微生物取样方法
微生物取样方法
举例一：
一、空气采样及检验方法
1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制
2采样（空气沉降法）
2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周
空气质量标准：
生车间、熟车间、成品车间：低于100个
半成品库、成品库：低于10个
二、设备的采样与检验方法
根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法
1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）
取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）
将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法
2.1细菌总数的检验
将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算
表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2
2.2致病菌的检验
沙门氏菌，参照GB4789.4进行
金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行
4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，
5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2
一般区域：细菌总数≤100个∕cm2
三、人员手表面细菌污染情况的检验
1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
2. 检验方法：同工器具表面细菌总数检验方法。
3. 结果计算：每只手表面的细菌总数（cfu/只手）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数
四、消毒液药效的微生物学鉴定法
1采样对象：正常使用的消毒液，和已知配制好备用的消毒液
2采样及检验方法
在无菌条件下，用无菌吸管吸取1毫升样液，加入9毫升稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠，对洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）土温80和0.3%卵磷脂；对醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入（W/V）土温80，以中和被检样液中的残效作用，
将注入了样液的稀释液充分摇匀，取1毫升注入平皿，随之倒入普通营养琼脂，待琼脂凝固后，翻转平皿，将平皿于37℃条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。
3结果分析
平板上有菌生长，表明被检样液中有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒，若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不宜在用于消毒。
该公式是一个经验公式.它的理论模式依据是:100CM2的面积上10MIN降落的菌落数,
等于1升空气中所含的细菌总数.系数50000基于上述假说和单位换算而来.
细菌总数(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT
5/10T:实际放置了5MIN;
100/A:A单一培养皿面积;
1000:1M3=1000L啊,换算成m3
N:平均菌落数
举例二：
一、物体表面采样及检查方法
采样面积
被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
采样方法
用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
培养（略）
二、空气及与食品接触面微生物检验方法、检验标准
1、目的：
检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。
2、参照标准：
中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌
检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。
3、采样与检测方法：
3.1空气的采样与测试方法
3.1.1样品采集：
(1)取样频率：
a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。
d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。
e)正常生产状态的采样，每周一次。
（2）采样方法
在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2菌落培养：
（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
（3）菌落计算：
a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。
b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：
3.2.1样品采集：
(1)取样频率：
a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。
d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。
e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。
f)正常生产状态的擦拭，每周一次。
（2）采样方法：
a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2 的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
（3）采样注意事项：
擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间
3.2.2 细菌?大肠菌群的检测培养:
样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。
3.2.2.1 细菌总数：
（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。
（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
