯电流”使空白荧光强度值在400以下。 3.10在工具栏中点击“参数”按钮在“样品形态”和“样品单位”中选择适当的参数，在“质量/体积比或体积/体积比”中输入定容前和定容后的样品溶液参数。然后输入样品标识，输入样品号，按行号输入起始行和终

荧光分析法实验报告

荧光分光光度法 一、 实验目的 1、学习荧光分光光度法的基本原理； 2、学习荧光光谱仪的结构和操作方法； 3、学习激发光谱、发射光谱曲线的绘制方法。 二、 实验原理 荧光分光光度法（fluorescence spectroscopy, FS ）通常又叫荧光分析法，具有灵敏度高、选择性强、所需样品量少等特点，已成为一种重要的痕量分析技术。荧光（fluorescence ）是分子吸收了较短波长的光（通常是紫外光和可见光），在很短的时间内发射出比照射光波长较长的光。由此可见，荧光是一种光致发光。 任何荧光物质都有两个特征光谱，即激发光谱（excitation spectrum ）和发射光谱（emission spectrum ）或称荧光光谱（fluorescence spectrum ）。激发光谱表示不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。绘制激发光谱时，将发射单色器固定在某一波长，通过激发单色器扫描，以不同波长的入射光激发荧光物质，记录荧光强度对激发波长的关系曲线，即为激发光谱，其形状与吸收光谱极为相似。荧光光谱表示在所发射的荧光中各种波长的相对强度。绘制荧光光谱时，使激发光的波长和强度保持不变，通过发射单色器扫描以检测各种波长下相应的荧光强度，记录荧光强度对发射波长的关系曲线，即为荧光光谱。激发光谱和荧光光谱可用于鉴别荧光物质，而且是选择测定波长的依据。 荧光强度（F ）是表征荧光发射的相对强弱的物理量。对于某一荧光物质的稀溶液，在一定波长和一定强度的入射光照射下，当液层的厚度不变时，所发生的荧光强度和该溶液的浓度成正比，即 该式即荧光分光光度法定量分析的依据。使用时要注意该关系式只适用于稀溶液。 三、 仪器与试剂 F-4500荧光光谱仪；比色管（10mL ）；牛血清白蛋白（BSA ） 四、 实验内容 1、 开机准备：接通电源，启动电脑。打开光谱仪主机电源，预热15分钟。 2、 运行FL solution 软件，设定检测方法和测量参数： EX （激发波长）：280nm EM （发射波长）：340nm EX 扫描范围：210nm ～330nm EM 扫描范围：290nm ～450nm EX 缝宽：2.5nm ，EM 缝宽：2.5nm 扫描速度：240nm/min PMT 电压：700V 3、 激发光谱和发射光谱的绘制： 先固定激发波长为280nm ，在290～450nm 测定荧光强度，获得溶液的发射光谱，在343nm 附近为最大发射波长λem ；再固定发射波长为λem ，测定激发波长为200nm ～λem 时的荧光强度，获得溶液的激发光谱，在280nm 附近为最大激发波长λex 。 4、 退出FL solution 软件，关闭光谱仪主机电源，关闭计算机。 Kc F

万能工具显微镜操作规程

抚顺市计量测试所作业指导书 抚顺市计量测试技术研究所 K03ZY-CZ(A)-005万能工具显微镜操作规程 2009-8-1发布 2009-8-1实施抚顺市计量测试所/抚顺市计量测试研究所发布

本管理办法经抚顺市计量测试所/抚顺市计量测试技术研究所技术负责人于2009年8月1日批准，自2009年8月1日起施行。 起草人：白凤民 批准人：荆兆东

万能工具显微镜操作规程 一、概述 万能工具显微镜是利用显微系统进行瞄准、家位或读数的几何量测量工具。主要由基座、纵向滑板、横向滑板、主显微镜、立柱、顶针座、纵横读数显微镜、照明装置、工作台和分度台、分度头等附件组成。万能工具显微镜由辽宁省计量研究院检定，检定周期为一年。 二、使用环境要求： 温度（20±2）℃,温度波动不大于1℃/h,相对湿度不大于60%。 万能工具显微镜固定的工作台上,附近应无强磁场干扰,无强气流及腐蚀性气体存在。 三、操作程序 安全注意事项 由于万能工具显微镜精度高，仪器本身以有很多光学零件，所以要求环境清洁，没有振动，严格控制温度、湿度；另外仪器金属部分很容易生锈，光学零件容易发霉、生雾，光学零件表面的镀层容易划伤或脱落，所以，平时必须加强仪器的维护保养。 操作步骤 3.2.1使用前准备工作 3.2.1.1旋入物镜。 3.2.1.2插入目镜。 3.2.1.3接通电源,将变压器箱上电源插头和输出插头分别插在电源和仪器上,开启开关,仪器上各照明灯按功率分别插在相应的插座上。 3.2.1.4调节灯丝,用灯泡定中心器调整灯丝轴向与中心位置。 3.2.1.5调节孔径光兰。按所测圆柱体或螺纹直径来开启光兰直径。 3.2.1.6调焦。测量圆柱体或螺纹零件时，欲正确调焦可用定焦杆。 3.2.1.7按具体情况，装置所需要的附件。 3.2.2测量 3.2.2.1长度测量 在工作台上装压板(或带压板座),放上测件，使其纵、横方向与纵、横向滑

