李金龙实习报告 1111
顶岗实习(报告)
专业
班级：矿山3131
学号
姓名：李金龙
指导老师：桂阿娟
起止日期
目录
第1章实习概况 (1)
1.1 实习时间 (1)
1.2 实习地点 (1)
1.3 实习项目、岗位及工作内容简述 (1)
1.4 工程范围范围及主要内容 (1)
1.5工程特点 (1)
1.6 设计主要设计标准 (1)
1.7 施工条件 (1)
第2章施工准备 (2)
2.1 临时工程建设 (2)
2.2 物资供应 (2)
2.3 电力、通信及生产生活用水 (2)
2.4 技术准备 (3)
第3章管理目标 (5)
3.1 质量目标 (5)
3.2 工期目标 (5)
3.3 安全生产目标 (5)
3.4 环保目标 (5)
3.5 技术创新目标 (5)
3.6 文明施工 (6)
3.7 科学管理目标 (6)
第4章施工组织机构及规划 (7)
4.1 机构设置原则 (7)
4.2 施工组织机构 (7)
4.3 职能规划 (7)
第5章施工总体部署 (9)
5.1 施工总体方案 (9)
5.2 施工队伍设置及任务划分 (9)
5.3 总体施工布置及规划 (9)
第6章主要工程方法和主要施工工艺 (10)
6.1 钻孔桩基础施工 (10)
6.2 常见事故预防及处理 (13)
6.3 承台施工工艺 (18)
6.4 墩台身 (20)
第7章安全保证措施 (24)
7.1 安全保证体系 (24)
7.2 安全保证措施 (24)
第8章实习总结 (27)
1. 实习概况
1.1 实习时间
2015.11.01----2016.06.17
1.2 实习地点
四川省德昌县凤凰大道三段公示公司往西800米中铁航空集团成昆铁路峨眉至米易段14标项目经理部二分部
1.3 实习项目、岗位及工作内容简述
叉岩沟中桥工程位于四川省凉山彝族自治州德昌县境内，中桥为顺接铁路路基而设，根据当地地形及用途而设，主要为2-32m等跨度，实习岗位是施工员。
1.4工程范围及主要内容、主要工程数量
该桥正线里程DK475+148处，起讫里程为DK475+108.3～DK475+186.45，全桥位于-9‰下坡段，双线间距4.2m,桥长78.15m，由两个桥台及一个墩组成，墩台下设承台及24根Φ125cm钻孔桩，总桩长492m。该桥位于直线上，与线路顺接，为泥石流沟排洪而设。
1.5工程特点
中桥工程作为先期开工工点，工期紧，任务重。全桥共计划两台钻机，将完成的现浇砼方量约为1200m3。依据总体计划安排，该中桥计划于2016年5月5日开工，合理安排工序，紧密组织施工，必须在2016年10月5日全部完成。
1.6设计主要技术标准
铁路等级：时速160客货共线
正线数目：成都至昆明双线
坡度：-9‰下坡
列车活载：中-活载。
1.7施工条件
叉岩沟中桥所在位置地形跨越洪沟，通视条件较好。该地区地下水质较好，水位较高，蕴藏丰富，可做施工用水和生活用水，施工沿线有既有高压线路，电力接驳方便，利用G108国道，维修既有村道及架设钢便桥跨越安宁河。
第2章施工准备
2.1临时工程建设
（1）施工道路
①公路
利用G108国道和既有地方县乡道路德阿路。
②便道
维修既有村道及架设钢便桥跨越安宁河，顺接至县乡道路德阿路，德阿路至既有天桥跨越成昆铁路至工地。
（2）钢筋场
叉岩沟中桥附近设置3#钢筋加工场，该加工厂占地936m2，分别设原材堆放区、下料区、加工区、半成品堆放区。
2.2物资供应
⑴工程用砂
地方砂石厂取样合格，可为工程用，通过新修便道便桥及乡村道路运输至工地。
⑵石料
地方石厂取样合格，可为工程用，通过国道、新修便道及乡村道路运输至工地。
2.3电力、通信及生产生活用水
⑴施工用水
拌和站用水采取2号拌和站自来水，抽样合格。工地现场水资源丰富，可就地取水。
⑵施工用电
该桥因是先期开工工点，先考虑使用发电机自发电，后期施工全部考虑利用地方电源，配置315kV.A变压器1两台供电。并配200KW发电机一台。
⑶施工用燃料
本段线路沿线燃料供应比较充足，施工机械使用的燃料可在德昌县或西昌市购买。
2.4 技术准备
2.4.1内业准备
认真阅读、审核施工图纸理解设计意图，编写审核报告；进行临时工程设施的具体设计；编写实施性施工组织设计(含质量计划)；编写各种针对性的质量、安全保证措施；结合工程施工特点，编写技术管理办法和实施细则，备齐参考图、标准图、验收标准、施工指南、施工手册等必要的参考资料。编写施工安全手册，施工人员岗前技术培训。
准备工作做到“准备项目齐全，执行标准正确，内容完善齐备，超前计划布局，及时指导交底，重在检查落实”
2.4.2施工控制测量
为确保本标段桥梁位置准确无误，项目部测量队在施工放样前对设计单位所提供的导线点和水准点进行了贯通测量，经复核设计单位的交桩表无误后，根据施工现场需要，加密导线点和水准点建立平面导线及高程控制网，并将所有控制测量的原始记录、计算资料及成果报监理工程师审批、签认，同时确保测量结果的正确及精度，符合《新建铁路工程测量规范》（TB10101-99）的要求。
2.4.3平面导线控制网
在全线贯通测量完成后，根据需要在施工场地内加密，采用全站仪建立三级多边形平面导线控制网。平面导线控制网的外业测量完成后，根据规范对其水平角及距离进行平差，并以平差后的坐标成果做平面控制网。
2.4.4高程控制网
对设计提供的水准点标高复测闭合后，在施工范围内建立四级高程控制系统。2.4.5施工放样测量
本工程测量放样拟按照坐标法与墩、台轴线几何尺寸法，互相进行测量放样与监控、复核。
⑴桩基
桩基础施工采用坐标法放样，然后利用导线点与各桩位平面几何关系进行复核。同时在每个墩台纵横向每侧设置不少于三个护桩，供施工时恢复十字中心点使用。⑵承台
