基因预测总结
1、基因预测
对于真菌来说有四个ab initio预测软件：
GlimmerHMM，SNAP，Genearkes,augustus 以及同源预测（homology）。四个软件中：GeneMarkes是通过隐马模型工作的，但是它不需要参考物种，是自身训练的，不需要参考序列，当处理一个新物种，没有理想的或者较近缘的已测序物种时可以采用这种方法。Augustus，GlimmerHMM，SNAP都需要参考训练集的。
总流程：
perl /nas/MG01/FUNGUS/PGAP/FGAP.pl [options] Genome.fa
Options
--all run all analysis for Fungi
--cutlen
--predict
augustus,genemarkes,snap,glimmerhmm or homology
--prepara
--repeat
--ncRNA
--rRNA_ref
--function
nr-swissprot-trembl-cog-kegg-iprscan
--lib
--synteny synteny analysis
--family Gene Family analysi
--species
--category
--cpu
--outdir
--prefix
--help output help information to screen
分步流程程序路径：/nas/MG01/FUNGUS/PGAP/gene-prediction/bin/gene-predict.pl
perl gene-predict.pl [options]
--glimmer run glimmer by self training
--genemark run genemark by self training
--shape
--snap
--genemarkes run genemarkes by self traning
--augustus
--homology
--genemarkM run genemarkM for mata gene prediction
--metagene run metagene for meta gene prediction
--metageneA run metageneA for meta gene prediction
--cpu
--run
--prefix
--outdir
--verbose output running progress information to screen
--help output help information to screen
1.1Genemarkes预测：
Self-training algorithm GeneMark-ES
a) splits input sequence at such "NN...N" strings
b) runs gene finding GeneMark.hmm on contigs
c) maps back predictions to original super-contig sequence As a result, incomplete gene structures can be predicted inside super-contig sequences.
Script：perl ./gene-predict.pl --genemarkes
GeneMarkES 输出结果为./genemark_hmm.gtf
1.2 Homology预测
Homology(同源预测）是通过基因组序列和参考蛋白集进行比对来确定基因位置的，预测的结果特点是基因数目少，但是准确率很高。通过genewise软件预测，用此方法需要提供近缘物种的氨基酸序列，由于同源预测的结果比真实的少，所以建议大家再用此方法时不要只找一个参考物种，多找几个近缘物种，尽量能多预测出一些基因来。
perl ./gene-predict.pl --homology ../input/CNGH2S.fa.pep -prefix RHO
*.pep 序列为参考序列的蛋白序列。
1. 3 SNAP预测
SNAP也是通过隐马尔科夫模型工作的，自身是没有现成的训练集的，需要参考物种进
行训练集的构建。如果要使用这个两个软件，必须寻找一个参考物种，得到它的基因组序列和基因位置信息的gff文件，自己来构建训练集来进行预测
SNAP基因预测包括两步：
Step 1：参考物种训练集的构建。训练结果为*.hmm文件。
perl /nas/MG01/FUNGUS/PGAP/gene-prediction/bin/train_snap.pl
Step 2 :
perl ./gene-predict.pl --snap .. /SNAP/train/gram.hmm --prefix RHO
1. 4 Augustus预测
Augustus运用隐马尔科夫模型，隐马模型ab initi o预测。基本要素包括两个状态（观察状态、隐含状态）和三个概率（初始概率、转移概率和两态对应概率）。模型在DNA序列和基因结构上定义了一个概率分布，采用的是维特比算法。Augustu s自带了真菌的48个训练集，大家可以选择较近缘的物种来进行预测，当自带的训练集中没有和目标基因组近缘或者亲缘关系都特别远不太理想时，这时可以自己寻找一个参考物种，得到它的基因组序列和基因位置信息的gff文件，自己来构建训练集来进行预测。
第一种情况：如果自带的训练集中有和目标基因组近缘，可以用Augustus自带的训练集进行预测。
perl ./gene-predict.pl –augustus saccharomyces_cerevisiae_S288C
说明：saccharomyces_cerevisiae_S288C 为augustus自带46个训练集其中的一个标签。Augustus训练集路径为：/nas/MG01/liule/bin/software/augustus.2.5/config/。
第二种情况：如果自带的训练集中没有和目标基因组近缘或者亲缘关系都特别远不太理想时，可以自己寻找一个参考物种，得到它的基因组序列和基因位置信息的gff文件，自己来构建训练集来进行预测。自己构建的训练结果会添加到Augustus自带的训练集中以—species 命名。
