6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGDH)说明书
货号：QS1106 规格：50管/48样6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconate dehydrogenase，6-PGDH）
说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
测定原理：
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。
粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清、培养液等液体：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于25℃或者37℃水浴预热30 min。
3. 空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
4. 测定管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL粗酶液，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10 s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3
注意：空白管只需要做一次。
计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
6PGDH酶活性(nmol/min/mg prot)= [(△A测定管-△A空白管)×V反总
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÷ε÷d×109]÷(Cpr×V样)÷T
= 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
6PGDH酶活性(nmol/min/g) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×109]÷(W×V样÷V
样总)÷T
= 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
6PGDH酶活性(nmol/min/104cell) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×109]÷(细胞
数量×V样÷V样总)÷T
= 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：每毫升液体每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。
6PGDH酶活性(nmol/min/mL) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×109]÷V样÷T
= 535.9×(△A测定管-△A空白管)
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，0.001 L；Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V样：反应体系中加入粗酶液体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，3 min。
注意事项：
（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融；
（2）试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃，可保存2天。
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6- 酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒
6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 产品简介： 6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP还原为NADPH，以供生物合成及维持细胞内的还原状态，因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。 G6PDH能使NADP还原成NADPH，6-磷酸葡萄糖+NADP→6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH；在一定反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。本测试盒通过在340nm下测定NADPH增加速率来反应G6PDH活性的大小，NADPH浓度升高越多则G6PDH 活力越大。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、蒸馏水 产品内容： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：储备液50mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用； 试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用。 操作步骤： 一、样品测定的准备： (1)细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。8000g离心10分钟，取上清，置冰上待测。 组织：称取100mg组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟，
取上清，置冰上待测。 （2）血清（浆）样品：直接检测。 二、测定操作表： 测定管对照管试剂一（μL）750750 试剂二（μL）1010 试剂三（μL）1010 样本（μL）30 蒸馏水（μL）30 将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳动物用37℃，非哺乳动物用25℃），准确反应5分钟。迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，记录5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。 注意事项： 1、若A2-A1大于0.5，需将酶液用提取液稀释，使A2-A1小于0.5，可提高检测灵敏度。 2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一37℃或25℃水浴放置。 3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明
葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0930 规格：50管/48样 产品内容： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂三：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂四：液体×1支，-20℃保存； 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤： 一、样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞 数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加
