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题

红色法拉利2006-06-01 21:50原核表达手册(中文版)

可以说是原核表达宝典级读物,MERCK公司产品,让你对原核表达有个更深的认识,不错的东东，推荐大家读读

红色法拉利2006-06-01 21:57之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的系列载

体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darm stadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。

Novagen公司出品的系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌体转录系统进行表达的载体，其表达原理见下图。

T7噬菌体具有一套专一性非常强的转录体系，利用这一体系中的元件为基础构建的表达系统称为T7表达系统。T7噬菌体基因编码的T7RNA聚合酶选择性的激活T7噬菌体启动子的转录。它是一种高活性的RNA聚合酶，其合成m RNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍左右。并可以转录某些不能被大肠杆菌RNA聚合酶有效转录的序列。在细胞中存在T7 RNA聚合酶和T7噬菌体启动子的情形下，大肠杆菌宿主本身基因的转录竞争不过T7噬菌体转录体系，最终受T7噬菌体启动子控制的基因的转录能达到很高的水平。

T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶，因此T7 RNA聚合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调控方式。噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，一段含有lacⅠ，lacUV5启动子和T7 RNA聚合酶基因的 DNA片段倍插入其int基因中，用噬菌体DE3的溶源菌，如BL21(DE3)、 HMS174(DE3)等作为表达载体的宿主菌，调控方式为化学信号诱导型，类似于Lac表达系统。

从开始涉及表达的时候可以根据是否要用基因本身的起始密码子进行选择，Novagen公司仅提供三个载体：-21(+)，-24(+)和

-23(+)。如果你打算利用载体的起始密码子，那么就有许多选择。

根据是否要可溶性表达，选择加有不同标记的载体。一般说来在大肠杆菌中不加标记外源蛋白都会以不溶的包涵体形式表达。为了让外源蛋白融合表达一般说来有三个策略：

1. 与一个高度可溶的多肽联合一起表达，比如：谷胱甘肽S转移酶

（glutathione S transferase, GST）、硫氧还蛋白

（thioredoxin, Trx）和N利用质A（N utilization substance

A, NusA）。

2. 转入一个酶催化二硫键的形成，如：硫氧还蛋白，DsbA，DsbC。

3. 插入一个定位到周质空间的信号序列。

不同载体提供不同的标记，有的可以同时带有多个标记。如果你不希望在蛋白的N末端加入任何的多肽，你也可以选择用NdeⅠ直接从起始密码子后插入外源片断，或者在得到表达产物后利用蛋白氨基酸的酶切位点把多余的多肽切除。在重组技术上，Novagen除了传统的酶切、连接方式外，还有不需要连接的克隆方式：Ligation-Independent cloning，简称LIC。采用LIC方法的载体是线性化的，在末端有12-15个突出的碱基以在退火时和目的片断互补。在设计PCR扩增引物时加入与LIC载体互补的序列，PCR产物用3’→5’的内切酶消化出单链与载体互补的序列。通过这种方式就可以把目的片断定向、高效地插入LIC载体上。

一般的载体是先在不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选，之后再把阳性克隆转化进入表达菌株，如BL21（DE3）中，通过IPTG诱导进行表达。而coco载体它引入了低拷贝控制元件，F附加体上的oriS和 repE元件与parABC 共同作用下使质粒在细菌中保持单拷贝，这样即可以使质粒在细菌内稳定存在又可以减少外源蛋白对细胞的毒害作用。当我们需要大量表达时加入树胶醛醣诱导trfA基因表达，质粒在细胞内的拷贝数就可以增加到25-50。coco载体同时兼容了DE3调控模型，在加入IPTG后诱导表达量达升高2500倍。

在保证质粒稳定性这一点上除了coco的方法还有另一种方法就是将重组质粒转化进入含有T7 RNA聚合酶抑制剂的T7溶菌酶表达基因的菌株中，在含有pLysS的pLysE宿主菌内重组质粒的本底表达被进一步抑制，质粒可以更稳定地存在。

Novagen提供多种表达使用的菌株，为了提高表达量做出了各种改造，它们大致分为以下几个种类：

1. 蛋白酶缺陷型所有B菌株的衍生株都是lon蛋白酶和om pT蛋白酶缺陷型的，这包括有B834, BL21, BLR, Origam i? B, Rosetta?和Tuner?。因此在纯化时可以保持蛋白的稳定不被降解。BL21(DE3)是应用最多的表达的表达菌株。另外它的衍生株BLR(DE3)是recA－，RecA是大肠杆菌中介导同源重组的重要蛋白之一。它的缺失，可以保证质粒的稳定。

2. 保证所有细胞以同样量进行表达

Tuner?株及它的衍生株（Origam i? B和Rosetta?）是BL21菌株的lacY1缺失突变型，在这些菌株中可以使蛋白以同样水平在所有细胞中表达。Lac渗透酶的突变使进入每个细胞的IPTG量都是一致的，这样使蛋白表达浓度可以随着IPTG浓度而改变。通过对 IPTG浓度的控制可以使细胞微量表达或者大量表达。一般说来，低浓度表达有利于蛋白的可溶性和活性。

3.二硫键形成与溶解性增强二硫键的形成对某些蛋白的可溶性起到重要的作用，而Novagen也专门设计了一些菌株是谷胱甘肽还原酶（gor）和/或硫氧还蛋白还原酶（trxB）缺陷型的，包括AD494，BL21trxB，

Origam i，

Origam i B和Rosetta-gam i?。在这些菌株中表达蛋白，可以更大程度促进二硫键的形成，并使蛋白以可溶形式和有活性形式出现的可能增加。

4. 稀有密码子的补给不同物种有不同的密码子偏爱性，如果外源蛋白中含大量大肠杆菌的稀有密码子，特别当这些稀有密码子呈连续分布的时候，就会造成蛋白表达量极低，或者翻译提前终止。Rosetta?是为了表达真核蛋白而特别设计的，它含有大肠杆菌稀有的密码子tRNA，包括AUA，AGG，AGA，CUA，CCC和GGA。它们以氯霉素抗性的质粒形式存在。Rosetta系列是来自BL21lacY1，所以它具有 BL21lacY1的所有特性。

5. 硒蛋氨酸标记 B834是来源于BL21的蛋氨酸（m et）营养缺陷型菌株。它在高度特异活性35S-m et标记和晶体成像蛋氨酸标记中非常有用。

我们常用的培养基有LB、TB、M9、M9ZB，LB因为其成本低廉所以应用最为广泛，而Novagen有提供特殊的培养基Overnight Express? Autoinduction System。使用这种培养基不需要按照传统方法先培养一段时间再加IPTG进行诱导，它可以直接进行过夜培养。在这种培养基中含有痕量金属，可以满足合成蛋白时对金属的需求。同时提供除了各种氨基酸，这其中蛋氨酸是另外加入的。这样培养基可以满足细菌生长的各种需求，使细菌密度更高；可以自动诱导无需自己加IPTG；使蛋白更加容易溶于培养基中；并且如果需要的话，可以对蛋氨酸进行硒标记。

同时Novagen还有表达双外源蛋白的载体pCDFDuet-1 DNA 、Duet?-1 DNA 、pRSFDuet-1 DNA。这些载体含有两个不同多克隆位点，可以插入两个外源蛋白基因，利用单独的T7 启动子, 乳糖操纵子和核糖体结合位点进行表达。载体转化进入合适的菌株中最多可以同时表达8个外源蛋白。

红色法拉利2006-06-01 21:57人们合成与生物相关的物质是从尿素开始的，1828年，德国化学家维勒人工合成了存在于生物体的这种有机物。在1960年我国科学家采用化学方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白质——胰岛素。随着内切酶的发现和基因工程技术的发展，人们发现用各种不同的载体在原核、真核系统中进行蛋白表达更为行之有效。而这其中大肠杆菌表达系统发展得最为迅速、成熟。原核表达具有操作方便、快捷，需时较短，表达量大，适合工业化生产等优点。虽然也有缺少糖基化和表达后加工等问题，当有了其它多种表达系统后，原核系统仍是我们合成外源蛋白的首选。

在网上看到有人把原核表达技术分成四个等级：初次尝试扫盲、乱棍打枣入门、系统优化中级和自成一体高手，觉得十分有意思。但是根据笔者自己的经验以及耳闻目睹的一些经历告诉我：做表达？那是谋事在人，成事在天。有时候你把克隆做出来了，双酶切鉴定没问题，测序没问题，可是就是看不到表达带。原因当然可以分析，实验也是可以改进，但是窜改一下戈尔泰的话：“成功的实验都是一样的，失败的实验各有各的不幸。”在实验遇到瓶颈的时候要如何进行分析，找到问题的症结是我们的实验关键所在。在准备进行原核表达的时候需要考虑的因素很多，市面上可供选择的载体、菌株也很多，要如何进行正确的选择，找到适合自己的载体是十分重要的。所以，现在要对目前常用的一些载体进行介绍，让我们对其相关产品及其表达原理进行了解，以方便实验设计。首先来一些大肠杆菌表达的基本概念：一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株，如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测等等。选择表达系统通常要根据实验目的来考虑，比如表达量高低，目标蛋白的活性，表达产物的纯化方法等等。主要归结在表达载体的选择上。

表达载体：我们关心的质粒上的元件包括启动子，多克隆位点，终止密码，融合Tag（如果有的话），复制子，筛选标记/报告基因等。通常，载体很贵，我们可以通过实验室之间交换得到免费的载体。但是要小心，辗转多个实验室和多个实验室成员之手的载体是否保持原来的遗传背景？MCS是否还是原来那个MCS？是我们要特别注意的。

复制子：通常表达载体都会选用高拷贝的复制子。pSC101类质粒是严谨方式复制，拷贝数低，pCoE1，

pMBI(pUC)类的复制子的拷贝数高达500以上，是表达载体常用的。通常情况下质粒拷贝数和表达量是非线性的正相关，当然也不是越多越好，超过细胞的承受范围反而会损害细胞的生长。如果碰巧需要2个质粒共转化，就要考虑复制元是否相容的问题。