perl /nas/MG01/liule/bin/software/augustus.2.5/scripts/autoAugTrain.pl --genome=/path/ref.seq --trainingset=/path/ref.gff --species =Curvularia_lunata –useexisting
--genome ：近源物种的参考序列的绝对路径
--trainingset ：参考序列的gff 文件的绝对路径
--species ：物种名字，自己命名。
--useexisting 如果它们存在species，使用和改变目前的配置和参数文件。
1.1.5 GlimmerHMM预测
GlimmerHMM，自身是没有现成的训练集的，需要参考物种进行训练集的构建。如果要使用这个软件，必须寻找一个近源性非常高的参考物种，得到它的基因组序列和基因位置信息的gff文件，自己来构建训练集来进行预测。
Step1 ：参考物种训练集的构建。
Script ：/nas/MG01/FUNGUS/PGAP/software/GlimmerHMM/train/trainGlimmerHMM
contained in the
blank line; I am assuming a format like below:
seq1 5 15
seq1 20 34
seq1 50 48
seq1 45 36
seq2 17 20
Step 2: 用构建的训练集进行预测
perl ./gene-predict.pl --glimmerhmm /path/train
/path/train ：自己训练的结果文件的绝对路径
1.2 基因预测结果说明
基因预测结果主要包括*.cds *.pep *.gff 文件。
基因的CDS序列（Fasta形式）：
>P40GL001 locus=Scaffold3:607:783:-
ATGGGGTCAACATGCTGGGA…TAG
基因的氨基酸序列（Fasta形式）：
>P40GL001 locus=Scaffold3:607:783:-
MLTLLWDLNMLGRLPMTLGPLEGVRLTLDLPRLTDLLGE
RIRAGALTASP
参考序列GFF文件格式：
NC_001133 GenBank CDS 151099 151168 . - . Parent=YAL001C; GFF 文件为存文本文件，由tab键隔开的9列组成
Column 1 ：序列得编号，在一个GFF文件中必须唯一。
Column 2 ：注释信息的来源，比如”Genescan”、”Genbank” 等，可以为空，为空用”.”点号代替
Column 3: “type”
注释信息的类型，比如Gene、cDNA、mRNA等，或者是SO对应的编号
Columns 4 & 5: “start” and “end”
开始与结束的位置，注意计数是从1开始的。结束位置不能大于序列的长度
Column 6: “score”
得分，数字，是注释信息可能性的说明，可以是序列相似性比对时的E-values值或者基因预测是的P-values值。”.”表示为空。
Column 7: “strand”
序列的方向，+表示正义链, -反义链, ? 表示未知.
Column 8: “phase”
仅对注释类型为“CDS”有效，表示起始编码的位置，有效值为0、1、2。
Column 9: “attributes”
以多个键值对组成的注释信息描述，键与值之间用”=“，不同的键值用”;“隔开，一个键可以有多个值，不同值用”,“分割。注意如果描述中包括tab键以及”,=;”，要用URL转义规则进行转义，如tab键用%09代替。键是区分大小。
Seq.file 是组装结果补洞，优化，重命名、排序之后的FASTA 文件。FASTA 文件格式如下：>Scaffold1 length=1691990
AGGGCGGCGCGCCCGACGCCGAGGCCGCCGCCCTCTGGCTCATCCAGCGC
TGGCGTGCGGGCCACCTCGGTCGCTTCGTCCTCGATCCCGTGACGGAGGAC
基因工程知识点总结归纳(更新版)
基因工程 绪论 1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。作动词：基因的分离和重组的过程。 2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。供体、受体和载体是基因工程的三大要素。 3、基因工程诞生的基础 三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。 三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现 3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶 1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。 2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数 3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割 4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。 5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。 6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。 7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。 8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。 9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。
最新基因工程笔记总结