Nikon 80i荧光显微镜使用说明

Nikon 80i荧光显微镜使用说明 △荧光显微镜属贵重仪器，未经保管人员同意请勿擅自使用。 △严格按照操作步骤进行，在使用过程中如发现问题应及时向保管人员反映。 △因违反操作规程，而导致仪器损坏，根据本中心《损坏仪器赔偿制度》进行赔偿。 △使用者在使用完毕后应进行登记. 维护和保养 本仪器应定期进行维护和保养。 ●防止镜头霉变，定期除湿。 ●为防止损坏荧光灯泡，荧光光源关闭后，15分钟内不得再重新开启。 ●荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，如发现荧光强度明显降低应更换荧光灯泡。 荧光显微镜操作步骤 △显微镜系精密仪器，务请不要碰击，要仔细耐心使用。 △荧光光源关闭后，15分钟内不得再开启。 △荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，因此每次使用时请尽量缩短时间。 1.插上电源插座，打开主机电源开关。 2. 将待检标本置于载物台上。 3. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。 4. 调节光圈及灯光强度至合适位置。 5. 调节粗调和微调使标本至最清晰。 6. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。 7.保存图象至电脑中。 8. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。 ●荧光光源操作 1.插上荧光光源电源插座，打开荧光光源电源开关。 2. 打开光栅。 3. 根据使用荧光素的不同选择不同的荧光滤光片。 4. 将待检标本置于载物台上。 5. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。 6. 调节粗调和微调使标本至最清晰。 7. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。 8. 保存图象至电脑中。 9. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。 10. 登记使用情况。 Nikon 80i主要技术参数：放大倍数40-1000，CFI60无限远光学系统，内置滤色镜，数字成像头。明场、暗场、简单偏光、荧光/明场、荧光/暗场。波长：330-380，450-490，510-560。主电压90~250V。频率：50~60HZ。功率消耗：最大160W。周围环境温度：10~36℃。相对湿度：0~80%。污染级别：2。 应用范围：正置明场、相差及荧光，主要用于细胞及细菌等的观察及荧光摄影。

原子荧光操作规程

版本：第A版（第0次修订） 文件编号： 控制状态：■受控□非受控 使用人： 发放编号： 编制：质量技术部 审核：会审 批准： 批准日期：2014年 10月20日实施日期：2014年10月20日Xxxxxxx 颁发

第1页共3页 AFS-2100原子荧光光度计操作规程第A版第0次修订1. 适用范围 1.1 设备名称：原子荧光光度计 1.2 型号规格：AFS-2100 1.3 生产产家：北京海光仪器公司 1.4 统一编号：KCA-39 2. 操作规程 2.1打开Ar瓶使次级压力0.2～0.3MPa，一般在0.25 MPa。 2.2开启计算机、打印机。 2.3安装所需元素灯，注意灯的插口，更换元素灯时一定确保仪器不通电的情况下进行。 2.4打开主机、自动进样器，开启自动进样器之前确认自动进样臂位于下端。 2.5调节原子化器高度用调光器调节灯位置，使光斑位于调光器的中心位置。 2.6双击AFS—2100/230E/3100操作软件，进入操作系统。 2.7在“文件（F）”菜单中依次进行“气路自检”、“断续流动和自动进样器自检”、“空芯阴极灯和电路自检”。 2.8在“文件（F）”中选择“生成新数据库”在“文件名”栏中输入新数据库的名字，单击“保存”按钮，即可生成一新数据库，或“连接数据库”打开所需文件名称。 2.9用鼠标左键单击钮，进入条件设置对话框，在其中可以对“仪器条件”、“测量条件”、“断续流动程序”、“自动进样器参数”和“A道标准样品参数”、“B道标准样品参数”等内容进行相关参数的设定。详见仪器操作软件说明书。 2.10用鼠标左键单击“运行”“点火”。 2.11用鼠标左键单击“运行”“样品测试”，用载流进行测试，通过调节“负高压”、“灯电流”使空白荧光强度值在200左右。 2.12在工具栏中点击“参数”按钮在“样品形态”和“样品单位”中选择适当的参数，在“质量/体积比或体积/体积比”中输入定容前和定容后的样品溶液参数。然后输入样品标识，输入样品号，按行号输入起始行和终止行号。详见仪器操作软件说明书。 2.13用鼠标点击工具栏中的按钮，仪器对标准空白溶液开始进行测量。用鼠标左键单击 按钮，在弹出对话框中输入文件名，即可进行标准系列溶液的测定。如需重测其中某一标准点单击点击“重测曲线测量”输入相应序号点击确定。 2.14用鼠标左键单击“运行”“样品测试”，用载流进行测试，如荧光强度波动不大单击“停止”。 2.15用鼠标点击工具栏中的按钮选择“样品空白”选项，测量样品空白。 2.16点击“样品测量”按钮或选择“运行”菜单中“样品测量”选项，在弹出对话框中输入文件名，仪器会连续对未知样品进行测量。测量完毕如需增加样品数量按第“13”步进行更改。如需对所测样品