（3）结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
3.2.2.2大肠菌群：
（1）平板法:
a) 以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基，约3-5 ml。
b) 待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养24h后计数。
c) 结果计算：以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。
d) 结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
（2）试管法:
a) 以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。
b) 置BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。
c) 结果报告：按BGLB肉汤管产气管数，查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。
3.2.3 金黄色葡萄球菌检测
（1）定性检测
a) 取1ml 稀释液注入灭菌的平皿内，倾注15-20ml的B-P培养基，（或是吸取0.1稀释液，用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板），放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。
b) 从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。
c) 结果报告：B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性，即报告手（工器具）上有金黄色葡萄球菌存在。
（2）定量检测
a) 以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10％氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。
b) 置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板，置36℃±1℃培养45～48小时。
c) 从B-P琼脂平板上，挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基，36℃±1℃培养20～24小时。
d) 取肉汤培养物做血浆凝固酶试验，记录试验结果。
e) 报告结果：根据凝固酶试验结果，查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。
3.3工厂环境中病原体的检测计划与方法
检测计划：为了保证食品安全，工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估，检测项目包括李斯特菌，沙门氏菌等病原体微生物，化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测，其中包括地面、下水道、排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架，冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时，应该对环境中的相似点加大检测频率；在把所有的预定点检测完后，应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估，在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点，达到持续改进的目的。
检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。
3.3.1 环境李斯特菌的检测方法（3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片）
3.3.1.1 用涂抹棒，海绵或者其他采样设备收集环境样本。
3.3.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水，将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟，将样品置于室温（20-30℃）1小时，最久不超过1.5小时，以修复损伤的李斯特菌。
3.3.1.3 将测试片放在平坦处，掀起上层膜。
3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央，将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。
3.3.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上，不要压，扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟，以使胶体凝固。
3.3.1.6 将测试片透明面朝上，可叠放至十片，在37℃±1℃培养26-30小时，可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读，不要记数圆形轮廓上的菌落，因为他们不受选择性培养基的影响。
3.3.1.7 对于定性检测，根据紫红色菌落是否存在，结果记为检出或者未检出。
3.3.2 环境中沙门氏菌的检测方法
3.3.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方
3.3.2.2 操作步骤
3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行，用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积，然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。
3.3.2.2.2将样品带回实验室，每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测，若有阳性结果出现，应逐步对所混合的每个点分别检测
表面微生物测试标准操作规程