筛选标记和报告基因：氨苄青霉素抗性是最常见的筛选标记，卡那霉素或者是新霉素次之，通常是另一个载体的

筛选标记用。四环素，红霉素和氯霉素等已经日渐式微。抗性基因的选择要注意是否会对研究对象产生干扰，比如代谢研究中要留意抗性基因编码的酶是否和代谢物相互作用。在表达筛选中要注意的问题应该就是LB倒板前加抗生素的温度，温度过高容易导致抗生素失效。今天耐青霉素的超级细菌泛滥，不知道是否有我们实验人员的功劳呢？大家“随便倒掉”已经获得氨苄抗性的大肠杆菌之前有没有经过煮沸或者消毒等处理呢？从以前的一针50万单位到现在100多万个单位，青霉素剂量似乎越来越大了。

对于做表达来说，如果不是要研究启动子的强弱，通常比较少关心或者用到报告基因吧。绿色荧光蛋白是最常用的报告基因了（注意选择适用原核表达版本的GFP），其他还有半乳糖苷酶啊，荧光素酶啊等等。一些融合表达Tag也有报告基因的功能。

启动子、终止子和核糖体结合位点

启动子：启动子的强弱是对表达量有决定性影响的因素之一。从转录模式上看有组成型表达和诱导调控型表达。lac和Tac，PL和PR，T7是最常用的启动子，生物通在下面和后继的文章中会逐一介绍

组成型表达：表达载体的启动子为组成型启动子，也就是一直努力不停表达目的蛋白的启动子，如pMAL系统。持续性表达通常表达量比较高，成本低，但是不适合表达一些对宿主细菌生长有害的蛋白。因为过量或者有害的表达产物会影响细菌的生长，反过来影响表达量的积累。

诱导调控型表达：表达载体采用诱导型启动子，只有在诱导剂存在的条件下才能表达目的产物。这种方法有助于避免菌体生长前期高表达对菌体生长的影响，又可减少菌体蛋白酶对目标产物的降解。特别适合解决有毒蛋白的表达。另外也有启动子是组成型的，但是启动子所依赖的转录酶是诱导表达的，也属于诱导表达系统。

融合表达：表达载体的多克隆位点上有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。对于特别小的分子建议用较大的Tag（如GST）以获得稳定表达；而一般的基因多选择小Tag以减少对目的蛋白的影响。His-Tag是最广泛采用的Tag。

分泌表达：在起始密码和目的基因之间加入信号肽，可以引导目的蛋白穿越细胞膜，避免表达产物在细胞内的过度累积而影响细胞生长，或者形成包含体，而且表达产物是可溶的活性状态不需要复性。通常这种分泌只是分泌到细胞膜和细胞壁之间的周质空间。

可溶性表达：大肠杆菌表达效率很高，特别是强启动子，目的蛋白来不及折叠而形成不溶的包含体颗粒，包含体容易纯化但是复性效率不高。分泌表达可以得到可溶的产物，也有部分融合Tag有助于提高产物的可溶性，比如Thio，pMAL系统。

转录终止子对外源基因在大肠杆菌中的高效表达有重要作用——控制转录的RNA长度提高稳定性，避免质粒上异常表达导致质粒稳定性下降。放在启动子上游的转录终止子还可以防止其他启动子的通读，降低本底。转录终止子有两类，Rho因子作用下使转录终止m RNA和根据模版上的对称序列形成发夹结构而终止m RNA。常见的是rrnB rRNA操纵子的T1T2串连转录终止子。

核糖体结合位点：启动子下游从转录起始位点开始延伸的一段碱基序列，其中能与rRNA16S亚基3'端互补的SD序列对形成翻译起始复合物是必需的，多数载体启动子下游都有SD序列，也有些载体没有，适合自带SD序列的基因表达，要留意。

表达菌株：我们往往最容易忽视的一点。不同的表达载体对应有不同的表达菌株，一些特别设计的菌株更有助于解决一些表达难题，这一点生物通会有专门的介绍。同样的，交换获得的免费菌株，要小心其遗传背景是否已经发生改变？当心。

注：以上各种特性是可以相互组合的，不是排他的！

几个常用的启动子和诱导调控表达系统

最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子，由启动子Plac +操纵基因lacO +结构基因组成。其转录受CAP正调控和lacI负调控。lacUV5突变能够在没有CAP的存在下更有效地起始转录，该启动子在转录水平上只受lacI的调控，因而随后得到了更广泛采用。lacI产物是一种阻遏蛋白，能结合在操纵基因lacO 上从而阻遏转录起始。乳糖的类似物IPTG可以和lacI产物结合，使其构象改变离开lacO，从而激活转录。这种可诱导的转录调控成为了大肠杆菌表达系统载体构建的常用元件。tac启动子是trp启动子和lacUV5的拼接杂合启动子，且转录水平更高，比lacUV5更优越。trc启动子是trp启动子和lac启动子的拼合启动子，同样具有比trp更高的转录效率和受lacI阻遏蛋白调控的强启动子特性。在常规的大肠杆菌中，lacI阻遏蛋白表达量不高，仅能满足细胞自身的lac操纵子，无法应付多拷贝的质粒的需求，导致非诱导条件下较高的本底表达，为了让表达系统严谨调控产物表达，能过量表达lacI阻遏蛋白的lacIq 突变菌株常被选为Lac/Tac/trc表达系统的表达菌株。现在的Lac/Tac/trc载体上通常还带有lacIq 基因，以表达更多lacI阻遏蛋白实现严谨的诱导调控。IPTG广泛用于诱导表达系统，但是IPTG有一定毒性，有人认为在制备医疗目的的重组蛋白并不合适，因而也有用乳糖代替IPTG作为诱导物的研究。另外一种研究方向是用lacI的温度敏感突变体，30度下抑制转录，42度开发。热诱导不用添加外来的诱导物，成本低，但是由于发酵过程中加热升温比较慢而影响诱导效果，而且热诱导本身会导致大肠杆菌的热休克蛋白激活，一些蛋白酶会影响产物稳定。

以λ噬菌体再起转录启动子PL、PR 构建的载体也为大家所熟悉。这两个强启动子受控于λ噬菌体cI基因产物。cI 基因的温度敏感突变体cI857(ts)常常被用于调控PL、PR 启动子的转录。同样也是30度下阻遏启动子转录，42度下解除抑制开发转录。同样的，PL、PR 表达载体需要携带cI857(ts)菌株作为表达载体，现在更常见的做法是在载体上携带cI857(ts)基因，所以可以有更大的宿主选择范围。另外一种思路是通过严谨调控cI产物来间接调控PL、PR 启动子的转录。比如Invitrogen的PL 表达系统，就是将受trp启动子严谨调控的cI基因溶源化到宿主菌染色体上，通过加入酪氨酸诱导抑制trp启动子，抑制cI基因的表达，从而解除强大的PL 启动子的抑制。

T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流，这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选，尤其以Novagen公司的系统为杰出代表。强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA 聚合酶，而高活性的T7 RNA 聚合酶合成m RNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍——当二者同时存在时，宿主本身基因的转录竞争

不过T7表达系统，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶，需要将外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌，因而T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式——非诱导条件下，可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录，从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响；通过控制诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量，就可以控制产物表达量，某些情况下可以提高产物的可溶性部分。有何高招？且看生物通为你一一道来：

有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶的合成，从而调控T7表达系统。

1.噬菌体DE3是lam bda噬菌体的衍生株，含有lacI抑制基因和位于lacUV5启动子下的T7 RNA 聚合酶基因。DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)就是最常用的表达菌株，构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中，诱导调控方式和lac一样都是IPTG诱导。

2.另一种策略是用不含T7 RNA聚合酶的宿主菌克隆目的基因，即可完全避免因目的蛋白对宿主细胞的潜在毒性而造成的质粒不稳定。然后用λCE6噬菌体侵染宿主细胞——CE6是lam bda噬菌体含温度敏感突变(cI857ts)和

pL/pR启动子控制T7 RNA 聚合酶的衍生株，在热诱导条件下可以激活T7 RNA 聚合酶的合成。

此了噬菌体之外，还可以通过共转化质粒提供T7 RNA 聚合酶。比如有人用受溶氧浓度控制的启动子调控T7 RNA 聚合酶合成，据说这比较适合工业化发酵的条件控制。

由于T7 RNA 聚合酶的调控方式仍有可能有痕量的本底表达，控制基础表达的手段之一是培养基外加葡萄糖，有助于控制本底表达水平。2.是采用带有T7lac 启动子的载体——在紧邻T7 启动子的下游有一段lacI操纵子序列编码表达lac 阻遏蛋白(lacI)，lac 阻遏蛋白可以作用于宿主染色体上T7 RNA 聚合酶前的lacUV5 启动子并抑制其表达，也作用于载体T7 lac 启动子，以阻断任何T7 RNA聚合酶导致的目的基因转录。pLacI工转化也是同样的原理。

如果这还不够，更为严谨调控手段还有——在宿主菌中表达另一个可以结合并抑制T7 RNA 聚合酶的基因——T7融菌酶，降低本底。常用的带溶菌酶质粒有pLysS和pLysE，相容的ori都不会影响后继的表达质粒转化，前者表达的溶菌酶的水平要比后者低得多，对细胞生长影响小，而pLysE会明显降低宿主菌的生长水平，容易出现过度调节，增加蛋白表达的滞后时间，从而降低表达水平。

通过几种不同方法来巧妙调控T7聚合酶合成，T7启动子发展出了史上功能最强大，最丰富的表达系统。生物通在下面首先进行主流表达系统介绍：了解各种产品的特色，是选择合适的表达系统的关键哦。

红色法拉利2006-06-01 21:58生物通原核表达技术专辑：表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。

原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半。做足准备功夫，可是省去很多将来后悔的事情。首先，我们要根据是否要求可溶将载体分成两大类，如果希望可以同时尝试多种表达系统，也有许多商业化的系统供选择。

前面已经介绍过许多公司的商业化载体、菌株和多系统表达体系，现在我想先从自己的蛋白分析讲起。同样的载体、同样的系统，很可能表达这个蛋白表达量奇高，但是另外一个就是做不出来，所以没有万能的载体，只有永恒的分析。当然如果你的蛋白曾经在原核系统中成功表达出来那是最好的，选择同样的载体表达成功率会高很多。如果没有也最好尝试找一些曾经表达过和你的蛋白拥有相类似结构的文献。比如大部分含有哺乳动物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列载体表达出来的。根据经验而言，含有较少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小为60kD的单体蛋白较容易表达。

