药物代谢动力学实验讲义全
实验一药酶诱导剂及抑制剂对
戊巴比妥钠催眠作用的影响
【目的】
以戊巴比妥钠催眠时间作为肝药酶体活性指标，观察苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠催眠作用的影响，从而了解它们对肝药酶的诱导及抑制作用。
【原理】
苯巴比妥为肝药酶诱导剂，可诱导肝药酶活性，使戊巴比妥钠在肝微粒体的氧化代加速，药物浓度降低，表现为戊巴比妥钠药理作用减弱，即催眠潜伏期延长，睡眠持续时间缩短。而氯霉素则为肝药酶抑制剂，能抑制肝药酶活性，导致戊巴比妥钠药理作用增强，即催眠潜伏期缩短，睡眠持续时间延长。
【动物】
小白鼠8只，18~22g
【药品】
生理盐水、0.75%苯巴比妥钠溶液、0.5%氯霉素溶液、0.5%戊巴比妥钠溶液
【器材】
天平、鼠笼、秒表、注射器1 ml×4、5号针头×4
【方法与步骤】
一、药酶诱导剂对药物作用的影响
1、取小鼠4只，随机分为甲、乙两组。甲组小鼠腹腔注射0.75%苯巴比妥钠溶液0.1 ml/10g，乙组小鼠腹腔注射生理盐水0.1 ml/10g，每天1次，共2天。
2、于第三天，给各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1 ml/10g，观察给药后小鼠的反应。记录给药时间、翻正反射消失和恢复的时间，计算戊巴比妥钠催眠潜伏期及睡眠持续时间。
二、药酶抑制剂对药物作用的影响
1、取小鼠4只，随机分为甲、乙两组。甲组小鼠腹腔注射0.5%氯霉素溶液0.1 ml/10g；乙组小鼠腹腔注射生理盐水0.1 ml/10g。
2、30分钟后，给各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1 ml/10g，观察给药后小鼠的反应。记录给药时间、翻正反射消失和恢复的时间，计算戊巴比妥钠催眠潜伏期及睡眠持续时间。
【统计与处理】
以全班结果（睡眠持续时间，分）作分组t检验，检验用药组与对照组有无显著性差异。（参见“数理统计在药理学实验中的应用”）
【注意事项】
1、催眠潜伏期为开始给药到动物翻正反射消失的间隔时间，睡眠持续时间为翻正反射消失至恢复的间隔时间。
2、本实验过程中，室温不宜低于20°C，否则戊巴比妥钠代减慢，使动物不易醒。
3、氯霉素溶液有结晶析出时可在水浴中加热溶解。
4、吸取氯霉素溶液的注射器应预先干燥，否则易结晶堵塞针头。
【思考题】
1、何谓肝药酶诱导剂与抑制剂？
2、试从理论上解释苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠睡眠时间的影响。
实验二家兔血浆中水酸钠
浓度测定和药代动力学参数测定
【实验目的】
1. 以水酸钠为例了解血浆药物浓度随时间变化的时量关系。
2. 了解药代动力学参数的临床意义。
【实验材料】
1.动物：家兔1只，雌雄不限，体重（
2.5+0.5）kg。
2.器材：试管5支、离心管3支、试管架、小玻棒、l0ml吸管、注射器(1 ml、
5ml、l0ml)、手术器械、动脉插管、动脉夹、721分光光度计、离心机
3.试剂和药品：25%氨基甲酸乙酯、10%及0.02%水酸钠溶液、10%三氯醋酸溶液、
10%三氯化铁溶液。
【实验步骤】
1.实验准备：
取离心管3支及试管5支，编号备用，麻醉（乌拉坦4ml/Kg），1～3号离心管及4、5号试管中分别加入10%三氯醋酸7ml
2.手术：
颈动脉取血2ml,放入1号离心管
3.给药：
耳缘静脉注入10%水酸钠，150mg/Kg，取血（5,35min分别取血2ml放入2、3号离心管，4、5试管分别加入蒸馏水及0.02%水酸钠2ml）
4.离心：
2000r/分，5min，取上清液6ml，加入10%三氯化铁（12滴），比色（5min后，波长510nm），计算结果。
【注意事项】
1.注意颈总动脉插管术。
2．取血时，要先用0.1%肝素润湿注射器和针头，取血后用肝素封管，避免血液
凝固，每次取出血第1ml 弃去不用，再吸取2ml 置于离心管。 3.给药时间及给药后取血时间要记清。
4.取上清夜时，要先将上清液倒入编号相对应的试管中，再吸取所需的ml 数，以免吸入沉淀影响比色，注意吸管要对号使用。
5.计算Vd, CL 时注意单位换算。
【实验结果】
管号 光密度（X ） 水酸钠浓度（Y ）g/100ml 标准管（5号） X 0.02 给药后5min （2号） X 1 C 1 给药后35min （3号） X 2 C 2 计算：
1、半衰期（t 1/2）: K=y/x
C 1=kx 1,C 2=kx 2(单位:g/100ml)
t 1/2=