使用全站仪用坐标法放出承台十字线及墩柱预埋钢筋中心线。
⑶墩身及支承垫石
使用全站仪用坐标法放出墩身及支承垫石十字线和预埋件位置。
2.4.6标高控制
桩基标高通过护筒顶部标高来控制;承台、墩身、墩帽、支承垫石标高通过在安装好的模板上标注醒目标记来控制，护筒顶标高度随时复测是否下沉。
2.4.7施工测量注意事项
⑴测量仪器必须送专门的检测部门标定;所有控制测量和放样的计算和施测，均须复核和复测。施工控制测量成果必须满足测量精度及有关规范要求，并报监理工程师审批、签认; 施工测量必须认真细致，各部位的平面位置和高程控制，必须严格校核确认无误后，方可进行施工。
⑵墩、台、桩位及其它施工放样前必须根据导线点坐标及几何关系，制订详细的书面放样计划，计算需要放样位置的各种数据及几何尺寸关系，并经技术负责人校核后才可组织放样测量。
第3章管理目标
3.1 质量目标
工程质量必须符合国家和铁路总公司有关标准、规范及设计文件要求，检验批、分项、分部工程施工质量检验合格率必须达到100%，单位工程一次验收合格率必须到达100%，主体工程质量零缺陷。
3.2 工期目标
将工期控制在国家、铁路总公司批复的总工期范围内，并按照铁路总公司总体要求和部署对总工期目标进行适时调整。进一步优化施工组织方案，确保该桥5个月建成。
该中桥计划工期：5个月；
计划开工日期：2016年5月；
计划完工日期：2016年10月。
3.3安全生产目标
⑴杜绝重大及以上施工安全事故；
⑵杜绝重大及以上道路交通责任事故；
⑶杜绝重大及以上火灾事故；
⑷控制或减少一般责任事故。
3.4 环保、水保目标
环境保护、水土保持设施与主体工程“同时设计、同时施工、同时投入使用”，确保无集体投诉事件，环境监控达标，单位工程验收时，环保验收合格。
水体功能、耕地、森林资源得到有效保护，噪声、振动的环境影响得到有效控制，减少水土流失，铁路设施、建筑与沿线城市环境、自然景观和谐相容。
3.5 文明施工目标
做到现场布局合理，施工组织有序，材料堆码整齐，设备停放有序，标识标志醒目，环境整洁干净，实现施工现场标准化、规范化管理。
3.6 技术创新目标
以促进技术进步和服务工程建设为宗旨，攻克对工程建设安全、质量、工期、环
境保护等影响重大的技术难题；获得最大的科技、管理、资源、环保和社会经济效益；争创国家科技进步奖项、省部级科技进步奖项。
3.7 科学管理目标
以工程首件示范为先导，以现场管理、过程控制标准化为重点，以“工程转包、违法分包”清理为契机，以“四化”建设为支撑，通过深化认识，全面发动，全员参与，努力构建标准化管理为核心的铁路建设文化；通过高度重视，明确责任，完善措施，落实标准和流程，深入持久推进标准化管理，进一步提高铁路建设质量安全管理水平，全面实现“精品工程、安全工程”的铁路建设管理目标。
大力推进铁路建设标准化管理，全面落实“六位一体”建设管理目标，实现铁路建设的又好又快发展
第4章施工组织机构及规划
4.1 机构设置原则
叉岩沟中桥工程机构设置原则以技术为龙头，以计划为先行，以管理为主线，以施工现场为对象，组建职能完善、体系健全、精干高效的施工管理班子和桥涵架子队，确保各项工作正常运转。
4.2 施工组织机构
“拟为本工程设立的组织机构图”见后附图1。
4.3职能划分
（1）项目经理
制定本工程管理目标和创优规划，建立项目管理体系，保证项目管理目标的实现；
组织精干高效的项目管理班子和桥涵架子队，搞好项目机构设置、人员选调及职责分工；
科学组织施工，及时组织有关人员编制项目施工方案、进度计划安排、重大技术措施、资源调配方案、提出合理化建议与设计变更等。
（2）项目副经理
配合项目经理工作，具体组织本工程的施工，对项目经理负责。
协调与业主及监理单位的关系，保证工程进度、质量、安全、成本控制目标的实现；
科学组织施工，及时组织编制进度计划安排及资源调配方案，参与提出合理化建议与设计变更等重要决策。
（3）项目总工程师
对本工程的施工技术、质量负全责。
负责制定技术培训计划，组织技术人员实施各项技术规范和质量验收标准的有效实施；
主持编制施工方案及实施性施工组织设计的审批、监督和落实；
负责制定科技研发计划并组织科技攻关，配合项目经理督促监察生产计划的执行。
（4）工程技术部、安全质量部、物资设备部、计划财务部综合办公室等部门在
分管领导的带领下开展自身业务范围的管理工作。
第5章施工总体部署
5.1总体施工方案
钻孔桩基础拟安排2台CZ-6A型冲击钻机成孔。钢筋骨架在3#加工场地分节制作成型后运到工地采用25T吊车吊装，单面搭接焊接连接。砼集中拌和，导管法灌注入孔；承台采用小块钢模拼装、墩台身采用大块组合钢模，拼装后吊车配合一次浇筑成型。
5.2施工队伍设置及任务划分
根据本项目的工程特点，施工队任务划分如下表：
5.3总体施工布置及规划
（1）总体施工布置原则
①严格遵守国家和地方政府有关土地资源使用方面的法律、法规，服从建设单位和监理工程师的指导。
②本着尽量利用既有设施，节省投资，节约用地，因地制宜，就地取材，便于施工，永临结合的原则进行总体施工布置的规划及设置。
（2）总体施工布置及规划
大型临时工程有：汽车运输便道、钢筋加工场、电力干线、混凝土拌和站等，根据施工要求提前完成，以保证施工顺利进行。
第6章主要工程施工方法和主要施工工艺
6.1钻孔桩基础施工
6.1.1钻孔桩基础施工工艺和施工方法
⑴施工工艺：
本工程钻孔桩基共计24根，桩径均为φ1.25m，最深桩长22.5m；共计总桩长492m。
根据桥址处的水文、地质及周围环境情况,中桥钻孔桩采用冲击钻,利用筒式钻头或实心钻头进行施工。中桥钻孔桩的砼采用2#拌和站集中拌和，利用砼运输车运至
