高效液相色谱使用和维护中的几个重要环节

高效液相色谱使用和维护中的几个重要环节

随着现代化社会的不断进步和需求，科学技术的不断发展和提升，各种高尖端产品及技术如春雨后竹笋般蓬勃发展。高效液相色谱产品及高效液相色谱技术就是为了适应和满足这种社会需要悄然而生，并逐渐成长发展直至壮大起来。

作为先进、精密的仪器，高效液相色谱仪是用于尖端的科学研究，用于复杂的化学分析，用于关于民生问题的监测、检测等。仪器的正常运行，准确的结果数据是每个操作者所期待并向往的。那么仪器的正确使用和正确维护就显得尤为重要。

下面就一一介绍下高效液相色谱使用和维护中的几个重要环节吧。

实验前的准备工作

1.过滤流动相。为了保证流动相洁净，流动相使用前都必须微膜过滤。

2.流动相脱气。为了避免流动相中气泡对仪器(气泡可能会对仪器及相关设备的正常使用及寿命产生一定影响)及分析结果的影响。

3.运行液相泵前尽量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%异丙醇溶液(5%甲醇或异丙醇等有机相溶液能避免微生物污染，但浓度不能太高，高于20%缓冲液可能会导致盐结晶析出，碰到酸碱类物质可能会有比较强烈的反应;另外异丙醇粘度较大，清洗能力较强;也有采用纯水清洗的，这样如果仪器每天使用还行，如果长期不用，为了防止微生物繁殖，纯水还得用含有有机相的清洗液置换出去)冲洗，这是为了保护泵柱塞和密封圈等部件在泵运行时不被结晶盐等磨损而导致泵头漏液。

4.每天运行仪器前先排气。一般的液相色谱仪都有排气功能，没有的可以不接色谱柱开机运行几分钟排气。

5.泵运行时尽量不采用大流量模式(主要是换流动相或排气泡等，流量尽量设为3.0ml/min以内，这样更有利于保护泵柱塞杆和密封圈等部件的寿命)。

6.分析前先对色谱系统(整个流路)进行冲洗及平衡，尤其是色谱柱。先用纯甲醇冲洗30分钟，再换10%甲醇水溶液冲洗30分钟，最后换含缓冲盐或酸碱类物质的流动相平衡30分钟。色谱柱如果长期没用，每一步冲洗、平衡量尽量为色谱柱柱容量20倍以上)。如果流动相中不含缓冲盐或酸碱类物质，纯甲醇冲洗完可直接换为流动相。使用色谱柱前知道或怀疑色谱柱中残留有或酸碱盐类物质，在用纯甲醇冲洗前增加一步10%甲醇水溶液冲洗。

7.如果色谱柱需要控温(升温)，要先运行泵后再设柱温箱温度。

8.待仪器运行稳定后(基线基本走平后，这个是经验值)，方可进样。

样品前处理

1.样品浓度不要太大，杂质不要太多，否则色谱柱处理起来压力很大。

2.进样前样品一定得先经微膜(一般采用0.22um或0.45um微膜)过滤。

实验过程中注意事项

1.为了避免进样器残留影响，进样前先对进样器进行清洗(这个不是必须的，但最好是每进一针样品或标准品前都清洗进样器和进样针，当然同一样品也可以不洗，不同样品尽量洗)，清洗顺序为纯水、甲醇、流动相。

2.每进一针样品后要对系统进行一次冲洗、平衡后再进下一针样品(等度要求不高，梯度要求相对高，主要是冲洗色谱柱中残留的强保留物质)。

实验完毕的后续工作

1.做完样要先清洗进样器，清洗顺序为纯水、甲醇。

2.关闭柱温箱温度设置。

3.冲洗色谱系统及色谱柱。先用10%甲醇水溶液冲洗30分钟后换为纯甲醇冲洗30分钟，待基线基本走平停泵。如果流动相中不含缓冲盐或酸碱类物质，冲洗时流动相可直接换为纯甲醇。色谱柱用完后如果长时间内不会再用，纯甲醇冲洗量要大于色谱柱柱容量20倍以上的，冲洗后卸下，两端密封保存。

4.待色谱柱温度降至接近于室温时再停泵、关机(这一点需特别注意，目的是防止温度过高损坏色谱柱)。

5.关机前用清洗液清洗柱塞杆。

仪器长时间不用的维护方法

1. 如果长时间不做实验要经常开启下仪器，最好是半个月到一个月开启一次。

2. 仪器内要充满甲醇保护(或者用高纯氮气吹干液路中的液体后密封液路

两端)。

3. 色谱柱最好卸下，两端密封保存，并堵上拆下色谱柱两端的管路。

4. 要保证实验室清洁、干燥、通风，无强光照射，无腐蚀性气体，无强烈振动等。

仪器好具有分析结果准确，分析时间短，故障率低，使用寿命长等多种优势。正确使用和维护，仪器就会长期保持良好的状态和性能，使用起来就会既顺手又准确，所以对仪器的正确使用和正确维护的重要程度不言而喻，这个不用说大家都知道，那是重要加非常的。

高效液相色谱仪维护规程

1 目的 建立本实验室高效液相色谱仪的保养维护操作，确保仪器能正常使用。 2 适用范围 适用于本实验室高效液相色谱仪的保养维护操作。 3 责任者 本实验室所有操作高效液相色谱仪人员。 4 操作规程 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1 对仪器的一般要求和色谱条件 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。 4.1.1 色谱柱 反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂； 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm （1nm=10A）以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm 以上的填料。除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10um之间。粒径更小（约2um）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。 使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃。

agilent高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

优胜美特制药有限公司&浙江巨泰药业有限公司 --------药物研究所-------- 变更内容及定期审核 制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程，使操作维护规范化，保证检测结果准确可靠。

