高效液相色谱法测定补肾益寿胶囊中的淫羊藿苷_喻录容

第30卷,第3期光　谱　实　验　室Vol.30,No.3 2013年5月Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May,2013

高效液相色谱法测定补肾益寿胶囊中的

淫羊藿苷①

喻录容　何先元②

(重庆医科大学中医药学院　重庆市沙坪坝区大学城中路　401331)

摘　要　建立高效液相色谱法测定补肾益寿胶囊中淫羊藿苷的含量。色谱条件为Dia monsil TM C18 (250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(30∶70,V/V)为流动相,检测波长270nm,柱温25℃。淫羊藿苷在0.0842—1.2630μg范围内线性关系良好(r=0.9992),平均回收率为99.4%(RSD为0.76%,n=6)。

结果表明,所建立的高效液相色谱法适用于补肾益寿胶囊中淫羊藿苷含量的测定。

关键词　淫羊藿苷;高效液相色谱法;补肾益寿胶囊

中图分类号:O657.7+2 文献标识码:B 文章编号:1004-8138(2013)03-1071-04

1　引言

补肾益寿胶囊由十余味中药组成,其中人参、灵芝、珍珠粉、何首乌、淫羊藿及丹参等有大补气血、健脾益肾、活血化瘀、以及增强机体免疫机制与延年益寿之功[1]。淫羊藿作为主药之一,现有标准对它仅有一个薄层鉴别试验,且分离效果不太理想。本实验增加了一个对淫羊藿测定项目,主要内容是利用高效液相色谱法,测定补肾益寿胶囊中淫羊藿苷的含量,并制定该中成药中淫羊藿苷的最低限量。

2　实验部分

2.1　仪器与试剂

Agilent1100型series高效液相色谱仪(美国Agilent公司);Diamonsil TM C18(250mm×4.6mm, 5μm,日本迪马公司)色谱柱;XS205型分析天平(瑞士梅特勒-托利多有限公司)。

淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0737-200111);补肾益寿胶囊(太极集团涪陵制药厂,批号:88040052,88040123,88040138,88050013,88050067,88050075,88060005, 88060036,88060023,88060047);缺淫羊藿的补肾益寿胶囊阴性对照(自制);乙腈(色谱级,美国Tedia公司);甲醇(色谱纯,江苏汉邦科技有限公司)其余试剂均为分析纯。实验用水为重蒸馏水。

2.2　溶液的配制

对照品溶液的配制:取淫羊藿苷对照品适量(约10mg),准确称定,加甲醇溶解并定容至100m L棕色容量瓶中,摇匀,得100μg/m L的对照品溶液,置于4℃冰箱中避光保存,备用。

供试品溶液的制备:参考2010版《中国药典》一部淫羊藿药材含量测定项下[2],供试品超声提取方法处理补肾益寿胶囊样品,且分别对乙醇溶剂的浓度、用量、超声处理的时间做了一系列的试验,最终选择50%乙醇作为提取溶剂,乙醇溶剂的用量为50m L,超声处理45min,放冷,再称定重

①重庆市卫生局科技项目(2012-2-144)

②联系人,手机:(0)131********;(0)159********;E-mail:yulurong1976@https://www.sodocs.net/doc/8110574152.html,

作者简介:喻录容(1976—),女,重庆市人,讲师,硕士,主要从事天然产物和药物制剂的研究工作。

收稿日期:2012-12-24;接受日期:2012-12-31

量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

阴性样品溶液的制备:按照供试品溶液的制备方法配制阴性对照品溶液。2.3　色谱条件与系统适应性试验2.3.1　检测波长的确定

将淫羊藿苷对照品甲醇溶液(浓度0.10250mg /m L)和补肾益寿胶囊的供试品溶液分别注入色谱仪,采用DAD 紫外进行检测,结果样品中淫羊藿苷色谱峰与淫羊藿苷对照品色谱峰UV 光谱图一致,均在270nm 有特征吸收,故选定270nm 为检测波长(与中国药典2010年版一部中淫羊藿项下淫羊藿苷含量测定的波长一致)。2.3.2　色谱条件

色谱柱:Diamonsil TM

C 18(5μm,4.6mm ×250mm );流动相:乙腈-水(30∶70,V /V );检测波长:270nm;柱温:25℃,流速1.0m L /min,进样量10μL 。

分别准确吸取对照品溶液、供试品溶液和缺淫羊藿苷的阴性对照品溶液各10μL,按照上述色谱条件进样分析,即得,见图1

。

图1　补肾益寿胶囊HPL C 图

A ——淫羊藿苷对照品;

B ——补肾益寿胶囊样品;