表面微生物测试标准操作规程（接触平皿法） 1．目的 建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2．依据《药品生产质量管理规范》（2010年修订本） 3．范围 本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。 4．责任 质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行 5．内容 洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置： 空调系统验证的结果 房间的大小和布局 房间的用途 与产品的距离 人流物流方向 如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定： 1.洁净区（室）的大小； 2.设备、管路等的复杂程度； 3.生产活动的重要性； 4.易受污染的部位等。 应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介 质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。 表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。 为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。 洁净区微生物测试频率和限度 日常监控一月一次 接触碟（55mm）50cfu/25cm2 ，警戒40cfu/25cm2 ，纠偏 45cfu/25cm2 。 洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）。 洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。
微生物采样方案
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微生物限量采样方案 采样方案分为二级和三级方案，二级采样方案设有n、c、m值，三级采样方案设有n、c、m和M值。 n：同一批次产品应采集的样品件数 c：最大可允许超出m值的样品数 m：微生物指标可接受水平的限量值 M：微生物指标的最高安全限量值 例：n=5,c=2,m=100cfu/g,M=1000cfu/g,即从一批产品中采集5个样品，若5个样品的检测结果均小于或等于m值（≤100cfu/g），则这种情况是允许的，若≤2个样品的结果（X）位于m值和M值之间（100cfu/g≤X≤1000cfu/g），则这种情况也是允许的；若有3个及以上样品的检验结果位于m和M之间，则这种情况是不允许的；若有任一样品的检验结果大于M（>1000cfu/g），则这种情况也是不允许的。 0/25g a，标准限量，就是每25g样品不得检出。a通常为5次。 挥发性盐基氮：代表动物蛋白受微生物的作用程度，是动物蛋白新鲜度的代表。 MPN：基于泊松分布的一种间接计数方法，most probable number GB 7718,直接向消费者提供的预包装食品标签，标示应包括食品名称、配料表、净含量和规格。生产者和经销商的名称、地址和联系方式、生产日期和保质期、贮存条件、食品生产许可证编号、产品标准代号及其他需要标识的内容。 ADI：每日允许摄入量 acceptable daily intake。 净含量字体高度≥4mm。 下列预包装食品豁免强制标示营养标签 1、生鲜食品如包装的生肉、生鱼、生蔬菜和水果、禽蛋等 2、乙醇含量≥%的饮料酒类 3、包装总面积≤100cm3或最大表面面积≤20cm3的食品 4、现制现售的食品 5、包装的饮用水 6、每日食用量≤10g或10mL的预包装食品 7、其他法律法规标准规定可以不标识营养标签的预包装食品
微生物控制验证计划
受控状态： 北京港龙华佳食品有限公司 生产车间微生物验证 （含涂抹实验、食品接触面、车间环境） （依据QS市场准入有关规定编制） 文件编号：HJ-HACCP-02 编制人员：我 审核： 批准： 2013年10月10日发布2013年10月30日实施 北京港龙华佳食品有限公司
生产车间微生物验证 1范围 本标准规定了公司生产过程中微生物控制要求及验证计划。 本标准适用于公司食品生产过程中对微生物控制的验证活动。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准条款，凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然后，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本均适用于本标准。 GB5749 生活饮用水卫生标准 GB14881 食品企业通用技术规范 GB15980 一次性使用医疗用品卫生标准 GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 GB4789.3 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数 卫生标准操作程序（SSOP） 3职责 品管部对车间卫生状况进行监控，定期开展微生物验证，并根据检验结果对车间卫生进行管控，必要时委托化验室抽样检测。 4术语和定义 食品接触面：指生产过程中与所生产的食品直接接触的设备、工具器具、人、水、空气、包材等；或直接接触的门把手、电源开关等。 5验证计划 5.1工厂应按照GB14881等相关国家规定，采取适宜的措施控制食品生产经营过程中微生物。 5.2验证内容包括食品生产经营过程中微生物控制的各个环节（如原材料、人员、生产环境等）及采取的各种措施（如清洗、消毒措施、提高生产车间洁净度要求等） 5.3微生物控制标准应符合食品安全国家标准要求，具体见表一 5.4可通过以下环节的检测进行微生物控制效果验证 5.4.1生产用水 1）采样时间：生产过程中
手、设备表面微生物取样方法
手、设备表面微生物取样方法 一、携带物品： 酒精灯、75%酒精棉球若干、不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水、一次性手套。 备注：不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水须经高温蒸汽灭菌；10ml生理盐水根据实际所需准备多支；一次性手套需经辐照灭菌； 二、操作方法： 1、手取样 点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹车间人员手正背面，反复两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。 2、设备表面取样 点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹设备平滑表面（面积自己预先估计一个大概数值，25、50或100cm2等），反复涂抹两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。 三、细菌及大肠菌群的培养（具体操作时以GB4789.2-2010和GB4789.3-2003为准） 样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。配成1：10样液。