二、适用范围 本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。 三、职责 QC对本规程的实施负责，项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。 四、程序内容 4.1仪器配置 本仪器由梯度泵，自动进样器，柱温箱，VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作站组成。 4.2操作前的准备 色谱纯的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm以下的滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相。 4.2.2 供试溶液的配制供试品用规定溶剂配成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm以下的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。 4.2.3 检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。 4.3仪器的操作 4.3.1 接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30秒后，各部件进入待机状态，指示灯为橘黄色，启动完成。 →梯度泵→柱温箱→检测器的状态，橘黄色为未就绪状态，绿色为空闲状态，粉色为进样状态，蓝色为运行状态，红色为出错状态。 显示所有数据：即打开运行样品时所有记录运行状态的数据图谱。 平铺数据：即将所有运行状态图谱平铺。 重叠数据：即将所有运行状态图谱重叠。 4.4色谱条件的设定及数据采集操作过程 一模块图标中的控制来开或关。把泵上的Purge阀逆时针松开，调流速为3.0ml/min,启动泵，系统开始排气泡，直到管线内（由容器瓶到泵出口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所用流动相通道中无气泡为止，调流速为1.0ml/min，再把Purge 阀顺时针旋紧。 “与泵和进样器一致”使柱温箱温度一致，单击确定进入下一画面。 “最大压力限度”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子，单击确定进入下一画面。VWD检测器参数的设定

高效液相色谱仪日常维护

高效液相色谱仪维护保养规程 1. 高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。 2. 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洁；定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，清洁后用纯水清晰到中性，保持过滤器畅通无阻。 3. 所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。 4. 所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，超纯水和哇哈哈纯净水或同等级水可直接使用，所有试液均新用新配，配置后液体需经过0.45um水膜过滤后使用，并且在进样的样品都必须经过0.45um薄膜针筒过滤后进样。 5.流动相保存时间：纯有机相，比如甲醇，乙腈等为1个月；水相（含超纯水，磷酸水，乙酸水，缓冲盐水，离子对试剂等）最好现配现用，存放不超过3天为宜；水相与有机相混合的为7天。有效期内，每一到两天要进行脱气。水相每两天进行过滤、脱气，有效期内如发现有长毛和浑浊，视为变质要进行重新配制。

6. 采用保护柱，延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰型变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。 7. 在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=95：5清洗了管路和色谱柱1 小时以上，使用水：甲醇=5：95保存管路和色谱柱40分钟以上。 8. 定期清洗在线过滤器：把在线过滤器卸下，先用甲醇超声30分钟，最后用超纯水超声30分钟。 9. 仪器使用结束，饱和完色谱柱后，在不接通色谱柱的情况下，将所有非纯有机试剂通道插入已过滤并超声处理的纯化水中，开启泵。冲洗30分钟后，将纯化水换成色谱甲醇冲洗30分钟后，关闭电源。 10. 实验结束后用洁净干布擦拭仪器及电脑表面，切忌用湿布擦拭及水冲洗，最后罩上仪器罩。

Waters 600 Controller高效液相色谱仪维护保养规程

1 使用前 1.1 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洁；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。 1.2 定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，保持过滤器畅通无阻。 1.3 使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02μm滤膜过滤）。对流动相一定要脱气。 1.4 每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。 1.5 保持仪器使用环境20℃-30℃，湿度30%-70%。 2 使用中 2.1 珍惜保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压力的波动。 2.2 采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰型变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。 2.3 避免超负荷进样，对250*4.6mm的柱子，绝对进样量应不超过100μg。在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC 柱性能持久良好的重要举措之一。 2.4 经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇-二氯甲烷（1:1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗，时间均不少于1h。 2.5 以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。 2.6 尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。 2.7 对于阻塞或受伤严重的柱子，必要时，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。 2.8 色谱仪检测器输出和积分仪（处理机）要匹配，要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来，使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。 2.9 如仪器突发故障，应立即停机并报告，由专业人员排除故障后经校准方可重新使用。 3 使用后 3.1 做完实验，及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀，尤其是对过夜的柱子和进样阀，一定要

BRUKER TENSOR 27 FT-IR仪器操作规程与维护规程

BRUKER TENSOR 27 FT-IR 仪器操作规程与维护规程 1目的 规范TENSOR27红外光谱仪的操作程序，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。 2适用范围 适用于TENSOR27红外光谱仪的使用操作与日常维护。 3操作程序 3.1安全操作注意事项和特别提示 3.1.1该仪器必须由专人保管，专人使用，使用人员必须经过专门培训， 并仔细阅读说明书，确保对仪器具有充分的认识。 3.1.2使用环境： 电源电压：85～265V，47～65Hz 温度范围：18～35℃ 湿度范围：小于70% 仪器室须保持无尘，无腐蚀性气体，无强烈振动。 3.1.3严格遵守操作规程，如仪器出现故障，须立即退出检测状态，并向 保管人或科室负责人报告，查明原因，及时处理，不得擅自“修理”， 同时做好使用和故障情况登记及实验室记录。 3.1.4日常保养：当位于仪器的右上角的红色电子湿度指示灯闪烁时，应 该立即更换干燥剂。包括位于样品仓内的干燥剂及位于干涉仪仓内 的干燥剂。若仪器长期不用，则必须至少每两星期更换一次干燥剂 并且每周至少开启主机一次，每次开机时间不低于4小时， 样品仓内干燥剂为变色硅胶，再生按变色硅胶方法处理。 再生、更换干涉仪仓干燥剂步骤： （1）小心将失效干燥管从仪器中取出，并将已再生好的备用干燥

