多糖的分子量测定

多糖的分子量测定

常用的是凝胶滤过法。将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱，用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡，然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱，同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱，分步收集，苯酚-硫酸法监测，分别求得洗脱体积Ve，然后再将兰葡聚糖（M V>200万）上同一条柱，求出柱的空体积V o，根据V e/V o与logM之间存在着线性关系，可绘制标准曲线。最后，将待测样品按上述不变的条件上柱，求得待测多糖的V e。通过标准曲线上的V e/V o，查得待测多糖的分子量对数，便可求出M。

对于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。亦有用蒸汽压渗透法（VPO，基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律，参考文献：崔锡红, 等. 蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 骆传环. 蒸气压渗透计测定多糖分子量. 现代科学仪器, 1994, 4:11.）、超速离心法（骆传环, 等. 香姑多糖的分子量测定. 科学技术与工程. 2006, 6(8): 1058~1060）、光散射法（LS，光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射，垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比。参考文献：魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：lgM W=k-bX，式中：M W为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。应用如，将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，以标准蛋白质的迁移率为纵坐标，lgM为横坐标，绘制相对分子质量曲线。根据样品迁移率得出相对分子质量。）测分子量，黏度法及超滤法估计分子量。利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证，同时也是对多糖纯度的考察。在测定过程中要注意标准品的选择，尽量使用与被测多糖结构相似的标准品，因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。

多糖分子量的测定没有一种绝对的方法，其分子量只代表相似链长的平均配比而不是确切的分子大小。往往用不同的方法会得到不同的分子量。

(完整版)粗多糖的测定方法

粗多糖的测定方法(1) 1. 原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。 （8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 粗多糖的测定方法(2) 5. 操作方法 5.1 样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/L NaOH 2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。 （4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL（V5）。准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备：

超声波法提取香菇多糖实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除超声波法提取香菇多糖实验报告 篇一：超声波提取香菇多糖汇报 项目名称： 超声波提取香菇多糖 【工作汇报】 超声波提取香菇多糖 操作者姓名：王岚 班级技术102 专业生物技术 前言 1、实训的背景、目的和意义： 实训背景： 香菇(Lentinulaedodes)是侧耳科的 担子菌,味道鲜美,药食两用,具有较好的保健作用。香菇多糖是香菇中的重要营 养成分和有效药用组分,具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能,香菇还

原糖对于人体糖分的补充也起着重要作用 测定蛋白质的方法可分为两大类：一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算，如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等；另一类是利用化学方法来计算，如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等 主要测定方法有：双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法. 目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。 实训目的及意义： 1、 2、 2、实训要解决的问题： 掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的原理。熟练掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的操作技术。 1、微量凯氏定氮法与常量法的同点？ 2、根据08年国标，样品消化完全一小时之后，需要冷却后加20ml水，为什么会有晶体析出，成分是什么，为什么会析出？ 3、香菇多糖的主要成分是什么？如何脱蛋白？ 3、实训操作关键技能

1．在蒸馏过程中，切勿关闭电炉，否则会引起硼酸液的倒吸。 2．环境中氨气的含量要低。 3．定氮仪各连接处绝对不能漏气。 4．所用橡皮塞、管用前均需处理。其方法是：浸在10％氢氧化钠溶液中煮沸约10min，再经水洗和水煮10min，最后冲洗数次。 材料及方法 1、实训材料及配制、预处理技术 干香菇，蒸馏水； 电热恒温鼓风干燥箱 组织粉碎机 圆底烧瓶，铁架台，温度计 超声波发生器（带加热功能） 真空泵，漏斗，滤纸，滤布，烧杯，量筒，玻璃棒等 微量凯氏定氮蒸馏装置一套、三角烧瓶、酸式滴定管、容量瓶溶液的配制 1．浓硫酸：分析纯，95.5% 2．80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。 3．6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）

多糖含量的测定

多糖含量的测定 1.原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2.适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5mol/LNaOH溶液：100gNaOH加蒸馏水稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和。 （3）铜贮存液：称取3.0gCuSO4·5H 2 O，30.0g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50ml，加水50ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50ml，加入10ml铜应用溶液，10ml2.5mol/LNaOH溶液，混匀。 （6）1.8mol/LH 2SO 4 ：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 5.操作方法 5.1样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml（V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml（V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml（V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。 （4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/LH 2SO 4 溶解，用水定容至100mL（V5）。 准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，