Jo型万能测长仪操作规程.doc

Jo5型万能测长仪操作规程 1、根据被测量对象和测量方法，装上所需的附件。 2、接通电源，转动测微目镜的调节环以调节视度。 3、测帽的调整，在测头与尾管的测帽之间，垫以1～3毫米的量块，使它们互相接触，调节尾管上的两个调节螺钉，找转折点。 4、在开始测量前必须对读数显微镜的示值进行一次对正，然后用螺钉将目镜固定。 5、将被测件固定在工作台上，利用万能工作台上各个可能的运动条件来寻找转折点，以确定万能工作台的正确方位。 6、测量从读数显微镜中读出示值。只有转动微调手柄，使毫米刻线置于双刻线正中时，才能读数。 7、使用完毕，关闭开关，取下电源插头。 8、用汽油清洗工作台、测帽及其它附件的表面，并涂上防锈油或无酸凡士林，放入附件箱或干燥器中。仪器本体用仪器罩遮好。 9、严禁用手触摸光学零件表面。

KCB-33.3齿轮式输油泵操作规程 一.系列齿轮油泵的润滑是靠本身排送的液体进行的，（电动机的润滑脂更换，视使用情况而定）。所以排送的液体必须清洁，若夹带有细小沙尘或金属粉末，对本泵的使用寿命有严重的影响，使用时注意此点。必要时在吸入管端装置金属滤油网，防止杂质吸入。滤油网以60-100目时为宜，滤油网的有效过滤面积应大于吸油管截面积的两倍。 二.泵的安装高度，应保证不超过泵所允许的吸上高度，安装管路应有管架、油泵不允许承受管路负荷。 三.建议在吸、排油管路上分别安装真空表和压力表，以便监视泵的工作状态。 四.油泵未开动前的准备 1.在油泵未开动之前应对泵各部进行仔细检查。 A.检查油泵的各螺母及底座上各螺栓是否紧固。 B.检查油泵内的主动齿轮和被动齿轮的转动是否灵活。 2．把吸油接管和排油接管的阀门打开。 3.检查电动机的电源是否接对。油泵旋向是否与指示箭头方向相

OLYMPUSIX51倒置显微镜操作规程-厦门大学医学院中心试验室

倒置荧光显微镜 操作规程 Olympus IX5 厦门大学医学院中心实验室 黄静茹 2017年3月

说明： ①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架； ⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮； ⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；?聚光镜高度调节钮；?聚光镜对中旋钮；?视场光阑调节杆；?孔径光阑调节杆；?聚光镜转盘；?荧光光闸（SHUTTER）；?荧光激发块转盘；?荧光减光阀

正式操作仪器之前请注意如下事项： 首先要在仪器预约保护时间内及时使用本人注册的校园卡刷卡开始实验。 1.查看仪器使用记录本，如之前使用者有记录仪器异常情况，请不要开机使用。 2.查看仪器整体有无异常，周围环境是否正常，需要时要开启室内空调，检查 并清空除湿机水箱。 3.查看仪器使用记录本及刷卡机“日历”，如之前使用者刚刚关机，请等候30 分钟以上再开机使用。 一、开机 1、打开透射光源（白光）主开关①； 2、打开荧光光源（汞灯高压电源）②； 3、打开电脑，进入cellSens Standard工作站； 备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。 二、明场观察（Bright Field BF） 1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动聚光镜转盘?到“BF”位置，直到听到咔嗒声； 4、将光路选择杆⑤推进去（选择目镜观察光路）； 5、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮③至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察,根据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩； 三、相衬观察（Phase contrast PH) 1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜； 4、转动聚光镜转盘?，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）； 5、将光路选择杆⑤推进去（选择目镜观察光路）； 6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧进行聚焦观察,根