施工现场，吊车配合导管法灌筑。
依据桩径、地质及地下水位情况决定钢护筒埋设位置及埋置深度，保证钻孔作业中孔口不坍塌，地表水不流入孔中，并保证孔内泥浆表面高程。就近开挖或用草袋围堰构筑泥浆池，设置泥浆通道，选用合格粘土制作悬浮泥浆，用以钻孔护壁。每个桩钻孔作业要连续进行，不得中断，及时核对地质资料，并随时测定深度、斜度和孔径。
钻孔达到设计标高后，及时清孔，填写孔桩检查证，经监理工程师确认同意后，方可进行下一道工序施工。分节或整体吊装预先制好的钢筋骨架（骨架上设控制保护层钢耳环）准确就位并固定后，再次检测孔底泥浆沉淀厚度，若超出要求时再次清孔。
每个桩的砼灌注一次完成，砼顶面高出桩顶设计标高0.5～0.8m以上。各工序必须紧密衔接，严格按规定要求施工作业，随时检验记录，签证。
间距小于5m的钻孔桩不能同时施工，必须待邻桩砼灌注完成后,并达到2.5Mpa 抗压强度后方可开钻，以免影响邻桩砼凝固质量。每墩（台）桩基完成后，及时清运钻孔出碴，拆除泥浆池，清理场地，为下一施工工序创造有利条件。
具体施工要求：
钻孔场地处理方法根据各桥桥位地质、水文情况而定。在旱地上清除杂物，整平场地。遇软土时适当处理。
桥梁每个台下8颗桩基，开挖两个泥浆循环池，为满足沉渣及泥浆储量要求，开
挖尺寸为7×7×3m，并按照1：0.5进行放坡。泥浆池四周用钢管架围住，挂警示牌。
护筒采用厚度4～8mm的A3钢板卷制而成。护筒内径使用冲击钻机时大于40cm。护筒顶面高出施工水位（或地下水位）1.5—2.0m，并高过施工地面0.5m，护筒埋置
深度在岸滩粘性土处≮1.0m，砂类土≮2.0m。表层松软桩位将护筒埋置于坚硬土层≮0.5m。
护筒四周用粘土夯实，保证不漏水。护筒埋设偏差≯5cm，斜度≯1%。
护筒上标注确定孔位中心的十字线及测定的标高。泥浆采用优质的粘土制作，粘土的各项指标均符合规范规定。采用冲击钻时,孔底泥浆比重不大于 1.3t/ m3,泥浆黏度一般地层为16～22S；松散地层粘度为19～28S。含砂率≯4%。
钻孔位置根据测量精确对位，并拉线检查。施工时按隔墩（台）隔孔对位，保证钻孔过程中不影响已灌注的砼凝固。安钻机时做到垫平、垫稳，不移位、不下沉。钻头或钻杆中心不偏离护筒中心，偏差≯5cm。
在钻孔过程中取碴和停钻后，及时补充泥浆，保证孔内水头。
为确保孔位正确，钻头位置即钻头的十字丝和钻孔桩中心对应。并在钻孔开始时，利用小冲程或慢速开孔，使初成孔坚实、竖直、圆顺，起导向作用，防止孔口坍方。当钻至3～4m时，方正常进行。
钻孔时，保持速度均匀，不过猛或突然，以免碰撞孔壁，影响正常钻孔，孔内出土不得放于钻孔四周。因故停钻时，孔上应加护盖，钻机钻杆要提离孔底5m以上。其他钻机钻头提出孔外。
钻进过程中，经常仔细检查钢丝绳和钻头的磨损程度及联结状况，钻头转向是否自由，以免卡钻。防止钻头掉入孔内，保证桩径尺寸。采取有效措施，预防坍孔。
在松散土，粉砂土层或流砂地段，钻进时控制好钻孔进尺，并选用优质泥浆（或加入石膏）护壁。必要时向孔中投入混合物（粘土、片石、石膏），用低冲程把投入孔中的混合物冲挤入孔壁中，保证孔壁稳定性。若孔底遇倾斜岩层，可向孔中投入片石，填至孔底斜面最高处，并采用小冲程，渐渐将孔底斜面凿平后，再正常进行。
如孔内出现大面积坍方或遇特殊地质时，接长护筒并下到坍孔1m以下或下内护筒后继续施钻。
钻孔达到设计深度后，经监理单位、设计单位核实地质情况方能清孔，清孔后对成孔直径、倾斜度、桩底沉淀层厚进行检查，柱桩沉碴不大于10cm，摩擦桩不大于30cm。不得用加深孔深度的方法代替清孔。
清孔采用掏碴筒循环掏碴，用测锤量测是否掏净，泥浆比重值控制在1.1～1.2 t/ m3，停止50min左右，让孔内悬浮的颗粒回沉后再测量。
如沉淀值未在允许值内，则把所回沉值清除干净，立即进行下一道工序，否则应
重新掏碴，直到达标为止。
清孔时保持孔内的水头高度，不断向孔内注入清水，以免坍孔。
钢筋笼制作、安装：小桥桩基用钢筋型号为Q235钢筋ф20、ф16、ф10、ф8。钢筋笼主筋接头采用双面搭接焊，同一截面上接头数量不超过50%，加强箍筋与主筋连接全部焊接。钢筋笼的材料、加工、接头和安装，符合要求。钢筋骨架的保护层厚度可用焊接钢筋“耳朵”或混凝土旋转垫块。钢筋“耳朵”用钢筋制作，见下图，如图纸未设计则采用混凝土垫块。设置密度按竖向每隔2m设一道，每一道沿圆周布置4个。
对于孔深较大的桩基，钢筋笼需要现场焊接的，钢筋笼分段长度不小于18米，以减少现场焊接工作量。现场焊接须采用单面搭接焊接。
钢筋笼制作完成后，骨架安装采用汽车吊，为保证骨架不变形，须用两点吊：第一吊点设在骨架的下部，第二吊点设在骨架长度的中点到三分点之间。起吊时先提第一吊点，使骨架稍稍提起，再与第二吊点同时起吊，待骨架离开地面后，第一吊点停止起吊，继续提升第二吊点。随着第二吊点不断提升，慢慢放松第一吊点，直到骨架同地面垂直，停止起吊。检查骨架是否顺直。骨架入孔时应慢慢下放，严禁摆动碰撞孔壁。将骨架临时支撑于护筒口，再起吊第二节骨架，使上下两节骨架位于同直线上进行焊接，焊接时应先焊顺桥方向的接头，最后一个接头焊好后，全部接头就可以下沉入孔，直至所有骨架安装完毕。并在孔口牢固定位，以免在灌注混凝土过程中发生浮笼现象。
钢筋骨架的制作和吊装的允许偏差为：主筋间距±10mm；箍筋间距±20mm；骨架外径±10mm；骨架倾斜度±0.5％；骨架保护层厚度±20mm；骨架中心平面位置20mm；骨架顶端高程±20mm；骨架底面高程±50mm。