香菇多糖质量标准

正式名：香菇多糖汉语拼音：Xianggu 标准号：WS-291（X-256）-97 拉丁文或英文：Lentinan 主要活性成分：香菇[Lentinus edodes（Berk）sing]子实体提取、精制的多糖。按干燥品计算，含香菇多糖应不得少于%。 性状：类白色或浅黄色粉末；无味，有引湿性。在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶；在L氢氧化钠中溶解。 比旋度取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典），范围在+2～+15之间。 鉴别：（1）取含量测定项下的溶液2ml，加蒽酮溶液（取蒽酮35mg置100ml量瓶中加硫酸溶解，并用硫酸稀释至刻度，即得，临用配制）5ml，振摇混匀，置水浴中加热，应显蓝绿色。 （2）取本品约10mg，滴加水少许研磨，再加水制成每1ml中含的溶液，置匀浆器中制成匀浆液，取10ml，加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠（NaIO4）4.28g，加L硫酸溶液。溶解并稀释至1000ml]1ml，摇匀，立即取反应液4ml，以水为空白对照，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录ⅣA），在295nm的波长处测定吸收度（A1），剩余的反应液置避光容器中。于3O℃连续搅拌6小时后，取出，测定吸收度（A2）。两次吸收度之差（A1-A2）应为～。 （3）红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致，在89Ocm-1上附近有弱吸收峰。 检查：酸碱度取本品，加水制成%的匀浆液，依法测定（中国药典1995年版二部附录Ⅵ H），pH值应为～。 特性粘数取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L 氢氧化钠溶液数滴，使充分溶胀，研磨均匀，在25～30℃放置6～8小时，使完全溶解，制成每1ml中含的溶液，摇匀，依法测定（中国药典1995年版二部附录ⅥG第三法），特

高分子相对分子量的测定

高分子分子量的主要测定方法 用途 高聚物的分子量及分子量分布，是研究聚合物及高分子材料性能的最基本数据之一。它涉及到高分子材料及其制品的力学性能，高聚物的流变性质，聚合物加工性能和加工条件的选择。也是在高分子化学、高分子物理领域对具体聚合反应，具体聚合物的结构研究所需的基本数据之一。 表征方法及原理 1.粘度法测相对分子量（粘均分子量Mη） 用乌式粘度计，测高分子稀释溶液的特性粘数[η]，根据Mark-Houwink公式[η]＝kMα，从文献或有关手册查出k、α值，计算出高分子的分子量。其中，k、α值因所用溶剂的不同及实验温度的不同而具有不同数值。 2.小角激光光散射法测重均分子量（Mw） 当入射光电磁波通过介质时，使介质中的小粒子（如高分子）中的电子产生强迫振动，从而产生二次波源向各方向发射与振荡电场（入射光电磁波）同样频率的散射光波。这种散射波的强弱和小粒子（高分子）中的偶极子数量相关，即和该高分子的质量或摩尔质量有关。根据上述原理，使用激光光散射仪对高分子稀溶液测定和入射光呈小角度（2℃－7℃）时的散射光强度，从而计算出稀溶液中高分子的绝对重均分子量（MW）值。采用动态光散射的测定可以测定粒子（高分子）的流体力学半径的分布，进而计算得到高分子分子量的分布曲线。 3.体积排除色谱法（SES）（也称凝胶渗透色谱法（GPC）） 当高分子溶液通过填充有特种多孔性填料的柱子时，溶液中高分子因其分子量的不同，而呈现不同大小的流体力学体积。柱子的填充料表面和内部存在着各种大小不同的孔洞和通道，当被检测的高分子溶液随着淋洗液引入柱子后，高分子溶质即向填料内部孔洞渗透，渗透的程度和高分子体积的大小有关。大于填料孔洞直径的高分子只能穿行于填料的颗粒之间，因此将首先被淋洗液带出柱子，而其他分子体积小于填料孔洞的高分子，则可以在填料孔洞内滞留，分子体积越小，则在填料内可滞留的孔洞越多，因此被淋洗出来的时间越长。按此原理，用相关凝胶渗透色谱仪，可以得到聚合物中分子量分布曲线。配合不同组分高分子的质谱分析，可得到不同组分高分子的绝对分子量。用已知分子量的高分子对上述分子量分布曲线进行分子量标定，可得到各组分的相对分子量。由于不同高分子在溶剂中的溶解温度不同，有时需在较高温度下才能制成高分子溶液，这时GPC柱子需在较高温度下工作。 4.质谱法 质谱法是精确测定物质分子量的一种方法，质谱测定的分子量给出的是分子质量m对电荷数Z之比，即质荷比（m/Z）过去的质谱难于测定高分子的分子量，但近20余年由于我的离子化技术的发展，使得质谱可用于测定分子量高达百万的高分子化合物。这些新的离子化技术包括场解吸技术（FD），快离子或原子轰击技术（FIB或FAB）,基质辅助激光解吸技术（MALDI-TOF MS）和电喷雾离子化技术（ESI-MS）。由激光解吸电离技术和离子化飞行时间质谱相结合而构成的仪器称为“基质辅助激光解吸－离子化飞行时间质谱”（MALDI-TOF MS 激光质谱）可测量分子量分布比较窄的高分子的重均分子量（Mw）。由电喷雾电离技术和离子阱质谱相结合而构成的仪器称为“电喷雾离子阱质谱”（ESI- ITMS 电喷雾质谱）。可测量高分子的重均分子量（Mw）。