原子荧光光度计操作规程

原子荧光光度计操作规程 1、工作原理 原子蒸汽受具有特征波长的光源照射后，其中一些自由原子被激发跃迁到较高能态，然后去活化回到某一较低能态而发射出特征光谱的物理现象。各种元素都有其特定的原子荧光光谱，根据原子荧光强度的高低可测得试样中待测元素含量。 2、性能指标 （1）检测元素：砷As、锑Sb、铋Bi、汞Hg、硒Se、碲Te、锡Sn、锗Ge、铅Pb、锌Zn、镉Cd等十一种元素。本实验室用于测量砷As、锑Sb、铋Bi、汞Hg。 （2）检出限 砷As、锑Sb、铋Bi小于0.01ng/mL;汞Hg小于0.001ng/mL。 （3）重复性 砷As、锑Sb、铋Bi、汞Hg小于0.7%。 （4）相关系数 砷As、锑Sb、铋Bi、汞Hg大于0.999。 （5）道间干扰 在测量两道干扰时，使其模拟信号荧光强度比值大于100倍时，道间干扰为±1%。 （6）仪器稳定性 整机通电30分钟静态模拟信号基线稳定性小于1%。 3、工作条件 （1）环境温度：15~35℃。 （2）室内相对湿度不大于80。 （3）仪器应置于稳定的工作台，不应该有强震动源。 （4）周围无强电磁干扰及有害气体。 （5）仪器使用电源：电压220V±10%，频率50Hz±1Hz单相交流电，最好配制交流稳压气，功率不大于500，室内应有地线并保证仪器良好接地。

4、操作步骤 （1）打开仪器灯室，在A、B道上分别插上或检查元素灯。 （2）打开氩气，调节减压表次级压力为0.3Mpa。 （3）打开仪器前门，检查水封中是否有水。 （4）依次打开计算机、仪器主机电源开光。 （5）检查元素灯是否点亮，新换元素灯需要重新调光。 （6）双击软件图标，进入操作软件。 （7）在自检测窗口中点击“检测”按钮，对仪器进行自检。 （8）点击元素表，自动识别元素灯，选择自动手动进样方式。 （9）点击点火按钮，点亮炉丝。 （10）点击仪器条件，依次设置仪器条件、测量条件（如要改变原子化器高度，需要手动调节）。 （11）点击标准曲线，输入标准曲线各点浓度值和位置号。 （12）点击样品参数，设置被测样参数。 （13）点击测量窗口，仪器运行预热一小时。 （14）将标准、样品、载流和还原剂等准备好，压上蠕动泵压块，进行测量，处理数据打印报告。 （15）测量结束后用纯水清洗进样系统20分钟。 （16）退出软件，关闭仪器电源和计算机电源，关闭氩气。 （17）打开蠕动泵压块，把各种试剂移开，将仪器及试验台清理干净。 5、期间核查 （1）稳定性 开机，不点火，点亮砷、锑灯，灯电流调至（30~90）mA，负高压置于300V 左右。预热30min，调整静态模拟信号的荧光强度初始值为500左右（如需可在原子化器上部放置一个荧光强度调节器），进行模拟记录。连续测量30min，计算仪器的漂移（最大漂移量除以初始值）和噪声（最大的峰-峰值除以初始值）。 （2）线性、检出限、重复性 将仪器各参数调至最佳工作状态，用硼氢化钠（或硼氢化钾）作还原剂分别对0.0、1.0、5.0、10.0ng/mL砷锑混合标准溶液进行3次重复测量，记录荧光强

荧光光谱法

荧光分析法测定维生素B2 一、实验目的 1.学习与掌握荧光光度分析法测定维生素B2的基本原理与方法; 2.熟悉荧光分光光度计的结构及使用方法; 3、学习掌握固体及液体试样的荧光测试方法。 二、实验原理 当用一种波长的光照射某种物质时,这种物质会在极短的时间内,发射出一种比照射光波长较长的光,这种发射出来的光就叫做荧光。当照射光停止照射时,荧光也随之很快地消失。利用某些物质被紫外光照射后所产生的、能够反映出该物质特性的荧光,以进行该物质的定性分析与定量分析,称为荧光分析。 实验证明,荧光通常发生于具有刚性平面的л-电子共轭体系分子中。随着л-电子共轭度与分子平面度的增大,荧光也就越容易产生。因此几乎所有对分析化学有用的荧光体系都含有一个以上的芳香基团,芳环数越多,荧光愈强。能发荧光的纯无机物很少,通常就是利用有机配位体与金属离子形成荧光络合物进行无机离子的分析。 图1.荧光分光光度计的结构原理图

荧光分光光度计工作原理(图1)可简述为:光源发出的光束经激发单色器色散,提取所需波长单色光照射于样品上,由样品发出的荧光经发射单色器色散后照射于检测器上,检测器把荧光强度信号转变为电信号并经放大器放大后,由信号显示系统显示或者记录。 荧光光谱包括激发光谱与发射光谱两种。激发光谱就是就是指发射单色器波长固定,而激发单色器进行波长扫描所得到的荧光强度随激发光波长变化的曲线。荧光发射光谱就是指激发单色器波长固定,发射单色器进行波长扫描所得到的荧光强度随发射光波长变化的曲线。一般所说的荧光光谱实际上仅指荧光发射光谱。这一光谱为分析指出了最佳的发射波长。 荧光定性定量分析与紫外可见吸收光谱法相似。定性时,就是将实验测得样品的荧光激发光谱与荧光发射光谱与标准荧光光谱图进行比较来鉴定样品成分,一般荧光定性的依据就是荧光光谱峰的个数、位置、相对强度及轮廓。 定量分析时,一般以激发光谱最大峰值波长为激发光波长,以荧光发射光谱最大峰值波长为发射波长,测量样品的荧光强度。对同一物质而言,荧光强度F 与该物质的浓度c 有以下的关系: F = 2、303Фf I0 a b c ⑴ Фf－荧光过程的量子效率; a－荧光分子的吸收系数; I0－入射光强度; b－试液的吸收光程。 在I0 与b 不变时,2、303Фf I0 a b为常数,则⑴式可以表示为 F＝Kc ⑵ ⑵即可作为荧光定量检测的依据。 图2 VB2的结构式