入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组 织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周； 2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。 3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处 初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。 注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 G6P活性计算： 1、血清（浆）G6P活力计算 单位定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P（U/mL））＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算 （1）按样本蛋白浓度计算 单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P（U/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号:BC2100 规格:50T/48S 产品内容： 试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。； 产品说明： 磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。 6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。 操作步骤： 一、样本的处理 称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。 二、测定步骤 1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。 3.加样表：在比色皿中依次加入 试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL） 样本100-
蒸馏水-100 试剂一700700 试剂二100100 试剂三100100 于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。 三、6PGDH活性计算： 1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。 6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T =536×(△A测定-△A空白)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。 6PGDH酶活性(U/g鲜重)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(W÷V样总×V样)÷T =536×(△A测定-△A空白)÷W ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/moL/cm；d：比色皿光径，1cm； V反总：反应体系总体积，0.001L；V样：反应体系中加入粗酶液体积，0.1mL； Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL；V样总：提取液体积，1mL； T：反应时间，3min；W：样本质量，g。 注意事项： （1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融； （2）试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃，可保存1周。 （3）若样本初始（0s）读值大于0.5且△A测定小于0.1，可尝试将样本进行稀释后测定。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性检测试剂盒说明书 微量法
葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC3325 规格:100T/48S 产品内容： 提取液：液体120mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体12mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂四：试剂×1瓶，4℃保存；临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂五：液体4mL×1瓶，4℃保存； 标准品：液体1mL×1支。10μmol/mL磷标准液。 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取
液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。 2、将10μmol/mL标准液用蒸馏水稀释16倍至0.625μmol/mL的标准溶液备用。 3、工作液的配制：试剂二中加入5mL试剂一充分溶解备用。 O:试剂三:试剂四:试剂五=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若4、定磷试剂的配制：按H 2 无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。 注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。 5、操作表： 测定管对照管标准管空白管样品（μL）2020 工作液（μL）80 充分混匀，37℃（哺乳动物）或者25℃（其他物种）水 浴反应10min。反应后迅速放入沸水中沸水浴10min。取出 冷却至常温 工作液（μL）-80 10000rpm常温离心10min后取上清。 上清液（μL）2525-- 标准溶液（μL）--25- 定磷试剂（μL）125125125125 蒸馏水（μL）100100100125 充分混匀，40℃反应10min。吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，测量660nm处吸光值，测定管、对照管、空白管、标准管测定的吸光度分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。计算△A=A测定管-A对照管，△A标准=A标准管-A空白管。 三、G6P活性计算：
4.糖代谢
第四章糖代谢 一、A型选择题 01. 淀粉经α-淀粉酶作用后的主要产物是 A. 麦芽糖及异麦芽糖 B. 葡萄糖及麦芽糖 C. 葡萄糖 D. 麦芽糖及临界糊精 E. 异麦芽糖及临界糊精 02. 糖酵解时下列哪一对代谢物提供～P使ADP生成ATP A. 3-磷酸甘油醛及6-磷酸果糖 B. 1,3-二磷酸甘油酸及磷酸烯醇式丙酮酸 C. 3-磷酸甘油酸及6-磷酸葡萄糖 D. 1-磷酸葡萄糖及磷酸烯酸式丙酮酸 E. 1，6-双磷酸果糖及1,3-二磷酸甘油酸 03. 下列有关葡萄糖磷酸化的叙述中，错误的是 A. 已精激酶有四种同工酶 B. 己糖激酶催化葡萄糖转变成6-磷酸葡萄糖 C. 磷酸化反应受到激素的调节 D. 磷酸化后的葡萄糖能自由通过细胞膜 E. 葡萄糖激酶只存在于肝脏和胰腺p细胞 04. 下列哪个酶直接参与底物水平磷酸化 A. 3-磷酸甘油难脱氢酶 B. α-酮戊二酸脱氢酶 C. 琥珀酸脱氢酶 D. 磷酸甘油酸激酶 E. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 05. 1分子葡萄糖酵解时可生成几分了ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 06. 1分子葡萄糖酵解时可净生成几分子ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 07. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可生成几个ATP A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 08. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可净生成几个ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 09. 肝脏内据酵解途径的主要功能是 A. 进行糖酵解 B. 进行糖有氧氧化供能 C. 提供磷酸戊精 D. 对抗糖异生