管小心装入仪器； （2）打开失效干燥管密封盖，将干燥剂（分子筛，白色）倒出； （3）将倒出的干燥剂放入适当的容器，在干燥烘箱于150℃下再生不低于24小时；（切勿连同干燥管一起加热！））（4）在干燥气氛中冷却干燥剂至50℃以下，然后才能将干燥剂重新装入干燥管中，盖好密封盖，在干燥气氛中保存备用。 （切勿将高温干燥剂立即放入，否则会损坏红外光谱仪！） 3.1.5样品测定完毕，须保持仪器样品仓的清洁，并将样品移出仪器室， 关好仪器、电脑及水、电、门窗等。 3.2开机前的准备 3.2.1检查确认电源插座上的电压是否在规定的范围内。 3.2.2开除湿器，湿度须小于70%。 3.3开机步骤 3.3.1按仪器后侧的电源开关，开启仪器，加电后，开始一个自检过程； 约30秒钟。自检通过后，状态灯由红变绿。仪器加电后至少要等 待10分钟，等电子部分和光源稳定后，才能进行测量。 3.3.2开启电脑，运行OPUS操作软件。检查电脑与仪器主机通讯是否正 常。 3.3.3设定适当的参数，检查仪器信号是否正常，若不正常需要查找原因 并进行相应的处理，正常后方可进行测量。 3.3.4仪器稳定后，进行测量。 3.4测量步骤 3.4.1根据实验要求，设置实验参数。 3.4.2根据样品选择背景。 3.4.3测量背景谱图。 3.4.4准备样品（如用压片机压片或液体池等） 3.4.5将样品放入样品室的光路中（如放在样品架或其它附件上）。 3.4.6测量样品谱图。 3.4.7对谱图进行相应处理。

岛津LC-2030型自动进样高效液相色谱仪使用、维护及保养标准操作规程

岛津LC-2030型自动进样高效液相色谱仪使用、维护及保养标准操作规程 1

修订记载

目的：建立岛津LC-2030型自动进样高效液相色谱仪使用、维护及保养标准操作规程，供化验员标准操作。 范围：应用于岛津LC-2030型自动进样高效液相色谱仪。 职责：由质控实验室仪器负责人编写； 质控实验室经理、质量管理QA 审核；质量负责人批准； 质控实验室相关化验员执行。 内容： 1 编制依据：《岛津LC-2030型自动进样高效液相色谱仪使用说明书》、《药品生产质量管理规范》（ ）。 2 仪器组成：本仪器主要由溶剂瓶柜、自动进样器、紫外检测器、荧光检测器、柱温箱、脱气机组成。如图1所示： 图1 溶剂瓶自动进脱气 柱温箱 荧光检 紫外检

3 操作方法： 3.1 开机： 3.1.1 准备好流动相并安装好色谱柱：将配制好的流动相用孔径为0.45μm的滤膜过滤，超声脱气处理15分钟后方可使用；色谱柱按箭头指示方向连接到液相色谱仪上。 3.1.2 打开液相色谱仪电源，液相色谱仪仪器开始自检。 3.1.3 电脑开机进入WINDOWS桌面后，双击LC-2030色谱工作站图标，进入工作站登陆界面。如图2所示： 图2 3.1.4 单击【确定】进入主项目界面。如图3所示：

图3 3.1.5 单击【仪器】图标，双击，进入仪器操作界面在线系统， 出现在线控制主界面。如图4所示： 图4 3.1.6 打开排放阀（逆时针旋转﹤180°），单击【自动排气】，进入排气操作界面，根据需要选择流路及排气时间，完成设

置后单击【下载】。如图5所示： 图5 3.2 数据采集方法编辑： 3.2.1 常规参数设置： 3.2.1.1 单击[常规]，进入常规操作界面，运行时间、泵流速、检测器波长和柱温箱温度（5℃～85℃）等，完成设置后单击[下载]，将该方法下载至液相色谱仪。如图6所示： 图6 3.2.1.2 单击【时间程序】，进入该操作界面，若进行等度洗脱，则不需要修改。如图7所示： 图7 3.2.2 高级参数设置： 3.2.2.1 单击[高级]，进入该操作界面，设置相关检测参数，完成设置后单击【下载】，将该方法下载至液相色谱仪，如图8所示：

高效液相色谱的日常使用和维护

高效液相色谱的日常使用和维护 高新科技与现代产业的迅猛发展，促进了以高效液相色谱（HPLC）为代表的复杂样品的分离分析和分离纯化仪器的飞速发展。HPLC以它定量分析结果准确、分析周期短、分析范围广、分析检测限低等优势，在食品添加剂、药物成分分析等多领域得到了广泛的应用。高效液相色谱仪是一种高端检测仪器，它精密快速，有效准确检测的同时就要求我们一定要严格正确使用仪器，定期科学有效地维护仪器，只有这样仪器才能长久持续有效使用。但是从目前实际使用情况看，与高效液相色谱仪的应用及产品技术升级的发展速度相比，其使用和维护则相对比较滞后，从而造成对仪器的滥用和对耗材不必要的浪费。主要原因是由于对于仪器使用操作者的培训侧重于仪器的初步使用，忽略了仪器的后续培训及维护操作学习；其实很多高效液相色谱都是国外进口仪器，英文版本软件对于大多数理工科毕业的仪器操作者也是一个障碍。笔者根据自己的工作经验，以岛津LC-20AT液相色谱仪为例，阐述液相色谱仪在使用时应注意的几个问题及日常使用后的仪器维护基本事项，并对仪器使用过程中容易遇到的问题进行分析，提出解决方法。 1、高效液相色谱仪的组成 高效液相色谱仪主要是由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和色谱软件数据处理系统组成。 1.1输液系统 输液系统主要包括溶液贮器、在线脱气装置、高压输液泵、梯度洗脱装置。 溶液贮器用于存放符合HPLC要求的流动相。在线脱气装置主要功能是流动相在进入柱子前排除气泡。高效液相色谱柱的填料颗粒较小，通过2～5mm的色谱柱受到的流动阻力很大，因此需要通过高压输液泵抽取流动相输送至色谱柱。 高压泵按输液性能可分为恒压泵和恒流泵两种。按机械结构又可分为液压隔膜泵、气动放大泵、螺旋注射泵和往复柱塞泵四种，前两种为恒压泵，后两种为恒流泵。恒压泵可以输出稳定不变的压力。在一般的分析仪器中，由于系统阻力不变，恒压亦可达到恒流的效果。但是当系统阻力发生变化时，输入压力即使不变，流量却可随阻力而变化。恒流泵则无论系统阻力如何变化都可保证其流量基本不变。在色谱实际操作中，系统阻力可能随着运行时间的增加产生微小的改变，因此恒流泵比恒压泵更优越。然而在泵和柱系统所允许的最大压力下操作时，恒压泵较为安全方便。