水下C35抗侵蚀砼灌注采用Ф300mm钢导管施工。导管长度在中间导管每节长为1.5m～2.0，底节为4m，并配以若干1m和0.5m短导管。砼用砼中心搅拌站拌合，由砼运输车运至现场，配合输送泵灌注或用汽车吊灌注。混凝土的运输、浇筑及间歇的全部时间保证不应超过混凝土的初凝时间4h（添加了缓凝减水剂）。
灌注前，对使用的导管调直、编号、试拼组装并打压试验。导管的长度按计算拼装，设立1m和0.5m短节，保证导管底端距孔底为40cm。
漏斗和储料斗按计算容量设计，并具备足够的强度和刚度。
砼的初存量应满足首批砼入孔后，导管埋入砼中的深度任何时候不小于1m，并不大于3m，当桩身较长时，导管埋入砼中的深度可适当加大。
为使砼顺畅灌入孔中，砼坍落度控制在18-22cm之间，粗骨料粒径为1—3.15cm 碎石，砼灌注导管输送距离控制在50m以内，防止砼离析后阻塞导管，并相应加大灌注高度，水下砼灌注面宜高出桩顶设计高程1.0m，在承台开挖后凿除。
钻孔桩施工中，产生大量废弃的泥浆，为了保护当地的环境，这些废弃的泥浆，经泥浆分离器处理后，运往指定的废弃泥浆的堆放场地，并做妥善处理。
钻孔桩施工质量按下表标准控制
质量检测：所有钻孔桩按设计要求成桩后进行检测。对质量有问题的桩，钻取桩身混凝土鉴定检验。
6.2钻孔桩常见事故的预防及处理：
常见的钻孔（包括清孔时）事故及处理方法分述如下：
1、坍孔
各种钻孔方法都可能发生坍孔事故，坍孔的特征是孔内水位突然下降，孔口冒细
密的水泡，出渣量显著增加而不见进尺，钻机负荷显著增加等。
1.1 、坍孔原因
①泥浆相对密度不够及其它泥浆性能指标不符合要求，使孔壁未形成坚实泥皮。
②由于出渣后未及时补充泥浆（或水），或河水、潮水上涨，或孔内出现承压水，或钻孔通过砂砾等强透水层，孔内水流失等而造成孔内水头高度不够。
③护筒埋置太浅，下端孔口漏水、坍塌或孔口附近地面受水浸湿泡软，或钻机直接接触在护筒上，由于振动使孔口坍塌，扩展成较大坍孔。
④在松软砂层中钻进进尺太快。
⑤提出钻锥钻进，回转速度过快，空转时间太长。
⑥水头太高，使孔壁渗浆或护筒底形成反穿孔。
⑦清孔后泥浆相对密度、粘度等指标降低，用空气吸泥机清孔泥浆吸走后未及时补浆（或水），使孔内水位低于地下水位。
⑧清孔操作不当，供水管嘴直接冲刷孔壁、清孔时间过久或清孔停顿时间过长。
⑨吊入钢筋骨架时碰撞孔壁。
1.2、坍孔的预防和处理
①在松散粉砂土或流砂中钻进时，应控制进尺速度，选用较大相对密度、粘度、胶体率的泥浆或高质量泥浆。
②发生孔口坍塌时，可立即拆除护筒并回填钻孔，重新埋设护筒再钻。
③如发生孔内坍塌，判明坍塌位置，回填砂和粘质土（或砂砾和黄土）混合物到坍孔处以上1m-2m，如坍孔严重时应全部回填，待回填物沉积密实后再行钻进。
④清孔时应指定专人补浆（或水），保证孔内必要的水头高度。供水管最好不要直接插入钻孔中，应通过水槽或水池使水减速后流入钻中，可免冲刷孔壁。应扶正吸泥机，防止触动孔壁。不宜使用过大的风压，不宜超过1.5-1.6倍钻孔中水柱压力。
⑤吊入钢筋骨架时应对准钻孔中心竖直插入，严防触及孔壁。
2、钻孔偏斜
各种钻孔方法可能发生钻孔偏斜事故。
2.1 、偏斜原因
①钻孔中遇有较大的孤石或探头石
②在有倾斜的软硬地层交界处，岩面倾斜钻进；或者粒径大小悬殊的砂卵石层中钻进，钻头受力不均。
③扩孔较大处，钻头摆动偏向一方。
④钻机底座未安置水平或产生不均匀沉陷、位移。
⑤、钻杆弯曲，接头不正。
2.2 、预防和处理
①安装钻机时要使转盘、底座水平，起重滑轮缘、固定钻杆的卡孔和护筒中心三者应在一条竖直线上，并经常检查校正。
②由于主动钻杆较长，转动时上部摆动过大。必须在钻架上增设导向架，控制杆上的提引水龙头，使其沿导向架对中钻进。
③钻杆接头应逐个检查，及时调正，当主动钻杆弯曲时，要用千斤顶及时调直。
3 、掉钻落物
钻孔过程中可能发生掉钻落物事故。
3.1、掉钻落物原因
①掉钻落物原因
卡钻时强提强扭，操作不当，使钻杆或钢丝绳超负荷或疲劳断裂。
②钻杆接头不良或滑丝。
③电动机接线错误，钻机反向旋转，钻杆松脱。
④转向环、转向套等焊接处断开。
⑤操作不慎，落入扳手、撬棍等物。
3.2、预防措施
①开钻前应清除孔内落物，零星铁件可用电磁铁吸取，较大落物和钻具也可用冲抓锥打捞，然后在护筒口加盖。
②经常检查钻具、钻杆、钢丝绳和联结装置。
3.3 、处理方法
掉钻后应及时摸清情况，若钻锥被沉淀物或坍孔土石埋住应首先清孔，使打捞工具能接触钻杆和钻锥。
4、糊钻和埋钻
糊钻和埋钻常出现于正反循环回转钻进中，糊钻的特征是在细粒土层中钻进时进尺缓慢，甚至不进尺出现憋泵现象。
预防和处理办法：对正反循环回转钻，可清除泥包，调节泥浆的相对密度和粘度，适当增大泵量和向孔内投入适量砂石解决泥包糊钻，选用刮板齿小、出浆口大的钻锥；严重糊钻，应停钻，清除钻渣。对钻杆内径、钻渣进出口和排渣设备的尺寸进行检查计算。
5、扩孔和缩孔
扩孔比较多见，一般表局部的孔径过大。在地下水呈运动状态、土质松散地层处或钻锥摆动过大，易于出现扩孔，扩孔发生原因与坍孔相同，轻则为扩孔，重则为坍孔。若只孔内局部发生坍塌而扩孔，钻孔仍能达到设计深度则不必处理，只是混凝土灌注量大大增加。若因扩孔后继续坍塌影响钻进，应按坍孔事故处理。
缩孔即孔径的超常缩小，一般表现为钻机钻进时发生卡钻、提不出钻头或者提外鸣叫的迹象。缩孔原因有两种：一种是钻锥焊补不及时，严重磨耗的钻锥往往钻出较设计桩径稍小的孔；另一种是由于地层中有软塑土（俗称橡皮土），遇水膨胀后使孔径缩小。各种钻孔方法均可能发生缩孔。为防止缩孔，前者要及时修补磨损的钻头，后者要使用失水率小的优质泥浆护壁并须快转慢进，并复钻二三次；或者使用卷扬机吊住钻锥上下、左右反复扫孔以扩大孔径，直至使发生缩孔部位达到设计要求为止。对于有缩孔现象的孔位,钢筋笼就位后须立即灌注,以免桩身缩径或露筋.