在下面将列出几个影响表达的因素，大家可以在表达前根据这几个因素自己分析一下：

1. 翻译起始位点

现在大部分的表达载体都提供起始位点，所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行优化了，一般情况下不需要自己再加，不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子

2. GC含量

表达序列中的GC含量超过70％的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。GC含量可以利用DNA STAR、Vector NTI Suite等软件进行预测。

3. 二级结构

在起始密码子附近的m RNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻译暂停从而产生不完全的蛋白。如果利用软件分析DNA或RNA结构上有柄（stem）结构，并且结合长度超过8个碱基，这种结构会因为位点专一突变等因素而变得不稳定。

4. 基因或者蛋白的大小

一般说来小于5kD或者大于100kD的蛋白都是难以表达的。蛋白越小，越容易被降解。在这种情况下可以采取串联表达，在每个表达单位（即单体蛋白）间设计蛋白水解或者是化学断裂位点。如果蛋白较小，那么加入融合标签GST、Trx、MBP或者其它较大的促进融合的蛋白标签就较有可能使蛋白正确折叠，并以融合形式表达。

对于另一个极端，大于60kD的蛋白建议使用较小的标签，如6×组氨酸标签。对于结构研究较清楚的蛋白可以采取截取表达。当然表达时要根据目的进行截取，如果是要进行抗体制备而截取，那么一定要保证截取的部位抗原性较强。对于抗原性也可以利用软件分析，比如Vector NIT Suite或者一些在线软件，不过在分析之余也要认识到这是一种数据统计的结论，如果蛋白和免疫动物亲缘关系较远的话还是不妨一试的。

5. 亲疏水性

这也是一种经验之谈，相信经常做表达的人都发现表达亲水区域时表达量会比较高，如果你要表达一个膜蛋白，那么劝你做好长期抗战的准备吧。有许多软件可以对氨基酸的亲疏水性进行分析，比如Vector NIT Suite，除此之外还可以利用在线跨膜区预测软件http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/对跨膜区进行预测。

对于自己表达的蛋白有所了解后就可以开始对载体进行选择了，目前商业化的载体基本上包含以下几个元件：除了上面标出的元件外还需要有复制起点，它对于控制质粒的拷贝数非常重要；另外就是筛选标记了，比如蓝白斑筛选的lacZ，各种抗生素标记。在以上几个元件中，我们需要注意的是负责调节与启动的元件，也就是调控子和启动子。其中启动子对于蛋白表达的速度起着举足轻重的作用，它与最终蛋白的表达量、是否可融密不可分。这里，对于世面上广泛销售的几种原核表达载体使用的启动子进行总结。

启动子来源调控手段（浓度）强度

LacUV5 乳糖操纵元 lacI/IPTG (0.1-1m M) 强

Trp 色氨酸操纵元 trpR 3-β-吲哚丙烯酸强

Tac 结合了色氨酸启动子的-35序列和乳糖启动子的-10序列 lacI/IPTG (0.1-1m M) 强

PL λ噬菌体λcI阻遏物/温度强

噬菌体T5 T5噬菌体 lacI/IPTG (0.1-1m M) 强

pBAD 阿拉伯糖操纵元 AraBAD/阿拉伯糖（1μm-10m M）严谨

T7 T7 RNA聚合酶 lacI/IPTG (0.1-1m M) 非常强

乳糖操纵子是应用最广泛的调控模式，除了IPTG这种化学诱导方式之外还有利用吲哚丙烯酸和阿拉伯糖的化学诱导。如果你害怕这些化学物质会损害细菌的生长，那么你可以尝试利用温度诱导的载体，如：pDH2。它利用PL 启动子，在温度上升到42℃后进行诱导表达。

可以看到在所有启动子里属T7启动子最强，它可以将大肠杆菌的资源最大程度地调用过来表达外源蛋白。这样一些难表达的蛋白都可以在系统里面表达出来，但是是不是越强就越好呢？如果你需要表达蛋白是可溶的，那么T7启动子就不那么适合了。较弱的启动子转录速度较慢，这样对于表达可溶、稳定、完整的蛋白比较有利。

Novagen可以说是的系统是最王牌的T7启动子表达系统，可是当T7启动子的强启动效应不受欢迎的时候怎么办呢？在这里给读者留个小小的疑问，看看大家有没有仔细看笔者写的Novagen篇。提示一下，虽然它转录速度快，但是可以控制它的拷贝数，又或者是……利用这些原理Novagen载体也可以毒性高的外源蛋白。

载体上除了启动子这个需要注意之外，另外一个就是标签了。很多标签是为了增加蛋白的可溶性，也有一些是为了方便鉴定表达产物，所以在表达时可以选择加标签。是否加标签要看个人需要，笔者认为如果是表达一个人家没表达过的蛋白最好还是加标签，这样方便将来鉴定。如果从经济角度考虑最好加入6×组氨酸标签，笔者曾经以为加什么标签都无所谓（前提是不需要融合表达），结果加了个Novagen的T7?Tag，等到鉴定的时候发现单抗那么贵。而且还不好买的，一些较少人用的标签会让你很伤脑筋。这也是表达前要准备的功课之一哦。

好了，如果你选好了载体，那么下一步就是设计引物的。相信大多数人都是利用PCR把目的基因调出来的吧。设计引物可以使用一下两个软件，Prim er Prem ier或者Oligo。如果要表达全长，其实也就没那么多要考虑，从一头一尾找至少8个匹配序列在加上与载体匹配的序列就可以了。

不过，我还是有以下几点提醒一下各位：

1. 这一点其实很容易理解，但是有时也容易被遗忘。那就是先查查表达外源片段中含有什么内切酶位点，不要设计重了，否则酶切时发现怎么老是有预期外的小片段出现。

2. 根据载体上的酶切位点设计引物，现在许多类似T载原理的克隆方法也可以应用到原核表达中了，如果T载克隆方法要定向很多时候要多加4个碱基，设计引物时候可别忘了加。在设计酶切位点的5’端不要忘了加保护碱基，不同内切酶所需的保护碱基不同，SalⅠ不需要保护碱基，EcoRⅤ需要1个，NotⅠ需要2个，HindⅢ最好有3个。一般情况下，都设计2个。

3. 注意启始密码子和终止密码子的读码框。如果载体上有ATG可以不另外加了，但是通常ATG后不是紧跟外源片段的，如果中间含有载体序列，务必确定中间这段序列不会造成你外源序列的移码。按情况需要，可以加1到2个碱基在引物中使读码框正确。有始有终，同样正常的终止密码子才能保证蛋白的产出。大部分载体也有终止密码子，如果你对载体的不放心，也可以在引物中设计上终止密码子，这样万无一失。

4. 还有就是设计一对引物需要注意的地方：一对引物之间Tm值相差不宜过大，能一样最好；一对引物不宜形成发夹结构、互相配对，若配对时最好不要是G-C的结合（可以用软件分析）；3'端以G、C结尾为宜等等。如果要详细研究可以看一下PCR技术的相关书籍，很厚。还有就是记得把上游引物设计成有义链，下游设计成反义链，否则就没有片段出现了。虽然这是很小的地方，可是经常会被忽略。

5. 如果你是进行截取表达，那么除了之前提到的要注意截取亲水区，还有一点就是对密码子的使用频率进行分析。如果在大肠杆菌中使用较少的密码子在外源片段中连续出现，还是避开它为上策。

红色法拉利2006-06-01 21:58生物通原核表达技术专题：我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面，PCR鉴定没问题，双酶切也OK，可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢？大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照，比较严谨的电泳对照，应该是：Marker，标准品阳性对照（如果有，且打算做Western 的话），以及空白载体（诱导）和重组载体（不诱导）2个阴性对照，再加上诱导不同时间的表达结果。Marker 用于判断条带大小，标准品用于判断Western体系包括抗体显色剂和操作的可靠性，以及精确判断大小；空白载

体（诱导）负对照有助于判断在非诱导条件下的本底表达；而重组载体（不诱导）负对照则有助于判断诱导的效果以及排除诱导剂对宿主菌潜在的干扰，或者是区分细菌内源和外源表达产物——偷懒可不是好习惯，会影响结果判断。注意，接种表达和接种做感受态都类似，一定要用挑单克隆、加足量抗生素、过夜培养的新鲜菌液转种最好，在筛选压力下生长旺盛的种子液远比经过4℃保存的菌液要好得多，也许是因为保存时间长会导致抗生素失效部分细菌丢失质粒或者其他变化。反正就是一种经验做法。

跑SDS-PAGE的话可以用考马斯亮兰染，它灵敏度在100ng左右；但是不能跟着做Western了。银染的灵敏度在0.1～1 ng；有钱还可以用Sypro Red，灵敏度高还可以继续做Western。WesternBlot是蛋白质定性和半定量的最通用的技术，具体细节可参考生物通WesternBlot技术专题，我们有详细介绍的。

在做过Western Blot仍没有检测到表达带，那么就要开始进行下一步的分析了。首先，看看载体的多克隆位点和片断插入的序列，是否有因为酶切连接而意外引入了转录终止信号。有时载体几经多个实验人员的周转，反复插入片断，或者是粘端相同的不同酶切片断之间的连接，会意外在启动子后面带入终止位点，特别是用到XbaI之类的酶要小心。然后要对测序结果进行确定，确定插入的每个碱基都是正确的，没有意外终止的情况。还有个大家容易忽略的问题：就是要看基因中有没有细菌不常用的密码子——如果有，需要考虑换表达菌株。每种菌株都有自己独特的设计，或者是蛋白酶缺陷，或者是重组酶缺陷，改造的目的都是为了让质粒在细菌中存在更稳定，表达的产物不易被降解。不同的载体要配合一定的菌株使用，像系列就一定需要有T7 RNA聚合酶片段整合在细菌中的菌株才可用于表达。采用不同调控机制会使用不同的表达菌株，所以换菌株一定要仔细看过载体的调控方式再换。以Novagen为例，如果使用BL21(DE3)表达不成功的话可以换Rosetta系列菌株，它能够由一种氯霉素抗性的、与相容的质粒提供AUA，AGG，AGA，CUA，CCC和GGA 的tRNA。所以这类菌株能够明显改善大肠杆菌中由于稀有密码子造成的表达限制。有时不明原因的表达蛋白截短（比预期的分子量要小很多）也可能是由于稀有密码子造成的。另外一种可能是不严谨的本底表达产物抑制。