t
C C ?-/)2log 1(log 301
.0 （单位：min ）
注:k 为清除速率常数，y 为0.02g/100m1,x 为标准管即5号管的光密度值; C1, C2分别为给药后5、35分钟取血时的血药浓度;△t 为两次取血的时间差。 2、表观分布容积（Vd ）：
C 0=C 1×lg -1(0.301×t 1/t 1/2)(单位：g/100ml) Vd=
D 0/C 0（单位：L/Kg ）
注：D 0为用药初始剂量（150mg/Kg ），t1为用药后到第一次取血的时间间隔 3、清除率（CL ）：
CL=0.693/t 1/2×Vd （单位：ml/min.Kg ）
实验三氨茶碱的血药浓度测定及药动学
研究
【实验目的】
掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。
【实验原理】
1.氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成。在酸性条件下,可用
有机溶剂从血清中提取出茶碱,再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出。测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度），ΔA= A274-A298。
2. 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型。
3. 房室模型是抽象的数学模型，它的划分与解剖学部位或生理学功能无关。药物转运速率相同或相近的部位可划分为同一房室。房室模型可以分为一室模型、二室模型、多室模型。大多数药物在体的转运和分布符合二室模型。即药物静脉注射入血后，首先快速进入血流量大的组织，如心、肝、肾、肺、脑等，然后缓慢地向血流量小的组织，如脂肪组织、静止的肌肉组织等转移。
【实验材料】
1、动物
家兔1只，雌雄不限，体重（2.5+0.5）kg
2、药品
氨茶碱标准液
3、试剂
0.1mol/L HCl
0.1mol/L NaOH
异丙醇：氯仿抽提液（5:95）。
4、仪器
754型紫外分光光度计
液体涡旋混和器
数学坐标纸一
半对数坐标纸一。
【实验方法】
1 动物实验部分
1.1取健康家兔1只，称重，将家兔置于兔台。
1.2 在家兔一耳缘注射部位去毛、热敷和消毒，待血管扩后，以左手拇指与食指
压住静脉耳根端，使静脉充盈，给药前用12号针头自耳静脉取血1-1.5ml，7号针头平行刺入静脉，抽动针管，见有回血即可推注。对其静脉注射氨茶碱15mg/kg。
1.3另一耳用锐利刀片切割取血。分别在给氨茶碱后5、10、20、30、60、120、
180、300、420min取血。
1.4分离血清，各管均取血清0.5ml于15ml试管中，加0.1mol/L盐酸0.2ml、
抽提液5ml，振摇混合，2500r/min离心10min。
2 血药浓度测定（紫外分光光度法）
2.1 吸取下层氯仿液4ml置另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，振摇混
匀，2500r/min离心10min。
2.2吸取上层碱液，以0.1mol/L NaOH溶液4ml作参比，振摇混匀，2500r/min
离心10min。
测定其在λ274和λ298处的吸收度（A274和A298），计算△A。
3 制作茶碱标准曲线：取5支试管，依次加入茶碱标准液20、40、60、80、100μl，各加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，终浓度依次为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml，
测定各管的A274和A298，计算△A。以茶碱浓度为横坐标，△A为纵坐标描点
绘图，用Excel软件求直线回归方程，即为茶碱标准曲线的直线方程（图示）。
4. 将测得血清样品的△A代入标准曲线的方程，求得相应的C，C×10即为茶碱
的血药浓度。以时间为横坐标，浓度对数为纵坐标，用CAPP软件描点做图，
判断氨茶碱在体代的房室模型。
【注意事项】
1.紫外分光光度计使用前需预热30min并激发氢灯。
2.振摇混匀药液时防止溅出并准确加样。
3.样品离心前需配平。
4.测量时若更换波长，必须重新调节0和100％。
【讨论】
1.氨茶碱的时量曲线呈几房室模型？为什么？
2.为何要测两个波长下茶碱的吸光度并取其差值？
3.试述药动学参数V1、Vd、t1/2α、t1/2β、K10、K12、K21、Cl、AUC的含义。