KOBO简要操作说明
KOBO简易操作
一、KOBO原生系统
1、开关机：
开机：推动电源键停1秒，松开。
休眠：在开机状态下推一下电源键，KOBO进入休眠状态，屏幕显示在读的一本书的封面，在屏幕上方显示该书阅读进度和“SLEEPING”字样。
关机：在开机姿态下推电源键停3秒，KOBO关机，屏幕显示在读的一本书的封面，在屏幕上方显示该书阅读进度和“POWERED OFF”字样。
安卓系统开机：先按住home键，不放手的情况下拨一下电源键（拨1秒绿灯亮就放开），注意看LED灯，LED灯会亮起红光，在其红光转绿的时候，就可以放开home键，LED灯接下来会闪烁绿光。你就顺利进入新系统了。
安卓系统休眠：在安卓系统里拨一下电源键，进入休眠画面。退出休眠也是拨一下。
安卓系统关机：推着电源键三秒，屏幕弹出一个对话框（也不知道哪国语言），选第一个。
2、打开书籍
可以从桌面上点入或点左下角Library书架打开BOOKS查看您已存入的书藉。
3、存入文本电子书
把KOBO通过数据线连接电脑，KOBO会弹出一个对话框确认是否连接，点右边选项确认连接。
在电脑上出现KOBO的盘符，打开，将文本书籍拷入BOOKS的目录里（这个BOOKS是可以任意命名的，如果您书多的话可以多建几个文件夹在KOBO的根目录里）。
拷入完成了先弹出USB设备，完成后再拔出数据线，这时KOBO会有更新内容的进度画面，完成后回到KOBO主界面，完成。
4、文本格式
KOBO支持的电子书格式有PDF、EPUB、TXT、MOBI、HTML、JPG、GIF、TIFF、PNG、CBZ、CBR。其中蓝色为电子书文件，红色为图片，绿色为漫画压缩文件。
电子书文件中PDF、EPEB、MOBI、HTML都无限制，个别文件拷入不能识别可能是文件问题，可以考虑转换格式或重新下载。
在线将TXT转为EPUB（针对无法打开的TXT，或大对2M的文件）
https://www.sodocs.net/doc/8910526197.html,/txt2epub.html
附1：
针对TXT文件，KOBO有2M限制，大于2M不能识别。另外TXT文件在拷入电子书之前需做一下转换编码，不然会出现乱码。以下教程：
在电脑打开TXT文件后，点一下左上角的“文件”----“另存为”然后有下面的界面，注意把“编码”改为“UTF-8”
附2：
网上大多数漫画都是ZIP格式的压缩包，漫画CBZ文件其实就是网上下载的ZIP 文件，您下载了ZIP的漫画压缩包后，将文件后缀名的ZIP改为CBZ却可。
5、书架乱码及文本内容乱码
在打开电子书后文本乱码的页
面，屏幕最下边点击一下，出现任务
样，选A字图标，然后font face 有
个下拉框，这个选字体，把字体设为
WenQuanYi Micro Hei。这样能解决书
架乱码及文本乱码的问题。
文本中的字体自行更换，但网
下的字体可以文本中被应用，但不一
定能解决书架乱码的问题。
6、查看机身版本与内存
在主界面点右上角的三横，SETTINGS→→Device information→→SoftWare Version（后面看到的是版本号）。
内存在此页面：Onboard Storage（如有内存卡可看此项下行：Micro SD）注：在此页面中千万别点Reset Derice项的Factory reset，不然机身全部还原，设置、KOreader、安卓等全部会消失。（后果自负）
7、WIFI （开关在主界面右上角的三横，WIFI 开关）
建议不要连接，因为这个功能很鸡肋又耗电，原系统中WIFI有三个功能：1）固件升级，就像苹果那样，有新固件会通过WIFI下载，然后给您更新上（主界面右上角三横，Sync按键，慎点！！！）。
2）购书商城，因为是KOBO国外的东东，他的商城也是国外的，都是英文书，还收费的。
3）浏览器，这个浏览器是BETA版
（SETTINGS---BETA Features----WEB BROWSER ，小游戏那些都在这里），因为机身语言并没有中文，所以我们看国内网站只会显示日文字库里有的中文字，很多地方都缺字的。
建议不要打开这个功能，不然小心按到更新，到时把系统更到最新版本，所有的设置和刷入的KOreader、安卓等全部消失。（后果自负）
8、死机、假死、卡顿
这个问题很多电子书都存在，打开大文件不时会遇到，如遇死机，可用牙签对背后小孔戳一下进行重启。（也可连拨电源键三次，效果一样）
二、KOREADER软件
套餐1、2（KOBO Touch 905B/905C）可安装，官方标配905A 无法刷入该软件。
1、关于KOREADER
KOREADER是一个运行于KOBO原系统的软件，它能弥补原系统的很多缺陷：
1）对于TXT文件2M的限制，KOREADER 20M的TXT文件都能读出，而且不需要在电脑上转编码！文件直接倒入电子书即可读
2）对于PDF大页面非扫描版文件，KOREADER可做页面重排，使显示屏适合字体大小，不用再放大缩小移动着看。
3）PDF扫描版文件切边
4）字体加深
5）菜单完全中文，操作简便
7）中英词典
2、启动KOREADER
3、KOREADER的操作栏、返回/退出
AKTA Purifier中文操作手册