没有发现原则性错误之后，最简单、快捷的就是改变一下表达温度、IPTG浓度。低温、较长时间的表达有利于蛋白稳定、融合表达，低浓度的IPTG可以减少化学物质对细胞的损伤。培养基中的葡萄糖可能会抑制表达。有时表达的蛋白可能比预期的有不同，要认真研究电泳结果。如果尝试改变条件后依然没有表达，可以试试换不同的培养基。除了LB外还有TB、M9等，Novagen公司还有特殊的培养基出售补充各种细菌生长所需营养。

如果还是不行，考虑那么就剩下换换载体或者表达系统了。在换过不同载体，不同菌株之后仍是表达不出来的话，笔者的建议是：放弃吧。有些蛋白是用大肠杆菌无法表达的，或许可以尝试其它的表达系统。毕竟，将构建好的质粒交给细菌后，有些事情是我们不能控制的，未知的。尝试其他的表达系统未尝不是一种办法。不过原核不能表达，转去做真核，也不保险，这时候试试体外表达，会更省事，因为没有细胞生长的限制，更容易得到结果，可能只是花费高些，产量低些。能做出结果是第一需要时，这些就不能计较太多。生物通将随后介绍几个体外表达系统，欢迎留意。

如果你成功表达出来了，首先要恭喜你，之后你仍然可能遇到各种各样的问题。这个很正常，科研的道路是曲折的嘛。

Q1：蛋白表达出来了，但是跑SDS-PAGE时大小不符？

进行SDS-PAGE的时候蛋白的净电荷会影响迁移率。带电量高的蛋白会结合较少的SDS，因此阻碍了蛋白的泳动。富含脯氨酸的蛋白会在SDS-PAGE胶中移动得特别慢。如果蛋白的等电点在5到9之间，并且组成的氨基酸组分没有明显的偏好，那么目的蛋白迁移率与预期相差较远就很有可能不是由于凝胶电泳造成的。我们前面提到过，在很特殊的情况下稀有密码子的问题也会造成表达产物的截短。应加以考虑。

这个时候最好利用C端或者N端的标签进行Western Blot，看是否由于蛋白被蛋白酶降解而导致多条目的条带或者比预期小很多的条带出现。如果排除以上因素仍是无法找出为何与预期大小相差很远，你只能苦命地重头再来。如果蛋白酶过高可以换个缺陷菌株试试。

Q2：蛋白不可溶，怎么办？

许多外源蛋白在大肠杆菌中表达后都是以包涵体形式存在，包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下，形成包涵体表达产率都很高，并且容易分离，得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用，如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果你表达蛋白的目的是为了作为抗原制备抗体，那么出现包涵体也不算太坏，可以用PBS将包涵体悬浮，使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。

包含体的形成据分析原因之一在于表达量过高，表达产物来不及折叠为活性形式——多数以高表达见长的表达系统都会得到包含体产物。如果融合表达含有标签，常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化，然后复性。复性是表达下游最折磨人的步骤，生物通以后会逐步介绍。但是，在那之前你应该还要确定一下，你的蛋白真的是不可溶吗？细胞裂解是否完全呢？利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察。是否仍可以看到完整的细胞？裂解后的沉淀是否和之前收集细胞沉淀大小相似？裂解后溶液是否看起来澄清？以上任何一种情况出现都可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致裂解上清检测不到产物。如果形成了包涵体，在比较高倍的（>400×）光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。

Q3：必须要可溶的蛋白，你可以怎么做？

如果你希望得到能行使功能的蛋白，那么就最好还是想办法使蛋白以可溶形式表达，包涵体复性也是一条十分曲折的道路。避免包涵体形成的方法很多，比如：选用表达量不高的表达系统，选择有助于可溶性表达的融合表达系统比如pThio，pMal等等，对于T7系统来说降低或者减少诱导条件（例如降低ITPG浓度减少T7聚合酶）从而降低表达速度，使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，同样容易导致表达产物不溶，更换菌株例如Novagen的Origam i系列也有助于解决这个

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问题。生物通将在随后专门介绍几种特殊的用途的大肠杆菌菌株，不妨留意。

一般包涵体可以先使用温和变性剂（如：低浓度的尿素）和去污剂（如：Triton-X 100）将包涵体初?????后用8M尿素将包涵体溶解。可以通过透析复性、或者是在过柱的时候复性。复性条件每个蛋白都是不一样的，所以是一条需要摸索前进的道路。

有人尝试当蛋白挂在柱子上的时候，在还原和氧化的谷胱甘肽存在的情况下用浓度从6M到0M的盐酸胍过柱，促使蛋白的折叠。在蛋白重新折叠后用咪唑洗脱。

Q4：?????????????а?????

很多???????????????????NEB出有内含肽自动断裂这种模式就不需要蛋白酶了），在蛋白酶切除标签后是否一定要去除呢？有人认为蛋白酶与??????????1:500甚至更低，蛋白酶是不会影响到下а??????а???????傼н?????????????傼???????????????????????????????????????????????????????傼???????

药学自我评价

药学自我评价 药学专业培养具备药学学科基本理论、基本知识和实验技能，能在药品生产、检验、流通、使用和研究与开发领域从事鉴定、药物设计、一般药物制剂及临床合理用药等方面工作的高级科学技术人才。下面是小编收集的药学自我评价，欢迎阅读。 药学自我评价1 我的专业是药学专业。XX年，我在北京XX公司进行了X个月的实习，也是公司的第一批医大实习生。 时间荏苒，一转眼，已经度过了四个月的实习生活。这四个月，是我们紧张而充实、飞速成长的四个月。 回想在每天的实习工作中，我们学到了许多课本上学不到的东西，同样也遇到了许多的困难和挫折，看到了自己本身存在着许多问题。以前总以为液相色谱分析很简单，配样进针就完事了，可现在发现并不是那么简单。 在实际工作中，样品，流动相，仪器以及温度，湿度等外界因素对它都有很大的影响，任何一个因素出了问题，都不能得到一张合格的图谱。前期我们遇到了许多困难，但在老师的帮助下和指导下，使得我们能够克服种种困难顺利完成任务。从中我们学会了如何发现问题，分析问题，解决问题，认识到医药研究的科学性和严谨性。因此我们不再单纯的向老师索取知识，而是更多的思考分析，不再刻板的研究书本定律，而是要学有所用。我们已经走出了大学的象牙塔，能够熟练操作各种仪器，独立完成各项试验工作，综合素质

得到了全面的提高。 在工作之余，我们利用公司的网络系统，搜集整理毕业论文论文素材，在大家的帮助下，经过几个月的努力，我们的开题报告，课题综述已经完成，期间陈总和赵总两位领导曾多次修改，并提出了宝贵的意见。两位领导根据我们的实际表现如期完成了中期考核，通过不懈的努力相信我们能够完成一篇优秀的毕业论文。 还有一个月我们的实习生活即将结束，四年的大学生涯也即将画上一个完美的句号。在这样一个经济大萧条时期，很多人正在为找工作发愁。但是公司的领导很负责，在百忙之中为我们谋划未来的蓝图，并为我们安排了合适的工作，我们感到很幸运。凭借着丰富的实战经验和崇高的人生目标，我们对未来充满着信心，充满着希望。 我们不会忘记，我们所获得的宝贵经验的背后，有着各级领导对我们的殷切关怀，有着各位老师对我们的谆谆教诲。所以，我再次向你们表示最诚挚的感谢，并致以最崇高的敬意。 药学自我评价2 经过了一个暑假的实习，让我在从中明白到，对学生而言，实习可以使每一个学生有更多的机会尝试不同的工作，扮演不同的社会角色，逐步完成职业化角色的转化。通过自身的不断努力，无论是在实践上还是工作上，都使我有所了解和收获。 每天的实习工作中，我学到了许多课本上学不到的东西，同样也遇到了许多的困难和挫折，看到了自己本身存在

新整理药学专业生自我评价

药学专业生自我评价 第一篇：药学专业生毕业自我评价 大学四年中，我各方面的能力都得到了发展，可以说，经过大学四年的学习，我已经具备了适应社会工作的能力。 本人自入校以来思想上进，努力学习邓--建设有中国特色社会主义理论，认真思考、体会伟大的思想和先进的理论，并试着在学习中检验和实践，学习十七大精神和三个代表重要思想，学会用正确先进的理论武装自己的头脑，树立了正确的世界观、人生观、价值观。 本人学的药学专业，五年的大学生活和社会实践使我在思想认识、业务知识和专业技能方面都有了很大的提高。使我掌握了深厚的药学专业知识，我不仅学习了药物化学，药物分析，药理学，药剂学等专业知识，还学习了其它的基础医学知识，还积极在课外的实践和实习中，提高自己的操作动手能力和技术。并通过了英语四六级，具备了一定的英语听，说，读，写能力，熟悉计算机的理论和应用技术，如office等办公软件操作。 除了专业学习之外，我还重视社会实践活动，到校外参加勤工助学工作，暑假期间参加暑假工，通过社会实践来提高自己的交际能力和工作水平，还常参加各种社会志愿活动等。我曾在xx药业股份有限公司实习，初步掌握了药品的检测和取样方法，了解了颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流程及生产的管理等，并受到实习单位的一致好评。

将来的工作是对我知识的检验，也是对我人生的挑战。我会在工作中不断地完善自己，提高自己，适应工作的需要。所以我希望找一份与自身知识结构相关的工作，如网络出版、多媒体制作、印前处理，可以有更大的空间来证明自己，发展自己! 第二篇：药学专业毕业生的自我评价 药学专业毕业生的自我评价 本人学的药学专业，五年的大学生活和社会实践使我在思想认识、业务知识和专业技能方面都有了很大的提高。使我掌握了深厚的药学专业知识，我不仅学习了药物化学，药物分析，药理学，药剂学等专业知识，还学习了其它的基础医学知识，还积极在课外的实践和实习中，提高自己的操作动手能力和技术。并通过了英语四六级，具备了一定的英语听，说，读，写能力，熟悉计算机的理论和应用技术，如office等办公软件操作。 除了专业学习之外，我还重视社会实践活动，到校外参加勤工助学工作，暑假期间参加暑假工，通过社会实践来提高自己的交际能力和工作水平，还常参加各种社会志愿活动等。我曾在xx药业股份有限公司实习，初步掌握了药品的检测和取样方法，了解了颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流程及生产的管理等，并受到实习单位的一致好评。 将来的工作是对我知识的检验，也是对我人生的挑战。我会在工作中不断地完善自己，提高自己，适应工作的需要。所以我希望找一份与自身知识结构相关的工作，如网络出版、多媒体制