根据污染情况，进行十倍递增稀释，吸取1ml 的1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液，以此类推。 细菌总数： 1、以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，及时将冷却至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾注平皿，每皿约15-20ml，转动平皿使其充分混合均匀。 2、待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。 3、结果报告：报告每25、50或100cm2数食品接触面或每只手的菌落数。 大肠菌群： 1、以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每个稀释度接种三管。 2、将乳糖胆盐发酵管置于36℃±1℃培养24±2h。所有乳糖胆盐发酵管都不，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，根据标准做证实实验。 3、结果报告：按乳糖胆盐发酵管产气管数，查MPN表报告每25、50或100cm2食品接触面或每只手的大肠菌群数值。
微生物限度取样标准操作规程
微生物限度取样标准操作规程 1目的： 建立微生物限度取样标准操作程序。 2范围： 适用于微生物限度取样 3职责： QA对本SOP的实施负责。 4程序： 4.1 取样前的准备工作 接到检验申请单后，做好取样准备。 4.1.1用洁净、干燥已消毒的不锈钢（探子、镊子和玻璃管）作取样工具。 4.1.2洁净、干燥已消毒的具塞三角瓶、具塞广口瓶、无菌塑料袋作盛样工具。 4.2 取样原则及数量 4.2.1 按批号、随机抽样，以一次取样为准，不重复取样。 4.2.2 抽取样品时，凡发现有异常或可疑的样品，应先抽有疑问的样品，但因机械操作明显破裂的包装不得作为样品。 4.2.3凡能从药品、瓶口（外盖）内侧及瓶口周围，外观看出长螨、发霉、虫蛀以及变质的药品，可直接判为不合格品，无需再抽样检查。 4.2.4抽样量一般应为检验用量的3倍量。 4.3 取样 4.3.1 用酒精消毒棉球擦拭手和手指甲缝。 4.3.2 固体样品：用不锈钢探子在包装的不同部位取样，盛入无菌塑料袋或无菌玻 璃瓶内，封口，并贴好标签。 4.3.3液体样品：用玻璃管在容器的上、中、下三个部位取样，样品置无菌玻璃瓶内，瓶子内液面与瓶塞留一段空隙，封口，并贴好标签。 4.3.4 标签上应标明品名，批号，取样日期，地点，取样人签名。 4.3.5 封存好已打开的样包件，填写取样证，并贴在被取物料的包装上。 4.3.6 封口后，在检验前不得开启，并保证在运送过程中不受污染。
4.3.7 将样品送QC室，办理样品交接手续，填写样品交接记录。 4.4 取样器具的清洗、干燥、灭菌、贮存 4.4.1 清洗、干燥程序同原辅料取样标准工作程序中的内容。 4.4.2 干燥后，置180℃干烤2小时，保存于专用柜中，并注明有效期。
公共用品微生物的采样方法
公共用品微生物的采样方法： 涂抹是公共用品微生物样品采集的常用方法之一 样品包括（六类不同公共用品的采样）：茶具、餐具；毛巾和枕巾、枕套；床单和被罩 等卧具；脸盆、脚盆和浴盆；拖鞋、理发用具。 采样所需设备：灭菌试管（内装10ml生理盐水）、100ml无菌烧瓶（内装50ml生理盐 水）、250ml无菌烧瓶（内装125ml生理盐水）、无菌棉拭子、灭菌剪刀、灭菌5cm X 5cm规格板、酒精灯、酒精棉球、工作服/白大衣、口罩、帽子、记号笔、灭菌镊子、采样记录单 采集样品前的准备： 1 穿好白大衣、戴好帽子及口罩 2 点燃酒精灯 3手消毒 一茶（餐）具微生物的采样方法 1 打开试管盖，用酒精灯烧灼试管口 2 随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具或餐具，用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具或餐具与口唇接触处，1-1.5cm高度的内外缘各涂抹一周 3 用灭菌剪刀，剪去棉签与手接触部分，将棉拭子放入10ml生理盐水中 4 用酒精灯烧灼试管口，盖好试管盖 5 试管上标明样品编号 二毛巾、枕巾（套）微生物的采样方法 1 打开试管盖，用酒精灯烧灼试管口 2 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、枕巾（套），用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾（套）对折后两面的中央，各25cm2面积上，在灭菌规格板里用力均匀涂抹5次 3 用灭菌剪刀，剪去棉签与手接触部分，将棉拭子放入10ml生理盐水中 4 用酒精灯烧灼试管口，盖好试管盖 5 试管上标明样品编号 三床单和被罩等卧具微生物的采样方法 1 打开试管盖，用酒精灯烧灼试管口 2 随机抽取清洗消毒后准备使用的床单和被罩等用品，用灭菌生理盐水湿润棉拭子，分别在床单或被罩两端的中间，25cm2面积处以及床单或被罩中央部位25cm2面积上，在灭菌规格板里用力均匀涂抹5次 3 用灭菌剪刀，剪去棉签与手接触部分，将棉拭子放入10ml生理盐水中 4 用酒精灯烧灼试管口，盖好试管盖
版药典表面微生物检测操作规程
1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。 3.责任：表面微生物检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2表面微生物： 4.1.3表面微生物菌落数: 规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。 4.2测试原理: 本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。 接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养
72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。 4.3.2采样点选择： 洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置： 空调系统验证的结果 房间的用途 与产品的距离 人流物流方向 如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。 注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定： 1.洁净区（室）的大小； 2.设备、管路等的复杂程度； 3.生产活动的重要性； 4.易受污染的部位等。 应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。 表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。 4.3.3采样方法： 洁净区表面微生物测试方法。 4.3.3.1接触平皿法： 取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与设备直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面 取样后，需要立即用75%酒精擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。 收好的营养琼脂接触碟在32℃培养72小时。 4.3.3.2棉签擦拭法：