HPLC日常维护办法

一、介绍 怎样确定和解决故障 解决HPLC存在的故障应该从判断故障所在开始。本手册将从五个方面帮助您快速找到故障所在。 压力异常 漏液 谱图问题 进样阀问题 其它由气味、现象和声音可以判断的问题。 将问题解决后，请将方法记录下来，以备将来参考。 前期维护 许多液相色谱的故障通过日常维护一般都是可以避免的。例如：定期的更换柱塞杆密封可以避免柱塞杆密封的磨损以及由此产生的相关的故障。第七部分列出了很多液相色谱的常见故障以及预防措施及建议。针对特定品牌的液相色谱，这些建议需要灵活运用，这样它就可以成为实验室日常维护工作中的一部分。 其它参考资料 1、参考仪器的操作手册和用户服务手册。其内容包括详细的图解、 维修步骤以及需要更换的零部件的部件号。 2、与有丰富维修经验的实验室工作人员联系，从他们那里得到帮 助。 3、与仪器厂商直接联系。大部分的仪器生产商为用户提供免费的

技术支持。 4、Phenomenex拥有经验丰富的技术顾问，可以帮助您解决所遇到 的问题。欢迎您来电或传真垂询。 5、Phenomenex还提供与HPLC故障排除有关的计算机培训软件、 音像资料及一套完整的HPLC用户手册。 6、以下参考文献，也可以帮助您解决一些问题： J. W. Dolan and L. R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, Humana Press, NJ(1989). Phonomenex Order No.: AA0-1717 L. R. Snyder and J. J. Kirkland, Introduction to Mordern Liquid Chromatography, 2nd ed., Wiley, NY (1979). Phenomenex Order No.: AA0-1700 D. J. Runser, Maintaining and Troubleshooting HPLC Systems A User’s Guide, Wiley, NY (1981) J. W. Dolan, “Troubleshooting”, LC/GC Magazine. This is a monthly discussion.

仪器仪表使用与维护

仪器仪表的使用与维护 放置位置要求： 1、仪表应放置在平坦、干净、无灰尘的实验台上； 2、仪表的安放位置应无大的振动； 3、放置仪表的位置应远离有害气体或液体滴落； 4、确保电极连接电缆及电源线所经过的任何位置都不接触高温的或有摩擦的物体。 一、HK-3C型台式精密酸度计使用说明 组成：HK-3C台式精密酸度计由主机、复合的PH电极、A TC温度电极及电极支架组成。电极采用测量灵敏的PH复合电极，A TC自动温度补偿，测量可靠、数据准确。 电极安装： 1、取出PH电极，摘下电极前端的保护瓶，保留保护瓶以备将来保存电极； 2、目测球泡是否破损或裂纹，如果有破损或裂纹，则该电极不能使用； 3、如球泡内有气泡，轻甩电极，使气泡上升，保证球泡内充满溶液； 4、用3.3mol/L氯化钾溶液浸泡24小时，然后用清水冲洗干净； 参数设置： 1、水质选择：不同的水有不同的温补曲线，所以，根据具体的使用情况选择相应的水质十 分必要，可选项有普通水、纯水、氨水、磷酸盐水、钼酸盐水、不补偿； 2、温度补偿方式：由于温度的波动对测量造成影响，必须进行温度补偿，可以选择自动或 手动温度补偿方式（25℃）； 仪表校准： 1、PH缓冲液校准 2、样品校准 3、输入E0.S 4、温度校准 5、电气校准 PH缓冲液校准： 通过使用标准缓冲液对仪表校准，可以校准一点，也可以校准两点，仪表在初次使用，更换电极或长时间停用后必须进行二点校准。使用仪表自动识别的标准缓冲液：（4.00、6.86、7.00、9.18、10.01）PH 测量方法： 1、向塑料烧杯中加入约100ml除盐水清洗电极，然后倒掉，清洗电极三遍。 2、向塑料烧杯中加入约100ml的待测水样，用该水样清洗电极至少两遍。 3、用步骤2的方法取待测水样，将电极插入烧杯，等待测值稳定；当稳定后，即可读出测 量值。 仪表维护： 1、电极的稳定时间与电极的新旧程度和水样的性质有关，电极越新稳定越快，电极使用一

高效液相色谱仪维护保养操作规程

高效液相色谱仪维护保养操作规程

目的:建立高效液相色谱仪维护保养规程。 范围：高效液相色谱仪的维护保养。 责任：质量部、后勤保障部负责人。 内容： 1.泵的维护 1.1流动相的更换 1.1.1将新流动相置于储液瓶中。 1.1.2打开放空阀，启动泵使新的流动相从放空阀出口流出20ml.左右。 1.1.3关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，用小容器放置于进样阀的出口处。 1.1.4启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出10ml左右。 1.1.5重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约30倍于色谱柱体积，而且检测器基线平恒后，流动相更换完毕。 1.2换非互溶性流动相（如甲醇系统更换为正己烷系统） 1.2.1准备50ml能与新旧流动相互溶的中介溶剂（如异丙醇）。 1.2.2用中介溶剂更换泵中的旧流动相，步骤同‘更换互溶流