香菇中糖类物质离与测定

香菇中糖类物质离与测定

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香菇中糖类物质的分离与测定 摘要：本实验采用热水浸提和乙醇醇沉的方法提取香菇多糖（Lentinan，LNT），利用正交法得出最佳提取粗多糖的方案，得到的粗多糖回收率为14.05﹪，再对得到的粗多糖进行定性、定量分析。用苯酚—硫酸法测定已提取出的粗多糖中单寡糖与多糖的含量为35.9%；经过薄层层析和纸层析法分析单糖的组成，其中组成多糖的单糖多属于葡萄糖和阿拉伯糖；用 Sepharsose CL—6B柱层析法测定多糖的相对分子量约为5597.58道尔顿。气象色谱分析单糖含的结果是香菇多糖中的单糖种类有半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖等，其中含量较多的半乳糖和葡萄糖。 关键字：香菇多糖回收率含量组成相对分子量 Separation and Determination of carbohydrates in Lentinus edodes Abstract：This experiment extracts of lentinan (Lentinan LNT) by using hot water extraction and ethanol alcohol precipitation method. The orthogonal method to get the optimum extraction of polysaccharides is the best program, resulting polysaccharides recovery of 14.05%, and then to get crude polysaccharide qualitative and quantitative analysis. By using Phenol-sulfuric acid method, extracted polysaccharides single oligosaccharides and polysaccharides content was 35.9%; TLC and paper chromatography analysis monosaccharide composition, the monosaccharide composes mostly of glucose and arabinose; Relative molecular weight of polysaccharide determined by Sepharsose CL-6B column chromatography is about 5597.58 daltons. The results of gas chromatographic analysis of a monosaccharide is galactose, glucose, arabinose, fucose, sugar, and other types of monosaccharides in the lentinan. galactose and glucose are much more among them. Key words： Lentinan; Recoveries; Content; Composition; Relative molecular weight 0 引言： 糖类化合物是中药的重要成分，随着现代生物化学与分子生物学的不断发展与进步，人们对糖的了解越来越多。而糖生物学研究对揭示生命本质，实现中药现代化，深入开发中药资源有着重要的意义。但是,目前多糖的研究主要以陆生植物为主, 有些源于名贵中药,这不