6、梅花孔（或十字孔）
常发生在以冲击锥钻进时，冲成的孔不圆，叫做梅花孔或十字孔。
6.1、形成原因
①锥顶转向装置失灵，以致冲锥不转动，总在一个方向上下冲击。
②泥浆相对密度和粘度过高，冲击转动阻力太大，钻头转动困难。
③操作时钢丝绳太松或冲程太小，冲锥刚提起又落下，钻头转动时间不充分或转动很小，改换不了冲击位置。
④有非匀质地层，如漂卵石层、堆积层等易出现探头石，造成局部孔壁凸进，成孔不圆。
6.2 、预防办法
①应经常检查转向装置的灵活性，及时修理或更换失灵的转向装置。
②选用适当粘度和相对密度的泥浆，并适时掏渣。
③用低冲程时，每冲击一段换用高一些冲程冲击，交替冲击修整孔形。
④出现梅花孔后，可用片、卵石混合粘土回填钻孔，重新冲击。
7、卡锥
7.1 、原因
①钻孔形成梅花形，冲锥被狭窄部位卡住。
②未及时焊补冲锥，钻孔直径逐渐变小，而焊补后的冲锥大了，又用高冲程猛击，极易发生卡锥。
③伸入孔内不大的探头石未被打碎，卡住锥脚或锥顶。
④孔口掉下石块或其它物件，卡住冲锥。
⑤在粘土层中冲击冲程太高，泥浆太稠，以致冲锥被吸住。
⑥大绳松放太多，冲锥倾倒，顶住孔壁。
7.2 、处理方法
①当为梅花卡钻时，若锥头向下有活动余地，可使钻头向下并转动直径较大方向提起钻头。也可松一下钢丝绳，使钻锥转动一个角度，有可能将钻锥提出。
②卡钻不宜强提以防坍孔、埋钻。宜用由下向上顶撞的办法，轻打卡点的石头，有时使钻头上下活动，也能脱离卡点或使掉入的石块落下。
③用较粗的钢丝绳带打捞钩或打捞绳放进孔内，将冲锥勾往后，与大绳同时提动，或交替提动，并多次上下、左右摆动试探，有时能将冲锥提出。
④在打捞过程中，要继续搅拌泥浆，防止沉淀埋钻。
⑤用其它工具，如小冲锥、小掏渣筒等下到孔内冲击，将卡锥的石块挤进孔壁，或把冲锥碰活动脱离卡点后，再将冲锥提出。但要稳住大绳以免冲锥突然下落。
⑥用压缩空气或高压水管下入孔内，对准卡锥一侧或吸锥处适当冲射一些时候，使卡点松动后强行提出。
⑦使用专门加工的工具将顶住孔壁的钻头拨正。
⑧用以上方法提升锥无效时，可试用水下爆破提锥法。将防水炸药（小于1kg）放于孔内，沿锥的滑槽放到锥底，而后引爆，震松卡锥，再用卷扬机和链滑车同时提
脱钙液的配制
脱钙液配制 30%盐酸溶液1000 ml(10%中性福尔马林液700 ml+浓盐酸300 ml)加入140 g氯化钠,待其完全溶解后再加入20 ml冰醋酸。 在日常病理技术工作中,有多种对骨骼的脱钙方法和脱 钙组织切片的制作方法,本文所述脱钙方法和脱钙液从脱钙 速度,对组织的损伤程度以及切片染色等方面效果都比较理 想,这种脱钙液与其他酸类脱钙液相比较,对组织损伤小,脱 钙时间短,并作用温和,其中30%的盐酸溶液对脱钙组织造 成的损害较小,对组织不膨胀,不至于导致脱钙过程缓慢,但 核染色不佳。加入氯化钠可以防止脱钙组织因经过盐酸脱 钙后导致的切片染色偏红,加入冰醋酸可使脱钙组织软化, 有利于切片,从而使制片效果更加理想。对照组以单纯30% 盐酸为主的脱钙液与新方法脱钙液对同等体积、大小、部位 相同的骨组织同时进行脱钙,前者制作的骨骼切片不平整, 染色偏红,胞核红染,核质不清晰,切片整体组织结构显示不 清。经新方法脱钙后所制作的切片组织结构显示清晰,切片中的软组织和骨组织结构均可完整显示,细胞染色清晰,核 质对比鲜明,制片中所用的固定剂、脱水剂、透明剂等都为日 常技术工作必备试剂,而且制作出的切片效果很好,在本方 法中所用的固定、脱水、透明、浸蜡、染色试剂都可以数次重 复使用,试剂配制和操作方法简单,值得临床推广应用。 王淑兰，制作骨骼组织切片的新脱钙液 改良的Plank·Rycho 脱钙液的配制: 氯化铝7g , 盐酸815ml , 甲酸5ml , 甲醛15ml ,TritonX-100 0.5ml ,蒸馏水100ml 。 为了保持良好的骨组织形态结构,达到脱钙目的,我们 在Plank·Rycho 脱钙液中加入甲醛和TritonX-100 ,更加充分发 挥各自的作用,使固定、脱脂、脱钙同时进行。甲醛不仅是优 良的固定剂,还可适度保护组织免受酸的侵蚀。TritonX-100 (聚乙醇辛基苯基醚) 是一种表面活性剂,虽不具备脱钙作 用,但能溶解脂质,改善细胞膜的通透性〔1 ,2〕,使骨组织中的 脂质在短时间内脱去,加快了脱钙速度。脂质被溶解后,组 织间隙疏通,脱钙液能顺利渗入骨组织内,有利于钙盐析出。 改良的脱钙液性质温和,虽然脱钙速度较强酸类脱钙液缓 慢,但能减少对细胞核的破坏,获得良好的组织学形态。 胥维勇，介绍一种改良的Plank·Rycho 脱钙液
EDTA脱钙液
EDTA脱钙液 产品简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解脱钙。EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Jimei EDTA脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH值为7.2。其优点是：①经EDTA 脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。 产品组成： 自备材料： 1、PBS 2、蒸馏水 3、加热装置或微波炉 操作步骤（仅供参考） 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10~30天或更长时间。如 果想加快脱钙速度，可以置于37。C进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周~3个月即可，每周更换一次直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3~5min，中间间隔3~5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5 mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14~60天即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37~40。C，温度过高容易使骨组织 造成松散解体，尤其不可大于60。C。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时
病理检验技术(1)
荧光原位杂交 FISH 用DNA探针与组织切片上互补的DNA杂交，通过观察荧光信号在染色体上的位置和颜色来反映相应基因的情况。 第一章病理检验技术概述 病理学的作用： 1、研究疾病的病因、发病机制，认识 疾病的发生发展规律 2、为临床诊断疾病、治疗疾病、分析预 后提供依据等。 病理检验的定义： ------在临床医疗实践中，通过对患者病变组织或细胞进行检查，以协助临床诊断疾病的方法称为病理检验。 一、病理检验的主要任务 （一）确定疾病的诊断 （二）为临床选择治疗方案提供依据 （三）提供有关预后因素的信息。（最正确、最可靠、最后的诊断） （四）了解疾病的发展及分析疗效 （五）为科学研究积累资料 （六）为提高临床诊断水平服务 二、病理检验分类 （一）细胞学检验（脱落细胞、细针穿刺吸取） （二）组织学检验---最后的诊断 活体组织检验、手术标本检验、手术中病理检验 （三）尸体剖验 病理学技术： 在病理学临床及科学研究工作中使用的各种技术方法统称为病理学技术。病理检验技术的质量和水平是临床病理诊断工作中至关重要的因素。“技术是病理学之母。” 第二节、病理检验技术常规工作 收发工作 协助取材和尸体剖检工作 制作制作切片及细胞学涂片 病理资料管理及检索 药品、物资的管理及仪器维护 大体标本的收集和制作 第六章组织制片技术 P39 常规石蜡切片制作程序
组织固定→取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封片→观察 第一节组织块的处理 （一）组织切片制作过程中的各种操作： 1、取材与固定：合理取材、及时固定； 2、洗涤、脱水、透明； 4、浸蜡、包埋； 5、切片、贴片（展片、捞片）和染色： 6、封片：长期保存。 一、取材： -------按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。 注意事项： 部位、大小、形状、方向 二、固定和固定液 固定：将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内的物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置过程。 （一）固定目的： （1）防止组织、细胞的自溶与腐败；（2）凝固或沉淀细胞内物质； （3）增加组织硬度，便于制片； （4）产生不同的折光率，有利于染色后观察辨认。 （二）固定方法： 1、浸泡固定法：病理外检一般均用此法； 2、注射、灌注法：体积过大或整个脏器或尸体的固定； 3、微波固定法：应用于临床病理快速诊断，微波固定组织温度至关重要。微波固定介质可用 生理盐水或10%甲醛。 4、蒸汽固定法：为了固定组织中可溶性物质、 血液、细胞涂片等； （三）固定液的特性： 1、渗透力强，迅速渗入组织内部 2、不会使组织过度收缩或膨胀 3、能硬化组织，保持细胞形态和位置 4、使组织对染料产生亲和力，产生折光率（四）组织固定注意事项： 1、及时固定 2、固定容器宜大 3、固定液应足量：固定组织体积的10-20倍 4、防止组织变形 5、确定恰当的固定时间 （五）组织固定液 常用固定液： 1、4%甲醛（福尔马林）：配置为市售的40%甲醛1份加水9份混合即成； 2、酒精（乙醇）：高浓度组织硬化显著，先用80%固定数小时，再用95%固定； 3、中性缓冲甲醛液：可提高免疫组化阳性率。 4、酒精-甲醛液（A-F固定液）： 5、Zenker固定液： 1、4%甲醛（福尔马林）： 久置能产生白色沉淀（三聚甲醛），容易氧化变成甲酸，严重影响细胞核着色。
EDTA脱钙液
EDTA脱钙液 产品简介： 一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切除完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游的实验，如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解法脱钙。 EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类， 经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Leagene EDTA脱钙液优点：①经EDTA脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小；③用化学方法测试可以确定脱钙的终点。 Leagene EDTA脱钙液缺点：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬。 主要成分：主要由EDTA、磷酸盐等组成，用NaOH溶液调pH值为7.2。 自备材料： 1、PBS 2、蒸馏水 3、加热装置或微波炉 操作步骤（仅供参考）： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加 快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：