如何做原核表达——面面俱到Novagen产品

之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 Novagen公司出品的pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。pET系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌体转录系统进行表达的载体，其表达原理见下图。 T7噬菌体具有一套专一性非常强的转录体系，利用这一体系中的元件为基础构建的表达系统称为T7表达系统。T7噬菌体基因编码的T7 RNA聚合酶选择性的激活T7噬菌体启动子的转录。它是一种高活性的RNA聚合酶，其合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍左右。并可以转录某些不能被大肠杆菌RNA聚合酶有效转录的序列。在细胞中存在T7 RNA聚合酶和T7噬菌体启动子的情形下，大肠杆菌宿主本身基因的转录竞争不过T7噬菌体转录体系，最终受T7噬菌体启动子控制的基因的转录能达到很高的水平。 T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶，因此T7 RNA聚合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调控方式。噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，一段含

有lacⅠ，lacUV5启动子和T7 RNA聚合酶基因的DNA片段倍插入其int基因中，用噬菌体DE3的溶源菌，如BL21(DE3)、HMS174(DE3)等作为表达载体的宿主菌，调控方式为化学信号诱导型，类似于Lac表达系统。 从开始涉及表达的时候可以根据是否要用基因本身的起始密码子进行选择，Novagen公司仅提供三个载体：pET-21(+)，pET-24(+)和pET-23(+)。如果你打算利用载体的起始密码子，那么就有许多选择。 根据是否要可溶性表达，选择加有不同标记的载体。一般说来在大肠杆菌中不加标记外源蛋白都会以不溶的包涵体形式表达。为了让外源蛋白融合表达一般说来有三个策略： 1.与一个高度可溶的多肽联合一起表达，比如：谷胱甘肽S转移酶（glutathione S transferase, GST）、硫氧还蛋白（thioredoxin, Trx）和N利用质A（N utilization substance A, NusA）。 2.转入一个酶催化二硫键的形成，如：硫氧还蛋白，DsbA，DsbC。 3.插入一个定位到周质空间的信号序列。 不同载体提供不同的标记，有的可以同时带有多个标记。如果你不希望在蛋白的N末端加入任何的多肽，你也可以选择用NdeⅠ直接从起始密码子后插入外源片断，或者在得到表达产物后利用蛋白氨基酸的酶切位点把多余的多肽切除。 以下是Novagen载体带有标记及抗性的列表：

药学专业个人自我评价

药学专业个人自我评价 药学专业个人自我评价： 从来都不明白，原来再见这两个字是那么的难讲出口，放在内心就更加难。临终毕业了，我要感谢我的五年大学生活，让我从一个年幼无知的小小姐，逐渐成长了。不管是从思想上依旧人际关系及工作能力上，差不多上质的飞跃。总的讲就是： 本人自入校以来思想上进，努力学习邓小平建设有中国特色社会主义理论，认真考虑、体会伟大的思想和先进的理论，并试着在学习中检验和实践，学习十七大精神和三个代表重要思想，学会用正确先进的理论武装自己的头脑，树立了正确的世界观、人一辈子观、价值观。 本人学的药学专业，五年的大学生活和社会实践使我在思想认识、业务知识和专业技能方面都有了非常大的提高。使我掌握了深厚的药学专业知识，我不仅学习了药物化学，药物分析，药理学，药剂学等专业知识，还学习了其它的基础医学知识，还积极在课外的实践和实习中，提高自己的操作动手能力和技术。并通过了英语四六级，具备了一定的英语听，讲，读，写能力，熟悉计算机的理论和应用技术，如OFFICE等办公软件操作。 除了专业学习之外，我还重视社会实践活动，到校外参加勤工助学工作，暑假期间参加暑假工，通过社会实践来提高自己的交际能力和工作水平，还常参加各种社会志愿活动等。我曾在__药业股份有限公司实习，初步掌握了药品的检测和取样方法，了解了颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流程及生产的治理等，并受到实习单位的一致好评。 当然，还存在很多不足之处，在以后的工作和学习中我将努力，改进缺点不足，改善学习方法，提高理论水平，在提高自己科学文化素养的同时，也努力提高自己的思想道德素养，使自己成为德、智、体诸方面全面进展适应21世纪进展要求的复合型人才，做一个有理想、有道德、有文化、有纪律的社会主义建设者和接班人。

药学专业简历自我评价范本

药学专业简历自我评价范本在写简历自我评价的时候，要注意些什么又怎么写呢下面由fwdq就由小编为大家整理的药学专业简历自我评价，仅供参考与借鉴 【药学专业简历自我评价一】我非常热爱自己的专业，不断学习完善自己的专业知识。工作积极主动，严谨认真，耐心细致，有高度的责任感，具有敬业精神。在工作中我能认真思考发现的问题，并提出解决办法，使工作能够高效、优质地完成。具备独立完成药剂科各项工作的能力。我现在已经取得执业药师资格。 【药学专业简历自我评价二】1、团结协作，具有高度的集体责任感; 2、诚信守时，具有与人为善乐观平和的性格; 3、勤学善思，具有扎实的专业知识技能及良好的自学能力; 4、脚踏实地，做事认真细致，富有耐心，并具有良好的执行力。 【药学专业简历自我评价三】本人毕业于国内著名药科学府，是一名有资质的信息分析师、注册执业药师，有海外工作经历;十多年市场调研分析、竞争情报研究工作经

验有敏锐的市场洞察力、严密的逻辑思维分析能力、良好的判断力，能提出前瞻性思路，具有主持前沿性新产品研究能力，同时根据科技前沿、竞争对手分析及公司状况筛选新产品，引进新产品项目，提供技术指导等，熟悉了解知识产权概念，并有相应独到操作经验;7年多的项目管理经验具有医药企业产品(新药、保健食品及化妆品)研发、项目申报、药品注册及组织管理工作经验，政府科技项目的立项、申报以及高新技术企业的申请等成功经验。 【药学专业简历自我评价四】两年多药厂和两年多化妆品厂以来实习，工艺员,主任，制药工程师兼生产经理岗位学习和积累，掌握了片剂，胶囊剂，颗粒剂,巴布膏剂以及中药提取在生产过程中的各项生产流程，操作，工艺技术,质量控制及人员安排和培训 【药学专业简历自我评价五】本人有过在医院和药厂工作的经验，熟悉中药的炮制以及调剂过程，还掌握400多种常见中药的性状鉴定，100多种中药的显微及理化鉴定并能比较顺利地按照《药典》规定的操作程序对中药材、中药饮片及中成药等进行提取、分离、检验，并能自制薄层板且熟练操作紫外分光度器等仪器。 【药学专业简历自我评价六】具有一定的专业知识，有较强的分析能力，能理性、客观看问题并解决问题;团队

药学专业毕业自我评价

药学专业毕业自我评价 药学专业毕业自我评价 我是**大学**系药学专业的一名应届本科毕业生。 大学四年，是我来之不易的学习机会。在这大好时光里，我本着学好本专业，尽量扩大知识面，并加强能力锻炼的原则，大量汲取知识财富，锻炼了自己的各种能力。我努力的学习基础课，深研专业知识，并取得了优异的成绩，多次名列前茅，连年获得奖学金。本人在几年中系统学习了药学，化学，生物学，有机化学，物理化学，生物化学，微生物学，药物化学，药剂学，药理学，药物分析学，药事管理学，临床医学概论等课程。 通过几年的学习，本人具备以下几方面的知识和能力： 1.掌握药剂学，药理学，药物化学和药物分析等学科的基本理论，基本知识;

2.掌握主要药物制备，质量控制，药物与生物体相互作用，药效学和药物安全性评价等基本方法和技术; 3.具有药物制剂的初步设计能力，选择药物分析方法的能力，新药药理实验与评价的能力，参与临床合理用药的能力; 4.熟悉药事管理的法规，政策与营销的基本知识; 5.了解现代药学的发展动态; 6.掌握文献检索，资料查询的基本方法，具有一定的科学研究和实际工作能力。 在校学习期间，我热爱社会主义，拥护中国共产党和他的领导。自觉遵守国家的法律和学校的纪律。积极参加各种校内党校活动，向党组织靠拢，并取得了25党校结业证书。在学校里，我积极参加从班到系，学校的各种集体活动，并为集体出谋献策。时刻关心同学，与大家关系融洽。作为班干部，我努力为同学服务，积极协助老师的工作，开展各种形式的`活动，协调同学与集体的关系，使我们班成为一个充满生气，有活力的班集体。

在课余生活中，我还坚持培养自己广泛的兴趣爱好，坚持体育锻炼，使自己始终保持在最佳状态。为提高自己的社会交往和各方面知识的运用能力，我积极参加社会实践。三年中，我加入了青年志愿者，参加了学校党校培训，这些经历，不仅增强了我吃苦耐劳，自理自立的能力，还提高了我与别人合作与交往的能力。 我是一个外向型的人，性格开朗活泼，待人处事热情大方，生活态度端正向上，思想开放积极，能很快接受新鲜事物。我最大的特点是：热心待人，诚实守信，具有创新和开拓意识，勇于挑战自我。为人处世上，我坚持严于律已，宽以待人，“若要人敬已，先要已敬人”,良好的人际关系正是建立在理解与沟通基础之上的，所以我与同学关系极其融洽。 天大地大，世界永无尽头，这四年中，在各方面我都有量的积累和质的飞跃，但我知道自己除了理论知识之外，我的经验与阅历还尚浅。读万卷书，行万里路，这些还需我在以后的实践工作和学习之中不断提高!我深信机遇定会垂青有准备的人，我憧憬着美好的未来，时刻准备着!