第二章Enzymes 第四节DNA连接酶Ligase 一、DNA连接酶的发现 二. 连接条件 必须是两条双链DNA。 DNA3’端有游离的-OH，5’端有一个磷酸基团（P）。需要能量。 三、连接反应的机理 1、A TP（NAD+)提供激活的AMP。 2、A TP与连接酶形成共价“连接酶-AMP”复合物，并释放出焦磷酸PPi。 3、AMP 与连接酶的赖氨酸-氨基相连。 4、AMP 随后从连接酶的赖氨酸-氨基转移到DNA 一条链的5’端P上，形成“DNA-腺苷酸”复合物。 5、3’-OH对磷原子作亲核攻击，形成磷酸二脂键，释放出AMP。 Ligase：只连“Nick切口”，不连“Gap缺口” 四. 两种DNA连接酶 1. E. Coli DNA ligase 来源：E.coli 适用：粘性末端（PEG与高浓度一价阳离子存在可连平末端） 2. T4 ligase 来源：T4 phage 适用：粘性末端及平末端 T4 vs. E.coli T4 DNA ligase制备容易，价格便宜，能进行各种类型连接反应，应用更广泛！ 五.Ligase的反应温度 最佳温度： 界于酶作用速率和末端结合速率之间，一般认为是4-15℃比较合适。 六. DNA分子连接的四种形式 1. 粘性末端； 2. 平末端； 3. 平末端加尾； 4. 平末端加衔接物(linker)或接头(adaptor) (1)Digestion and Ligation 1．粘性末端连接 Problem: (自我环化作用) 解决方法：a、双酶切（两种内切酶）b、去磷酸 2.平末端连接 粘性末端连接效率高于平末端约100倍！ 解决方法：化平末端为粘性末端 3. 平末端连接---同聚物加尾法（1）末端脱氧核苷酸转移酶 功能：5’至3’单链聚合 作用特点：单链；无模版 作用机理： a: 用5’-特异的核酸外切酶处理DNA分子，以便移去少数几个末端核苷酸, 获得3’-OH的单链延伸末端。 b: 加入dA TP/dTTP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3-OH末端将会出现单纯由poly(dA)和poly(dT)组成的DNA单链延伸。 c: 获得poly(dA)和poly(dT)尾巴，就会彼此连接起来。缺点： 当poly(dA)，Poly(dT)不严格等长时,重组DNA分子会有缺口。 需要用DNA聚合酶I填补，然后用DNA连接酶连接最后的缺口。 4. 平末端连接 ---衔接物连接法与接头连接法 (1) 平末端的衔接物连接法 衔接物的5’末端和待克隆的DNA片段的5’-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化。通过T4 DNA连接酶的作用使两者连接起来。用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子。 (2) 平末端的接头连接法 将具有某种限制性酶(BamHI)粘性末端的典型DNA 接头分子与平末端的DNA片段连接后，后者变成具有粘性末端的DNA分子。 七.热稳定的DNA连接酶——来自嗜热高温放线菌 热稳定的DNA连接酶的应用： 寡核苷酸连接测定法（oligonucleotide ligation assay, OLA） 连接酶链式反应（ligation chain reaction, LCR） 寡核苷酸连接测定法的作用 检测突变 寡核苷酸连接测定法的作用：检测突变。 1. 寡核苷酸连接测定法 （1）原理: 两条寡聚核苷酸探针分子，同一种与之互补变性的靶DNA之间的杂交作用,这两条寡聚核苷酸探针分子在靶DNA分子上的位置是彼此相邻的。 当他们同靶DNA链是完全碱基配对时，便可以被连接酶连接起来。 结合点或靠近结合点处存在和靶DNA错配的碱基两个探针之间不能形成磷酸二脂键。 精品文档
专题一、基因工程知识点归纳
专题一基因工程 一【高考目标定位】 1、专题重点：DNA重组技术所需的三种基本工具；基因工程的基本操作 程序四个步骤；基因工程在农业和医疗等面的应用；蛋白质工程的原理。 2、专题难点：基因工程载体需要具备的条件；从基因文库中获取目的基 因；利用PCR技术扩增目的基因；基因治疗；蛋白质工程的原理。 二【课时安排】2课时 三【考纲知识梳理】 第1节DNA重组技术的基本工具 教材梳理： 知识点一基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 注意：对本概念应从以下几个面理解： 知识点二基因工程的基本工具 1.限制性核酸切酶——“分子手术刀” （1）限制性切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。 （2）限制性切酶的作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。（3）限制性切酶的切割式及结果：①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 2.DNA连接酶——“分子缝合针” （1）来源：大肠杆菌、T4噬菌体 （2）DNA连接酶的种类：E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 （3）作用及作用部位：E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸
二酯键，T4DNA连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。注意：比较有关的DNA酶 （1）DNA水解酶：能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基 （2）DNA解旋酶：能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意：使DNA解成两条长链的法除用解旋酶以外，在适当的高温（如94℃）、重金属盐的作用下，也可使DNA 解旋。 （3）DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。（4）DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。 3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” （1）分子运载车的种类：①质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中，是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子，独立于拟核之外。②病毒：常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。 （2）运载体作用：①是用它做运载工具，将目的基因转运到宿主细胞中去。②是利用它在受体细胞对目的基因进行大量复制。 （3）作为运载体必须具备的条件：①在宿主细胞中保存下来并大量复制②有多个限制性切酶切点③有一定的标记基因，便于筛选。 