E. 为其他代谢提供合成原料 10. 糖酵解时丙酮酸不会堆积的原因是 A. 乳酸脱氢酶活性很强 B. 丙酮酸可氧化脱羧生成乙酰CoA C. NADH／NAD+比例太低 D. 乳酸脱氢酶对两酮酸的K m值很高 E. 丙酮酸作为3-磷酸甘油难脱氢反应中生成的NADH的氢接受者 11. 6-磷酸果糖激酶-l的最强别构激活剂是 A. AMP B. ADP C. 2,6-双磷酸果糖 D. A TP E. 1,6-双磷酸果糖 12. 与糖酵解途径无关的酶是 A. 己糖激酶 B. 烯醇化酶 C. 醛缩酶 D. 丙酮酸激酶 E. 磷酸烯酸式丙酮酸羧激酶 13. 下列有关糖有氧氧化的叙述中哪一项是错误的？ A. 糖有氢氧化的产物是CO2及H2O B. 糖有氧氧化可抑制糖酵解 C. 糖有氧氧化是细胞获取能量的主要方式 D. 三羧酸循环是在糖有氧氧化时三大营养素相互转变的途径 E. 1分子葡萄糖氧化成CO2及H2O 时可生成38分子ATP 14. 丙酮酸脱氢酶复合体中不包括 A. FAD B. NAD＋ C. 生物素 D. 辅酶A E. 硫辛酸 15. 不能使同酮酸脱氢酶复合体活性降低的是 A. 乙酰CoA B. A TP C. NADH D. AMP E. 依赖cAMP的蛋白激酶 16. 下列关于三羧酸循环的叙述中，正确的是 A. 循环一周可生成4分子NADH B. 循环一周可使2个ADP磷酸化成A TP C. 乙酰CoA可经草酸乙酸进行糖异生 D. 百二酸可抑制延胡索酸转变成苹果酸 E. 琥珀酸CoA是α酮戊二酸氧化脱羧的产物 17. 1分子乙酰COA经三羧酸循环氧化后的产物是 A. 草酰乙酸 B. 草酸乙酸和CO2 C. CO2＋H2O D. 草酰乙酸十CO2＋H2O E. 2CO2＋4分子还原当量
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD) 简介(英文)
What is G6PD deficiency? Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency, or G6PD deficiency for short, is the most common “inborn metabolic disorder” in the world. This means that from the time a baby is born, thre is already something wrong with how his body makes and breaks important substances. According to statistics, about 400 million people have G6PD deficiency, and it is most common in Africa, Southeast Asia and the Middle East.Babies with G6PD deficiency have very little or no enzyme called Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PD). An enzyme is a kind of protein that speeds up chemical reactions in the body. The enzyme G6PD is especially important to red blood cells. If this enzyme is lacking or missing, red blood cells are easily destroyed. Another name for G6PD deficiency is favism because some people who have it, usually those living in the Meditteranean region, react very badly to fava beans. What causes G6PD deficiency? In order to understand what causes G6PD deficiency, one must first learn a bit about genes and chromosomes. Genes are like the body’s blueprints. They contain instructions on how specific parts of the body are made. For example, if the isntructions in your hair genes say your hair is black, your hair will be black. Genes are packaged into threadlike structures called chromosomes. A chromosome is very much like a beaded bracelet. The beads are the different genes that give instructions for different part of the body; the entire bracelet is the chromosome. Genes usually come and act in pairs. One member of a specific pair comes from the father, and the other member comes from the mother. The members of a pair are located on paired chromosomes. All normal human beings have 23 pairs of chromosomes. Each of the first 22 pairs contain the same number and kind of genes. The last and 23rd pair is the sex chromosomes. They are different from the first 22 pairs in that they do not have the same number and kind of genes. The sex chromosomes contain the genes that determine whether a baby will be a girl or a boy. There are 2 kinds of sex chromosomes, X and Y. All baby girls have two X chromosomes. All baby boys have one X and one Y. The gene that gives instructions on how G6PD is made is found in the X chromosome only, thus G6PD deficiency is described as X-linked. If a baby girl gets one defective G6PD gene from either of her parents, she will not have G6PD deficiency because she has another G6PD gene that can do the work (remember: a baby girl has two X chromosomes, thus two G6PD genes). But if she gets two defective G6PD genes from both her parents, she will have G6PD deficiency. On the other hand, a baby boy whose G6PD gene is defective will surely get G6PD deficiency because the Y chromosome has no G6PD gene. A defective G6PD gene will give wrong instructions on how to make the enzyme G6PD. As a result, too little or none of it is made. What are the harmful effects of G6PD deficiency? G6PD has a very small but strategic role in protecting the body from substances that can cause damage to cells or oxidative substances. Because of this important role, G6PD is normally found in all parts of the body. To be sure, most parts of the body also keep a “spare” enzyme, one that can do the w ork of G6PD in case it is lacking or missing entirely.
