不同化学限定性培养基培养重组CHO细胞的比较

不同化学限定性培养基培养重组CHO细胞的比较

【摘要】同一实验条件下,比较了Hyclone公司和Gibco公司的化学成分限定性培养基，在单克隆抗体生产过程中,对Anti-EGFR- CHO细胞系的生长状况及蛋白增长率的影响。结果显示：两大公司的培养基各有优势。

【关键词】CHO细胞系；化学成分限定性培养基；生长；增长率。

动物细胞的体外培养是近些年来发展相当迅速的一门现代生物技术。目前大多数的动物细胞在进行体外培养时已采化学限定性培养基[1]，在细胞工程中用于生产疫苗、单克隆抗体和生物活性蛋白等生物制品是化学限定性培养基最重要同时也是最有发展前途的应用。用M345基因重组质粒转化中华地鼠卵巢细胞1.4 CO2培养箱2方法

2.1 细胞培养：按常规方法无血清悬浮复苏细胞到T25方瓶，细胞长成致密单层后离心、重悬分别应用不同的化学限定性无血清基础培养基传代培养（3代以上），待细胞至对数生长期后逐级扩增至250ml模拟反应器，当细胞密度4×106cells/ml，体积40ml。分别取相同数量细胞，按照细胞密度1×106cells/ml，体积40ml，离心、重悬接种250ml模拟反应器，每组3个重复对照，37℃、120rpm 振荡培养，每天取样计数，按规定流加，待细胞活率低于80%，收获细胞液。

2.2 培养方法

2.2.1 批次流加：按照 2.1细胞培养方式，一次性接种细胞至基础培养基CDM4和CDOpti-CHO，培养数天，每天取样计数，观察细胞变化情况，比较两种培养液之间的差别。

2.2.2 流加培养：按照 2.1细胞培养方式，一次性接种细胞至基础培养基CDM4和CDOpti-CHO，培养第2、4、6、8天分别开始流加10%CellBoost5或10%FeedC两种流加培养基，每天取样计数，观察细胞生长情况及蛋白表达量增长情况，比较培养液之间的差别。

2.3蛋白含量测定：分别收集的细胞培养液高速离心(15 000 r/ min)除细胞碎片, 利用Protein A 高效液相检测培养液中蛋白含量

2.3.1确定Protein A柱检测限：将纯蛋白样品稀释至终浓度为15 mg/L，上样量分别为0.10 ml、0.20 ml、0.30 ml、0.40 ml、0.50 ml，根据说明中介绍的方法进行检测，确定检测限。

2.3.2验证Protein A柱载量：将纯蛋白样品稀释至终浓度为1500 mg/L，上样量分别为0.10 ml、0.20 ml、0.30 ml、0.40 ml、0.50 ml，根据说明中介绍的方法进行检测，确定载量。