思维探究：知识点3、4、5主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具及其作用。限制酶──“分子手术刀”，主要是介绍限制酶的作用，切割后产生的结果。在这部分容学习时，应关心的问题之一是：限制酶从哪里寻找？我们可以联想从前学过的容──噬菌体侵染细菌的实验，进而认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭，有保护机制？进而联想到可能是有什么酶来切割外源DNA，而使之失效，达到保护自身的目的”。这样就对“限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的认识提高了一个层次。 基因进入受体细胞的载体──“分子运 输车”的学习容，不能仅仅着眼于记住这几个 条件，而应该深入思考每一个条件的涵，通过 深思熟虑，才能真正明确为什么要有这些条件 才能充当载体。 教材拓展： 拓展点一限制酶所识别序列的特点 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱
基因工程简答题总结
基因工程原理复习题思考题 5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。 同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。 同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。 不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。） 6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？ 类型：DNA连接酶和RNA连接酶 异同点： 相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。 不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。 7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。（传说中的网上答案） 1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。 2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。 3、足够多的载体和插入片段是最重要的。 4、平端的连接对于离子浓度很敏感 5、尽可能缩小连接反应的体积 6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好 8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？ 1）大肠杆菌DNA聚合酶 2）Klenow fragment 3）T7 DNA聚合酶 4）T4 DNA聚合酶 5）修饰过的T7 DNA聚合酶 6）逆转录酶 7）Taq DNA聚合酶 第四章基因克隆的载体系统 1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？ 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）； 具有合适的筛选标记； 具有较高的外源DNA的载装能力； 具有多克隆位点（MCS）； 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。 3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？ 基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。 4、质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？
生物选修3专题1 基因工程知识点复习学案
专题1 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过________________________，赋予生物以 _____________________，创造出______________________________________。基因工程是在____________上进行设计和施工的，又叫做__________________。 1. （1 （2 （3 2. (1)两种DNA ②区别：E· (2)与DNA 酸二酯键。 3. （1 （2 _____________________的双链___________DNA （3）其它载体： _________________________________ (二)基因工程的基本操作程序 第一步：__________________________ 1.目的基因是指： ______________________________________________________ 。 2.目的基因可采取_______________-获得，也可以用_____________________。人工合成目的基因的常用方 法有________________和_________________。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理：_____________________ 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是________________，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 _______________。此方法的受体细胞多是 ____________。将目的基因导入微生物细胞：★原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少， 最常用的原核细胞是 ____________，其转化方法是：先用 ________处理细
基因工程技术 笔记整理