测量仪器操作规程教程文件

测量仪器操作规程

测量仪器操作规程 2016年3月

目录 水准仪操作规程 (2) 经纬仪操作规程 (4) 全站仪操作规程 (8) GPS操作规程 (11)

水准仪操作规程 1.目的和适用范围 为了正确使用测量仪器,确保仪器的完好率和利用率,适用于本项目所有水准仪的操作。 2.引用标准：使用说明书 3.进行水准标高测量时，应按以下操作规程使用： 3.1整平 先将三脚架两只铁脚踩入土中，观测者操纵三脚架的一条腿前、后、左、右移动，直到圆水准气泡基本居中时，固定这条腿不动，然后调节三个脚螺旋使气泡完全居中（仪器内设自动安平）。 3.2瞄准 先转动目镜对光螺旋，使十字丝的成像清晰，然后放松固定螺旋，用望远镜筒外的缺口和准星瞄准水准尺，粗略地进行物镜对光，当在望远镜内看到水准尺像时，即将固定螺旋固定，转动微动螺旋，使十字丝纵丝靠近水准尺的一侧。 3.3读数 读数时要按由小到大的方向，应先用十字丝横丝估读出毫米数，然后再读米、分米、厘米数。 4.进行水准标高测量前注意事项： 4.1检查水准仪及配套工具是否带齐，包括测量尺、脚架、水准点标高资料等。 4.2架设时，应先把脚架螺旋旋紧，在地面上踩紧脚架。对水准仪进行精平调整，对后视水准点后进行标高测量。 4.3在标高测量时，须转点搬移过程中，应检查好仪器的螺旋是否拧紧，防止掉损仪器。 5.水准仪自检规程 5.1圆水准器的检验和校正： 5.1.1检验方法：

①转动脚螺旋使圆水准气泡居中； ②将仪器旋转180度，如气泡居中，则正常，否则需校正。 5.1.2校正方法： ①首先整平仪器，使圆水准气泡居中，旋转180度，调整脚螺 旋，使气泡退回到偏离量的一半； ②松开圆水准仪的固定螺旋，用拔针，拔动圆水准器的校正螺 丝，使气泡居中； 重复第②步直到，仪器转到任何位置，圆水准气液始终居中。 5.2I角的检验与校正 5.2.1检验方法： ①在平坦地面上选取相距100m的高差为ΔHA、ΔHB两点； ②将水准仪置于A、B两点之间,在距A或B点,1m处测其高差Δ H′ ③若ΔH=ΔH′则正常，否则需校正。 5.2.2校正方法： ①将需校正的仪器整平置于A、B之间的A 端或B 端，在A 尺 上读出a1; ②然后读出B尺，其读数为a1+ΔH′，用拔针拔动校正螺旋使 a1+ΔH′=a1+ΔH 重复以上步骤，使仪器放任一位置，a1+ΔH′=a1+ΔH。 5.3十字丝的检验与校正 5.3.1检验方法： ①整平仪器，将横丝对准一固定点；

参考答案_《检验仪器学》作业一

《检验仪器学》作业 第二章 显微镜技术和显微镜 （1）简述光学显微镜的一般操作规程。 （2）荧光显微镜使用过程中的注意事项。 第四章 光谱分析技术机相关仪器 （1）试计算说明单色性不纯对分光光度法准确性的影响？ （2）某溶液用2cm 吸收池测量时，透射率为60%，其他条件不变，若改用0.5cm 和3.5cm 吸收池对此溶液进行测量，透射率和吸光度值分别为多少？（88%，0.055；40.8%，0.389） （3）在光度分析中，某溶液浓度为C 0，以1cm 吸收池测得透光度为T 0，若溶液浓度增加1倍，则透光度是多少？（T 02 ） （4）某溶液测得其吸光度为A 0，稀释后测得其吸光度为A 1，已知A 0－A 1＝0.477，稀释后的透射比T 1应为多少？（T 1=3T 0） （5）浓度为0.51mg/ml 的Cu 2+溶液，用环己酮草酰二腙显色后，于波长600nm 处用2cm 吸收池测量，测得透射率为50.5%，求摩尔吸光系数ε和比吸收系数a 。 （a=0.29L/(g*cm)；ε=18.64L/(mol*cm)） （6）将蛋白质溶液配制成下列标准浓度的溶液，加碱性硫酸铜显色后，在540nm 波长处测得透射率如下： 根据以上数据绘制标准曲线并使用最小二乘法给出标准曲线的表达式。另取未知蛋白质溶液，经同样操作测得吸光度值为0.306，求该蛋白质溶液的浓度。 21()010210102 [10] lg bc k k I I A k bc I I --+=++