植物基因在大肠杆菌中的原核表达

植物基因在大肠杆菌中的原核表达 通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。 当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在定位、检测或纯化目的蛋白时提供方便。 以pET-32a(+)为例，介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程，从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程。 1.准备工作（试剂配置和器材准备） 1)操作流程示意图 主要步骤操作 ①制备pET-32a(+)载体用限制性酶消化，去磷酸化后胶纯化回收 ②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性消化，再回收 ③插入片段克隆到pET-32a(+)载体插入片段与pET连接，转化 ④转化表达宿主菌BL21 转化带有T7RNA聚合酶基因的菌株 ⑤诱导表达目的蛋白 SDS-PAGE，Western 印迹、定量分析确定目的蛋白 ⑥放大试验纯化目的蛋白放大试验，制备粗提物，亲和纯化，切除融合标签 2)配制生长培养基如LB，和100mM IPTG,50μg/ml 卡那霉素存储液。 3)宿主菌的保存。长期存放菌株和pET重组子应保存于甘油中。 4)感受态细胞的制备，参照其它试验手册。 2.操作步骤 [1] 制备载体 1）载体消化和胶纯化 3μg pET载体 3μl 10×限制性内切酶buffer 10-20U 两种酶（是否共用buffer; 酶体积不要超过反应体系的10%） 3μl 1mg/ml乙酰BSA（根据需要 补足水到30μl

Pichia酵母表达系统使用心得

Pichia酵母表达系统使用心得 摘要：Pichia酵母表达系统广泛应用于外源基因表达。 生物通编者按：甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，生物通编者特地收集了部分用户在使用EasySelect Pichia Expression System这个被誉为最简单的毕赤酵母表达的经典试剂盒过程中的心得体会。其中Xiang Yang是来自美国乔治城大学（Georgetown University）Lombardi癌症中心（Lombardi Cancer Center），部分用户来自国内。 + 表示优胜于；- 表示不如；= 表示差不多 EasySelect Pichia Expression System

产品性能： 优点——使用简单，表达量高，His-tag便于纯化 缺点——酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题 全面产品报告及心得体会： 巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种能高效表达重组蛋白的酵母品种，一方面由于其是属于真核生物，因此表达出来的蛋白可以进行糖基化修饰，另一方面毕赤酵母生长速度快，可以将表达的蛋白分泌到培养基中，方便蛋白纯化。 毕赤酵母表达载体pPICZ在多克隆位点（MCR）3'端带有his-tag和c-myc epitopes，这些tag有利于常规检测和纯化，而且在MCR5'端引入了alpha factor（α-factor）用以增加表达，并且在表达后α-factor可以自动被切除。在进行克隆的时候，如果你选择的是EcoRI，那么只需在目标蛋白中增加两个氨基酸序列即可完成。另外pPICZ系列选用的是Zeocin抗生素作为筛选标记，而诱导表达的载体需要甲醇——甲醇比一般用于大肠杆菌表达诱导使用的IPTG便宜。 第一步构建载体 Xiang Yang：pPICZ系列有许多克隆位点可供选择，同时也有三种读码框以便不用的用户需要。 红叶山庄：有关是选择pPIC9K还是pPICZ系列？pPIC9K属于穿梭质粒，也可以在原核表达，而pPICZ系列比较容易操作，大肠和毕赤酵母均用抗Zeocin筛选（PIC9K操作麻烦一点，大肠用amp抗性，而毕赤酵母先用His缺陷筛选阳性克隆，在利用G418筛选多拷贝），而且对于大小合适（30—50KD）的蛋白在产量上是pPIC9K 无法比拟的。 leslie：要做毕赤酵母表达实验，首先当然就要了解这个可爱的酵母了（椭圆形，肥嘟嘟的，十分可爱），她和大肠杆菌长得有较大区别（大肠杆菌是杆状的），因此在培养的过程中要区别这两种菌体，除了气味，浓度，颜色以外，也可以取样到显微镜中观测。大家做毕赤表达的时候应该都遇过这种情况吧，表达过程中染菌（我们实验室曾经污染过各种颜色形状的细菌，那真是一段可怕的经历），如果在不知情的情况下继续做下去，那可以就是浪费大把的时间了。 基本熟悉了毕赤酵母，了解了她生长的喜好（多糖偏酸环境），生长的周期等等情况后，当然更多的精力还是应该花在表达的目的蛋白上，我的表达蛋白有些恐怖，有100KD，本来当然应该放在大肠杆菌中表达，但是为了分泌表达（其实后来发现大肠杆菌pET系列分泌表达系列也不错）和糖基化修饰（主要是这个方面，因

药学专业简历自我评价精选

三一文库（https://www.sodocs.net/doc/8e14713018.html,）/个人简历 药学专业简历自我评价精选 【范例一】 我非常热爱自己的专业，不断学习完善自己的专业知识。工作积极主动，严谨认真，耐心细致，有高度的责任感，具有敬业精神。在工作中我能认真思考发现的问题，并提出解决办法，使工作能够高效、优质地完成。具备独立完成药剂科各项工作的能力。我现在已经取得执业药师资格。 【范例二】 1、团结协作，具有高度的集体责任感； 2、诚信守时，具有与人为善乐观平和的性格； 3、勤学善思，具有扎实的专业知识技能及良好的自学能力； 4、脚踏实地，做事认真细致，富有耐心，并具有良好的执行力。 【范例三】

本人毕业于国内药科学府，是一名有资质的信息分析师、注册执业药师，有海外工作经历；十多年市场调研分析、竞争情报研究工作经验-有敏锐的市场洞察力、严密的逻辑思维分析能力、良好的判断力，能提出前瞻性思路，具有主持前沿性新产品研究能力，同时根据科技前沿、竞争对手分析及公司状况筛选新产品，引进新产品项目，提供技术指导等，熟悉了解知识产权概念，并有相应独到操作经验；7年多的项目管理经验-具有医药企业产品（新药、保健食品及化妆品）研发、项目申报、药品注册及组织管理工作经验，政府科技项目的立项、申报以及高新技术企业的申请等成功经验。 【范例四】 两年多药厂和两年多化妆品厂以来实习，工艺员,主任，制药工程师兼生产经理岗位学习和积累，掌握了片剂，胶囊剂，颗粒剂,巴布膏剂以及中药提取在生产过程中的各项生产流程，操作，工艺技术,质量控制及人员安排和培训 【范例五】 本人有过在医院和药厂工作的经验，熟悉中药的炮制以及调剂过程，还掌握400多种常见中药的性状鉴定，100多种中药的显微及理化鉴定并能比较顺利地按照《中国药典》规定的操作程序对中药材、中药饮片及中成药等进行提取、分离、检验，并能自制薄层板且熟练操作紫外分光度器等仪器。

原核表达步骤总结

原核表达步骤 原核表达先要将基因克隆到原核表达载体上，然后通过转化到 JM109或BL21等菌株中，诱导表达蛋白，然后进行蛋白纯化。本实验方案的前提是，目的基因已克隆到载体，并已转进入JM109菌株中。 1．鉴定目的蛋白是否在大肠杆菌JM109或BL21中大量表达 （1）制样 1 . 挑取经过双酶切鉴定的单克隆菌落于700ul LB培养基，加入0.7ul Amp（100mg/mL），37o C200r/min摇床培养，过夜活化。 2. 以1：50比例（200ul），将活化的过夜培养物加入10mL LB液体培养基中，加入10uLAmp（100mg/ml），37o C200r/min摇床扩大培养2h-3h，期间取样监控菌液的OD值，控制菌液OD600在0.6-1.0之间，以使大肠杆菌处于最适合表达外源蛋白的生长状态。(一般3h时，菌液浓度及达到标准，但是不同的基因对菌的影响不同，所以第一次实验时需要确定这个最佳时间) 3. 从10ml扩大培养物中取3ml菌液作为不加IPTG的空白对照（CK），其余7ml菌液加入7ul IPTG（储存浓度为0.5mol/l），使IPTG 终浓度达到0.5mmol/l。以200r/min的转速，37o C摇床培养3h。 4. 以5000r/min离心2min收集菌体，倾倒上清，每个离心管收集3ml培养物。 5. 加入1ml dH2O，将管底沉淀用振荡器打散以充分洗涤，8000r/min 离心2min，倾倒上清。 6. 重复步骤5。将离心管中的水倒干净。 （二）菌落SDS-PAGE 1. 在收集的菌体中加入200ul 1×SDS PAGE loading buffer(可根据沉淀的量增加或减少loading buffer的量，一般200ul比较合适)。用漩涡器剧烈震荡，确保将管底沉淀震散。 2. 将样品于100℃恒温加热器上开盖加热10min（Marker也要加热）。样品凉后，12000r/min离心3min，取每管的上清点样。上样量一般30ul—40ul，marker 20ul。 （3）SDS-PAGE分析 1. 根据目的片段的大小，制作不同浓度的分离胶 蛋白分子量 (kDa)凝胶浓度 (%) 4-4020

药学专业自我评价

药学专业自我评价 从来都疑惑，原来“再见”这两个字是那么的难说出口，放在内心就更加难。临终毕业了，我要谢谢我的五年大学日子，让我从一具年幼无知的小小姐，逐渐成长了。不管是从思想上依然人际关系及工作能力上，基本上质的飞跃。总的说算是： 本人自入校以来思想上进，努力学习邓小平建设有中国特色社会主义理论，仔细考虑、体味伟大的思想和先进的理论，并试着在学习中检验和实践，学习十七大精神和“三个代表”重要思想，学会用正确先进的理论武装自己的头脑，树立了正确的世界观、人一辈子观、价值观。 本人学的药学专业，五年的大学日子和社会实践使我在思想认识、业务知识和专业技能方面都有了很大的提高。使我掌握了深厚的药学专业知识，我别仅学习了药物化学，药物分析，药理学，药剂学等专业知识，还学习了其它的基础医学知识，还积极在课外的实践和实习中，提高自己的操作动手能力和技术。并经过了英语四六级，具备了一定的英语听，说，读，写能力，熟悉计算机的理论和应用技术，如OFFICE等办公软件操作。 除了专业学习之外，我还重视社会实践活动，到校外参加勤工助学工作，暑假期间参加暑假工，经过社会实践来提高自己的交际能力和工作水平，还常参加各种社会志愿活动等。我曾在xx药业股份有限公司实习，初步掌握了药品的检测和取样办法，了解了颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流程及生产的治理等，并受到实习单位的一致好评。 固然，还存在不少别脚之处，在未来的工作和学习中我将努力，改进缺点别脚，改善学习办法，提高理论水平，在提高自己科学文化素养的并且，也努力提高自己的思想道德素养，使自己成为德、智、体诸方面全面进展习惯21世纪进展要求的复合型人才，做一具有理想、有道德、有文化、有纪律的社会主义建设者和接班人。