动相’中的1－5过程（不要接色谱柱）。 1.2.3如果色谱柱中流动相也需要更换，用该溶剂冲洗色谱性。 1.2.4准备新流动相并置于储液瓶中。 1.2.5用新流动相更换中介溶剂步骤同‘更换互溶流动相’中的1－5过流动相更换完毕。 1.3换缓冲液流动相（如磷酸盐缓冲液更换为甲醇系统） 1.3.1取超纯水或去离子水500ml。 1.3.2用水更换色谱系统中缓冲液（不包括色谱柱），具体步骤与‘更换互 溶流动相’中的1－5过程相同。 1.3.3用水含量10%－60%范围的溶剂冲洗色谱柱中的盐。1.3.4用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂，具体步骤与‘更换互溶流动相’中的1－5过程相同。 1.3.5【注意】由于一般缓冲液遇到甲醇、异丙醇等高含量有机溶剂混合液时容易将缓冲液中盐结晶出来，而结晶盐对密封圈、柱塞杆以及进样阀内部转子和定子都有很大的损坏，也容易阻塞输液管路，因此要特别仔细操作。 1.3.6用缓冲液作流动相或一段时间不使用泵，在关机前，首选用含量较高的超纯水或去离子水混合溶剂冲洗色谱柱和系统中的盐，然后用纯甲醇或乙腈冲洗。

四合一检测仪器操作及维护规范

四合一检测仪器操作及维护规范 编制： 审核： 批准： 实施日期: 发布日期:

1目的 1.1为正常操作使用四合一，为测试作业提供指导。 1.2为了操作人员的人生安全、设备能够正常运行并延长其使用寿命而制定本 操作规范。 2适用范围 2.1适用于所有使用该测试仪进行测试动作的人员及其测试行为和设备维护人员。 3职责 3.1所有操作人员须严格遵守该操作规范；测试过程中如出现报警或异常情况，操作人员应及时通知设备负责人员处理，切勿随意自行处置。 4 工作内容 4.1测试内容 4.1.1将CD/进气压力调至0.7MP& 4.1.2检查设备无异常情况后，两人协助将测试样片抬上辅助上料架，并从左侧将样片推至贴紧右侧限位定位装置。 4.1.3软体操作界面下方菜单中选择［LOT OPERATION打开其选择界面。 4.1.4在［LOT OPERATION^择界面中，选择［RECIPE］，打开 Recipe Loading 界面。 4.1.5选择对应的RECIPE并确认OK 4.1.6返回LOT OPERATIO程序界面，点击 LOAD/UNLOAD钮运行基板的导入准备程序。 4.1.7选择“基板尺寸”，点击“ Load”按钮，基板导入程序启动。 4.1.8转动辅助上料台的手摇柄，将测试样片送至进出料门前，手摇柄旁的指 示灯闪烁，按下闪烁灯，进出料门开启，继续转动手摇柄送料，直到进料门的传感器侦测到样片，指示灯闪烁，按下闪烁灯，自动输送装置开启；待样片完全进入后，指示灯再次闪烁，按下指示灯，进出料门关闭，送料结束。 4.1.9软体界面点击“ Start ”，测试程序开始运行。 4.1.10待测试完成后，点击“ LOAD/UNLOAD,选择UNLOAD1始下载样片。 4.1.11手摇柄旁边指示灯闪烁，按下指示灯，进出料门打开，样片退至辅助上料

高效液相色谱质谱日常维护计划

高效液相色谱质谱仪日常维护计划 目的：指导化验员正确的维护和保养高效液相色谱质谱仪，提高仪器使用寿命，使仪器稳定的工作得到稳定可靠的数据。 液相色谱仪部分： 一：流动相的制备要求： 高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；流动相 脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法 二：高压恒流泵的维护和保养 1．高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。 2．特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换 3．在仪器使用完了以后，要及时清晰管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。 三：色谱柱的维护和保养 1．所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。 2．所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。并且在进样的样品都必须经过0.45um

薄膜针筒过滤后进样。 3．所使用到的最大流速为1.0ml/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。 4．在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色谱柱1小时以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色谱柱40分钟以上。 四：工作站的维护 出现死机可重启计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。 五：常见故障及日常维护 下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出了的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。 溶剂瓶