大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)水平。用纯化的大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)，再与HRP 标记的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体结合，形成抗体-抗 原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)呈 正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠葡 萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶 2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（400U/L）0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份 5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张 6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进 行稀 释。 200U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 100U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 50U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 25U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 12.5U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显
葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症
葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，又名G6PD缺乏症（英文：G lucose-6-P hosphate D ehydrogenase deficiency），俗称蚕豆症，是一种常见的先天遗传性疾病。患者由于遗传基因的先天缺陷，无法正常地分解葡萄糖。除此以外，部份药物和化学物如蚕豆、樟脑、臭丸、龙胆紫（紫药水）、都会令患者出现急性溶血反应，症状包括黄疸、精神不佳，严重时会出现呼吸急速、心脏衰竭，甚至会出现休克而有生命危险。 症状 由于先天性六磷酸葡萄糖去氢酵素缺乏症（以下简称为G6PD）是X染色体联锁遗传性疾病，而男性只得一条X-染色体，故此病症几乎只出现于男性身上，但带有此病因的女性亦有可能出现轻微的症状。 以下为G6PD发病时可能出现的症状： ?持续的黄疸 ?溶血反应，由以下项目引发： ?某类药物（见下） ?某类食物（如蚕豆、金银花） ?其他物品（如樟脑、龙胆紫（紫药水）） ?其他疾病（如受到严重病菌感染、糖尿病） ?严重症状可引致急性肾衰竭 诱发G6PD症状的药物有： ?伯氨喹（Primaquine） ?奎宁、汤力水（tonic water）等抗疟药物 ?磺胺类抗生素 ?砜类：如用以治疗麻疯病的氨苯砜 ?其他含硫磺的药品，如治疗糖尿病、控制血糖的药物血糖平（Glibenclamide） ?呋喃妥因：治疗尿道感染的抗生素 ?阿司匹林 当某些族裔的病人，出现黄疸、贫血，以及对某些诱因产生溶血反应时，又或是家族中有G6PD患者，都会被列为G6PD 的疑似个案，需要作进一步的测试。 G6PD的测试包括： ?全套血球计数（Complete blood count）及网状细胞（reticulocyte）计数；当症状出现时，G6PD患者的海因兹小体（Heinz bodies）会出现于在检验血液玻片的红血球内。 ?肝脏蛋白酶测试，以剔除其他黄疸症状的诱因 ?结合珠蛋白（Haptoglobin）于溶血反应中会减少
生物化学试题及答案(2)
生物化学试题及答案（4） 第四章糖代谢 【测试题】 一、名词解释 1．糖酵解（glycolysis） 11．糖原累积症 2．糖的有氧氧化12．糖酵解途径 3．磷酸戊糖途径13．血糖(blood sugar) 4．糖异生（glyconoegenesis) 14．高血糖(hyperglycemin) 5．糖原的合成与分解15．低血糖(hypoglycemin) 6．三羧酸循环（krebs 循环） 16．肾糖阈 7．巴斯德效应(Pastuer 效应) 17．糖尿病 8．丙酮酸羧化支路18．低血糖休克 9．乳酸循环（coris 循环） 19．活性葡萄糖 10．三碳途径20．底物循环 二、填空题 21．葡萄糖在体内主要分解代谢途径有、和。 22．糖酵解反应的进行亚细胞定位是在，最终产物为。 23．糖酵解途径中仅有的脱氢反应是在酶催化下完成的，受氢体是。两个 底物水平磷酸化反应分别由酶和酶催化。 24．肝糖原酵解的关键酶分别是、和丙酮酸激酶。 25．6—磷酸果糖激酶—1 最强的变构激活剂是，是由6—磷酸果糖激酶—2 催化生成，该酶是一双功能酶同时具有和两种活性。 26．1 分子葡萄糖经糖酵解生成分子ATP，净生成分子ATP，其主要生理意义在于。 27．由于成熟红细胞没有，完全依赖供给能量。 28．丙酮酸脱氢酶复合体含有维生素、、、和。 29．三羧酸循环是由与缩合成柠檬酸开始，每循环一次有次脱氢、 - 次脱羧和次底物水平磷酸化，共生成分子ATP。 30．在三羧酸循环中催化氧化脱羧的酶分别是和。 31．糖有氧氧化反应的进行亚细胞定位是和。1 分子葡萄糖氧化成CO2 和H2O 净生 成或分子ATP。 32．6—磷酸果糖激酶—1 有两个ATP 结合位点，一是ATP 作为底物结合，另一是与ATP 亲和能 力较低，需较高浓度ATP 才能与之结合。 33．人体主要通过途径，为核酸的生物合成提供。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒说明书