（0.49g/L） （7）某种酶和一磷酸腺苷的混合物样品，在吸收峰处两组分相互干扰。如在波长280nm处测定时，总吸光度为0.460；在260nm处测定时，总吸光度为0.580。试计算各成分的浓度。吸收池厚度为1cm，摩尔吸光系数为： 酶：ε280=2.96ⅹ104/L mol cm 、ε260=1.52ⅹ104/L mol cm ，一磷酸腺苷：ε280=2.40ⅹ103/L mol cm 。 、ε260=1.50ⅹ104/L mol cm （酶：1.35*10-5mol/L；一磷酸腺苷：2.52*10-5mol/L） （8）下图为a、b两种物质的吸收光谱，如要使用等吸收双波长法分别测定两物质的含量，试作图选择测定波长和参比波长，并给出相应说明。 （9）用普通光度法测定铜，在相同条件下测得1.00×10-2 mol·L-1标准铜溶液和含铜试液的吸光度分别为0.699和1.00，如光度计透光度读数的相对误差为0.5％。测试液浓度测定的相对误差为多少？（-0.217%）

北京普析原子荧光光谱仪操作规程

1．目的 通过实施本规程，规范化验员的操作，保证原子荧光光谱仪测定结果的准确性，使原料采购、生产控制、产品销售正常运行，延长仪器的使用寿命。 2 适用范围 2.1 本规程规定了质检中心原子荧光光谱仪测定操作的具体要求及注意事项。 2.2 本规程适用于质检中心原子荧光光谱仪测定的操作与维护。 3 职责 3.1 质检中心班长负责全面管理及监督。 3.2 质检中心化验员负责日常化验操作。 4 工作原理 原子荧光光度计利用惰性气体氩气作载气，将气态氢化物和过量氢气与载气混合后，倒入加热的原子化装置，氢气和氩气在特制火焰装置中燃烧加热，氢化物受热以后迅速分解，被测元素离解为基态原子蒸汽，其基态原子的量比单纯加热元素生成的基态原子高几个数量级。 5 实验步骤

1．打开电脑，进入WINDOWS 桌面。 2．打开氩气瓶减压阀，分压表调至0.25MPa 左右。 3．换上需要做元素的元素灯，打开仪器主机电源，双击桌面上图标 4．检查元素灯光斑是否对正，光斑对准调光器中间横线和竖线的交叉点，如果仪器没有搬动，没有更换元素灯，此步骤可以省略。 5．做冷汞温度设成0度；其他元素设成200度， 点击 和。 6． 选择手动进样,让仪器自动运行测量，在 ，输入曲线各标准点的浓度，若用仪器自动稀释曲线，在前打上对勾。本液浓度输入配置的单点标液浓度。 7．压好泵管，放好还原剂和盐酸瓶.把各自的管路放到对应的瓶中，清洗三次。 8．，仪器预热30分钟，点击仪器依次测量载流，标准空 白，标准曲线，样品空白，样品。 9．，需要打印曲线，，数据打印。如果

想导出测量数据，点击 10．仪器清洗，将进样针和还原剂毛细管放入去离子水中，输入清洗次数点“开始”清洗三次以上。 11．关氩气，退出仪器工作站，松开泵的压块，关仪器主机电源。 12．把仪器内部的溶液全部取出，仪器内放些干燥剂。 6 操作注意事项 此仪器测量单位是ug/l，对试剂要求很严格，尽量全用优级纯试剂。容量瓶要严格泡洗。

荧光分析法实验(有思考题答案)

实验二.氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量五．数据处理 1．用实验获得的数据绘制两种氨基酸的激发、发射、同步光谱图（如图3、4）。2．从激发和发射光谱中找出最大激发波长和最大发射波长值，以及它们相对应的峰高。在它们的同步荧光光谱中也确定最大波长和对应的峰高。 苯丙氨酸的荧光光谱图 苯丙氨酸扫描激发波长在214nm和285m两处出现最高峰，本实验选择214nm为最大激发波长。此外，激发波长曲线在280－300nm处出现了一个十分完美的峰，此峰为倍频峰，非激发波长峰,我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证，如图，我们通过同步扫描荧光光谱技术获得的激发波长也在215nm，与之前基本吻合。 色氨酸的荧光光谱图