GE Healthcare 实施您?KTApurifier的首次运行
重要用户信息 所有用户必须阅读整本手册以充分理解?KTApurifier的使用安全。 WARNING（警告） 警告标识强调必须严格遵循指令以避免人身伤害。在说明书完全弄懂和所有规定条件都具备后才能开始动手操作。 Caution（小心） 小心标识用于引起注意以避免人身伤害，必须遵循指令和条件以避免毁坏产品和其它设备。在说明书完全弄懂和所有规定条件都具备后才能开始动手操作。 Note（注意） 注意标识用于指出对产品的无故障及最佳使用的重要信息。 CE证书 产品符合适用于CE规定的所有要求。相应合格证的复印件函索即寄。 CE标志和相应合格证对该仪器是有效的。当仪器 – 连接到其它标有CE标志的 GE Healthcare 仪器上，或， – 连接到本手册中推荐或所述的其它仪器上, 和， – 除了在本手册中提到的变更外，按 GE Healthcare 所提供的说明使用。 警告 本产品为A类产品。在局部环境下，本产品可能引起无线电干扰，在此情况下用户可能需要进行适当的测量。 销售条款和规定 除非另有书面协议，在 GE Healthcare 集团供应范围内，所有售出货物和服务都服从公司的销售条款和规定。这些销售条款和规定的复印件函索即寄。 如果您对本产品有任何意见，我们将乐意接受。请寄往： GE Healthcare SE-751 84 Uppsala Sweden 商标 水滴图样, ?KTA, ?KTApurifier, UNICORN and Superloop 均为 GE Healthcare 的商标。 Amersham 和 Amersham Biosciences 为 GE Healthcare 的商标。. Windows为Microsoft Corporation 的注册商标。 办事处地址 GE Healthcare SE-751 84 Uppsala Sweden
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作 AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。 1、认识AKTA。 AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。它们是： FIG 1、AKTA EXPLORER主机 ? Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。 ? Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。）? Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。 Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图
AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。打开装阀的门可全部看到。柱被挂在装阀的门的外侧。 分离装置由UNICORN 软件控制。软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。 2、一般操作 2.1 开机 按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。UNICORN的操作界面分为四个窗口（Fig 3） Fig 3、Unicorn的操作界面 2.2准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。 2.3清洗及管道准备 首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中，将B泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择pump→pump wash explorer，选中A1,B1管道为ON，execute。泵清洗将自动结束。(Fig 4) Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作 2.4安装层析柱
AKTA 操作
?KTA常见问题解决方案 系统（System） Q：样品与缓冲液怎么脱气和过滤？ A：溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤 瓶过滤（如右图），并且在负压条件下保持10min脱气。脱气的方法还包括：超声15min 以上或者使用注射用水配制缓冲液。对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式， 吸取上清。 Q：系统怎么保存？ A：使用完毕，须用水将系统冲洗干净（关机前，电导检测数值<0.1ms/cm），之后用 20%乙醇清洗系并保存所有的流路。 Q：系统的清洗？ A：按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用中性的缓冲液（例如PBS）和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。 系统泵（Pump） Q：系统中进了气泡，怎么排除？ A：排除气泡的方式有两种：system control→Manual→Pump→PumppurifierA/B， 进行泵洗，高流速将气泡排出（流速和冲洗的时间系统默认）；或者将空注射 器放置在泵头黑色接头处（如右图），拧开泵头，抽出气泡后，拧紧泵头即可。 Q：泵后润洗系统，如果进入气泡怎么处理？润洗液不循环，怎么处理？ A：润洗系统只是起润滑作用，有小气泡不会影响缓冲液的系统或者进入柱子； 如果有大段气泡影响润滑时，则将润洗瓶中有接头处接空注射器，将气泡抽出即可。 如果润洗液不循环，说明单向阀堵塞或损坏，可以使用超声清洗或更换。 紫外监测器(UV Monitor) Q：如果紫外检测曲线有噪音或者波动，怎么处理？ A：可以使用注射器推甲醇或1M NaOH注入紫外流动池，停留20分钟，用水 冲洗；或者用注射器推10%的表面活性剂（如Decon90，Deconex11，DBS25， SDS等）注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗。 Q：怎么查看检测器的使用时间？ A：三波长检测器灯的使用时间：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Run Time（如果>4000h， 需要更换紫外灯）；光栅转动时间：面板菜单-Check-press OK-Check Flip Time （如果>2000h，需要维护）；紫外灯的能量：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity （如果灯的能量<20%，需要更换内部光纤） 固定波长检测器灯使用寿命：（AKTApurifier UPC/FPLC）：灯的使用时间：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Run Time，如果达到以下使用时间，需要更换相应灯——汞灯在254 nm的
akta简要操作说明(1)
AKTApurifier简要操作说明 打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。 Unicorn Manager文件管理、Method Edit方法编辑、System Control 系统控制、Evalution结果处理，4个窗口同时打开，同时关闭。 Unicorn Manager中Manual运行的结果自动保存在Manualruns的文件夹中，文件名从Manualrun1~Manualrun10，第11个结果会覆盖第1个文件（最多保存10个默认的文件名）。如果手动结果需要长期保存，可以remove到指定文件夹或者rename。可以利用Manual-other-record-on（off）来选择文件夹，制定文件名保存手动结果。 手动命令(Manual)见《?KTA系统手动命令指南》 利用脱盐实验熟悉手动操作(System Control→Manual) 脱盐试验原理：凝胶过滤 (或称分子筛) 层析是一种由限制分子通过多孔基质，按分子大小分离混合分子的技术。蛋白质是生物大分子，分子量比盐等小分子大许多倍，用凝胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠。由于层析方法可透过紫外和电导检测器监控整个层析脱盐的过程。Sephadex G-25 介质用带3- 氯-1 ，2- 环氧丙烷(epichlorohydrin) 交联葡聚糖加工成珠状的介质。适合分子量在5000 以下的生物分子的脱盐及缓冲液置换工作。在该实验中，蛋白质是大分子，盐离子是小分子，因此蛋白质先出来（280nm有特征吸收），盐离子后出来（电导值显示） o 样品：5mg/mLBSA，0.5M NaCl溶液 10mL o binding buffer缓冲液：去离子水 o 层析柱：HiTrap Desalting 5 mL o 流速：5mL/min, o 样品体积：200ul/0.5mL/1mL。 操作： 1）准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，使用前用低频超声脱气10min。 2）清洗及管道准备 首先将A1管道放入binding buffer中，在System Control窗口点击工具栏内的Manual，选择 Pump→Pump wash purifier，选中A1管道为ON， Execute。泵清洗将自动结束。 3）安装层析柱： 在Manual里选择Pump→Flow rate，输入流速5mL/mL，Execute，读取系统空压X Mpa（没有安装层析柱的系统压力），选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm,输入X+0.3Mpa（填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），Execute。Flow rate，输入流速1mL/mL，Execute，待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。改变Flow rate，输入流速5mL/mL，Execute 4)开始纯化： o 选择检测波长，Alarm&mon→Wavelength→UV1,UV2,UV3(可以只打开一个