微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，避免脱钙过度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 附录： 脱钙终点的测定（物理法）：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害， 尽量避免用力过大或反复检测。 相关产品： 产品编号 产品名称 DD0012甲酸脱钙液 DD0020电解脱钙液(2.5%甲酸) DD0028脱钙后碱处理液 DZ0029硫酸钠水溶液(5%) DH0006苏木素伊红(HE)染色液试剂盒 DZ0209脱钙终点检测试剂盒(化学法)
脱钙液
脱钙液 （一）酸性溶液脱钙法 1．硝酸-间苯三酚液：浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。 混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸100ml。 骨组织块5mm 厚脱钙时间12-24 小时。 优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。 缺点：（1）细胞核染色很差。 （2）如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。 （3）用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。 （4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 2．硝酸水溶液：浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。厚度5mm 骨组织块脱钙12-24 小时。 优点：（1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。 （2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。 （3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。 缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。 3．福尔马林-硝酸液：40%甲醛5ml，浓硝酸10ml，蒸馏水85ml。 5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要1-3 天。 优点（1）福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。 （2）该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。 （3）可作为紧急活检脱钙用。
（4）该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。 缺点：（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。 （2）用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。4．Perenyi’s 液：10%硝酸4 份，0.5%铬酸3 份，无水乙醇3 份。 5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要2-7 天。 优点：（1）该液是一种温和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。 （2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。 （3）推荐该液作为常规脱钙使用。 （4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90% 乙醇中。 缺点：（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。 （2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 5．Von Ebener’s 液：饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。厚度5mm 骨组织块脱钙3-7 天。 优点：（1）细胞核染色相当好。 （2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。 缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 6．甲酸液：甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。厚度5mm 骨组织块脱钙时间需要3-7 天。 优点：（1）脱钙同时可以对组织固定。 （2）对细胞核染色比较好。
甲酸脱钙液
甲酸脱钙液 简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。 Leagene 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。 组成： 自备材料： 1、 PBS 2、 蒸馏水 3、 5%硫酸钠溶液 操作步骤(仅供参考)： 1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。 2、 组织固定后，用PBS 清洗。 3、 组织用蒸馏水洗清洗。 4、 组织转移至甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。 5、 用蒸馏水冲洗数次。 6、 组织立即入硫酸钠溶液进行碱处理。 7、 充分流水冲洗。 8、 常规脱水、包埋。 编号 名称 DD0012 Storage 甲酸脱钙液 500ml RT 避光 使用说明书 1份
注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。 2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 3、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 4、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6个月有效。 附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。 相关： 编号名称 DB0082 改良番红O-固绿软骨染色液 DF0111 中性福尔马林固定液(10%) DG0005 糖原PAS染色液 DH0006 苏木素伊红(HE)染色液液 DZ0209 脱钙终点检测试剂盒(化学法) IH0091 多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
缓冲液及组织固定液的配制
缓冲液及组织固定液的配制 1、磷酸盐缓冲液的配制 关于缓冲溶液PB的配制，好多参考书如生物技术实验的后面均附有缓冲溶液的配制配方，可以根据需要配制pH5.7～8.0的磷酸盐缓冲。磷酸盐缓冲液称简PB，加NaCl（氯化钠）的称PBS，加KCl（氯化钾）、NaCl（氯化钠）的称KPBS。S就是指氯化钠的含量，一般为0.85％，即是100ml里面加0.85克，这个时候的PBS的浓度是0.1M的。一般在免疫组化洗涤中采用0.01M的PBS，pH7.0～7.4。我们在实验中直接将0.1M的稀释十倍，即可。最好能现配现用。母液4℃可以保持1～2周，影响不大。 成份 分子量 （MW） 浓度（g/1000mL） 0.01M PBS①0.1M PBS0.1M PB Na2HPO4·12H2O 358.14 2.684 29.009 29.009 NaH2PO4·2H2O 156.01 0.39 2.964 2.964 NaCl 58.44 8.5 8.5~9 / pH值/ 7.4 7.4 7.4 注：①配方来自网上。 2、组织固定液的配制 2.1、4%多聚甲醛-0.1M磷酸缓冲液[1]（pH=7.3）：多聚甲醛40g，置于三角烧瓶中，加入500~800mL 0.1M的磷酸缓冲液（PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至粉末完全溶解，通常需要滴加少许1N NaOH才能使溶液澄清，最后补足0.1M PB至1000mL，充分混匀。该固定试剂适用于光镜免疫细胞化学研究，因较温和，适用于组织标本的较长期保存。 2.2、10%中性缓冲福尔马林固定液[2]：甲醛溶液（37~40%）100mL，蒸馏水900mL，NaH2PO4（磷酸二氢钠）4g，Na2HPO4（磷酸氢二钠）6.5g，混合摇匀后调pH至7.2~7.4。 2.3、10%福尔马林固定液配制[2]：甲醛溶液（37~40%）100mL，自来水900mL，混合后在溶液中加入碳酸钙使溶液呈中性或偏碱性。 2.4、10%中性甲醛液[3]：甲醛原液100mL，0.01M PBS 1000mL（磷酸缓冲液pH 7.4）。
EDTA脱钙液
南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.sodocs.net/doc/7a14146347.html,/ 第1页 EDTA脱钙液 【产品组成】 【保存条件】 4℃，12个月 【产品概述】 在组织切片过程中，一些组织内含有a骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 EDTA 脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH值为7.2。其优点是：①经EDTA 脱钙的组织染色结果好； ②对组织的结构损害小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬； ③不宜用化学方法确定脱钙终点。 【使用方法】 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的EDTA 脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA 脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 【注意事项】 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。
甲酸脱钙液使用说明
甲酸脱钙液使用说明 货号：G2490 规格：500mL 保存：室温避光，有效期6个月。 产品说明： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。自备材料： PBS、蒸馏水、5%硫酸钠溶液 操作步骤(仅供参考)： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、组织立即入5%硫酸钠溶液进行碱处理。 7、充分流水冲洗18h以上。 8、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。 2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短