色氨酸扫描激发波长在217nm处有一个最大峰，所以激发波长为217，发射波长为361。发射波长曲线在450－460nm处出现了一个十分完美的峰（在这张图上没显示出来），此峰为倍频峰，非激发波长峰,我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证。 六．讨论与思考 1．对待测溶液进行预扫描的有何作用？ 从预扫描得到激发和发射波长的初步结果，根据我们得到的初步结果对仪器进行设置，然后对两种氨基酸溶液测量它们的荧光激发、发射和同步荧光光谱。 2．观察激发波长的整数倍处荧光发射光谱在有何特点？该波长是否适合于进行定量分析？ 激发波长的整数倍处荧光发射光谱会出现以很强的峰，是倍频峰。不适合定量分析。 3．同步荧光技术有哪些优点？比较激发、发射和同步荧光光谱中的峰值及对应波长，比较他们的不同，并解释原因。 同步荧光法能简化光谱，减少光谱重叠和散射的影响，提高对荧光性质相近化合物同时测定的选择性和灵敏度。同步荧光法相对于激发光谱和发射光谱， 得到的峰比较窄，更明显。同步荧光光谱不是荧光物质的激发光谱和发射光谱

布氏硬度计操作规程

济南汇九精密锻造有限公司 HB-3000B布氏硬度计操作规程 1、试验前准备： ①根据被测材料的硬度和试样厚度，选择压头直径、试验力和试验力保持时间。具体要求见下表：（表1） ②试验条件：试验室温度10-35℃，相对湿度35-85%，无灰尘、震动。 ③试样要求：试样表面应光滑平整、无氧化皮、电镀层及加工硬化层和其他污物，其表面粗糙度R a不大于3.2微米;厚度不小于压痕深度的10倍，如有关技术文件另有规定时，则厚度可为不小于压痕厚度的8倍。试验时试样温度应保持常温，特殊情况下，黑色金属的温度不得超过100℃。

④安装压头和试台：根据表1选择压头，并把压头擦干净紧靠主轴端部装入主轴套内，用固定螺钉固定好压头，然后把试台安装在丝杠上。 ⑤选择试验力：根据表1选择试验力，然后按照砝码上标明的试验力的大小进行加减达到要求就可以了。注意砝码吊架形成的试验力为187.5kgf. ⑥选择试验力保持时间：根据表1选择试验力保持时间，然后按以下要求进行调整：打开电源，指示灯亮，按设置键进入时间设置程序，按左侧箭头键向上滚动设置时间的十位数，按右侧箭头键向上滚动设置时间的个位数，再次按设置键确认设定时间。 2、试验：打开电源开关，此时显示屏显示待机状态。将试样平稳地放置在工作台，顺时针转动手轮使工件上升，当试样与压头接触并产生一定压力，手轮打滑时停止转动手轮。然后按开始键，电机转动进行试验，显示屏上依次显示加载（箭头向下）----试验力保持时间（数字）------卸载（箭头向上）。待电机停止转动时，反向转动手轮，使工件与压头脱开，杠杆回复到起始位置，一次试验结束。 3、取下试样，使用读数显微镜测试压痕的直径。 ①将读数显微镜置于试样上，在长镜筒的缺口处用自然光或灯光照明，在视场中应同时看清分划板上的字和刻线，如果感觉压痕不清晰，可转动目镜调节套调至清晰。 ②测量时，转动读数鼓轮，在读数鼓轮的圆周上刻有0－90的数字和100格线条，每一小格为0.01mm,转动鼓轮一圈为1mm。 ③测量时先将一刻线的内侧与压痕直径一边相切，记录测得的数据，然后再转动鼓轮，移动刻线到压痕的直径的另一边，用刻线的内侧与压痕直径相切，再记录测得的数据，则压痕直径为两次读数之差。将读数显微镜旋转90度，在压痕垂直方向按上述方法测量，得到压痕的另一直径，两次压痕的平均值即为直径的长度。

病毒的分离培养标准操作规程

病毒的分离培养标准操作规程 1．目的：规范病毒分离及鉴定培养操作流程，保证试验结果的重复性和稳定性。 2．术语：EID50/0.1ml，ELD50/0.1ml，TCID50/0.1ml，CPE 3．操作程序与方法： 3.1 采样：对于病死或剖杀动物，采集病毒主要聚集组织部位，一般为淋巴结、脾脏、肺脏、血液等；对于活体动物，可用无菌棉拭子采集含病毒量最多部位（口腔、鼻腔、生殖道、肛门等）的分泌液。采集样品如不能立即处理，应冻存与-20℃备用。长 途运输应用冰盒或4℃低温保存。 3.2 样品处理：组织块可用剪刀剪碎并研磨，加入10倍体积含300-500UI/ml青、 链霉素的生理盐水（PBS），反复冻融2-3次。棉拭子可直接混于3-5倍体积含300-500UI/ml 青、链霉素的生理盐水（PBS），反复冻融2-3次。8000rpm离心15min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，透过液即为病毒原液，收集保存，短期保存4℃，长期保存用液氮。 3.3接种培养：将病毒原液接种与特定细胞单层中，连续盲传4-6代，观察细胞是 否产生特异性CPE，并计算及TCID50/0.1ml。禽源类病毒可接适当日龄鸡胚或鸡胚成纤维细胞进行扩增和鉴定，并计算及EID50/0.1ml和ELD50/0.1ml。 3.4 病毒纯化：采用“有限梯度稀释法”结合“噬斑纯化法”对病毒进行纯化； 3.5 动物回归实验：分离培养并纯化好的病毒回归接种动物，观察动物病变是否为该病毒引起及病变特征是否典型。 3.6分子生物学鉴定：基因组提取并设计特异性引物，对分离病毒保守区基因片段 进行特异性扩增，并测序，从分子水平对其进行鉴定。 3.7血清学鉴定：用标准阳性血清与分离病毒作用一段时间后再次接种特异性细胞 或鸡胚验证病毒特异性。或者用荧光标记抗体与病毒作用后荧光显微镜下观察其特异性。 4.注意事项 4.1采样过程应做好自身防护，烈性病不得随意分离。 4.2 实验动物应及时焚烧或深埋等处理，避免病毒扩散到环境中。 4.3 纯化好毒种应及时做好扩毒并建立毒种库。 1