原核生物及其多样性1

原核生物及其多样性 【摘要】：原核生物是由原核细胞构成的生物【1】，其多样性在维持生物圈生态平衡和为人类提供广泛的、大量的未开发资源方面起着重要的作用。原核生物生活在各种生境中，包括在其他生物无法生存的条件下，其仍能进行多种形式的物质循环，并以我们初步了解的方式同其他生命形式相互作用。原核微生物的多样性在形式和分化上表现并不突出，而主要表现在物种和基因水平上。因此，研究原核微生物及其重要性具有主要的意义。 【关键字】：原核生物多样性 【正文】： 1.原核生物 原核生物最早是由Chatton提出的，原核生物是指一类无真正细胞核的单细胞生物或类似于细胞的简单组合结构的微生物【2】。20世纪70年代，Woese和Fox根据不同生物类群细胞中的ssuRNA的序列同源性提出了生物的三域学说，即地球上所有的细胞生物由细菌域、古菌域和真核生物组成，细菌和古菌都是原核生物。原核生物是由原核细胞构成的生物，原核细胞中无膜围的核和其他细胞器。 原核生物是没有成形的细胞核或线粒体的一类单细胞生物。原核生物对人类生活的影响，有利也有弊。植物病原原核生物是仅次于真菌和病毒的第3大类病原生物，浸染植物可引起许多重要的病害，造成农作物的严重减产，例如国内外普遍发生的茄科植物的青枯病、水稻白叶枯病、白菜软腐病；有国外危害严重，国内尚未发生的检疫性病害梨火疫病和玉米枯萎病，还有在国内较普遍的泡桐丛枝病和枣疯病等【3】。但是原核生物也有着许多对人类有益的地方，比如，中国的泡菜制作，就需要利用乳酸菌来发酵。现在，已经发现越来越多的原核生物的有利之处。例如，近年来的研究表明，致突变、致畸和致癌这三者之间具有较强的相关性，即多数的致癌物就是细菌诱变剂，而且通常的致畸剂量就可引起致突变，加之各种环境因子对原核生物的致突变作用与它对哺乳动物的潜在致癌作用有关【4】，原核生物rRNA在分子生物学研究中也得到了越来越广泛的应用【5】，对冰河消退时土壤微生物碳含苗的研究表明，微生物生物量与冰河峰面消退程度和植被盖度均呈正相关【6】。总的说来，原核生物对人类的利大于弊。 目前全球已描述的已描述的原核微生物种数约7000种，许多原核生物所生存的环境，一般生物都无法生存。位于中国西南边陲的腾冲的大滚锅(DGG)和龙陵的大沸泉(DFQ)相距约70km，两泉泉水出口温度均在96℃左右，据研究又如细菌和古茵在腾冲的大滚锅(DGG)和龙陵的大沸泉(DFQ)2个高温热泉中均有一定数量的存在【7】。 2.原核微生物的多样性 不同人对原核生物多样性的定义不一。根据世界自然保护联盟(1UCN)提出的定义，原核微生物的生物多样性包括所有原核微生物的生命形式、生态系统和生态过程以及有关在遗传、分类和生态系统水平上的知识概念【8】。而 Watve等则认为，微生物多样性可细致划分为生活环境多样性、生长繁殖速度多样性、营养和代谢类型多样性、生活方式多样性、基因多样性和微生物资源开发利用多样性等【9】。微生物多样性的分析主要集中在土壤、海洋和地表水【10】，本文主要探讨原核生物的生态多样性、代谢多样性和遗传多样性。

药学实习单位意见的评语

药学实习单位意见的评语 该生综合素质较好，爱岗敬业，工作能力强，有一定的工作组织能力，能和同事友好 相处，短短实习工作期间，是个出色的教学能手，相信会在今后的工作中，取的出色的成绩。 该学生实习期间工作认真，勤奋好学，踏实肯干，在工作中遇到不懂的地方，能够虚 心向富有经验的前辈请教，善于思考，能够举一反三。对于别人提出的工作建议，可以虚 心听取。在时间紧迫的情况下，加时加班完成任务。能够将在学校所学的知识灵活应用到 具体的工作中去，保质保量完成工作任务。同时，该学生严格遵守我公司的各项规章制度，实习期间，未曾出现过无故缺勤，迟到早退现象，并能与公司同事和睦相处，与其一同工 作的员工都对该学生的表现予以肯定。 本人结合自身专业在成都电业局的人力资源部进行一周的专业调查和专业实践，受益 非浅，人力资源部主要负责人力资源开发和实施，中层领导班子的建设与管理，劳动、人事、工资、保险、专业技术职称、职业技能鉴定、员工教育培训、人事档案、劳动保护、 离退休管理等方面的工作。 该实习生在实习期间，表现出强烈的敬业精神，深厚的专业思想和良好的师德。实习 态度极其认真，工作积极细心踏实，能虚心接受指导，较好地掌握运用管理方法与技巧经 典幼师实习鉴定实习单位鉴定评语。全身心投入班级管理。能较快地熟悉班情，独立妥善 处理班级日常事物。热爱学生关心学生，特别注意了学生的个别教育，效果良好，班级各 项考核均居年级首位。因此深受学生爱戴。被师生一致认为是一位非常优秀的实习幼儿教师。 人力资源部设置正副主任各一名，其职业道德的基本要求：一要有爱心：爱职业， 爱员工、敬重领导。二要有责任心：认真做好工作中的每一件“小事”。人力资源管理工 作事无巨细，事事重要，事事都是责任。三要业务精益求精：时时、事事寻求合理化，精 通人力资源管理业务，知人善任，用人有方，追求人与事结合的最佳点。四要具有探索、 创新、团结、协调、服从、自律、健康等现代意识。五要树立诚信观念。诚信乃做人做事 之本。 由于人的工作是最复杂微妙的工作，人力资源主任这个职位是对个人品性要求很高的 一个职位，需要以积极的心态去全身心的投入其中。想成为一个合格甚至优秀的人力资源 主任具备以下方面的素质： 该生工作认真负责，班主任工作做的扎实，经常深入学生了解他们的思想和学习状况，与学生谈心，帮助他们树立正确的人生观和价值观，与学生交流探讨好的学习方法，组织 开展各项有益的文体活动，深得学生喜爱。 具备公正、忠信、坚定勇敢的意志力。对于人力资源主任来说，只有公正才可以做到 无私，才能够客观地对人力进行评估、确定，在选拔、推荐、使用人才时坚持"唯才是用"

应用药学自我简介自我鉴定 个人简历

姓名 性别：男/女出生年月： XX大学应用药学专业 20XX届 XXXX方向 XX学士 联系方式：139-xxxx-xxxx 电子邮件： 期望从事职业：制药/生物工程、生物制药、医药代表、医生（点击来智联招聘搜索想要的工作） 自我评价：本人性格开朗，能吃苦耐劳，充分掌握了药学及其相关专业的理论及技能。具有较强的沟通能力，工作细致认真负责，为人诚恳，学习能力强。诚实正直、稳重乐观，对待工作严谨认真，刻苦耐劳、注重工作效率和团队合作。性格积极稳健、乐观向上，逻辑思维能力强，对事物具有敏锐的观察力，见解常有独到之处。 ~ xx大学××学院应用药学专业 xx学士 学分绩点（GPA）（满分x分），院系/班级排名第x 连续四年获得校奖学金 所获奖励： 20xx年获得“国家励志奖学金” 20xx年××大赛“一等奖” 20xx年获得“学生团干部” 20xx年荣获校级“三好学生” 20xx年 xx项目项目负责人 课题：xxxxxx 项目描述： 工作职责： 工作业绩： 20xx年 xxxxxx项目项目组成员 课题：xxxxxxxx 项目描述： 工作职责; 工作业绩： 20xx年 x 月—20xx年 x月 xx生物医药技术开发有限公司医药销售代表实习 主要工作：建立负责区域的药店档案，进行药店级别划分并进行管理，根据公司要求安排店员小型培训会，面对面地培训产品知识，改进疏通货渠道，保证公司产品在限定时间内铺入目标药店。经过实习使我掌握了销售药品的技巧和药店的操作流程 20xx年 x 月—20xx年 x月 xx医院临床药师实习 主要工作：作为临床药师协助医师制定药物治疗方案；填写并上报药物不良反应报告；为门诊及住院患者提供用药咨询服务（超过1200人次/年）；参与国家药品临床研究基地的临床试验，发表英文论文8篇（SCI收录）和中文论文5篇（核心期刊）。熟悉临床诊疗及药物应用各方面，严谨认真积极的工作态度 大学英语四/六级（CET-4/6）良好的听说读写能力

药学专业自我评价范文3篇

药学专业自我评价范文3篇 药学专业自我评价范文篇一： 我是XX药学毕业生，四年的大学生活使我在思想熟悉和专业技能方面都有了很大的进步。目前，我是从一个对药物一点都不懂的情况下到现在都比较了解并熟练应用，这便是我对自己的学习成果最大的个人鉴定。四年期间，我努力学习，成绩优异，把握了深厚的药学专业知识，专业课程主要有我药物化学，药物分析，药理学，药剂学和其它的基础医学课程，并通过了英语六级，有良好的英语听说读写能力，并通过了国家计算机考试二级证书，熟悉办公软件如word、excel等操纵。 为了让自己能够在毕业之后更快地适应社会，课余时间，我积极组织院内外的活动以及假期的勤工俭学，不仅能自己挣到生活费，更重要的是进步了自己的交际能力和适应能力。

大四下学期，我在xx药业股份有限公司实习，初步把握了药品的检测和取样方法，初步了解颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流程及生产的治理等，并受到实习单位的一致好评。 当然，本人思想上进，积极向党组织靠拢，并如愿成为一名光荣的***员，用马列主义毛泽东思想***理论武装自己，带动和影响四周人，树立了正确的世界观、人生观、价值观。 当然，我还存在一些不足，如做事优柔寡断，在以后的工作中我将改正缺点不足，改善学习方法，进步理论水平，加强动手能力，做一个“四有”新人。 回顾高中三年,通过良师的教导和自身的刻苦学习,我已初步掌握如何运用英语知识进行一般商务活动,也养成了认真对待学习和工作的好习惯!