脱钙方法总结
目前所用的脱钙法主要见于下列： 1．硝酸-间苯三酚液： 浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸100ml。 骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。 优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。 缺点： （1）细胞核染色很差。 （2）假如脱钙时间太长对组织有较大的损害。 （3）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。 （4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 2．硝酸水溶液： 浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。 优点： （1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。 （2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。 （3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。 缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。 3．福尔马林-硝酸液： 40%甲醛5ml，浓硝酸10ml，蒸馏水85ml。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要1-3天。 优点： （1）福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。 （2）该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。 （3）可作为紧急活检脱钙用。 （4）该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。 缺点： （1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。 （2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。 4．Perenyi’s 液： 10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。 5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。 优点： （1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。 （2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。 （3）推荐该液作为常规脱钙使用。 （4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。 缺点： （1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。 （2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。 5．Von Ebener’s液： 饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。 厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。 优点： （1）细胞核染色相当好。
银氨溶液的配制方法
银氨溶液的配制方法 简介： 网状纤维(Reticular fiber)是网状结缔组织内的一种纤维，由网状细胞所产生，直径多在0.2～1.0μm ，有韧性而没有弹性。网状纤维的染色方法很多，但染色原理基本一致，大都采用氨银浸法。Gomori 网状纤维染色原理是利用氨银液易被组织吸附与组织的蛋白质结合，经甲醛还原成黑色或棕黑色的金属银，沉积于组织内及其表面。冰冻切片、低温切片和火棉胶切片均可用于网状纤维染色，各种固定液均可采用，重金属汞盐或锇盐固定液偶尔会产生一些非特异性银背景。常用于鉴别肿瘤的性质和来源、癌与肉瘤、淋巴肉瘤与网状细胞肉瘤、血管内皮瘤与血管外皮瘤、骨尤文瘤与骨网状细胞肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤、恶性神经鞘瘤及早期浸润癌等。 配制方法： 准备试管：在试管里先注入少量氢氧化钠溶液，振荡，然后加热煮沸。把氢氧化钠倒去后，再用蒸馏水洗净备用。 2.配制溶液：在洗净试管中，注入1mL 硝酸银溶液，然后逐滴加入氨水，边滴边振荡，直到最初生成的沉淀刚好溶解为止。向溶液里逐滴滴加氨水首先析出AgOH ： AgNO3+NH3·H2O==AgOH ↓+NH4NO3 常温下AgOH 极不稳定，分解为Ag2O 暗棕色沉淀 2AgOH==Ag2O+H2O 继续滴加氨水，沉淀溶解： Ag2O+4NH3·H2O=2Ag(NH3)2++2OH-+3H2O 同时，生成的OH-与前面反应生成的NH4+反应：OH-+NH4+==NH3·H2O 因此，向AgNO3溶液里加入稀氨水至沉淀溶解的总离子方程式为： Ag++2NH3·H2O==Ag(NH3)2++2H2O 此时溶液中只含NO3-和Ag(NH3)2+，即得到Ag(NH3)2NO3，不是氢氧化二氨合银。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。切片厚4μm ，常规脱蜡至水。 2、氧化、漂白、媒染。 3、滴加Gomori 银氨溶液染色3min 。 4、常规脱水透明，中性树胶封固。 编号 名称 DC0020 Storag e Gomori 银氨溶液 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份
临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较
临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较 发表时间：2016-03-03T10:32:27.000Z 来源：《健康世界》2015年18期作者：蒲正芳 [导读] 南部县人民医院病理科将快速脱钙液运用在临床病理检验中，可将切片质量显著提高，有推广运用意义。 南部县人民医院病理科 637300 摘要：目的：探讨临床病理检验常用骨组织脱钙液的临床效果。方法：选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例，把70例标本随机分成两组，观察组和对照组，每组分别35例标本。给予对照组硝酸脱钙液检验，观察组快速脱钙液检验，比较观察两组标本在微波以及常温条件下骨组织脱钙和切片染色效果。结果：使用快速脱钙液处理的观察组标本组织切片在4μm-5μm之间，切片完整平坦，薄厚均匀并且颜色新鲜，细胞核有清晰染色；使用硝酸脱钙液处理的组织切片薄厚不均匀，没有完整切片，染色较模糊并且没有清晰的核着色，会对病理诊断造成相应的影响。结论：将快速脱钙液运用在临床病理检验中，可将切片质量显著提高，有推广运用意义。 关键词：临床病理检验；常用骨组织脱钙液；效果；比较 因骨组织中有大量钙盐沉淀，形成坚硬的结缔组织，实施直接切片治疗非常复杂，选取对保护骨组织形态结构有利并且制片效果较好的脱钙方式是当前重点研究的问题，这对临床检验中诊断病理有重要意义。当前众多研究中使用的改良脱钙方式较多，但具体何种方式可保证取得良好的检验效果仍不明朗[1]。为研究临床病理检验常用骨组织脱钙液的临床效果，选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例，现将结果报告如下： 1资料与方法 1.1一般资料选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例。将70例标本随机分成两组，每组35例。按照标本的差异把骨组织切取为体积是1.5×1.5×0.5cm的标本薄片，通常骨髓的直径为0.1cm，将所有标本放入到浓度为10%的福尔马林中固定24h，随后运用到脱钙实验中。 1.2方法 1.2.1对照组给予对照组标本使用硝酸脱钙液临床病理检验。硝酸脱钙液是5%的硝酸5ml溶于95ml蒸馏水中。脱钙步骤如下：（1）将大块骨组织切成小片，对小块骨组织标本无需改刀，随后放入到10%的福尔马林中固定24h，随后进行脱钙步骤。（2）将等待脱钙的标本放入到硝酸脱钙液中，其中脱钙液不能少于待脱钙标本体积的10倍。（3）在室温下脱钙骨髓的穿刺标本需要在30min-60min内完成；皮质骨脱钙标本需要在5d-7d内完成；指耻骨脱钙标本需要在3d-6d内完成。（4）脱钙之后的骨组织经过水冲洗后进行取材、脱水、透明、石蜡包埋、制片等一系列技术。 1.2.2观察组给予患者标本使用37%的8ml盐酸、5ml冰醋酸、10g水杨酸、87ml蒸馏水混合。使用微波炉加热可使组织内部分子运动加速并把脱钙的速度加快，因为标本在酸性溶液中滞留时间较短，因此对骨组织的副作用较小。具体脱钙步骤如下：（1）将大块骨组织切成小片，对小块骨组织标本无需改刀，随后放置到装有脱钙液的耐高温玻璃或者塑料容器内，脱钙液不得少于待脱钙标本总体积10倍。（2）随后把容器放入到功率为850W的医用微波炉中实施微波脱钙工作。（3）入微波炉之后使用高档加热5min使温度达到100℃，将骨髓的穿刺标本继续保留10min，把其他标本留置30min，对脱钙效果进行检查。（4）脱钙之后的标本不需要水洗，直接按照病理进行取材、脱水、透明、包埋、制片[2]。 2结果 使用快速脱钙液处理之后的标本组织切片的厚度在4μm-5μm之间，切片完整平坦，薄厚均匀并且颜色新鲜，细胞核有清晰染色，具体情况见图1；使用硝酸脱钙液处理的组织切片薄厚不均匀，没有完整切片，染色较模糊并且没有清晰的核着色，会对病理诊断造成相应的影响，具体情况见图2。 3讨论 脱钙是指使用物理或者化学的方式把骨组织成分中的胶原纤维以及钙盐分离，将钙盐去除。快捷、简单、有效的脱钙方式是当前医学研究中重点关注的问题。近年来，广大病理研究人员也进行了大量实验以及探索，比如当前在临床检验中使用的微波脱钙技术等方式，但是
福尔马林-EDTAEDTA脱钙液