(完整版)荧光分析法习题参考答案

荧光分析法 思考题和习题 1．如何区别荧光、磷光、瑞利光和拉曼光？如何减少散射光对荧光测定的干扰？ 荧光：是某些物质吸收一定的紫外光或可见光后，基态分子跃迁到激发单线态的各个不同能级，然后经过振动弛豫回到第一激发态的最低振动能级，在发射光子后，分子跃迁回基态的各个不同振动能级。这时分子发射的光称为荧光。荧光的波长比原来照射的紫外光的波长更长。 磷光：是有些物质的激发分子通过振动弛豫下降到第一激发态的最低振动能层后，经过体系间跨越至激发三重态的高振动能层上，再通过振动弛豫降至三重态的最低振动能层，然后发出光辐射跃迁至基态的各个振动能层．这种光辐射称为磷光。磷光的波长比荧光更长。 瑞利光：光子和物质分子发生弹性碰撞时．不发生能量的交换，仅是光子运动的方向发生改变，这种散射光叫做瑞利光，其波长和入射光相同。 拉曼光：光子和物质分子发生非弹性碰撞时，在光子运动方向发生改变的同时，光子与物质分子发生能量交换，使光于能量发生改变。当光子将部分能量转给物质分子时，光子能量减少，波长比入射光更长；当光子从物质分子得到能量时，光子能量增加，波氏比入射光为短。这两种光均称为拉曼光。 为了消除瑞利光散射的影响，荧光的测量通常在与激发光成直角的方向上进行，并通过调节荧光计的狭缝宽度来消除 为消除拉曼光的影响可选择适当的溶剂和选用合适的激发光波长 2．何谓荧光效率？具有哪些分子结构的物质有较高的荧光效率？ 荧光效率又称荧光量子效率，是物质发射荧光的量子数和所吸收的激发光量子数的比值称，用Ψf表示。 以下分子结构的物质有较高的荧光效率： (1)长共轭结构：如含有芳香环或杂环的物质。 (2)分子的刚性和共平面性：分子的刚性和共平面性越大，荧光效率就越大，并且荧光波长产生长移。 (3)取代基：能增加分子的π电子共轭程度的取代基，常使荧光效率提高，荧光长移，如-NH2、-OH、-OCH3、-CN等。 3．哪些因素会影响荧光波长和强度？ (1)温度：物质的荧光随温度降低而增强。 (2)溶剂：一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增大而长移，荧光强度也有增强。溶剂如能与溶质分子形成稳定氢键，荧光强度减弱。 (3)pH：荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大影响。 (4)荧光熄灭剂：荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用引起荧光强度降低或荧光强度与浓度不呈线性关系的现象。 (5)散射光的干扰：包括瑞利光和拉曼光对荧光测定有干扰。 4．请设计两种方法测定溶液Al3+的含量。（一种化学分析方法，一种仪器分析方法） 配位滴定：利用铝与EDTA的配位反应进行滴定分析，因铝与EDTA的反应速率比较缓慢，而且铝对指示剂有封蔽作用，因此铝的测定一般用EDTA作为标准溶液，返滴定法或置换滴定法测定。 仪器分析法：利作铝离子与有机试剂如桑色素组成能发荧光的配合物，通过检测配合物的荧光强度以来测定铝离子的含量。另可采用原子吸收分光光度法或原子发射光谱法进行测定。

荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程

荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是中的一种。 关键字： 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中： （1）任选一块标本放在载物台上. （2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。

（3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 （4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。 （5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 （6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 （7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 （8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察： （1）将荧光染色标本放到载物台上。 （2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 （3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长＜双色束分离器的透射波长＜阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。 （4）调节粗调手轮，当看清荧光图像轮廓后，再用微调手轮调焦，直至看到清晰的荧光图像。 （5）当需要得到较强的荧光图像时，可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路，可获得较明亮的荧光图像。