货号：MS3501 规格：100管/96样葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 测定原理： G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。 自备实验用品及仪器： 分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：100mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体19 mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂三：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂四：粉剂×1支，-20℃保存； 样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。 3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。 注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 第1页，共2页
葡萄糖-6- 磷酸酶染色液( 铅法)使用说明
葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)使用说明 货号：G1500 规格：3×50ml 保存：4℃避光，6个月 名称3×50ml Storage 试剂(A):G-6-Pase孵育液50ml4℃避光 试剂(B):ALP硫化液2×1ml RT避光 试剂(C):固定液50ml4℃避光 试剂(D):G-6-Pase对照液10ml4℃避光 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6–phosphatase，G-6-Pase)是一种多存在于哺乳类动物肝、肾、肠等组织的膜结合酶，G-6-Pase和微体紧密结合，定位于内质网，是内质网的主要标志酶，能把葡萄糖-6-磷酸水解成葡萄糖和磷酸。G-6-Pase对维持血糖浓度的相对恒定有至关重要的作用，是糖代谢的关键酶。当血糖降低时，G-6-Pase促进肝糖原转变为血糖。当缺乏G-6-Pase时，会引起糖原分解障碍，使糖原积累在肝、肾、心脏等部位，导致肝糖原储积病。G-6-Pase最适pH为 6.5，在pH6.0～8.0亦可，pH8.0最稳定，pH5.0易变性。组织化学反应多用pH6.5～6.7。 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)采用重金属捕捉剂和磷酸结合显示酶的活性。该酶对固定很敏感，组织经80%乙酸溶液固定后用石蜡包埋，G-6-Pase完全被抑制。需用新鲜组织低温恒冷切片，经甲醛短时固定酶即失活，但可短时低温丙酮固定，但一般不固定。 操作步骤（仅供参考）：
1.冰冻切片入蒸馏水清洗。 2.入G-6-Pase孵育液37℃孵育20min。 3.自来水冲洗后，蒸馏水冲洗。 4.在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1min。 5.自来水水洗。 6.(可选)入固定液，固定2min。 7.入蒸馏水水洗2次。 8.甘油明胶封片。 染色结果： G-6-Pase活性处棕色沉淀 阴性对照(可选)：将切片置入试剂(D)-G-6-Pase对照液中，其余步骤相同，结果为阴性。注意事项： 1.ALP硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。 2.ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。 3.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 4.本染色液适用于冰冻切片，一般不固定，也可染色后固定，固定步骤非必须步骤。 5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症
红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症是世界上最多见的红细胞酶病，本病有多种G-6-PD基因变异型，伯氨喹啉型药物性溶血性贫血或蚕豆病，感染诱发的溶血，新生儿黄疸等。本病是由于调控G-6-PD 的基因突变所致。呈X连锁不完全显性遗传。 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症是世界上最多见的红细胞酶病，据统计全球约有近4亿人G-6-PD缺陷。本病常在疟疾高发区、地中海贫血和异常血蛋白病等流行地区出现，地中海沿岸、东南亚、印度、非洲和美洲黑人的发病率较高。我国分布规律呈“南高北低”的态势，长江流域以南，尤以广东、海南、广西、云南、贵州、四川等地为高发区，发生率为4%-15%，个别地区高达40%。 疾病分类 本病有多种G-6-PD基因变异型，伯氨喹啉型药物性溶血性贫血或蚕豆病，感染诱发的溶血，新生儿黄疸等。 发病原因 诱因有：①蚕豆；②部分氧化药物：解热镇痛药；磺胺药；硝基呋喃类；伯氨喹；维生素K3、4；对氨基水杨酸等;③感染：细菌或病毒。 发病机制 本病是由于调控G-6-PD的基因突变所致。呈X连锁不完全显性遗传。由于G-6-PD基因的突变，导致红细胞葡萄糖磷酸戊糖旁路代谢异常，当机体受到伯氨喹啉型药物等氧化物侵害时，氧化作用产生的H2O2不能被及时还原成水，过多的H2O2可致血红蛋白和膜蛋白均发生氧化损伤。最终造成红细胞膜的氧化损伤和溶血。溶血过程呈自限性，因新生的红细胞G-6-PD活性较高，对氧化剂药物有较强的“抵抗性”，当衰老红细胞酶活性过低而被破坏后，新生红细胞即代偿性增加，故不再发生溶血。蚕豆诱发的溶血是蚕豆嘧啶核苷及伴蚕豆嘧啶核苷对红细胞氧化作用的结果。 病理生理
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGDH)说明书