福尔马林-EDTA脱钙液 货号：G2520 规格：500ml 保存：室温，避光，12个月 产品说明： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 主要由福尔马林、EDTA等组成，pH值约为7.2～7.4，相对于常规EDTA脱钙液，该试剂脱钙后对组织结构损害小，但脱钙速度更慢。其优点是：①经EDTA脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害比常规EDTA 脱钙液更小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。 操作步骤（仅供参考） 1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3.组织用蒸馏水清洗3次，每次20min。 4.组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10~30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置 于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，每周更换一次直至终点。 5.用蒸馏水冲洗数次。 6.常规脱水、包埋。 注意事项：
1.厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2.适当加温能加快脱钙的速度，一般维持在37～40℃，温度过高容易使骨组织松散解体，尤其不可大于 60℃。 3.脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以 免脱钙过长引起组织损害。 4.脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5.骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6.每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。
JYBL-Ⅰ脱钙液使用说明
JYBL-Ⅰ脱钙液使用说明 货号：G2470 规格：500mL 保存：室温避光保存，有效期12个月。 产品说明： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 JYBL-Ⅰ脱钙液主要由稀酸、甲醛、甲酸等组成。其优点是：①作用迅速，24～36h即可； ②对组织的结构损害小；③脱钙完全。该脱钙液特别适用于日常病理科骨组织标本的脱钙，但不宜用化学方法确定脱钙终点。 自备材料： PBS、蒸馏水、加热装置或微波炉 操作步骤(仅供参考)： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4、组织转移至20~30倍体积的JYBL-Ⅰ脱钙液中，脱钙24～36h。如果想加快脱钙速度，可
以置于37℃进行脱钙。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。 注意事项： 1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙24～36h即可。 2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附录：脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。
JYBL-Ⅲ脱钙液
JYBL-Ⅲ脱钙液 简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Leagene JYBL-Ⅲ脱钙液主要由甲醛、50%甲酸等组成。其优点是：①甲酸是最接近无机酸和有机酸临界线的一种有机酸，对组织的结构损害小；②脱钙完全。该脱钙液病理科特殊骨组织标本脱钙，如果在脱钙前对组织固定，效果更好。 组成： 自备材料： 1、 PBS 2、 蒸馏水 3、 加热装置或微波炉 操作步骤(仅供参考)： 1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。 2、 组织固定后，用PBS 清洗。 3、 组织用蒸馏水洗清洗。 4、 组织转移至JYBL-Ⅲ脱钙液中，脱钙24h 。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。 5、 用蒸馏水冲洗数次。 6、 常规脱水、包埋。 注意事项： 1、 厚度5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙24即可。 编号 名称 DD0018 DD0018 Storage JYBL-Ⅲ脱钙液 500ml 5L RT 避光 使用说明书 1份
2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。 相关： 编号名称 DB0082 改良番红O-固绿软骨染色液 DF0111 中性福尔马林固定液(10%) DG0005 糖原PAS染色液 DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 DZ0209 脱钙终点检测试剂盒(化学法) IH0091 多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
骨组织脱钙液介绍
骨组织脱钙液概述 在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。骨组织含钙量最多。除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。 为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。然后再行常规制片。 用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。 在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。 EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。对组织的渗透性差，作用慢。大剂量使用价格较贵。电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。 不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。EDTA 是一种相对较好螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织抗原性。经 EDTA 脱钙的组织可以进行免
OSTEOSENS脱钙液
OSTEOSENS脱钙液使用说明书 组织学中用于敏感脆弱组织脱钙 产品编号：OS-OT-1L (1000 ml) OS-OT-2.5L (2500 mL) 产品介绍 硬组织脱钙是显微分析的必要在标准组织学方法里，把样品完全浸入到脱钙液中。脱钙的时间主要由样品的大小和密度决定。该试剂含有EDTA，在组织脱钙期间可以结合钙离子。使组织变软以便于进一步处理。 测试样品敏感硬组织髂骨嵴(Latin Crista iliaca)和角化组织（血管）。 产品描述 OSTEOSENS脱钙液—在组织学中用于敏感脆弱组织的脱钙液，含有EDTA. 需准备的材料： 固定液：4%中性甲醛固定液、10%中性甲醛固定液 脱水/返水试剂：70%酒精 80%酒精 95%酒精 100%酒精 透明试剂：二甲苯或者二甲苯替代物（脂肪族烃） 包埋石蜡：BioWax Plus, BioWax 56/68, BioWax Blue, BioWax Micro 封片剂： BioMount, BioMount High, BioMount M, BioMount New, BioMount New Low, BioMount DPX, BioMount DPX High, BioMount DPX Low, BioMount DPX Low Eco, BioMount C, BioMount Aqua, 加拿大树胶 高品质载玻片：防脱载玻片、病理级载玻片 高品质盖玻片：标准级别尺寸范围 18×18mm -24×60mm 浸镜油：分为A, C, FF, 37 组织染色液 样品脱钙准备： ①组织样品首先需要被固定 ②组织样品要被完全浸入到OSTEOFAST 脱钙液，使其完全脱钙 脱钙步骤 髂骨嵴(Latin Crista iliaca)和其他硬组织 脱钙的时间和脱钙液的使用量依据处理样品的尺寸，类型，密度。15 x 9 x 3 mm 的髂骨嵴浸入50 ml OsteoSens 脱钙液 18-24小时 紧密的钙化组织 一块紧密的钙化组织1.5 x 1 x 0.3 cm)需花费 48-72 小时脱钙 注意：如果组织不要求用组织学方法处理，可以用OSTEOFAST 1脱钙液加快对骨硬组织的脱钙和固定 结束 例如：当髂骨嵴组织飘在脱钙液上脱钙即可结束。
EDTA 脱钙液 (pH 7.2 )使用说明
EDTA脱钙液（pH7.2）使用说明 货号：E1171 规格：100ml/500ml 保存：常温保存，有效期1年。 产品简介： 一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切除完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游的实验，如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解法脱钙。 EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 EDTA脱钙液优点： ①经EDTA脱钙的组织染色结果好； ②对组织的结构损害小； ③用化学方法测试可以确定脱钙的终点。 EDTA脱钙液缺点： ①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用； ②脱钙后组织会稍微变硬。 操作步骤： 1，骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。 2，组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。 3，组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。 4，组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。
5，用蒸馏水冲洗数次。 6，常规脱水、包埋。 注意事项： 1，厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2，适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3，脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4，脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5，骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6，每隔一段时间检测一次脱钙程度，避免脱钙过度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附录： 脱钙终点的测定（物理法）：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。