实验二氧化碳分子量的测定

实验二氧化碳分子量的 测定 TTA standardization office【TTA 5AB- TTAK 08- TTA 2C】

实验二氧化碳相对分子量的测定 实验目的 1、学习气体相对密度法测定分子量的原理、加深理解理想气体状态方程式和阿佛加德罗定律。 2、掌握二氧化碳分子量的测定和计算方法 3、进一步练习使用启普气体发生器和电子天平称量的操作。 实验原理 1、阿佛加得罗定律：同温、同压、同体积的气体含有相同的分子数，即摩尔数相同。根据阿佛加德罗定 律，只要在同温、同压下，比较同体积的两种气体(设其中之一的分子量为巳知)的质量，即可测定气态 物质的分子量。 本实验是把同体积的二氧化碳气体与空气(其平均分子量为相比，此时有： m空气/ M空气 = m CO2 / M CO2, 即 M CO2＝ m CO2·M空气/ m空气其中， M空气＝ 2、理想气体状态方程 PV=n R T 3、制备二氧化碳 反应方程式： CaCO3+2HCl=CaCl2+CO2+H2O 因为大理石中含有硫，所以在气体发生过程中有硫化氢、酸雾、水汽产生。此时可通过硫酸铜溶液，碳酸氢钠溶液以及无水氯化钙除去硫化氢，酸雾和水汽。 实验内容 1、二氧化碳的制取、收集和净化 2、第一次称量 取一个洁净而干燥的锥形瓶，选一个合适的瓶塞塞入瓶口，并在塞子上做一记号，以固定塞子塞入瓶口的位置，在电子天平上称量质量m A：m A=m空气+m锥形瓶+m瓶塞 3、收集二氧化碳 在启普发生器中产生二氧化碳气体，经过净化、干燥后导入锥形瓶中。由于二氧化碳气体略重于空气，所以必须把导管伸入瓶底。收集满气体后，轻轻取出导气管，用塞子塞住瓶口(应与原来塞入瓶 口的位置相同)。 4、第二次称量： 在电子天平上称量二氧化碳、锥形瓶、瓶塞总质量m1： m1=m co2+m锥形瓶+m瓶塞 5、平行称量重复3、4步操作，得m2 m2=m co2+m锥形瓶+m瓶塞 6、将4、5的称量值即m1、m2求平均值m B。 m B＝ m co2平均+m锥形瓶+m瓶塞 7、在锥形瓶内装满水，塞好瓶塞，注意橡皮塞进入的高度与记号相齐。 8、第四次称量 在台秤上称取水+锥形瓶+瓶塞的质量为 m c： m c＝m水+m锥形瓶+m瓶塞 数据处理 根据阿佛加得罗定律： m空气/ M空气 = m CO2 / M CO2, 即 M CO2＝m CO2·M空气/ m空气 其中， M空气＝ 即 M CO2＝ .m CO2/ m空气 (1) 那么， m空气＝？

多糖的分子量测定

多糖的分子量测定 常用的是凝胶滤过法。将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱，用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡，然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱，同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱，分步收集，苯酚-硫酸法监测，分别求得洗脱体积Ve，然后再将兰葡聚糖（M V>200万）上同一条柱，求出柱的空体积V o，根据V e/V o与logM之间存在着线性关系，可绘制标准曲线。最后，将待测样品按上述不变的条件上柱，求得待测多糖的V e。通过标准曲线上的V e/V o，查得待测多糖的分子量对数，便可求出M。 对于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。亦有用蒸汽压渗透法（VPO，基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律，参考文献：崔锡红, 等. 蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 骆传环. 蒸气压渗透计测定多糖分子量. 现代科学仪器, 1994, 4:11.）、超速离心法（骆传环, 等. 香姑多糖的分子量测定. 科学技术与工程. 2006, 6(8): 1058~1060）、光散射法（LS，光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射，垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比。参考文献：魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：lgM W=k-bX，式中：M W为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。应用如，将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，以标准蛋白质的迁移率为纵坐标，lgM为横坐标，绘制相对分子质量曲线。根据样品迁移率得出相对分子质量。）测分子量，黏度法及超滤法估计分子量。利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证，同时也是对多糖纯度的考察。在测定过程中要注意标准品的选择，尽量使用与被测多糖结构相似的标准品，因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。

香菇多糖提取作业

香菇多糖提取 提取法： 用物理提取的方法生产精细化学品，即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。 张杨杨 精化1122 1、认识香菇多糖 (1)香菇多糖结构式 分子式：〔C42H72O36〕n 分子量：〔1152.9995〕n

(2)香菇多糖性质 香菇多糖（l e n t i n a n;L N T）是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。 密度：1.88g/c m3；沸点：1472℃a t760m m H g。 溶于碱溶液或甲酸，微溶于热水或二甲亚砜，不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。对硫酸和盐酸稳定。 (3)香菇多糖的功能 香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成，调节机体免疫应答反应，诱导白细胞对肿瘤浸润，导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死，阻止病毒与宿主细胞的结合，提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性，抑制M D A〔丙二醛〕生成，抗脂质氧化，降低胆固醇，调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲，降低血糖等功能。 【丙二醛】 英文名：M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l 简称：M D A 分子式O H C-C H2-C H O 分子量72.0634 无色针状晶体，熔点72～74℃，一般含两个结晶水，60℃下真空干燥可得无水物，易潮解，纯的丙二醛在中性条件下稳定，但在酸性条件下不稳定。 由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制，主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。