基因工程技术：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转移等技术，有目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。 质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、共价闭合环状DNA分子cccDNA，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中，它具有自主的复制和转录系统。质粒在细胞内的复制一般有二种：紧密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子；后者在整个细胞周期中随时可以复制，在每个细胞中有许多拷贝。 质粒的不相容性：利用共同复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共存。 从细胞中分离质粒DNA 的方法都包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞；分离和纯化质粒DNA。 溶菌酶：破坏菌体细胞壁；SDS和Triton X-100：使细胞膜裂解。 染色体DNA通常用于构建基因组文库和Southern杂交等。 基因组DNA的提取 植物基因组DNA提取：提取缓冲液（Tris.Cl—保持pH,EDTA,NaCl,SDS），氯仿/戊醇/乙醇溶液—沉淀和抽提DNA，异丙醇—沉淀DNA（提染色体），TE（Tris.Cl,EDTA）--溶解DNA，RNase—保存液，降解RNA，NaAC—加盐，70%乙醇—漂洗。 细菌基因组DNA提取：SDS，蛋白酶K，氯仿：异戊醇（24：1）-- 沉淀DNA，苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）-- 抽提，70%乙醇—漂洗，TE,NaCl—调节离子强度，RNase A，CTAB/NaCl 溶液—CTAB--一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，异丙醇/无水乙醇—沉淀上清液。 总RNA制备 mRNA的分子结构容易受到RNA酶的攻击反应而降解，加上RNA 酶极为稳定而且广泛存在，因此，在提取过程中应严格防止RNA 酶的污染并设法抑制其活性，这是实验成败的关键。仪器—玻璃器皿：200℃烘2h，塑料器皿：DEPC水液处理—所有器皿最后硅烷化处理。 RNA酶抑制剂：DEPC--强烈但不彻底，与氨水溶液混合会产生致癌物；异硫氰酸胍--最有效，使RNA酶失活；其他--RNA酶蛋白抑制剂（RNasin）SDS, 尿素等。 细胞内总RNA制备方法：异硫氰酸胍热苯酚法、酚/SDS法、Trizol法。（均先将组织在液氮中研磨成粉末） 异硫氰酸胍热苯酚法：异硫氰酸胍(GIT)与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性，GIT与十二烷基肌氨酸钠(Sarcosyl)作用使蛋白质变性。 酚/SDS法：用酚和SDS破碎细胞和去除蛋白质，用LiCl选择沉淀RNA以去除DNA 和其它不纯物。 Trizol法：Trizol试剂（含酚、异硫氰酸胍和溶解剂等）。 mRNA提取 制备mRNA原理：分离的总RNA 可利用mRNA3’端含有poly(A)的特点，用oligo(dT)纤维素柱分离，当RNA流经oligo(dT)纤维素柱时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异的吸附在oligo(dT)纤维素上，然后逐渐降低盐浓度洗脱，在低盐溶液或蒸馏水中，mRNA被洗下。然后经过两次oligo（dT）纤维素柱，可得到较纯的mRNA。纯化的mRNA在70%乙醇中-70℃可保存一年以上。（上样buffer和洗脱buffer）。溶液中无盐时要沉淀RNA，必须加盐NaAC。 琼脂糖凝胶电泳 DNA凝胶电泳：琼脂糖-- 分离DNA片段大小范围广；聚丙烯酰胺-- 小片段，分辨力高。
【知识学习】学校开展“缅怀革命先辈,传承红色基因”活动总结
学校开展“缅怀革命先辈,传承红色基 因”活动总结 “清明时节雨纷纷，路上行人欲断魂。”当一年一度的清明节到来之际，为加强我校学生的传统文化教育，使学生了解我国的传统节日——清明节，从中受到深刻的思想教育，牢记中华民族历史，弘扬爱国主义精神，珍惜美好幸福生活，我校马立文校长特组织了以“缅怀革命先辈，传承红色基因”为主题的清明节纪念英雄系列活动。主要想通过此活动，使同学们在潜移默化中继承和发扬革命优良传统，不断深化爱党、爱家乡、爱祖国的革命情感；引导党员、同学们树立正确的世界观，人生观，价值观，促进学校精神文明与和谐校园的建设，激励同学们刻苦成才，立志报国。现将我校开展此次活动总结如下： 4月2日上午开展“网上祭英烈文明过清明”活动。各班少先队员由中队辅导员组织登录广西文明网“八桂未成年人频道”为先烈留言、敬献鲜花、抒写感言寄语等。通过这种网上鲜花留言方式，表达对先烈的感恩和敬仰。 4月2日下午各班中队辅导员举行以“怀缅革命先烈，传承红色基因”为主题的班会课。中队辅导员向同学们介绍了革命先烈的英雄事迹，让同学们了解更多烈士的感人事迹， 并精心准备了丰富多彩的节目，有诗歌朗诵、革命歌曲
大合唱、讲英雄故事等。他们通过丰富多彩的节目表达自己对先烈的敬佩之情。 4月3日早上，迎着明媚的阳光，踏着坚定的脚步，和平镇中心校向日葵中队全体队员在马立文校长的带领下，和人民政府的人员一同前往和平镇的烈士墓去扫墓。怀着无比崇敬的心情，我们来到了和平镇革命烈士纪念碑前。回忆烈士们的光辉历程，怀缅他们为党和人民作出的伟大贡献和不朽的精神。活动刚开始，仪式第一项：向烈士纪念碑敬献花篮及花圈。玉副镇长作了重要简短的讲话后，苏书记、姚芳然退伍老兵和学生代表向烈士墓敬献鲜花。 第二项：权老兵发表讲话。我们在认真的倾听，用心在体会革命烈士们勇于牺牲的崇高品质。 第三项：马校长、学生、政府人员、退伍老兵等代表向革命烈士墓上香点炮。表达了对烈士的无限怀念和敬仰。今天的幸福生活来之不易，是无数革命先烈用生命和鲜血换来的，先烈们的精神永远值得我们学习。 活动最后一项：全体代表人员向烈士默哀三分钟。师生们的表情变得更加庄严而凝重。此时此刻，每个人都陷入了沉思。为了这片美丽国土的新生，为了中华民族的伟大复兴，无数的革命先烈倒在了通往胜利的道路上。今天，战火纷飞的年代已经渐渐远离了我们，硝烟已散，战鼓已息，甚至在某些人的心中他们的形象都日渐模糊，但他们的精神不应被
基因工程复习笔记