AKTAprime操作规程 范本
昆山市工业技术研究院小核酸生物技术研究所有限责任公司 ?KTAprime 全自动层析仪操作规程 操作步骤： 1.开机：先启动电脑，等电脑启动完成后打开AKTAprime主机电源。 2.点击桌面上的Primeview图标进入层析监视界面。 3.将A/B管道分别放入0.45um/0.22um过滤去离子水中。 4.在AKTAprime主机操作界面按上下键选择Manual Run进入操作菜单界面。 5.选择“Set Pressure Linit”设置系统压力上限，选择“Set Flow Rate”设置流速， 选择“Start Run运行。 6.按下操作面板上的“Pause/Cont.”暂停运行。 7.将A/B管道分别放入0.45um/0.22um过滤buffer中。 8.重复操作步骤4—5。 9.按下操作面板上“end”按钮，结束运行。 10.安装层析柱，将层析柱上下管道分别接入AKTA相对应的接口。 11.选择“Set Flow Rate”设置流速，选择“Set Pressure Linit”设置层析柱压力上 限，选择“Start Run”运行，开始平衡层析柱。 12.将样品用注射器推入样品环中，选择“Manual Run—Set Inject valve Pos--Injection”命令开始进样，等样品全部层析柱后切换“Injection”到“Load” 状态。 13.选择“Manual Run—Set Gradient/concentration”命令设置洗脱梯度。 14.洗脱完成后按下控制面板“end”按钮结束层析方法。 15.双击桌面“PrimeView Evaluation”图标，进入Evaluation界面，在Manual run 中找到刚才运行的色谱图，选择菜单栏“File—Save As..”命令保存。 16.方法运行完毕后，用0.45um/0.22um过滤后的去离子水冲洗管道。 17.当电导和PH降至中性时换上20%乙醇冲洗管道，直到将所有管道充满乙醇 为止。 18.关掉AKTA prime电源，关闭电脑。 注意事项： 实验结束，可以关闭电源。注意保持仪器清洁，防尘、防潮，本手册仅供参考，不作为操作标准流程，详细信息请阅读仪器和软件说明书。
AKTAexplorer100 操作入门
AKTAexplorer层析系统操作入门 为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。 一系统组件及系统功能介绍 1 系统组件 (1) 泵 Pump 系统泵：(system pump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。 上样泵：(sample pump)样品输送。 (2) 阀 Valve 三通阀：(SV-903)两个。 分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2, B1/B2)切换。 七通阀：(INV-907)两个。 1. 上样阀(sample valve)，用于上样环切换 (load/inject) 和系统泵清洗时 废液管 (waste) 切换； 2. 流向切换阀(flow direction valve)，用于层析柱流向切换 (downflow/upflow)。 八通阀：(一个IV-908位于泵前，低压阀门；四个PV-908，位于泵后，高压阀门)共五个。 1. 缓冲液选择阀(buffer valve A1)，通过A1管可选择八个不同缓冲液； 2. 样品选择阀(sample valve)，可选择7个上样样品； 3. 柱位阀(column position)，两个，同时切换可选择七个柱位； 4. 出口阀(outlet valve)，选择收集出口。 (3) 收集器 Fraction 分段收集。 (4) 其它组件 梯度混合器(mixer)、柱前过滤器(on line filter)、紫外检测仪(UV-900) 、pH 电导仪 (pH/C-900 内含温度计)等。 2 系统功能 系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。 (1) 缓冲液pH及梯度配制 (a)梯度制备 (Gradient) A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。 (b)自动缓冲液pH及梯度制备 (BufferPrep) 根据所用缓冲液配方，分别将A1、A2、B1、B2放入相应的溶液，由A泵及其三通阀调配缓冲pH，由B泵及其三通阀调配梯度。
蛋白纯化AKTA操作说明#(优选.)