常见微生物标本的采集
常见微生物标本的采集、处理与检测 标本采集的基本原则：尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。 1.血液标本正常人的血液是无菌的。当细菌侵入时可引起严重的菌血症或败血症。 一般情况下在患者发热初期或发热高峰时采集；持续性菌血症可随时采集；间歇性菌血症，应预测其体温上升期进行采血。一般在使用抗生素前采集2~3次；多部位采集，如两侧肘静脉或动、静脉同时采取；对于已使用抗生素而无法停止的患者，也应在下次用药前采取。在感染局部的附近血管中采血，可提高阳性率。采血量成人一般5~10ml，婴幼儿1~2ml。 采集的血液标本注入培养瓶中先进行增菌培养，培养基和血液标本量的比例应>10：1，将血液中的各类杀（抑）菌物质充分稀释。需氧菌常用培养基有胰酪蛋白大豆胨肉汤和葡萄糖酚红肉汤等，常加入对氨基苯甲酸（PABA）50μg/ml中和磺胺类，青霉素酶2单位/ml破坏青霉素类，硫酸镁中和链霉素、四环素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸钠（sodium polyanethol sulfonate, SPS）可抑制血清中的抗菌物质，并对氨基糖苷类和多肽类抗生素有灭活效果。并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生长因子。 培养瓶每天观察一次。如发现①培养瓶内液体浑浊；②血球层上面出现颗粒状的生长物，并且有自下而上的溶血；③有明显的凝块；④液体表面有菌膜，培养液清晰或浑浊等，表明有细菌生长。直接进行涂片染色初步报告。同时分别接种血平板、巧克力（色）平板，普通培养和5%CO2 35℃培养。也可直接进行体外药敏试验。无细菌生长迹象的培养瓶孵育至第7d，接种血平板、巧克力（色）平板，分别进行普通培养和5%CO2环境35℃孵育24h。为了提高检出的速度，在培养的第2~3d时应移种一次。 有厌氧菌感染时，同时注入需氧瓶和厌氧瓶，厌氧培养基通常用硫乙醇酸盐培养基、牛心脑浸液肉汤等；培养液中有刃天青，无氧时无色，有氧时呈红色。需氧瓶和厌氧瓶同时浑浊，或需氧瓶无生长而厌氧瓶液体浑浊，提示厌氧菌生长。分别接种血平板和厌氧血平板，置需氧和厌氧环境中，如果都只生长1种细菌，则为兼性厌氧菌；如果仅在厌氧环境中生长，可以直接报告“有厌氧菌检出”。 若长期应用抗细胞壁类抗生素，应考虑细菌L型存在，将血液接种高渗培养基中，分别进行需氧、厌氧和5%CO2环境培养。每周移种2~3次于高渗固体培养基上，观察有无细菌L型菌落生长。 2.呼吸道标本 正常上呼吸道有正常菌群。下呼吸道正常情况下无细菌或仅有少量细菌侵入
环境监测微生物知识培训试题有答案
环境监测微生物知识培训试题 一、填空题（共20空，每空3分） 1.环境监测微生物测试主要包括的项目有沉降菌、浮游菌、表面微生物、人员微生物。 其中沉降菌测试的时间一般为4h。 2.对于洁净区表面微生物取样,对于规则表面通常使用RODAC双碟进行测试,对于不规 则表面一般使用擦拭取样法。 3.静态状态下进行的环境监测，除监测操作人员（不得超过2人），无其他操作人员 活动。 4.酵母菌和霉菌的监测为1年4次，一般在1、4、7、10月采用沙堡氏培养基加测。 5.所用的每一批号的培养基，应选取3只进行阴性对照，以检验此批号培养基无菌是 否良好。 6.应在A级关键操作的同时，对A级背景区域进行微生物项目的监测。 7.807车间的N1070/06房间及809车间的T128、T149、T207、T239房间，如某一品 种在该区域生产时需要进行A级操作，则该房间按相连B级频率测试；如该房间没有A级操作过程，则按不相连B级频率测试。 8.无菌双碟在洁净区使用时，应在双碟表面标明测试区域、测试位点、测试日期、产 品批号（限有产品的A级区域），避免混淆。用于写标识的笔应为不易擦除的无尘记号笔。 9.沉降菌测试时，在准备好的双碟底部写好编号后放置在各取样点，将培养皿大盖全 部打开，并扣在不产尘的灭菌纸或PE膜上。 10.沉降菌测试过程中，如双碟被不慎触碰，A级双碟继续监测；其他级别的双碟结束 测试并重新放置双碟继续监测，结束后结果按累加计数。 11.浮游菌测试测试位置一般距地面左右，A级区域仪器放在工作台面上。 二、问答题（共2题，每题20分） 1.简述培养基双碟递入递出流程。 1.培养基由车间物流通道进入。 2.在D级递物柜间黄线外去掉纸箱或转运筐。 3.打开物流递物柜房间递物柜紫外灯，空照30分钟后，递入培养基双碟。 4.用紫外灯照射60分钟后方可递入C级区。5操作人员在C级区对双碟进行表面清洁，去掉最外层塑料袋包装，递入B级区递物柜内，用紫外灯照射60分钟后递入B级区存放。
微生物检验标本的正确采集及注意事项
微生物检验标本的正确采集及注意事项 正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。据相关统计：微生物标本的检测误差来源：80%来源于分析前20%来源于分析中和分析后其它检验样本的检测误差来源：45%分析前10%分析中（仪器））45%分析后.检验标本采集质量控制的重要性,分析前的误差来源所占比例的这个数据是惊人的，在我们的大型医院都存在这个问题，而在我们医院应该不会低于这个数据。 可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。为此应正确采集各种细菌学标本。 一、血液标本的采集 1、采集方法 （1）75%酒精清洁局部皮肤。 （2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm （直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。 （3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。 （4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。 2、注意事项 （1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。 （2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，应在抗菌药物浓度最低时采集也即在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。 （3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。 （4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。 （5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。 （6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。 （7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。 （8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。 二、呼吸道 1、痰标本 （1）采集方法 ①清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中或无菌管中送检。 ②痰量极少者可用45℃ 3%-10%的氯化钠溶液约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。
微生物无菌取样方法 (2)
微生物无菌取样方法 在讨论无菌取样的原因与采集方法之前,必须要理解“无菌的”的这一术语,“无菌”一般用于取样中,意味着取样过程中,避免操作引起污染。一个无菌样品的采集,应该通过这样一种方式,即:在收集过程中,本身应避免污染,然后放入消毒容器中。 一、包装无菌取样的工具: 拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具就是至关重要的的。除非使用合适的采集工具,否则样品的完整性会被怀疑,甚至样品毫无意义。为了避免没有合适的取样工具,建议建立一个无菌取样的分析清单,来收集取样工具。如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识,像样品号、取样日期、取样人等。这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来,因此不用预先标明。 人员的工具设施,像工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。 二、采样前准备 1、干冰或冰袋:如果使样品在贮运过程中保持冷却,一些种类的制冷剂就是必需的。检查观瞧 干冰袋子就是否有接触,如果泄漏可能污染样品,您也可以用湿冰,湿冰可以由工厂提供,然而取样前必须清楚这一点,如果想保持样品冷冻,干冰应在检验前获得。 2、灭菌容器及器具:无菌采样袋,袋子必须购买灭菌的,使用时只需撕掉封头,用提供的地方法 张开袋子,将样品放入,然后将袋子顶端卷起,并封口;必要时,取样用镊子,剪子等要灭菌处理。 ３、无菌手套:灭菌手套在采样中并非必须启用,如果一个产品在样品收集过程中必须被接触,那么最好让工人来做(加工处理产品的工人),将样品放入收集容器中,既然工人在生产过程中处理接触产品,那么我们就不能认为她们对产品又有附加的污染。当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上,手套的大小必须适合工作的需要。 4、75％酒精棉球以及75%酒精喷壶,一次性帽子,口罩以及白大褂。 当采集无菌样品时,一条最重要的规则就是:千万别污染样品。 三、采样 抽样必须遵循无菌操作程序,抽样工具如整套不锈钢勺子、镊子、剪刀等应当高压灭菌,防止一切可能的外来污染。容器必需清洁、干燥、防漏、广口、灭菌,大小适合盛放检样。抽样全过程中,应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量与生长能力发生变化。确定检验批,应注意产品的均质性与来源,确保检样的代表性。常见的抽样方法有: 1.直接食用的小包装食品: 尽可能取原包装,直到检验前不要开封,以防污染。 2.桶装或大容器包装的液体食品:
表面微生物检测SOP
一. 目的： 本规程规定了COL洁净区（D级）、ME洁净区（D级）、万古霉素洁净区（C级）、菌种（A级、C级、D级）、QC（A级、C级、D级）、取样车（C级）等（包括五指手套和设备?设施等）表面微生物的检测。 二. 检测依据： 中国GMP 、日本药局参考信息、ISO14644、EU-GMP 三. 术语： 1.静态atrest 洁净设施建造完成，生产设备就位，并按客户与供应商议定的条件运行，但无人员在场的状态。 2.动态operational 洁净设施按规定方式运行，规定数量的人员按议定方式工作的状态。 四. 测试方法 1. 表面微生物测试用培养基： （1）沙氏葡萄糖琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）： 按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为5.6±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。 （2）大豆酪蛋白消化物琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）： 按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为7.3±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。 2 培养基平皿的制备 将需要灭菌的培养皿置于121±1℃湿热灭菌15分钟，将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,培养基的注入量不能太多也不能太少,要尽量注满整个培养基。待琼脂在室温下凝固后，在双碟上写上所检测位置的编号,将大豆酪蛋白
微生物无菌取样方法
微生物无菌取样方法文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）
在讨论无菌取样的原因和采集方法之前，必须要理解“无菌的”的这一术语，“无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中，避免操作引起污染。一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。一、包装无菌取样的工具： 拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具是至关重要的的。除非使用合适的采集工具，否则样品的完整性会被怀疑，甚至样品毫无意义。为了避免没有合适的取样工具，建议建立一个无菌取样的分析清单，来收集取样工具。如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识，像样品号、取样日期、取样人等。这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来，因此不用预先标明。 人员的工具设施，像工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。 二、采样前准备 1. 干冰或冰袋：如果使样品在贮运过程中保持冷却，一些种类的制冷剂是必需的。 检查观看干冰袋子是否有接触，如果泄漏可能污染样品，你也可以用湿冰，湿冰可以由工厂提供，然而取样前必须清楚这一点，如果想保持样品冷冻，干冰应在检验前获得。