在思想品德上,本人有良好道德修养,并有坚定的政治方向.我热爱祖国,热爱人民,坚决拥护共-产-党领导和社会主义制度,遵纪守法,爱护公共财产,团结同学,乐于助人.并以务实求真的精神热心参予学校的公益宣传和爱国主义活动.在学习上,我圆满地完成本专业课程.并具备了较强的英语听读写能力.对office办公软件和其它流行软件能熟练操作,并在因特网上开辟了自己个人空间.平时我还涉猎了大量文学、心理、营销等课外知识.相信在以后理论与实际结合当中,能有更大提高! 在生活上,我崇尚质朴的生活,并养成良好的生活习惯和正派的作风.此外,对时间观念性十分重视.由于平易近人待人友好,所以一直以来与人相处甚是融洽.敢于拼搏刻苦耐劳将伴随我迎接未来新挑战. 在工作上,我通过加入院学通社与合唱团,不但锻炼自己的组织交际能力,还深刻地感受到团队合作的精神及凝聚力.更加认真负责对待团队的任务,并以此为荣!

医药学专业大学生自我评价

医药学专业大学生自我评价 由于经过一个学期的学习，我知道了医学理论学作为医学与理论学相交叉的边缘学科，其宗旨在于提高学生的医学人文素质和综合职业素质，再加上后来的实践活动使理论更加与实际的紧密联系，令我认为学习医学理论学成为医学生一门必须学习的课程。 在“药学中西、医学济世”八字校风的鞭策下，我努力学习，刻苦钻研、勇于进取，时刻向“将自己培养成为具备高综合素质的临床药学毕业生”的目标奋进。我还获得了学校三好学生和二等奖学金等重要奖项。学习当中我深深的体会到，我们以履行公民义务为光荣，本着社会共济、关爱他人的精神，用爱心共同托起生命的希望。血液是生命的源泉，爱是生命的曙光。生命之源联系着你、我、他，我们的爱心是无限的。 所以在有限的学习期间，我在学校形成尊重劳动、尊重知识，培养德、智、体、美全面发展的高素质学生，注重学术的理念：崇尚学术，营造发扬学术民主和学术自由、重视学术成就的浓郁学术氛围。只有坚持这种理念，才能不断取得科学研究的丰硕成果，才能不断提高自身的学术水平和知识质量，知识创新和文化传播等做出应有贡献。 花蕾要绽放，不是在温室，而是在肥沃的土壤上吸收天地日月精华，经受风霜雨雪考验。我要成才，我必须在广阔天地里自

我历练，真正在熟悉自我、完善自我、熟悉社会、服务社会的社会实践中成长为社会英才。只有熟悉了自我，完善了自我，才能更好地熟悉社会，服务社会;只有在熟悉社会、服务社会的过程里才能更好地熟悉自我、完善自我。 在往后的学习中，我会更加努力，我会牢记着医学生的誓词：我自愿献身医药学，热爱祖国，忠于人民，恪守药德，尊师守纪，刻苦钻研，孜孜不倦，精益求精，面发展。我决心竭尽全力除人类之病痛，助健康之完美，维护医术的圣洁和荣誉，救死扶伤，不辞艰辛，执着追求，为祖国医药卫生事业的发展和人类身心健康奋斗终生。

药学专业简历自我评价

药学专业简历自我评价 药学专业简历自我评价 【范例一】 我非常热爱自己的专业，不断学习完善自己的专业知识。工作积极主动，严谨认真，耐心细致，有高度的责任感，具有敬业精神。在工作中我能认真思考发现的问题，并提出解决办法，使工作能够高效、优质地完成。具备独立完成药剂科各项工作的能力。我现在已经取得执业药师资格。 【范例二】 1、团结协作，具有高度的集体责任感； 2、诚信守时，具有与人为善乐观平和的性格； 3、勤学善思，具有扎实的专业知识技能及良好的自学能力； 4、脚踏实地，做事认真细致，富有耐心，并具有良好的执行力。 【范例三】 本人毕业于国内著名药科学府，是一名有资质的信息分析师、注册执业药师，有海外工作经历；十多年市场调研分析、竞争情报研究工作经验-有敏锐的市场洞察力、严密的逻辑思维分析能力、良好的判断力，能提出前瞻性思路，具有主持前沿性新产品研究能力，同时根据科技前沿、竞争对手分析及公司状况筛选新产品，引进新产品项目，提供技术指导等，熟悉了解知识产权概念，并有相应独到操作经验；7年多的项目管理经验-具有医药企业产品（新药、保健食品及化妆品）研发、项目申报、药品注册及组织管理工作经验，政府科技项目的立项、申报以及高新技术企业的申请等成功经验。 【范例四】 两年多药厂和两年多化妆品厂以来实习，工艺员,主任，制药工程师兼生产经理岗位学习和积累，掌握了片剂，胶囊剂，颗粒剂,巴布膏剂以及中药提取在生产过程中的各项生产流程，操作，工艺技术,质量控制及人员安排和培训 【范例五】 本人有过在医院和药厂工作的经验，熟悉中药的炮制以及调剂过程，还掌握400多种常见中药的性状鉴定，100多种中药的显微及理化鉴定并能比较顺利地按照《中国药典》规定的操作程序对中药材、中药饮片及中成药等进行提取、分离、检验，并能自制薄层板且熟练操作紫外分光度器等仪器。 【范例六】 具有一定的专业知识，有较强的分析能力，能理性、客观看问题并解决问题；团队意识强，沟通良好，并有一定的领导和组织能力。

药学专业本科毕业生自我评价

药学专业本科毕业生自我评价 药学专业本科毕业生自我评价 大学生活即将结束了，回首校园的生活和社会实践活动，有欢笑，有悲伤有成功当然也有失败。我始终以提高自身的综合素质为目标，以自我的全面发展为努力方向，树立了正确的人生观，价值观和世界观，做一个有理想、有道德、有文化、有纪律的社会主义建设者和接班人。 本人自入校以来思想上进，认真思考、体会伟大的思想和先进的理论，并试着在学习中检验和实践，学习“三个代表”重要思想，学会用正确先进的理论武装自己的头脑，树立了正确的世界观、人生观、价值观。 我的专业是药学专业，四年的大学生活和社会实践使我在思想认识、业务知识和专业技能方面都有了很大的提高。使我掌握了深厚的药学专业知识，我不仅学习了药物化学，药物分析，药理学，药剂学等专业知识，还学习了其它的基础医学知识，还积极在课外的实践和实习中，提高自己的操作动手能力和技术。并通过了英语四六级，具备了一定的英语听，说，读，写能力，熟悉计算机的理论和应用技术，如OFFICE 等办公软件操作。

除了专业学习之外，我还重视社会实践活动，到校外参加勤工助学工作，暑假期间参加暑假工，通过社会实践来提高自己的交际能力和工作水平，还常参加各种社会志愿活动等。我曾在xx药业股份有限公司实习，初步掌握了药品的检测和取样方法，了解了颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流程及生产的管理等，并受到实习单位的一致好评。 在生活上，我向来崇尚质朴的.生活，并养成良好的生活习惯和正派的作风。我不断地完善自己，提高自身素质，认真钻研，勇于创新。与老师与同学保持着紧密的关系，乐于帮助同学解决学习与生活上的麻烦。不仅如此，我还热爱篮球、羽毛球、跑步、下棋、唱歌。 作为一名大学应届毕业生，我所拥有的是年轻和知识。我可以用热情和活力，自信和学识来克服毕业后生活和工作中的各种困难，不断实现自我的人生价值和追求的目标。

药学人员自我评价

药学人员自我评价 【篇一：药学自我鉴定】 药学自我鉴定 药学自我鉴定（一） 我是xxxx药学毕业生，四年的大学生活使我在思想认识和专业技 能方面都有了很大的提高。目前，我是从一个对药物一点都不懂的 情况下到现在都比较了解并熟练应用，这便是我对自己的学习成果 最大的个人鉴定。四年期间，我努力学习，成绩优异，掌握了深厚 的药学专业知识，专业课程主要有我药物化学，药物分析，药理学，药剂学和其它的基础医学课程，并通过了英语六级，有良好的英语 听说读写能力，并通过了国家计算机考试二级证书，熟悉办公软件 如word、excel等操作。 为了让自己能够在毕业之后更快地适应社会，课余时间，我积极组 织院内外的活动以及假期的勤工俭学，不仅能自己挣到生活费，更 重要的是提高了自己的交际能力和适应能力。 大四下学期，我在xx药业股份有限公司实习，初步掌握了药品的检测和取样方法，初步了解颗粒车间，片剂车间和胶囊车间的工艺流 程及生产的管理等，并受到实习单位的一致好评。 当然，本人思想上进，积极向党组织靠拢，并如愿成为一名光荣的 共产党员，用马列主义毛泽东思想邓小平理论武装自己，带动和影 响周围人，树立了正确的世界观、人生观、价值观。 当然，我还存在一些不足，如做事优柔寡断，在以后的工作中我将 改正缺点不足，改善学习方法，提高理论水平，加强动手能力，做 一个四有新人。 药学自我鉴定（二） 实习是对一个应届毕业生来说非常重要的经历，实习时我们接触社 会的一个平台，最真实的感受社会的一个窗口。这次在……药业有 限责任公司为期的实习生活让我学到了很多东西，对我而言有着十 分重要的意义。我更深刻的了解社会，更便捷的融入社会，它不仅 使我在理论上对制药技术这个领域有了全新的认识，而且在实践能 力上也得到了提高，真正做到了学以致用，让我学到了许多书本上 学不到的东西，有效的锻炼了自己，长了见识，开拓了视野，实习 是我们把学校学到的知识应用在实际中的一次尝试，是我们迈向社 会的第一步，通过这次实习，我发现了不少问题，自己的缺点、不