AKTA pure操作说明 分子筛层析操作步骤： 1. 开机： 打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。 2. 打开系统： 打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。 注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。 3. 洗泵： 把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在System Control界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。 4. 设置系统参数： 设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute； 设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。 注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。 5. 装柱子(先上后下)： 接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口； 接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。 6.平衡柱子： 分子筛buffer平衡柱子，一般要两个小时左右，盐离子浓度达到5.5%左右。 7.设置系统及收集参数： 命名：先end---Manual instructions，点击browse，弹出select result name&location 界面，点开文件夹“defaultHome”，找到文件夹“labdata”，点开，选择自己名字 首字母缩写文件夹(已创建)，在界面下方“name”指令框进行命名。 注意：命名时要标明日期，柱子型号，样品名称。 设流速：Pumps---System flow---设流速（1 mL/min）---Execute； 设柱压：Alams--- alam systerm pressure---high alam---设置柱压---点击Execute； 洗A泵：Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse； 紫外调零：Monitors---Auto zero UV---Execute；
AKTA层析仪使用操作规程
?KTA Explorer层析仪使用操作规程 1、开机 打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。 2、准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。3、清洗及管道准备 首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。泵清洗将自动结束。 4、安装层析柱 在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。 5、开始纯化： 1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。 2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。 3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。 2),3)选择一种方式 4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）。 5）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900，exectue。 6、清洗泵及卸下层析柱： 将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash explorer功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A11和B1入口放入20％乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。整个过程防止气泡进入。 7、关闭电源： 从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。 （仪器的维护另见系统维护指南） 通用电气医疗集团生命科学部 hotline：8008109118
AKTA使用方法
AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱 （1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。 （2）洗泵。点击Pumps→Start pumpA wash 和Start pump B wash。用Q A buffer 冲洗pump A，用Q B buffer冲洗pump B。 （3）洗系统（管道）。将Conc%B改为100%，点击Start system wash。 （4）改流速，平衡柱子。将System flow的流速改为合适的流速（4mL/min, 2mL/min,0.4mL/min），点击Set flow rate。然后选择柱位。用Q B buffer平衡Q 柱4-5个柱体积，再用Q A buffer平衡Q柱4-5个柱体积。 （5）准备收集盘，设置运行程序。准备烧杯收集outlet。 （6）上样，选择A pump上样，当电导上升时waste改为outlet。上样不要进气泡，上样结束后将A pump放入Buffer A。电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。 （7）Elution, 运行洗脱程序。（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（8）及时将outlet取出并保存好。 （9）收集收集管，并将buffer放回。 Superdex(分子筛、凝胶过滤层析) （1）浓缩。将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。 （2）洗泵。用Superdex buffer冲洗pump A。 （3）用Superdex buffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。 （4）平衡。用Superdex buffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。 （5）准备收集盘，用Superdex buffer冲洗Loop环，设置运行程序。 （6）上样，运行程序。（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。 （8）根据分子筛图和SDS-PAGE电泳图，选择最终收集的样品。分装到1.5mL Ep管中，置于-80℃冰箱保存。