香菇多糖

香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 摘要:香菇是一种营养丰富的食、药用真菌香菇多糖因其具有如降血脂、抗血栓、抗血 小板聚集及抗肿瘤等生理活性而受到广泛的关注本论文通过香菇深层发酵来生产具有 生物活性的多糖为目的，研究了香菇多糖的发酵生产、提取、分离纯化及结构的初步分 析研究了营养性因子对香菇深层发酵的影响，结果表明葡萄糖、玉米粉、豆饼粉有利于 香菇菌体生长和胞外多糖的形成进一步的正交优化实验，确定了香菇深层发酵培养基为 葡萄糖20gL，豆饼粉60目20gL，KH2PO42gL，无机盐MgSO4·7H2O0.5gL优化发 酵工艺条件为初始pH5.5自然、接种量10％、种龄6d，温度28℃、250mL摇瓶装液 量80mL的条件下，香菇深层发酵结果最佳，在此基础上进行摇瓶发酵曲线测定，确定 了香菇适宜发酵周期为144h，胞外粗多糖含量最高可达542mg100mL，菌体生物量达 8.41mg100mL香菇发酵液胞外多糖最佳提取工艺为75％VV的乙醇浓度沉淀，温度为4℃，溶液pH值7.0时胞外粗多糖得率为670mg100mL发酵清液香菇发酵液胞内多糖 最佳提取工艺为组织捣碎法破壁处理、提取温度90℃、料水比14、提取时间4h、提 取次数2次，胞内多糖的最高产率为14.73mg50g湿菌丝体香菇胞外粗多糖经活性炭 脱色，酶法和三氯乙酸正丁醇法脱蛋白，经DEAE-纤维素柱进行组别分离和 Superdex200进行分级分离，经透析脱盐冷冻干燥得到香菇多糖纯品含量最多的胞外 多糖级分LEN1经红外光谱照射，证明其有多糖的特征吸收峰，是α-型吡喃环多糖经 紫外光谱扫描证明其不含蛋白质经HPLC测定，其分子量为6.5×105，是处于这一分 子量范围的单一成分，把提取出的香菇多糖应用于果蔬复合饮料中，无沉淀产生，证明 香菇多糖可用于饮料生产 标题:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 专业:食品科学 学位:硕士 单位:山东轻工业学院@ 关键词:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 论文时间:2007 分类:TS201.5 S646.12 导师:王成忠 语种:中文文摘 香菇多糖提取的原理是什么？ 多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白. 香菇子实体粉碎,低温烘干,准确称量,乙醚回流脱脂,乙醚提取物回收处理,香菇子实体粉末加入20倍量水,温度50 ℃,反应时间为80 min提取香菇多糖粗品,活性炭脱色[ 5 ],离心除去沉淀,上清液中加入95%乙醇,使乙醇终体积分数为75% ,离心取沉淀即得香菇多糖粗品。 香菇多糖粗品水溶解后过DEAE2 52层析柱(cm × 60 cm,柱高52 cm) ,DEAE2 52层析柱先用pH518的磷酸盐缓冲液平衡,样品溶于此缓冲液后上柱。

