细胞生物学实验报告记录
细胞生物学实验报告记录
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实验一：细胞的形态观察及其大小测量
一、实验目的：
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；
2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。
二、实验材料和仪器：
小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；
普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。
三、实验步骤：
(一)细胞形态观察
l、动物细胞的观察
（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
（2）鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
（二）细胞的大小和测量
1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜
的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至
能看清镜台测微尺的分度。
3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上
透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的
直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每
格等于多少μm：
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数=—————————× 10
目镜测微尺的格数
四、实验结果：
1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24
2、细胞大小的测量：
测量次数
细胞种类一/um 二/um 三/um 平均/um
人肝细胞（10×
19.44×21.3618.00×18.96 16.32×19.68 17.92×20.00
40）
血红细胞（10×
7.20 7.68 7.68 7.52
40）
血白细胞（10×
9.12 9.60 9.84 9.52
40）
血小板（10×10） 1.44 1.44 1.44 1.44
栅栏组织（10×
9.12×79.20 10.08×81.1210.56×80.649.92×80.32
40）
五、作业与思考：
1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。
白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要的功能是运送氧。白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。
2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。
3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。
实验二：PAS（Periodic Acid Schiff）反应显示糖原和其它多糖物质
一、实验目的
1、熟悉PAS法原理及操作步骤；
2、观察PAS反应的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。
二、实验原理
多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一般称为结构多糖。另一些多糖在生物体内作为能量贮存，如淀粉（植物）和糖元（动物），在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。
三、实验用品：
过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯（1：1）。
梯度乙醇溶液：100％，95％，90％，80％，70％，50％各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。
载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。
四、实验步骤:
（一）土豆切片的观察
制作土豆徒手切片→过碘酸处理15～30min→70%乙醇1min→schiff 试剂15min →亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→镜检
（二）小鼠肝细胞切片的观察
取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min →二甲苯+100%乙醇（3 min）→梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇（100％，95％，90％，80％，70％，50％）中约2～3 min →过碘酸氧化15～30 min →蒸馏水漂洗→Schiff 试剂15～30 min →亚硫酸水漂洗2～3
次→蒸馏水漂洗→苏木精染色10 min →流水冲洗→梯度乙醇脱水（50％，70％，80％，90％，95％，100％），在各乙醇浓度中约2～3 min →100%乙醇+二甲苯2～3 min→二甲苯适度透明→指甲油封片→镜检
五、实验结果：
六、作业与思考:
1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。
土豆切片中，多糖多在细胞质液泡中。
鼠肝切片中，多糖多在靠近核的区域。
2、影响PAS 反应染色效果的关键步骤是什么？
Camey固定液固定；Schiff 染色液染色；对分色的控制。
3、如何制作徒手切片？应注意什么才能得到薄而均匀的切片？
应注意需要连续快速地切下多片薄片，并从中选出较好的切片。
实验三：叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理：
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
某些物质在一定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光，这种光就称为荧光。若停止供能，荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧光）。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧光）。
三、实验材料和仪器：
普通离心机,粗天平,荧光显微镜，剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管, 10ml刻度离心管,纱布若干, 无荧光载玻片和盖玻片，新鲜菠菜，0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)、
四、实验步骤：
1、叶绿体的分离
（1）选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后，去除叶梗及粗脉并剪碎，称取2g左右，置于预冷的研钵；
（2）加10ml的0.35mol?L-1 NaCl溶液研磨匀浆；
（3）用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中；
（4）取滤液4ml于1000rpm离心2min，弃去沉淀；
（5）将上清液3000rpm离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）；
（6）沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察
（1）滴叶绿体悬浮液一滴于载片上，加盖片；在普通光镜下观察，注意观察所分离的叶绿体的形态以及其是否完整。
（2）滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上，加无荧光盖片；在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光，其颜色如何。
（3）滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01％吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察其次生荧光。
3、完整细胞中的叶绿体观察
（1）用镊子撕取一片菠菜叶子表皮，平铺于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
（2）用镊子撕去菠菜叶子的表皮，用刀片刮下一些叶肉细胞，放于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
（3）将以上两种制片进行一下三种方式的观察：
a、通光镜下观察。
b、光显微镜下观察。
c、加一滴0.01％吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后，在荧光显微镜下观察。
五、实验结果:
叶绿体自发荧光叶绿体次生荧光
六、作业与思考：
1、描述你所观察到的实验现象，自发荧光和次生荧光的区别？
自发荧光：有些生物体内的物质受激发光照射后，直接发出的荧光称为自发荧光，如叶绿素的火红色荧光。
间接荧光：有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，则称为间接荧光，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。 2、叶绿体分离的原理是什么？操作过程中应注意什么？
通过研磨绿色植物叶片使叶肉细胞破损，叶绿体被释放到提取液中，再通过等渗介质中差速离心去除杂质， 再次离心，则可分离出叶绿体沉淀。
应注意须在低温下迅速提取，且须注意等渗液溶度，离心速度和时间的把握，避免叶绿体破裂。
表皮细胞（荧光）
木质素（荧光）
表皮细胞（光镜）
实验四：吖啶橙(acridine orange)染色
观察口腔上皮荧光
一、实验目的
1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。
2、观察荧光染料染色后结合物发出的荧光。
二、实验原理
吖啶橙荧光染料可与细胞内DNA和RNA结合。其吸收光谱405nm，发射的荧光光谱是530～640nm，因此，吖啶橙和不同的细胞成分结合后，可发射红橙黄绿蓝各色荧光。
三、实验用品
荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签；口腔黏膜上皮细胞临时制片；
0.1mol/L pH7、0 PBS液。0.1％吖啶橙原液、95％乙醇
四、实验步骤
1、用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上；
2、95％乙醇溶液固定5min；
3、滴加0.01％吖啶橙染液染色5min；
4、用PBS缓冲液缓慢冲洗；
5、加盖玻片镜检。
五、实验结果
口腔上皮细胞（荧光）