AKTA pure中文说明书
教材内容 一、?KTApure层析仪简明操作规程 (3) 二、仪器常见维护保养 (5) 1.每日维护 (5) 2.每周维护 (5) 3.每月维护 (6) 三、?KTApure手动命令介绍 (7) 1.开机 (9) 2.实验前的准备 (10) 3.手动命令控制层析实验 (14) 4.校正 (30) 5.清洗与关机 (32) 四、脱盐演示实验 (35) 1. 实验准备 (36) 2. 准备收集器 (40) 3. 手动运行实验 (40) 4. 编辑方法自动运行脱盐实验 (43) 5. 结果分析与讨论 (45) 6. 清洗与关机 (45) 五、方法编辑 (48)
1.凝胶过滤方法编辑 (50) 2.离子交换方法编辑 (58) 3.层析柱CIP方法编辑 (63) 4.Column Preparation方法编辑 (65) 六、Evaluation (67) 1.打开结果 (68) 2.显示效果更改 (69) 3.曲线积分 (70) 4.查看数据点 (72) 5.结果对比 (73) 6.结果导出 (75)
一、?KTApure层析仪简明操作规程 1、开机 打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（主机控制面板白灯常亮）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。 2、准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm的滤膜过滤（样品也可高速离心后取上清使用）。缓冲液需在使用前用低频超声脱气15 min。 3、清洗及管道准备 首先将A1管道入口放入平衡缓冲液（binding buffer）中，将B1管道入口放入洗脱缓冲液（elution buffer）中，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择execute manual instructions→pump →pump A wash和pump B wash，选中A1和B1入口，点击execute。泵洗完成后自动停止。 4、安装层析柱 在manual instructions里选择pump→system flow，输入流速1 ml/ml，insert；选择Alarms→alarm pre column pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。待Injection Valve的1号位管道流出溶液后，将管路接入柱子的上端，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道，连上紫外流动池。 5、开始纯化： 1）选择检测波长，Monitors→Wavelength→UV1, UV2, UV3 (可以只打开一个波长) 等待柱子平衡好了（观察UV、COND、pH的数值和变化趋势）就可以准备上样。此时将紫外调零，选择Monitors →auto zero UV，exectue。
AKTApurifier操作入门
AKTApurifier 层析系统操作入门 为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。 一系统组件及系统功能介绍 1 系统组件 (1) 泵 Pump 系统泵：(system pump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。 (2) 阀 Valve 三通阀：(SV-903)两个。 分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2, B1/B2)切换。 七通阀：(INV-907)两个。 1. 上样阀(sample valve)，用于上样环切换 (load/inject) 和系统泵清洗时 废液管 (waste) 切换； 2. 流向切换阀(flow direction valve)，用于层析柱流向切换 (downflow/upflow)。 八通阀：1. 出口阀(outlet valve)，选择收集出口。 (3) 收集器 Fraction 分段收集。 (4) 其它组件 梯度混合器(mixer)、柱前过滤器(on line filter)、紫外检测仪(UV-900) 、pH 电导仪 (pH/C-900 内含温度计)等。 2 系统功能 系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。 (1) 缓冲液pH及梯度配制 (a)梯度制备 (Gradient) A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。 (b)自动缓冲液pH及梯度制备 (BufferPrep) 根据所用缓冲液配方，分别将A1、A2、B1、B2放入相应的溶液，由A泵及其三通阀调配缓冲pH，由B泵及其三通阀调配梯度。 (2) 上样 上样阀上样：将样品经进样阀 3 号口注入储存在样品环(Sample loop)内，再由阀门切换将样品带入层析柱； 系统泵上样：由三通阀选择进样管道，由系统泵将样品泵入层析柱。
AKTA操作流程
蛋白层析纯化系统 FPLC：全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography） 操作流程： 1.打开全自动交流稳压器的电源 2.打开FPLC或purifier 100的电源，系统立即进行自检 3.打开电脑电源 4.双击unicon4.12图标，输入用户名和密码，进入系统窗口。?KTA层析软件有四个窗口：UNICORN Main Menu、Method Editor、System Control、Evaluation。如使用程序运行，在Method Editor窗口里编方法设置各种参数(详见注意事项)；如使用手工运行，在System Control窗口里设置各种参数。 5.接入层析柱。如需低温操作，可通冷凝水 6.注入样品，运行程序或手工运行 7.试验结束，先用水冲洗柱子，再用20%乙醇保存柱子，然后拆除柱子，不得带入气泡。取下后放回原位。保存系统及层析柱 8.关机：仔细检查完毕，确信用过的所有管道都已经充满20%乙醇后，退出?KTA层析软件各窗口，脱出UNICORN软件，关闭电脑 9.关闭系统电源 注意事项： 技术指标注意事项： 1. 报警压力参数设置：所有程序运行和手动运行中，必须首先设定报警压力（使用预装柱，编程时由软件自动设定）。压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个最大耐受压力。我们实验室的层析柱如XK16/70Superdex75、200、DEAE-FF等柱子的警报压力均为0.3MPa。