货号：QS1106 规格：50管/48样6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconate dehydrogenase，6-PGDH） 说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。 测定原理： 6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血清、培养液等液体：直接测定。 测定操作： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂一置于25℃或者37℃水浴预热30 min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1 4. 测定管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL粗酶液，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10 s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3 注意：空白管只需要做一次。 计算公式： （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。 6PGDH酶活性(nmol/min/mg prot)= [(△A测定管-△A空白管)×V反总 第1页，共2页
葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症
葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症 G-6-PD缺乏症，全称为红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症，俗称“蚕豆病”，是一种染色体异常的遗传性溶血性疾病。约90%发生于男性，且多见于3岁以下的儿童，是新生儿黄疸的重要原因。 G-6-PD（红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶）能协助葡萄糖进行新陈代谢，并可产生一种能够保护红细胞的物质，以对抗某些“不良”物质的破坏。而当体内缺乏G-6-PD时，红细胞失去了保护物质，容易受到某些“不良”物质的破坏，从而发生溶血。主要表现为溶血症状，出现脸色苍黄、疲累、食欲差、黄疸、茶色尿等。严重时，可能会出现昏迷，甚至死亡。 目前，还没有任何药物能治愈此病。G-6-PD缺乏症在无诱因不发病时，与正常人一样，无需特殊处理。防治的关键在于预防，请严格遵照以下健康处方： 1、禁食蚕豆及其有关制品(如蚕豆酥、怪味豆)，避免在蚕豆开花、结果或收获季节去蚕豆地。 2、衣橱、厕所等处不可以使用樟脑丸（含萘的臭丸）。 3、不要使用龙胆紫(紫药水)。 4、禁止使用的药物：乙酰苯胺、美蓝、硝咪唑、呋喃旦叮、呋喃唑酮、呋喃西林、苯肼、伯氨喹啉、扑疟母星、戊胺喹、磺胺、乙酰磺胺、磺胺吡啶、噻唑酮、甲苯胺蓝、SMZ、TNT等。 5、慎用的药物：扑热息痛、非拉西丁、阿司匹林、氨基比林、安替比林、安坦、维生素C、维生素K、氯霉素、链霉素、异烟肼、磺胺嘧啶、磺胺胍、磺胺异恶唑、氯喹、秋水仙碱、苯海拉明、左旋多巴、苯妥英钠、普鲁卡因
酰胺、乙胺嘧啶、奎尼丁、奎宁、SM、TMP、优降糖等。 6、注意下列感染性诱因：病毒性肝炎、流感、肺炎、伤寒、腮腺炎等。 7、凡感染后或接触/服用以上食物或药物数小时或数天内，出现发热、腹痛、呕吐、面黄或苍白、尿呈黄褐色或暗红色等症状，属急性溶血反应，应立即到医院急诊科就诊！
6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸酶(ME)两种酶酶活测定方法
6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸酶(ME)两种酶酶活测 定方法 (1)6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定 6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定方法根据文献略有改动6979。测定反应体系(5ml)为：0.1mI浓度为1M的Tris-HCl缓冲液、0.1ml 浓度为25mM的底物G-6-P溶液、0.1ml浓度为2mM的NADP+、0.1ml 浓度为0. 2 M的氯化镁溶液及2.5ml ddH20，混合均匀后，在340 nm 下测定吸光度值A0，作为空白值。再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与25℃条件下保温，每30S于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。根据公式计算酶活力。 酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟G6PDH催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。 式中：△A/min为340 nm处每分钟吸光度的变化值；V为酶促反应体积(mL)；为NADH的摩尔消光系数(6.22×103L／mol·cm-1)；b 为比色皿光程(cm)。 (2)苹果酸酶(ME)活力测定 测定反应体系(3ml)为：0.5 mI浓度为0.4 M的Tris-HCl缓冲液、0.1 ml 浓度为30 mM的底物苹果酸溶液、0.2ml浓度为3.4 mM的NADP+、0.1ml浓度为0.12 M的氯化镁溶液及2 ml ddH20，混合均匀后，在340 nm下测定吸光度值A0，作为空白值。再加入0.1 ml粗酶液，摇
匀后，与250C条件下保温，每30s于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。根据公式2-1计算酶活力。 酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟ME催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。