酒石酸法茶多酚含量测定报告

茶多酚的含量测定

实验组员：赵龙飞赵奇慧刘芳陈小丽

一、实验原理

茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，在碱性条件下易氧化变质。

酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比，络合物在540nm处有最佳吸收。因此可以用比色方法测定。

二、仪器与试剂

仪器：分光光度计、天平、1ml移液枪、100ml容量瓶*6、100ml量筒、100ml烧杯*3 10ml EP管

试剂：(1)FeSO4?7H2O 1.000g，含4个结晶水的酒石酸钾钠5.000g

(2) Na2HPO4?12H2O 6.02g ，NaH2PO4?2H2O 0.50g

(3)儿茶素标准品10mg

三、操作步骤

（1）酒石酸钾铁溶液：称取FeSO4?7H2O 0.100g，含4个结晶水的酒石酸钾钠0.500g，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至100mL。

（2）pH7.5的磷酸缓冲液：6.020g Na2HPO4?12H2O ，0.500g NaH2PO4?2H2O，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至100mL。

(3) 儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至10ml，浓度为1000μg/ml。分别稀释到200、400、600、800μg/ml，得5个浓度标准品溶液。

(4) 标准曲线：分别吸取1ml标准液，磷酸缓冲液3ml，酒石酸钾铁1ml混匀，3000转离心10min。吸取上清液3ml加入玻璃比色皿，用分光光度计测定540nm处的OD值三次求平均值，并绘制浓度-OD标准曲线。以蒸馏水代替标准品溶液加入同样的试剂作空白对照。

(5) 取提取物10mg，用蒸馏水定容至10ml。取1ml，按上述同样方法测定540nm处的OD值3次求平均值。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白对照。

四、计算

茶多酚含量 W=C/1000×100%

C ：所测吸光度带入标准曲线得到样品中茶多酚浓度μg/ml

1000：样品浓度μg/m l

五、实验结果

样品

吸光度

浓度含量（%）1 2 3 平均

有机溶剂

萃取法

0.45 0.449 0.45 0.449666667 402.6303833 40.26%

金属离子

沉淀法

0.449 0.449 0.449 0.449 402.07015 40.21%

打孔树脂

30%醇洗脱

0.525 0.526 0.525 0.525333333 466.2168667 46.62%

打孔树脂

50%醇洗脱

0.349 0.349 0.348 0.348666667 317.7550333 31.78%

打孔树脂

80%醇洗脱

0.111 0.111 0.111 0.111 118.03185 11.80%

六、实验分析

由实验结果看出，30%的乙醇提取大孔树脂法提取的茶多酚的含量是最高的，而其余的溶剂提取法、金属离子沉淀法，都相对较低。本实验数据不能代表各个提取分离方法的绝对优略，要视各组在实验过程中的实际操作是否规准确。

实验中存在以下问题：

1、标准品溶液浓度过低，吸光值存在负数，仪器不够精密，无法准确测出对应的OD

值。最后修改方案，浓度提高了20倍。

2、样品测定时，同样浓度，吸光度却高于标准品，也就是含量超过100%。经过各个

环节问题排除后，怀疑是标准品含量过低。最后重复实验时发现加入反应物会有很多不溶的褐色絮状物，经过离心后再测OD值，数据显示合理。