Sephacryl-200、Sephacryl-300的警报压力为0.2MPa。 2.紫外灯：如果只是平衡层析柱，关闭紫外灯。FPLC通过FPLC系统主机关闭；Purifier 通过软件lamp off关闭。一般在上样前或前15min打开紫外灯。 3.层析柱的连接：层析柱是玻璃的，一定要轻拿轻放。 层析柱特别是凝胶过滤柱不能有气泡进入，将柱子接入系统时，可在柱子一端接带有液体的注射器，用手推，将气泡排出，同时，给系统一定流速，保证没有气泡的情况下将柱子连入系统。如果有问题，请找管理人员。 4.缓冲液及样品：所有溶液须经过滤和脱气，缓冲液现用现抽滤，以保护系统和层析柱。已经抽滤过的溶液长时间放置后，使用前必须再重新抽滤。 如果是室温纯化，从冰箱拿出的缓冲液温度升到室温后再用，防止温差产生气泡进入系统和层析柱。 所有样品须经过滤，以保护层析柱。少量样品必须经过离心，取上清，不得带入颗粒性和不溶性物质。 5.?KTA系统的日常维护： 紫外灯：紫外灯的使用是有一定的寿命的，所以平时清洗系统及平衡层析柱时，请关闭紫外灯。?KTA FPLC的紫外灯只有单波长280nm和254nm，一般用280nm。?KTA purifier 100的紫外灯可在190nm-700nm间任选三波长，但是对于已知蛋白一般选用280nm关闭其他两个波长足够了，这样可减少摩擦，保护仪器。 pH 电极：小心处理pH电极。每天使用完后从流路中取出保存在电极保护液中。切记不可保存在水中或长时间留在流路中。 在线过滤器（On-line Filter)：如果在没接层析柱时，系统仍有一定压力，若限压器（Flow Restrictor FR-902，FR-904）没有接在流路中，（可能影响低压柱的报警设置），应检查
AKTA使用操作
AKTA 1 先打开AKTA 开关后再开电脑 2 打开软件UNICORN，进入到System Control 3 冲洗系统：泵(Pump)—Pump wash bsic—Pump A-选择 On单击执行(Execute)，立即执行指令，冲洗充满系统，之后会自动结束 4 设置报警： AlarmsQmon—Alarm pressure---highalarm---在参数(Parameters)下面输入新的数值Mpa（根据柱子的信息设置5），单击执行(Execute)，立即执行指令 5 设置流速：泵(Pump)--流量(Flow)—在参数(Parameters)下面输入数值（流速FlowRate），设置一个较小的流速，一般0.5mL/min。单击执行(Execute)，立即执行指令，单击关闭(Close)关闭对话框 6 接注：在冲洗状态运行中接柱子，先打开柱子上端，注满液体，先松松接入接头，去掉柱子下端堵头并接上接头，稍紧，待下接头有液体流出，充满接柱孔后旋紧，然后拧紧柱子上面接头。 7 平衡：冲洗平衡柱子一个柱体积到基线稳定，期间可在接口2和6之间接上样品环，注射冲水洗干净，再用buffer冲洗并充满，注射器不拔，等待上样 8 上样：窗口进入到Flowpath—Injection valve—选择load，单击执行(Execute)。取下注射器，用新的注射器吸取适量的样品（根据样品环的容量，注射器中不要带入气泡）从注射口缓慢的注入样品，注射器不可拔掉。注射完成后，把load改为inject—insert，Alarms&Mon---AutozeroUV--insert，单击执行(Execute)开始上样，走4mL左右时，样品应已从样品环完全进入系统，把inject改为load，单击执行(Execute)，等待出峰收样，同时摆好收样器的位置，准备接收管。 9 收样：出峰时设置Frac---fractionation900---在参数(Parameters)下面输入数值，一般0.5mL—1mL，单击执行(Execute)，结束收样时end结束，保存结果 10：处理：洗脱样品结束后处理系统，先用水冲洗一个柱体积到基线稳定，暂停，换NaOH冲洗至少一个柱体积到基线稳定，再用水冲洗一个柱体积到基线稳定，测PH 为7.0，暂停，换20% 乙醇（Ethanol）冲洗至少一个柱体积到基线稳定， 11：拆柱：先拆下面，取下后松接上堵头，旋松上面的接头，旋紧下面堵头，取下上面接头，柱子上端注满液体，接上端堵头。接好仪器上的接头。 12：关机：关闭软件，保存处理结果。关闭AKATA开关，关闭电脑。
AKTA层析仪使用操作规程
?KTA全自动层析仪操作规程 1. 开机 打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。 2. 准备流动相和样品 所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。 3. 清洗管道及装柱 3.1 首先将A1管道放入平衡液或banding buffering中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffering中，在system control窗口点击manual→pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。泵清洗程序会自动运行结束。 3.2 选择manual→pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择manual→Alarm&mon→ alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道。 4. 手动运行 4.1 平衡 柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值正确曲线走稳了）。此时将紫外调零，选择manual →Alarm&mon→autozero，exectue，就准备上样了。 4.2 上样 4.2.1 用样品环上，将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入（进样量不得低于样 品环的体积的2倍），不要取下注射器。选择manual→flowpath→injectionValve→inject，execute。 4.2.2 用样品泵上样（AKTAexplorer系统），将样品置于Sample Valve 1号位（可以选8个不同 的位置），点击manual→pump→Direct Load_960输入进样流速和体积，execute。注意样品的管路要事先充满缓冲液。 4.2.3 用系统泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine；待样品上完后，再将A1 放入到平衡液中继续清洗柱子。 4.3 洗脱 用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。选择manual→pump→gradient，按照自己的条件选择target ％B（例如100％）和length（例如20min），execute。
AKTA设备常见问题及解决方法--气泡