2. 灭菌容器及器具：无菌采样袋，袋子必须购买灭菌的，使用时只需撕掉封头，用 提供的地方法张开袋子，将样品放入，然后将袋子顶端卷起，并封口；必要时，取样用镊子，剪子等要灭菌处理。 3. 无菌手套：灭菌手套在采样中并非必须启用，如果一个产品在样品收集过程中必 须被接触，那么最好让工人来做（加工处理产品的工人），将样品放入收集容器中，既然工人在生产过程中处理接触产品，那么我们就不能认为他们对产品又有附加的污染。当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上，手套的大小必须适合工作的需要。 4. 75%酒精棉球以及75%酒精喷壶，一次性帽子，口罩以及白大褂。 当采集无菌样品时，一条最重要的规则是：千万别污染样品。 三、采样 抽样必须遵循无菌操作程序，抽样工具如整套不锈钢勺子、镊子、剪刀等应当高压灭菌，防止一切可能的外来污染。容器必需清洁、干燥、防漏、广口、灭菌，大小适合盛放检样。抽样全过程中，应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量和生长能力发生变化。确定检验批，应注意产品的均质性和来源，确保检样的代表性。常见的抽样方法有： 1．直接食用的小包装食品： 尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。 2．桶装或大容器包装的液体食品： （1）．抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；
微生物采样方案
微生物限量采样方案 采样方案分为二级和三级方案，二级采样方案设有n、c、m值，三级采样方案设有n、c、m和M值。 n：同一批次产品应采集的样品件数 c：最大可允许超出m值的样品数 m：微生物指标可接受水平的限量值 M：微生物指标的最高安全限量值 例：n=5,c=2,m=100cfu/g,M=1000cfu/g,即从一批产品中采集5个样品，若5个样品的检测结果均小于或等于m值（≤100cfu/g），则这种情况是允许的，若≤2个样品的结果（X）位于m值和M值之间（100cfu/g≤X≤1000cfu/g），则这种情况也是允许的；若有3个及以上样品的检验结果位于m和M之间，则这种情况是不允许的；若有任一样品的检验结果大于M（>1000cfu/g），则这种情况也是不允许的。 0/25g a，标准限量，就是每25g样品不得检出。a通常为5次。 挥发性盐基氮：代表动物蛋白受微生物的作用程度，是动物蛋白新鲜度的代表。 MPN：基于泊松分布的一种间接计数方法，most probable number GB 7718,直接向消费者提供的预包装食品标签，标示应包括食品名称、配料表、净含量和规格。生产者和经销商的名称、地址和联系方式、生产日期和保质期、贮存条件、食品生产许可证编号、产品标准代号及其他需要标识的内容。 ADI：每日允许摄入量 acceptable daily intake。 净含量字体高度≥4mm。 下列预包装食品豁免强制标示营养标签 1、生鲜食品如包装的生肉、生鱼、生蔬菜和水果、禽蛋等 2、乙醇含量≥0.5%的饮料酒类 3、包装总面积≤100cm3或最大表面面积≤20cm3的食品 4、现制现售的食品 5、包装的饮用水
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求 样品取样的要求 1）在取样之前应确认货、证是否相符。2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。4）对采集的样品一般要求随机取样。若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。 食品微生物学的取样点
食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。另外还可以配合生产加工，在生产前后或生产过程中对环境样品（如地面、墙壁、天花板以及空气等）取样进行检验，以检测加工环境的卫生状况。库存样品的取样检验可以测定产品在保质期内微生物的变化情况，同时也可以间接对产品的保质期是否合理进行验证。零售商店或批发市场的样品的检测结果，能够反映产品在流通过程中微生物的变化情况，能够对改进产品的加工工艺起到反馈作用。进口或出口样品通常是按照进出口商所签订的合同进行取样和检测的。但要特别注意的事，进出口食品的微生物指标除满足进出口合同或信用证条款的要求外，还必须符合进口国的相关法律规定，如世界上很多国家禁止含有致病菌的食品进口。不同样品的取样方法（1）包装食品①直接食用的小包装食品：尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。②桶装或大容器包装的液体食品：取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；取样时应将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的四分之三，以便于检验前将样品摇匀；取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0℃~4℃。③桶装或大容器包装的
环境微生物检测——采样方法 剧本
《环境微生物检测——采样方法》场景剧本题目：环境微生物检测——采样方法 主题曲、插曲待定 影片主要角色： 男1号梁总，25岁，业务主管（西装革履） 男或女2号小李，20岁，采样组组长（休闲） 女3号小黄，20岁，前台靓女（时尚的靓女） 男3号** 客户，25岁，（带领的衣服）（演成搞笑的土豪人物） 男或女4号：小王，19岁，某学校的顶岗实习生 第一场： 场景：公司前台（汇标公司的前台，甲在埋头做报表，乙在打电话和客户沟通，前台靓女在接水） 时间：上午 人物：前台靓女、客户，前台靓女以及同事两三个。 从门外来了一个大约25岁男性在张望。前台靓女赶紧走出来打开门。 前台靓女：您好。 客户：这里是汇标检测公司吗？ 前台靓女：是啊，有什么可以帮到您？ 客户：我是来自大中国建筑集团有限公司的××。最近我们一个大楼要竣工验收，需要对水质进行检测，你们能做吗？我们不差钱。 前台靓女指引客户坐下，倒一杯水。 前台靓女：这些业务我们做过很多。我们是第三方检测公司，有对该项目进行检测的资质，严格按照国家标准做的。 客户：对水质都监测什么呀？ 前台靓女：《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》GB50242-2002中明文规定：