高效液相色谱仪的管理与维护

高效液相色谱仪的管理与维护 1引言 高精度的输液泵，应用广泛的色谱分离柱，低噪音、高灵敏度的各种检测器以及功能强大的数据处理软件系统的出现，都推动了液相色谱技术的迅猛发展。液相色谱仪正以它分辨率高、分析速度快和应用广泛的优点倍受仪器分析工作者的青睐，广泛地应用于生物医药研究、环境监测和食品检测等领域。我们在应用先进的HPLC技术进行各种科研工作中，为保证分析结果的科学性和准确性，必须重视和加强对液相色谱仪的管理和维护。只有良好规范的管理(GLp)，才能使仪器处于最佳工作状态，保证各项分析工作顺利完成，得出的实验数据才最真实可靠。我们希望通过本文的技术交流，能使广大液相色谱工作者不仅掌握液相色谱技术，还能管理和维护好液相色谱仪。 2 液相色谱仪流路泵系统的管理与维护 液相色谱仪的流路系统主要是由输液泵和连接管道组成。输液泵的主要作用是把流动相和样品带人色谱柱中，使样品在色谱柱固定相和流动相之间作用并实现分离。因此，正确配制流动相，维护好泵体和连接管路，对保证输液泵的流量精度和保留时间(tR)的重复性十分重要。 2.1流动相的配制和准备 在高效液相色谱分析中，正相色谱以已烷作为流动相的主体，二氯甲烷、氯仿、乙醚作为改性剂;反相色谱以水作为主体，以甲醇、乙睛、四氢吠喃作为改性剂。HPLC分析均应使用HPLC级纯度的溶剂，AR级的溶剂可能会由于杂质的存在而出现鬼峰。正相色谱分析中使用的己烷、二氯甲烷、氯仿、乙醚中经常含有微量的水分，这会改变液固色谱柱的分离性能，使用前应用球形分子筛柱脱去水分。反相色谱分析中使用的甲醇、乙睛、四氢吠喃，不必脱除微量水，但甲醇、乙睛等使用前最好经硅胶柱净化，去除具有紫外吸收的杂质。要保证配制流动相用水的纯度足够高。由于去离子水通常含有一些有机物，所以不适合用于HPLc分析用，最好使用超纯水(电阻率18Mfl.cm)。如果条件有限，可将去离子水再次蒸馏，现用现蒸，保持新鲜，还能脱去CO:，使用效果也不错。 有些分析需要用到缓冲盐的流动相，配制时盐试剂要用AR级以上、没有污染、过期;现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生变化和成分分解，影响色谱分离的效果。缓冲盐的流动相最好能在实验室自己配制，商品化的流动相可能会添加有硫代硫酸钠稳定剂，会影响缓冲液的光学和色谱性能。 无论是有机水溶液还是缓冲盐溶液的流动相，配好后都要通过0.45卜m滤膜过滤后再上机使用，这样能够有效防止由于微粒的存在使流路管道堵塞。过滤后应把溶剂放在密闭容器中，以防止被重新污染。过滤后的溶液既可用于色谱分析，也可用于清洗诸如泵头、柱塞杆、单向阀和密封圈等仪器部件，保持输液泵的性能良好。 所有的流动相在进人HPLC系统之前都应该首先脱气(即使仪器上有在线脱气)，因为没有脱气的流动相进人到高压系统后·，存在的气泡会导致系统的流速和压力不稳定，出现鬼峰等间题。从溶液中排除气泡的方法主要有:真空脱气、氦气脱气和超声波脱气实际工作中真空抽滤的方法很有效，它既能脱气又能过滤，但必须在上机前完成。在线连续脱气可以防止气体随温度的变化重新溶解在溶剂中。 1

膜片钳之仪器操作与维护篇.

膜片钳之仪器操作与维护篇 1、电极一旦拉制成功后，其尖端必须作进一步的处理。目的之一是为了减小电极内部与溶液之间的电容，即在电极末梢前数微米处，涂敷一层疏水材料，如硅酮树脂（Sylgard）。这种物质能够防止液膜爬上电极。另一目的是为了对电极尖端作优化处理，如同热抛光的方法使电极尖端光滑、周围均匀，以提高实验过程中的封接成功率。 2、关于电极的问题 a. 洁净的电极是封接的关键。电极需要在使用前拉制完成放在密闭容器中，通常在12小时内用掉比较好； b. 内液（确切的说是电极液）需要过滤； c. 在电极入水之前可以加一个正压，可以吹开电极尖端的液体及灰尘； d. 如果不用灌流的话，最好bath solution也要过滤。 e、电极拉制成功以后，常置于一有盖的容器内，2-3小时内必须使用，电极使用前要进行充灌。在充灌前，电极内液要用0.2um的滤膜或滤纸进行过滤。利用玻璃管的虹吸作用，溶液可从电极尖端吸入，也可利用5ml注射器在尾端加负压以实现充灌，随后电极从尾端充灌。电极内液不能漏到夹持器，会使其内表面变湿形成薄膜从而产生热噪声，在充灌时，电极内出现的气泡可以通过轻敲电极而消失。 3、降低噪声的关键是地线和屏蔽，第一地线接地要好；第二要注意将一些容易产生噪声的设备屏蔽好，比如显微镜灯光的电源、电动微超的马达、监视和记录的电脑以及一些可能产生噪声的电源线，总之你可以用排除法一一试验，肯定会降低噪声的，一般降低到几个pA/fA级即可。另外，你的负压也可以用一个“U”形管通过3通管加上。 我认为屏蔽很重要哦，以前我在实验中，常遇到电极入水后方波有50HZ干扰，有时还跳动，很是心烦，想了很多办法就是去不掉，包括接地线，镀银丝、参比电极，清洗Holder等等，甚至怀疑仪器有问题，感到有些绝望了！ 后来发现灌流时干扰明显，把灌流装置控制电源搬到法拉第笼子外，一切就ok了！而且发现只要有电源线进入屏蔽笼，即使没有通电，也有交流干扰，所以所有进入屏蔽笼的电源线都应该用屏蔽线（而不是一般电线）。 我体会到在膜片钳实验中一定要“消灭”各种干扰，这样结果才可靠，而消除干扰靠什么？It is 屏蔽！ 你可以用做铁笼子的铁丝网罩住显微镜电源，若没有屏蔽线，可以用保鲜用的锡纸包裹导线，只要是pA/fA就可以做了！ 4、关于干扰的问题我有以下几点看法： a、屏蔽室是必要的，尽管有时候看起来作用不大，但是如果外界的电磁干扰很大，这时候它的作用就显示出来了。 b、避免干扰的一个原则就是要将屏蔽室内外的各个可能产生电磁干扰的仪器一定要接地，有时候一个仪器有好几个零部件，有些部件之间是绝缘的，此时就要将绝缘的部分分别都接地。 c、同一个部件不要重复接地，有时候也可能产生干扰的。 d、关于显微镜的问题： 屏蔽到是没有必要，只要两根线就解决了 1）将显微镜的灯罩打开，在内部的螺丝上接出一根线 2）在显微镜的臂上的螺丝上接一根线 e、此外，浴槽电极与灌流液一定要接触良好，否则的话也会出现干扰的，有时候开始还挺好，