第一章 一、电泳 电泳(eletrophorosis) :带电荷的分子在电场中以一定的速率向与其电荷性质相反的电极移动.移动速度称为电泳迁移率。 影响因素：1 电泳迁移率同电场的强度和分子本身所带的净电荷数目成正比。 2. 电泳迁移率同分子与介质的摩擦系数成反比。 3当电场强度一定,电泳介质相同,电荷相同的分子在电场中迁移的速度主要取决于分子本身的大小和形状(构型)。 4分子形状相似的分子的迁移速度主要与分子量相关: 分子量越大，移动越慢。 指示剂：溴酚蓝（Bb）：常用指示剂。分子量670，分子筛效应小，近似于自由电泳，呈蓝紫色。二甲苯青(Xc)：分子量554.6，呈蓝色，迁移速度比Bb慢。 染料：溴化乙锭（EB） 1、聚丙烯酰胺凝胶电泳优点：比琼脂糖凝胶的分辨率高的多；回收DNA样品纯度高，无色透明，韧性好，银染的凝胶干燥后可长期保存；能装载的DNA量大，达每孔10μgDNA。 2 、SDS-PAGE 原理：SDS是蛋白质的变性剂，使煮沸变性的蛋白质维持线性状态，并与蛋白质结合，使蛋白质带上相同密度负电荷。SDS与蛋白质结合使蛋白质构象改变，成为形状近似雪茄状的长椭圆棒，SDS-蛋白质复合物短轴相同，而长轴与蛋白质的分子量成正比。
蛋白质-SDS复合物电泳的迁移率不受蛋白质原有电荷和形状的影响，只与椭圆棒的长度，即蛋白质分子量有关。 二、PCR技术 定义：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术，以DNA为模板，在引物、dNTPs、Taq酶的作用下，经变性－退货－延伸反复循环，使某个基因在体外特异性地扩增。 PCR法的原理也是利用人工合成带突变位点的诱变引物，通过PCR 扩增而获得定点突变的基因或DNA片段。 影响因素：（1）Taq DNA聚合酶（具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，但没有3’→5’外切酶活性因此不能修复错误的碱基配对）。 （2）引物（primer）一般引物设计为长15—30bp；位置与待扩增的模板DNA区段的两3’端序列互补（5‘端相同）的短DNA；引物的碱基组成：尽可能提高G+C含量，避免连续相同碱基排列或内部回文序列，避免形成引物二聚体。 （3）引物的Tm值：实际复性温度选择低于Tm值5 oC。 （4）dNTPs 含量适中 （5）Mg 2+ 的浓度 （6)对照实验 三、PCR技术的扩展：反向PCR：不对称PCR：差异显示PCR。反向PCR 原理：扩增两个引物外侧的未知序列，使引物的外侧序列“转变” 成内侧序列。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA，
小学“红色基因传承行动”活动总结
小学“红色基因传承行动” 主题教育活动总结 “要让红旗飘万代，重在教育下一代”是学校德育工作的基石，为引导未成年人学习和弘扬爱国主义精神，学校组织全校师生开展了"红色基因传承行动"为主题的教育活动，此次活动重在贯彻落实习近平总书记关于“红色基因传承”讲话精神。坚持立德树人的教育任务，同时也提升了学生的道德素养。我校将教育活动与日常教育教学紧密结合，注重活动的覆盖面和受教育面，围绕此次主题，我校开展了启动仪式、读书征文、文艺大赛、电影展播、社会实践、表彰奖励等活动。 1.11月13日，小学组织全校师生举行了"红色基因传承行动"主题活动启动仪式。王校长主持召开启动仪式，少先队辅导员对学生进行爱国主义教育，宣讲"红色基因传承行动"活动内容，并号召同学们积极参与活动。 2.11月14日下午，学校组织三至六年级学生开展"红色基因"为主题的作文竞赛活动，评选优秀作文，进行表彰。 3.11月21日下午，学校带领五年级的学生，就我们学校周围老年人的生活现状展开了相关调查。学生打扫老人屋的卫生、帮老人洗了衣服、并听老人讲了革命故事，从而激发学生对老人的关爱之情，引导学生在实际生活中从身边的
小事做起，尊敬老人、关爱老人，弘扬优良传统、传承红色基因。。 4.11月27日早上，组织学生进行升旗仪式，升旗仪式结束后，举行了"红色基因传承"为主题的演讲比赛，学生通过聆听感受到"红色基因传承"活动开展的重要性，对学生是一次深刻的爱国主义教育。 5.11月30日下午，学校安排各班利用电子白板播放革命题材电影，播放要求各班进行讨论，感受革命年代的艰苦、革命先烈的英勇献身精神、新中国建立的来之不易，珍惜今天的幸福生活。 6.12月1日下午，我校开展"红色基因传承行动"表彰活动，激发了学生的民族情怀,形成以爱国为根本的社会主义核心价值观。 此项活动是我校对学生进行爱国主义教育的重要途径，也是提升学生道德素养的一个平台，将不断引导孩子们崇德向善，积极践行社会主义核心价值观。"红色基因传承"从基础抓起，从源头抓起，充分发挥先进典型的带动作用，培养少先队员树立正确的世界观、人生观、价值观，使青少年按照党的要求健康成长，从小牢固树立共产主义远大理想，为社会主义事业输送高质量的合格建设者和可靠接班人。 小学 2017年12月
专题1基因工程知识点梳理(含教材答案)
专题1 基因工程 ※基因工程的概念： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 ﹡原理：基因重组 ﹡目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 ﹡意义：能够打破生物种属的界限（即打破生殖隔离，克服远源杂交不亲和的障碍），在分子水平上定向改变生物的遗传特性。 ﹡操作水平：DNA分子水平 【思考】： （1）基因工程的物质基础是：所有生物的DNA均由四种脱氧核苷酸组成。 （2）基因工程的结构基础是：所有生物的DNA均为双螺旋结构。 （3）一种生物的DNA上的基因之所以能在其他生物体内得以进行相同的表达，是因为它们共用一套遗传密码子。 一、基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端（回文结构特点）。 ①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。 ②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）分类：根据酶的来源不同，可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类 （2）功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ★两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 (3)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 （4）与DNA分子相关的酶