AKTA设备常见问题及解决方法--气泡 AKTA purifier以及AKTA avant系列液相色谱系统均采用柱塞泵作为液体传输的动力系统，柱塞泵具有精度高并能提供较高压力等优点。为了让设备能长期正常使用，就需要我们日常对设备尤其是系统泵做一些简单的维护保养并及时解决一些常见问题。 AKTA 设备柱塞泵的泵头分为前后两个腔体，前腔是正常缓冲液的流路；后腔是泵后润洗流路，后腔润洗液为20%乙醇。为保证柱塞泵长期正常运转，就需要保证后腔润洗液正常循环并定期更换。 为了保证日常的分离纯化工作正常进行，我们建议大家对所有用于AKTA纯化设备的缓冲液以及20%乙醇溶液都需要进行过滤以及脱气处理，避免层析系统以及层析柱堵塞及进气泡，影响层析效果。一般建议缓冲液脱气处理的方法有负压抽滤，超声脱气等。 气泡从哪里来？ 具体使用AKTA进行实验过程中，当我们所用到的缓冲液未经脱气处理时，实验过程中会有小微气泡逐渐从缓冲液中释放出，聚集在管路当中，小微气泡聚集多了以后会进入泵腔甚至层析柱，导致纯化效率降低；另外由于缓冲液更换、层析柱的拆卸和安装等操作可能也会使AKTA泵腔或层析柱出现进气泡的情况，大家也不必过分担心，可以通过一些操作排除泵腔和层析柱气泡。 怎么来排气泡？ 1、当系统上未连接层析柱时，我们发现设置了一定泵流速，但是系统出口看不到有液 体流出或液体流出速度明显低于设置的流速，这很可能就是泵腔进气泡了，我们可以先分别拧松泵头上黑色的排气阀口，然后将注射器插入抽气发口，快速抽动注射器，这时注射器抽出液体的同时会带走泵腔中的气泡，也可以重复抽几次确保气泡排除。 2、当系统上连接层析柱运行但又没有样品进柱子时，我们观察到280nm的紫外检测信 号出现快速剧烈的波动，这时就是有气泡进入到层析柱中了。这将会导致层析填料利用率下降，纯化效果下降。如果您使用的层析柱为Hitrap 层析柱、XK层析柱或Hiscale层析柱，您可以将902限流阀（反压阀）连接到紫外流通池后部，然后将报警压力设置为层析填料的压力+0.2Mpa或层析柱压力限值中较小一个，然后用不超报警压力但尽可能快的液体流速就可以将气泡排除层析柱。但对于自装的比较大的层析柱或者层析柱中进入的气泡过多，就需要重新装填层析柱。 泵后润洗如何排气泡？
akta层析系统操作入门
AKTAbasic层析系统操作入门 为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。 一系统组件及系统功能介绍 1 系统组件 (1) 泵 Pump 系统泵：(system pump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。 上样泵：(sample pump)样品输送。 (2) 阀 Valve 七通阀：(INV-907)两个。 1. 上样阀(sample valve)，用于上样环切换 (load/inject) 和系统泵清洗时 废液管 (waste) 切换； 2. 流向切换阀(flow direction valve)，用于层析柱流向切换 (downflow/upflow)。 (4) 其它组件 梯度混合器(mixer)、紫外检测仪(UV-900) 。 2 系统功能 系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。 (1) 缓冲液pH及梯度配制 (a)梯度制备 (Gradient) A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。 (2) 层析柱 柱顶连接进样（七通）阀1号口，柱后连接紫外流通池。 (3) 上样 上样阀上样：将样品储存在样品环(Sample loop)，再由阀门切换将样品带入层析柱； 系统泵上样：由系统泵将样品泵入层析柱。 (4) 收集 (选购) 收集器收集：设置收集体积(Frac size)，可自动按条件收集。 二开机程序 1 开启电脑； 2打开AKTAbasic电源； 3启动UNICORN软件，输入用户名( User name) 和密码(Password)，默认用户(default) 密码为 default，待AKTA自检结束后，在system control窗口中显示系统准备就绪（Instruments are ready) 。 三 UUNICORN 软件简介 Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下： Main: 1. 系统关闭(Quit Program)和退出、登陆(Log on/off)； 2. 系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志 等； 3. 文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等； 4. 方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。 Method Editor: 1.方法编辑； 2.缓冲液配方设置（如配方修改或新增配方等） System Control: 1. 系统控制，可以手动控制(Manual)或运行方法(Run Method)； 2. 系统设置，包括Alarms/Special/Monitors/Curves；
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
?KTApurifier层析仪使用操作规程 1、开机 打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。 2、准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。3、清洗及管道准备 首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。泵清洗将自动结束。 4、安装层析柱 在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。 5、开始纯化： 1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。 2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。 3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。 2),3)选择一种方式 4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）。 5）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900，exectue。 6、清洗泵及卸下层析柱： 将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。整个过程防止气泡进入。 7、关闭电源： 从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。