hplc维护

仪器的使用注意事项 1、流动相在使用前需要进行过滤和脱气处理 2、溶剂过滤器：过滤器必须使用，溶剂过滤有两种，白头过滤器和不锈钢过滤器两种，两种过滤器都可以使用。 维护：过滤器可以定期超声清洗；长时间不使用要把过滤器全放在有机溶剂里面，以防长菌 3、单向阀：单向阀在走低纯度试剂(尤其是未加溶剂过滤器的情况下)可能会引起单向阀堵塞，引起的结果是泵洗液不正常（压力不稳，流速不准或者干脆吸不上液），此时用扳手将单向阀取下，用甲醇或者丙酮超声就可以。 4、放空阀排气：在每次更换流动相的时候，都需要将放空阀打开，以3ml/min 的流速排气5分钟。（切记在排气的时候一定将相应泵的放空阀打开，否则高流速下压力会瞬间升高，对系统损害比较大；且泵不能空走，如果管路是空的话，需要用排气工具抽一下液在走泵） 5、泵后冲洗：在运行的时候一定要使用泵后冲洗功能，这可以大大延长朱塞杆和密封圈的使用寿命。S1050泵的柱后冲洗时自动的，每隔一段时间会自动运行几十秒钟，所以只需将泵后的进液管和出液管全部放在溶剂瓶里就可以。（清洗液：80%的蒸馏水+20%的异丙醇或甲醇，清洗液每隔3~5天更换一次） 6、7725i进样阀 7725i是6通道阀。阀的背面有数字标号：2号口为流动相进口（泵连接到阀），3号口为流动相出口（阀连接到色谱柱），1号口和4号口为定量环接口（默认连接的为20微升，可以更换），5口和6口为废液口。 进样注意事项： A、缓慢进样、快速扳阀。阀不要处于中间位置。 B、如果使用缓冲盐、当天使用后要使用含5%有机相的水溶液清洗进样阀 C、对于手动进样器，当使用缓冲溶液后，或者进浓度差异大的样品时，要用专用工具而不是用带针头的注射器冲洗进样口，同时扳动进样阀数次，每次数毫升。 D、安装时流通阀的5口和6口要与注射器在同一水平线上，以防止虹吸现象的发生，导致进样量的重复性变异。 E、进样量的多少要根据定量管（LOOP）体积决定。 当样品量少时：进样体积由注射器的进样体积决定，但最大进样体积要小于1/2 LOOP体积。 当样品量较多时：进样体积由定量管的体积决定，为保证样品完全把定量管的流动相置换干净，需注射大于2.5倍定量环的体积。 F、要使用专用的液相进样针进样，绝对不能使用气相进样针。 7、色谱柱 色谱柱标示： 如：Kromasil 250×4.6 5u 100A分别代表填料名称柱长内径填料大小填料比表面积 色谱柱基本常识： A、其他条件相同，柱子越长，保留时间越长。 B、其他条件相同，柱内径越小，柱压越高。

检测器高效液相色谱仪的维护

检测器高效液相色谱仪的维护 1．HPLC的日常操作条件：温度：10—30℃；相对湿度《80％；最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 2．泵的保养： 1)使用流动相尽量要清洁； 2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗； 3)流动相交换时要防止沉淀； 4)避免泵内堵塞或有气泡; 3．进样器的保养： 1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染； 4．柱的保养： 1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 2)当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 3)要注意流动相的脱气； 4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 5)进样样品要提纯； 6)严格控制进样量； 7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭； 5． UV)的保养： 1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。 2)样品池要保养。 高效液相色谱日常简易保养及维护 1、流动相的抽作要求： 高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤； 流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法） 2、吸滤头： 特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗； 清洗不成功则需要更换。 3、单向阀：

如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！ 4、泵头： 泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修（如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等） 5、过滤器： 当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。 6、排液阀： 此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。 7、手动进样器： 平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。 8、流通池： 在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗（可根据说明书进行操作或申请维修）。 9、工作站： 出现死机可重起计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障； 或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。 泵压不稳 1、泵头有气泡——流动相脱气/大流量冲洗泵/用注射器抽取流动动相 2、单向阀故障——清洗 若上述操作仍不能解决，可用异丙醇冲洗流动（无色谱柱冲洗，由手动进样器直接进检测器），流量为3-4ml/min,冲洗50分钟左右，然后重新安装色谱柱，更换流动相平衡，如此再不能解决泵压波动故障，可申请更换配件。色谱的保养：