【范文】学校开展“缅怀革命先辈,传承红色基因”活动总结
学校开展“缅怀革命先辈,传承红色基因” 活动总结 “清明时节雨纷纷，路上行人欲断魂。”当一年一度的 清明节到来之际，为加强我校学生的传统文化教育，使学生 了解我国的传统节日——清明节，从中受到深刻的思想教育，牢记中华民族历史，弘扬爱国主义精神，珍惜美好幸福生活，我校马立文校长特组织了以“缅怀革命先辈，传承红色基因”为主题的清明节纪念英雄系列活动。主要想通过此活动，使 同学们在潜移默化中继承和发扬革命优良传统，不断深化爱党、爱家乡、爱祖国的革命情感；引导党员、同学们树立正 确的世界观，人生观，价值观，促进学校精神文明与和谐校 园的建设，激励同学们刻苦成才，立志报国。现将我校开展 此次活动总结如下： 4月2日上午开展“网上祭英烈文明过清明”活动。各 班少先队员由中队辅导员组织登录广西文明网“八桂未成年 人频道”为先烈留言、敬献鲜花、抒写感言寄语等。通过这 种网上鲜花留言方式，表达对先烈的感恩和敬仰。 4月2日下午各班中队辅导员举行以“怀缅革命先烈， 传承红色基因”为主题的班会课。中队辅导员向同学们介绍 了革命先烈的英雄事迹，让同学们了解更多烈士的感人事迹，并精心准备了丰富多彩的节目，有诗歌朗诵、革命歌曲 大合唱、讲英雄故事等。他们通过丰富多彩的节目表达自己
对先烈的敬佩之情。 4月3日早上，迎着明媚的阳光，踏着坚定的脚步，和平镇中心校向日葵中队全体队员在马立文校长的带领下，和人民政府的人员一同前往和平镇的烈士墓去扫墓。怀着无比崇敬的心情，我们来到了和平镇革命烈士纪念碑前。回忆烈士们的光辉历程，怀缅他们为党和人民作出的伟大贡献和不朽的精神。活动刚开始，仪式第一项：向烈士纪念碑敬献花篮及花圈。玉副镇长作了重要简短的讲话后，苏书记、姚芳然退伍老兵和学生代表向烈士墓敬献鲜花。 第二项：权老兵发表讲话。我们在认真的倾听，用心在体会革命烈士们勇于牺牲的崇高品质。 第三项：马校长、学生、政府人员、退伍老兵等代表向革命烈士墓上香点炮。表达了对烈士的无限怀念和敬仰。今天的幸福生活来之不易，是无数革命先烈用生命和鲜血换来的，先烈们的精神永远值得我们学习。 活动最后一项：全体代表人员向烈士默哀三分钟。师生们的表情变得更加庄严而凝重。此时此刻，每个人都陷入了沉思。为了这片美丽国土的新生，为了中华民族的伟大复兴，无数的革命先烈倒在了通往胜利的道路上。今天，战火纷飞的年代已经渐渐远离了我们，硝烟已散，战鼓已息，甚至在某些人的心中他们的形象都日渐模糊，但他们的精神不应被忘记，也决不能被忘记，因为这是他们留给我们的最宝贵财
基因工程知识点超全
基因工程 一、基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 二、基因工程的基本工具 1、限制性核酸内切酶-----“分子手术刀” 2、DNA连接酶-----“分子缝合针” 3、基因进入受体细胞的载体-----“分子运输车” 1．“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）存在：主要存在于原核生物中。 （2）特性：特异性，一种限制酶只能 识别一种特定的核苷酸序列，并且能在 特定的切点上切割DNA分子。 （3）切割部位：磷酸二酯键 （4）作用：能够识别双链DNA分子的 某种特定核苷酸序列，并且使每一条链 中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键断开。
（5）识别序列的特点： （6）切割后末端的种类：DNA 分子经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端。当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA 的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的则是平末端。
2．“分子缝合针”——DNA连接酶 （1）作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。 （2）类型 相同点：都连接磷酸二酯键 3．“分子运输车”——载体 (1)载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 (2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (3)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。 (4)载体的作用: ①作为运载工具，将目的基因送入受体细胞。 ②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 【解题技巧】 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3)在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 (4)获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生4个黏性末端或平末端。 (5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。 (6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 (7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子，能将目的
最新基因工程细胞工程知识点汇总
基因工程细胞工程知识点汇总 一、基因工程 （一）基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，
供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理：DNA双链复制 （2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。
《基因工程》专题复习总结