分子量及分子量分布检测方法

分子量及分子量分布检测方法 1 范围 本标准规定了用高效体积排阻色谱法（HPSEC)测定可溶性聚乳酸平均分子量（Mw）和分子量分布的方法。 本标准适用于外科植入物用，能被三氯甲烷（或其他溶剂）完全溶解的包括聚（L-乳酸）树脂（或缩写PLLA）、聚（D-乳酸）树脂（或缩写PDLA）、任何比率的DL型共聚体以及丙交酯（或缩写PLA）和丙交酯-乙交酯共聚物（或缩写PLGA）的材料。 注1：本方法不是绝对的方法，要求使用市售窄分子量分布聚苯乙烯标准物质进行校正。 注2：由于聚乳酸产品在生产加工及灭菌过程中（特别是辐照灭菌），会影响材料本身的分子量及分子量分布，因此在评价产品时，宜采用成品进行检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 2035-2008 塑料术语及定义 3 术语、定义 GB/T 2035-2008界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3.1 聚乳酸 polylactic acid,PLA 包括聚（L-乳酸）树脂（或缩写PLLA）、聚（D-乳酸）树脂（或缩写PDLA）。 3.2 丙交酯-乙交脂共聚物 polylactic acid- polyglycolide acid copolymer，PLGA 由丙交酯及乙交脂按一定比例共聚得到的高分子化合物。 4 方法概要 溶解于溶剂的聚乳酸样品注入填有固体基质的色谱柱，按照溶液中聚合物分子大小顺序分离。自进样开始检测器持续监测从柱中出来的洗脱时间，从柱中流出分子按照尺寸分离，并按照其浓度分离的分子量被检测和记录。通过校正曲线，洗脱时间可以转为分子量，样品的各种分子量参数可由分子量/浓度数据计算得出。 5 试剂和材料 5.1 溶剂：本方法推荐使用三氯甲烷（CHCl3）。任何与HPSEC系统组分和柱填料相容的溶剂，并且可溶解聚乳酸样品的溶剂均可以考虑使用。选择溶剂应考虑试剂的纯度和一致性，例如四氢呋喃易与氧气

苯酚硫酸法测定多糖

分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。 （8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/L NaOH 2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。（4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL（V5）。准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备： 精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml（分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg），补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值（A），以葡聚糖浓度为横坐标，A 为纵坐标绘制标准曲线。

香菇多糖的提取

香菇多糖的提取技术 作者：唐庆菊学号：19 摘要：香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质，具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能，在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景，本综述通过对当前常用的热水浸提法、酶解法、微波提取法和深层发酵培养法等6种香菇多糖的提取方法进行概述，具体的阐述了深层发酵液中香菇胞内、胞外多糖的提取、香菇多糖的微波提取法。并展望了其今后研究方向及其开发应用前景。 关键词：香菇多糖、提取 1 引言 多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分,广泛存在于动物,植物和微生物细胞壁中,是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子.,尤其是一类重要的信息分子.到目前为止,已有近300种的多糖化合物从天然产物中分离出来,其中植物提取水溶性多糖最为重要.从植物中提取多糖主要根据不同溶解度来选择溶剂进行。香菇多糖的提取方法一般有热水提取法,酸提取法,碱提取法,酶提取法和微波助提法等方法.. 1．1.香菇多糖的组成及理化性质 香菇多糖又称香蕈、椎耳、香信、冬菰、厚菇、花菇，英文名：Lentinan。香菇是我国传统的著名食用菌，在世界上最早人工驯化栽培。香菇营养丰富，味道鲜美，被视为“菇中之王。

香菇多糖(LentinanLNT) 是一种β—1,3—葡聚糖,是从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖.多糖以甘露糖为主,含少量的葡萄糖,微量的岩藻糖,半乳糖,木糖,阿拉伯糖等;肽链由天冬氨酸,组氨酸,丝氨酸,赖氨酸,谷氨酸等18种氨基酸组成.LNT的化学结构是一种以β—D—[1~3]葡萄糖残基为主链,侧链为(1—6)葡萄糖残基的葡聚糖,平均分子量约为50万道尔顿。 香菇多糖成品为白色粉末状固体，对光和热稳定。在水中溶解度为3g/L；能溶解于0.5mol/L氢氧化钠，溶解度可达50g/L-100g/L；不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂中。香菇多糖具有吸湿性，在相对湿度为92.5%，温度为25摄氏度的环境中放置15天，吸水量可达40%。 1.2营养价值 香菇含有的10余种氨基酸，其中有异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等7种人体必需的氨基酸及维生素B1、B2、PP及矿物盐和粗纤维等。 香菇中含不饱和脂肪酸甚高。除了含有还含有麦角甾醇（ergosterol）外，还有菌甾醇(fungi sterol)，尤其所含大量麦角甾醇可转变为维生素D，有增强人体抗疾病和预防感冒的功效； 香菇中还有腺嘌呤（eriadenine）和胆碱，可预防肝硬化和血管硬化； 香菇中又含酪酸氧化酶，有降低血压的功效。 香菇中还分离出降血清胆固醇的成分（C6H11O4N5,C9H11O3N5） 香菇多糖能提