C ——阴性对照(缺淫羊藿)。

3　结果与讨论

3.1　线性关系考察

准确吸取对照品溶液,照拟定色谱条件,分别进样1、3、5、10、15μL,测定峰面积。以进样量x (μg )为横坐标,峰面积y 为纵坐标,按照最小二乘法原理进行回归,淫羊藿苷在0.0842—1.2630μg 范围内其进样量和吸收峰面积之间的线性关系良好,回归方程为:y =1795.69x +17.403(r =0.9992)。3.2　精密度试验

取淫羊藿苷对照品溶液(浓度为0.0842m g /m L ),照拟定色谱条件,取10μL 注入液相色谱仪,连续测定5次,其峰面积的相对标准偏差为0.08%,结果表明,精密度良好。3.3　稳定性试验

取补肾益寿胶囊样品(批号:88060047),按供试品溶液的制备方法处理,照拟定色谱条件,每隔

1072

光谱实验室第30卷

2h 测定一次,各进样10μL ,共测定5次,相对标准偏差为1.58%,结果表明,补肾益寿胶囊中淫羊藿苷的含量测定,在8h 内稳定。3.4　重复性试验

取补肾益寿胶囊样品(批号:88060047),按供试品溶液的制备方法分别制备5份供试品溶液,照拟定色谱条件测定,5份淫羊藿苷的相对标准偏差为0.27%,结果表明,重复性良好。3.5　加标回收率试验

取补肾益寿胶囊样品内容物(批号:88040123,已测定淫羊藿苷含量为9.66mg /g ),混匀,取约0.2g ,准确称定共6份(0.2041g 、0.2038g 、0.2045g 、0.2033g 、0.2028g 、0.2031g ),分别置具塞锥形瓶中,依次准确加入淫羊藿苷对照品溶液(浓度为0.0842mg /m L)10m L 于上述锥形瓶中,再按供试品溶液制备方法处理,照拟定色谱条件,测定淫羊藿苷含量,计算回收率,测定结果见表1。

回收率=测得量-样品量

加入量

×100%

表1　补肾益寿胶囊加淫羊藿苷的回收实验结果

样品编号样品中淫羊藿苷的量

(mg)淫羊藿苷加标量

(mg)样品中淫羊藿苷测得量

(mg)回收率(%)1 1.97160.8420 2.812899.92 1.96870.8420 2.808299.73 1.97550.8420 2.8183100.14 1.96390.8420 2.801799.55 1.95900.8420 2.784298.06

1.9619

0.8420

2.7972

99.

2

以上6份的淫羊藿苷平均回收率为99.4%,RSD 为0.76%,加标回收率符合相关方法学要求。

3.6　10批样品含量测定及含量限度的制定

按照拟定的测定方法,对10批样品淫羊藿苷的含量进行测定,结果见表2。

表2　10批补肾益寿胶囊样品中淫羊藿苷的含量测定结果

批号份数淫羊藿苷含量(mg /粒)

淫羊藿苷含量(mg /粒)

8804005212 2.4732.451 2.468804012312

3.2303.242 3.248804013812 2.0452.055 2.058805001312 1.9321.948 1.948805006712 3.3853.364 3.378805007512 3.2013.240 3.228806000512 3.6943.706 3.708806002312 3.3013.319 3.318806003612 3.0153.045 3.0388060047

12

3.4713.460

3.47

根据10批样品测定结果,结合大生产的需要等各种因素,暂拟定本品每粒含淫羊藿苷(C 33H 40

1073

第3期喻录容等:高效液相色谱法测定补肾益寿胶囊中的淫羊藿苷

1074光谱实验室第30卷

O15)不得少于1.7mg。

4　结论

实验结果表明,采用高效液相色谱法测定补肾益寿胶囊中淫羊藿苷的含量,本法方便,快捷,专属性好,准确度和精密度高,重现性好。因此,可以作为补肾益寿胶囊的质量控制检测方法。

本品每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计,不得少于1.7mg。

参考文献

[1]姚菊芳,洪克.从地球化学角度看补肾益寿胶囊[J].广东微量元素科学,2001,8(7):69—71.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010.306—307.

Determination of Icariin in Bushenyishou Capsules

by High Performance Liquid C hromatography

Y U Lu-Rong　H E Xian-Yuan

(Institute of Traditional Ch i nes e Medicine,Chongqi ng Medical University,Chongqing401331,P.R.China)

Abstract　HPLC method for determination of icariin in Bushenyishou capsules content w ere established.The chromatographic co nditions w ere Diamonsil TM C18(250mm×4.6mm,5μm)column, acetonitrile-H2O(30∶70,V/V)as the mobile phase,detection wav elength at270nm,column tem perature at25℃.The co ntent of icariin in Bushenyishou capsules in0.0842—1.2630μg rang e w as a g ood linear relationship(r=0.9992).The av erage recovery rate was99.4%(RSD=0.76%,n=6). The results show that the established HPLC method was suitable for the determination of Icariin in the Bushenyishou capsule.

Key words　Icariin;H igh Perfo rmance Liquid Chromatog raphy;Bushenyishou Capsule

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《光谱实验室》