专题1 基因工程 知识体系构建 专题整合 一、基因工程的基本工具 A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、载体 B.为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体细胞 C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功表达 二、基因工程的操作程序 1.目的基因的获取 （1）目的基因：指编码蛋白质的结构基因。 （2）获取方法：从基因文库获取，原核基因也可直接分离获得；真核基因主要是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 2.基因表达载体的构建 （1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 （2）组成：启动子＋目的基因＋标记基因＋终止子。 ①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。 ②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 ③标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。 3.将目的基因导入受体细胞
A.提取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因与载体结合→目的基因的检测与鉴定 B.目的基因的检测与鉴定→提取目的基因→目的基因与载体结合→目的基因导入受体细胞 C.提取目的基因→目的基因与载体结合→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 D.目的基因与载体结合→提取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 三、蛋白质工程 1.蛋白质工程流程 2.蛋白质工程与基因工程的区别：蛋白质工程的本质是通过改造基因进而形成自然界不存在的蛋白质，所以被形象地称为第二代基因工程；基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。 训练3 利用蛋白质工程改造天然蛋白质，进而改变其功能，可获得毒副作用减小，专一性、药效和稳定性都增强的理想的药物。如胰岛素是治疗依赖型糖尿病的特效药物，但是天然胰岛素在人体内寿命只有几小时，重症病人每天得注射好几次药物，给病人增加了不便和痛苦。通过蛋白质工程改变胰岛素的空间结构，以延长胰岛素的半衰期，得到长效胰岛素；还可以在不改变胰岛素活性部位结构的前提下，增强其他部位结合强度，使之难以被酶破坏，从而增强其稳定性。 （1）若要批量生产以上提到的长效胰岛素，根据所学知识，需要用到哪些生物工程（ ）
中学“传承红色基因”系列教育实践主题活动总结【精品范文】
中学“传承红色基因”系列教育实践主题活动总结 中学“传承红色基因”系列教育实践主题活动总结 为深入贯彻市、县宣传部、文明办清明期间开展祭奠革命先烈主题教育活动的通知精神，文安一中组织开展了“清明时节雨，缅怀英烈魂”主题系列教育实践活动，利用本学期第七周的五天时间组织学校师生瞻仰革命先烈、缅怀先烈伟绩，同时广泛开展了形式多样的祭拜革命先烈活动，引导全体师生在慎终追远、缅怀先辈的情怀中认知传统、尊重传统、继承传统、弘扬传统，增进了学生爱党、爱国、爱社会主义的情感。 活动时间：4月1日-4月5日 活动内容： 1、举行“学先烈，敬先贤，忆先人”升旗仪式 基础年级的师生在运动场举行了“学先烈，敬先贤，忆先人”升旗仪式，深切缅怀在百年中国解放与发展中英勇捐躯的先烈英模和先贤志士，教育学生传承优秀文化传统、弘扬中华民族精神。
2、举办“缅怀革命先烈、弘扬民族精神”主题班会 高二年级各班利用班会时间组织学生开展了“缅怀革命先烈、弘扬民族精神”为主题的班会，对学生进行革命传统教育和民族精神教育。 3、高一年级举行了“清明时节雨，缅怀英烈魂”烈士陵园祭扫宣传活动，同时参观纪念馆。 4、开展了“感恩在行动”活动 号召学生在清明节假期，帮父母做一件有意义的事情，敬老助困、关爱社会等活动，广泛开展了爱国主义教育和感恩教育。 5、举办了“忆先烈伟绩，寄后人哀思”网上祭扫活动 我校高一年级师生充分利用网络平台“网上祭英烈---中国文明网”开展活动，搭建起了“网上祭英烈”互动平台，开展网络访谈。部分教职员工登陆相关网站撰写了自己的体会，发表感言心声，表达了对先烈的感恩和敬仰，学生在教研组利用电脑开展上网祭扫活动。
高中生物基因工程核心知识点
高中生物基因工程核心知识点 专题1 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E?coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E?coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
基因工程总结
简述Southern blot,northern blot,western blot的原理，比较它们的不同. 答：Southern Blot 原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。DNA => 琼脂糖电泳=> 印迹转移=> 预杂交=> 杂交（变性探针）=> 洗膜=> 放射自显影或显色Northern Blot 原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 mRNA提取=> 甲醛变性电泳=> 印迹转移=> 预杂交=> 杂交（变性探针）=> 洗膜=> 放射自显影或化学发光 Western Blot 与 Southern Blot或 Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 不同：所用于分析的对象不同。 Northern杂交用于分析RNA； Southern杂交用于分析DNA； Western杂交用于分析蛋白质。 转基因动物与转基因植物的产生有什么不同？ 答：技术原理相同，用转基因技术将具体特殊经济价格的外源基因导入动植物体内，不但表达出人类所需要的优良性状（如抗虫，抗病，抗除草剂，抗倒伏，产肉，产蛋量高）,还可以通过蛋白质重新组合得到新的品种。但是，对动物和植物进行目的基因导入的方法不同。动物一般采用显微注射法将带有目的基因的病毒注入细胞；而植物一般采用农杆菌转化法或基因枪法将目的基因导入受体细胞。