高聚物分子量及其分布测定技术

高聚物分子量及其分布测定技术 郑伟国 中国民航学院理学院，天津 300300 weiguozhejiang@https://www.sodocs.net/doc/843962615.html, 摘 要:研究高聚物分子量及其分布对洞察其聚合机理、裂解机理、溶液性 质、力学性质和加工性能等具有重要的理论和现实意义。本文综述并评价了目 前国内外高聚物分子量及其分布研究领域的主要技术。 关键词:数均分子量 重均分子量 Z 均分子量 粘均分子量 高聚物的分子量有两个基本特征：一是分子量大；二是具有多分散性，即同一种聚合物， 其分子量的大小可以各不相同[1]。因此，讨论某一种聚合物的分子量有多大并无意义，只有 讨论其平均分子量才具有应用价值。根据统计方法的不同，聚合物的平均分子量存在多种不同形式。常用的有数均分子量n M 、重均分子量w M 和粘均分子量ηM n M 和Ｚ均分子量。我们用/表示分子量分布宽度,称为分子量分布指数w M n M [2] 。/越大,说明分子量分布越宽。 w M 当外界条件固定时,可应用聚合物的性质与分子量成函数关系这一特性,来测定其分子量的统计平均值。由于聚合物的不同性质与分子量有不同的依赖关系,因而根据不同的测试手段获得的分子量的平均值是不同的。即如果所用的测定方法不同,就要采用不同的统计平均方法。具体如下： 数均分子量：端基分析法、沸点升高法、冰点降低法、膜渗透压法（MO ）、气相渗透压法（VPO ）； 重均分子量：光散射法、小角激光光散射法（LALLS ）、凝胶色谱法、超速离心沉降平衡法； Ｚ均分子量：超速离心沉降速率法、凝胶渗透色谱法（GPC ）； 粘均分子量：粘度法。 1.高聚物数均分子量及其分布的测定 1.1 端基分析法[3] 测定范围：用于相对分子量小于2×104的高聚物分子量的测定，是一种绝对法。 适用对象：适用于线形高聚物分子量的测定，也可用于测定聚合物的支链数目。 优点：操作简便，快捷，结果准确。 计算公式：t t n xw x n w M ==/.其中为聚合物的质量（克），n w t 表示试样中被分析的端基的摩尔数，x 代表高聚物中含被分析端基的个数。 - 1 -

分子量测试的方法

在如今的社会上我们知道任何事情都有两面性，做任何事情都不只一种方法。像分子量测试更不可能只有一种方法的。毕竟多种方法进行测试最终将数据汇总可以减小测试的误差，使结果更加准确。下面我们来看看其测试有哪些方法。 1、凝胶渗透色谱法(GPC)，也叫做体积排阻色谱法，是一种新型的液相色谱。它是根据溶质分子尺寸(分子量、有效体积、流体力学体积)的差别在装有多孔凝胶物质的凝胶色谱柱中进行分离，检测系统对分离出来的每部分进行分析，测定各级别的分子量。GPC测定高聚物分子量及分子量分布是目前常用的方法。GPC测试分子量需要知道一个标准样品的流出体积与分子量的关系，因此此方法测试的是相对分子量。 2、端基分析法。其原理就是线型聚合物的化学结构明确，而且分子链端带有可供定量化学分析的基团，则测定链段基团的数目，就可确定已知重量样品中的大分子链数目。用端基分析法测得的是数均

分子量。它对缩聚物的分子量测定应用较广。 3、膜渗透压法。采用一个半透膜将溶液与溶剂隔开，半透膜是一种只允许溶剂分子透过而不允许溶质分子透过的膜。开始时，两池液面高度相等，因为纯溶剂蒸汽压大于溶液蒸汽压，所以纯溶剂向左渗透，直至两侧蒸汽压相等，渗透达平衡。此时半透膜两边的压力差Π叫做渗透压。它测得的分子量是数均分子量M你，而且绝对分子量。这是因为溶液的渗透压是各种不同分子量的大分子共同贡献的。 4、沸点升高和冰点降低。由于溶液中溶剂的蒸汽压低于纯溶剂的蒸汽压，所以溶液的沸点高于纯溶剂的沸点，溶液的冰点低于纯溶剂的冰点。 5、粘度法。聚合物的稀溶液，仍有较大的粘度，其粘度与分子量有关。因此可利用这一特性测定聚合物的分子量。在所有的聚合物分子量的测定方法中，粘度法尽管是一种相对的方法，但因其仪器设备简单，操作方便，分子量适用范围大，又有相当好的实验精确度，