仪器的维护与保养教学内容

实验室仪器管理、维护保养 一、仪器管理 1、实验室的仪器设备由具体负责人实行分室管理、开放使用制度。室内各类仪器设备均由各室负责人管理。仪器设备的使用登记、账目管理、报废等工作由实验室财产管理员负责。 2、实验室的大中型仪器的管理必须按要求建立技术档案，资料应完整保存，归档资料包括：订货申请、订货合同、装箱单、说明书、安装调试验收报告、仪器零配件、登记表和维护记录。每台仪器均需建立健全安全操作规程。 3、仪器设备的使用人员须先熟知设备的性能和操作规程，方可操作，新人员在使用仪器时需经过培训的人员陪同下操作。 4、定时进行仪器的维护、保养，掌握实验室设备的运行情况，发现仪器设备运行不良时应马上采取措施并及时报告、维修，并要及时登记维护、保养和维修情况，保证研究人员的科研工作顺利进行。 5 、发现仪器有故障者，有义务立即向仪器管理员或实验室领导报告，严禁擅自处理、拆卸、调整仪器主要部件。工作结束后应及时切断电源、水源，各种按钮回到原位，并做好清洁工作、锁好门窗。 6、下次使用者，在开机前，首先检查仪器清洁卫生，仪器是否有损坏，接通电源后，检查是否运转正常。发现问题及时报告该室管理员，并找上一次使用者问明情况，知情不报者追查当次使用者责任。 7、所有使用仪器的人员必须保持仪器清洁，不得使仪器接触强酸、强碱等腐蚀性物品，仪器的放置要远离水源、火源、气源等不安全源。各仪器要根据其保养、维护要求，进行及时或定期的干燥处理、充电、维护、校验等，确保仪器正常运转。 8 、特别是新来实验室的工作人员，在进入研究工作前，必须熟悉仪器的的基本操作。 9、对于仪器设备使用过程中发生的各种事故，实验室责任认定，并提出处理意见，重大事故报公司处理。

HPLC检测和维护大全

高效液相色谱检测和维护大全（本人总结） 至于今，我进行高效液相色谱检测分析进行了近2年，在近2年的色谱仪器分析工作中，我积累了大量的色谱仪器操作和维护的经验，对本人和后来的仪器操作工作者，可以说有一定的启示和借鉴作用，所以，我是毫无保留的奉献出我的这部分经验，以感谢光临我博客的朋友！一、色谱分析的准备工作： 在药物分析部门的工作中，对于液相色谱分析工作者而言，进行的药物分析的药物种类或品种时很多的，所以，我们在进行分析工作前，我们要对自己所要进行的药物品种和色谱柱进行统计，尽量做到专药专柱、专柱专用。这样，我们在进行药物分析和检测工作时，又不会造成色谱柱的交叉污染。 在做到药物分析用的色谱柱专药专柱用之后，可以明确知道该柱的流动相中缓冲液与有机溶剂的配比，快速进行流动相的配制（因为不同厂家和不同型号的色谱柱，即使分离分析同一品种的药物，其流动相的配比都是不尽相同的）。对于以后流动相的配比能做到有的放矢，也就是说，相对药物的保留时间和流动相的流速也就相对固定了下来。所以，在之后的相同药物的分析可就能顺手拿来做好了，不存在在以后的试验中还去摸索不同柱子的流动相的配比了。在以往的试验中，最常出现的情况

时，没有做到专柱专用，今天做这药物药调节流动相配比，明天又换根柱子，又是调节流动相配比一番，耗时又缺乏对这种药物分析时的保留时间的不可重现性。让非专业人员看了觉得不可理解。同时，对试验者本人来说，也可具有不同时间的试验比较，具有后续试验的参考意义。 二、分析前，对色谱柱的预处理和平衡过程重视。在每天的实验前，一近实验室，就立即要安排好今天该做的分析工作，连接好今天药物分析所用的专柱，打开色谱泵，用流动相中的相应有机溶剂的含10%有机溶剂的水溶液进行排气和冲洗色谱柱和管路，冲水30分钟左右，将色谱柱中的纯有机溶剂替换掉，然后再用流动相进行足够时间的平衡，大约1小时左右。此时，一般来说，色谱柱应该说是够平衡了。注意在色谱柱平衡半个小时时，打开检测器，在平衡近1小时时，打开色谱工作站，点击查看基线，看基线是否走平直。在基线走平直后，方可进行分析检测，才能保证检测结果的准确性和保留时间的重复性。 三、分析前的流动相脱气、色谱管路及泵内排气和每天必须要做的事情，否则，在实验过程中，就会造成（1）泵的流速不稳、有时候流速甚至相差甚远，（2）泵压来回波动很大，（3）检测器采集的图像基线很难稳定和走直，出现基线漂移和波动。（4）色谱峰面积不重现，最麻烦的是好好的色谱峰上突然出项和汽泡锯齿，影响峰面积的读取。 四、色谱分析过程中，一般是采用定量环进行手动进样或者是采用自动进样器进行进样，一般来说，能保证较好的进样量的重现性。所以在进行进样检测时，关键的步骤时溶液的配制，要做到对照品和待测样

高效液相色谱仪日常维护1100

高效液相色谱仪日常维护计划 目的：指导化验员正确的维护和保养高效液相色谱仪，提高仪器使用寿命，使仪器稳定的工作得到稳定可靠的数据。 一：流动相的制备要求： 高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；流动相 脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法 二：检测器的维护和保养 1．检测器是高效液相色谱仪器的数据收集部分，由很多的电子和光学元件组成。禁止拆卸更动仪器内部元件防止损坏或影响准确度。 2．仪器内部的流通池是流动相流过的元件，样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池，导致无法检测或检测结果不准，所以在使用了一段时间以后要先用水冲洗流通池和管路再换有机溶剂冲洗。 3．当仪器检测数据出现明显波动，基线噪音变大时要冲洗仪器管路冲洗后如果还是没有改善就应该检测氘灯能量，如果能量不足就因更换新的氘灯。 4．仪器在每次使用完了以后都要用水和一定浓度的有机溶剂冲洗管路，保证下次使用时管路和系统的清洁。 三：高压恒流泵的维护和保养 1．高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，

如此反复直到升高到所需流速。 2．特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换 3．在仪器使用完了以后，要及时清晰管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。 四：色谱柱的维护和保养 1．所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。 2．所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。并且在进样的样品都必须经过0.45um 薄膜针筒过滤后进样。 3．所使用到的最大流速为1.0ml/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。 4。在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色谱柱1小时以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色谱柱40分钟以上。 五：工作站的维护 出现死机可重启计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。 六：常见故障及日常维护 下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出了的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。