多糖类药物分子量及其分布测定

多糖类药物分子量及其分布测定的意义和方法，各种分子量的介绍，介绍国内外分析方法的建立方法及对比，以低分子肝素为例。有EP & BP 方法和USP 方法 一、原理 ?凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography, GPC)测定多糖分子量及分子量分布 ?或高效分子排阻色谱（High performance size exclusion chromatography, HPSEC) ?检测器：紫外( ultra-violet ， UV , 200～400nm)和 ? 示差（refractive index, RI) 1. UV 检测器 ?具有共轭双键的化合物都具有紫外吸收 共轭双键 →π π 和n → π 电子跃迁，从而导致紫外吸收 由光源产生波长连续可调的紫外光或可见光，经过透镜和遮光板变成两束平行光，无样品 通过时，参比池和样品池通过的光强度相等，光电管输出相同，无信号 产生；有样品通过时，由于样品对光的吸收，参比池和样品池通过的光强度不相等，有信号产生。根据朗伯—比尔 定律，样品浓度越大，产生的信号越大， 这种检测器灵敏度高，检测下限约为 10-10 g ／ml ，而且线性范围广，对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱。 2. 示差折光检测器 ?示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来检测的。 ?凡是具有与流动相折射率不同的组分，均可以使用这种检测器。 ?示差折光检测器分为反射式和折射式两种。 ?反射式的原理：光在两种不同物质界面的反射百分率与入射角和两种物质的折射率成正 比。如果入射角固定，光线反射百分率仅与这两种物质的折射率成正比。光通过仅有流动相的参比池时，由于流动相组成不变，故其折射率是固定的；光通过样品池时，由于存在待测组分而使折射率改变，从而引起光强度的变化，测量光强度的变化，即可测出该组分浓度的变化。 ?示差折光检测器的优点是通用性强，操作简便；缺点是灵敏度低，最小检出限约为 10-7 g/ml 。 ? 3.平均分子量的表示方法 数均分子量（Number-average molecular weight ） 按聚合物中含有的分子数目统计平均的分子量 高分子样品中所有分子的总重量除以其分子(摩尔)总数 式中，Wi ，Ni ，Mi 分别为i-聚体的重量、分子数、分子量 i = 1－∞ 数均分子量是通过依数性方法(冰点降低法、沸点升高法、渗透压法、蒸汽压法) 和端基滴定法测定 重均分子量（ Weight-average molecular weight ） 是按照聚合物的重量进行统计平均的分子量 C H C H C H C(O) ∑∑∑∑∑ = = = ) (i i i i i i i n M W W N M N N W M

多糖的分子量与分子量分布测定

多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程 1. 目的： 建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。 2. 依据： 《中华人民共和国药典》2000年版二部。 3. 范围： 适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。 4. 职责： QC 检验员对本标准的实施负责。 5. 程序： 5.1. 对仪器的一般要求： 色谱柱为测多糖专用凝胶柱（按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶 柱）。检测器为示差折光检测器。 5.2. 系统适用性试验： 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数 式中t R 为供试品峰的保留时间； t o 为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保 留时间 t T 为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间 5.3. 测定法： 系统校正：根据供试品分子量大小，一般选用 5个已知分子量的多糖标准品 （常用的为葡聚糖）分别用流动相制成每 1ml 中约含10mg 的标准溶液，分别取上述标准溶 液25卩I ，注入液相色谱仪，记录色谱图。由GPC 专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程: 1gM w =a+bt R 式中 M W 为标样的已知重均分子量； t R 为标样的保留时间。 （n ）和供试品在该分析状态下的分配系数（ K d ）应达到规定的要求 K d = t R — t o

样品测量：取供试品溶液25 d注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算 分子量： M n=E Rl i/艺(Rl i/M i) M w=E ( Rl i M i) /艺Rl i D =M w/M n 式中M n 为数均分子量； Rl i为为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高； M i为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。 54结果处理： 采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量（片段数据）和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。