“4.2.3 生活给水系统管道在交付使用前必须冲洗和消毒，并经有关部门取样检验，符合国家《生活饮用水标准检验方法》方可使用。 生活饮用水标准检验方法GB/T5750 – 2006，具体包括13个分项。包括水样采集和保存、感官性状和物理指标、有机物指标、消毒副产品指标、金属指标和微生物指标等等。 对建筑工程竣工验收水质检测，我们一般取pH、色度、浑浊度、臭味、肉眼可见物、总游离氯、耗氧量、菌落总数、大肠菌群等指标。 客户：听起来很专业，好！我信赖你们公司。 前台靓女：那麻烦您去我们主管办公室对签订合同有关事宜进行协商。 第二场： 场景：办公室 时间：某上午 人物：业务主管梁总、采样组组长小李 梁总：小李，这里刚接和大中国建筑集团有限公司签了一个合同。这可是一个大客户，你们要认真对待。你赶紧安排人过去采样吧。 小李：好的。我会尽快安排人过去采样。您放心吧。 第三场： 场景：公司走廊 时间：某上午 人物：采样组组长小李，实习生小王 小李：小王，我们明天要去广州海珠区琶洲那边对一个大楼的自来水进行采样，你准备一下。 小王：好的。我会马上去做。 第四场： 场景：实验室 时间：任意 人物：小李
2015版药典表面微生物检测操作规程
题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程 编码：颁发部门：质量部 起草：日期：2015年月日修订日期：年月日 审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日 批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版 分发部门：质量部、中心化验室 1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。 3.责任：表面微生物检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2表面微生物： 4.1.3表面微生物菌落数: 规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。 4.2测试原理: 本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。 接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养
临床微生物标本和医院环境卫生学监测标本采集培训试题
临床微生物标本和医院环境卫生学监测标本采集培训试题一填空（15分，每空格1分） 1、采集血培养要从不同的部位获得＿＿套血培养，一套血培养包括一个＿＿＿＿ ＿和＿＿＿＿＿，“双侧双套”是指＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 2、从静脉取血不宜从静脉导管或静脉留置口取血，除非怀疑＿＿＿＿＿；若从导 管取血，必需同时从＿＿取血。 3、尿液标本尽量采集晨起第一次尿，且应在膀胱内停留＿＿小时以上，所以夜间 最好＿饮水。尿液培养标本宜立即送检，＿小时内接种。 4、抽血培养时的皮肤消毒程序：首先＿＿＿＿擦拭静脉穿刺部位30秒，再用＿＿ 30秒或＿＿60秒；最后用＿＿脱碘并待干。 5、婴幼儿采血量不能超过全血量的（）不能少于（）ML. 6、空气细菌培养（自然沉降法） （1）、采样时间:选择后与进行之前采样。 (2)、采样高度:与地面垂直高度米（洁净手术室等除外）。 (3)、布点方法（洁净手术室除外） （3、1）、室内面积，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点。 （3、2）、室内面积，设两条对角线，于东、西、南、北、中取五点，其中东、西、南、北距墙均1米。 （4）、采样方法及培养时间:用直径普通琼脂平皿放置各采样点，打开后盖面朝＿＿斜扣到底盘，在采样点准确暴露规定时间后盖上平皿盖，及时送检。 （5）、要求标准: （5、1）门诊手术室、美容科手术室、宫腔镜室、介入科、新生儿室、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数。 （5、2）儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、注射室、治疗室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析室、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等，空气中的细菌菌落总数。 7、物体表面细菌培养 （7、1）、采样时间：在后或有关时进行采样。
微生物取样方法
微生物取样方法 举例一： 一、空气采样及检验方法 1培养基：普通营养琼脂平板，按中条配制 2采样（空气沉降法） 布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。 采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。 采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 3培养：于37℃培养24小时。 4检测频率：每周 空气质量标准： 生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个 二、设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。 1采样方法 涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面） 取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面） 将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 2检验方法 细菌总数的检验 将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。 结果计算 表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 致病菌的检验 沙门氏菌，参照进行 金黄色葡球菌，参照进行 4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2， 5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2 三、人员手表面细菌污染情况的检验 1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。 2. 检验方法：同工器具表面细菌总数检验方法。 3. 结果计算：每只手表面的细菌总数（cfu/只手）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数 四、消毒液药效的微生物学鉴定法
病原微生物标本采集、运送
病原微生物检验标本采集、运送操作规程正确的标本采集，运送，保存和处理对于微生物检验工作质量至关重要，为了准确检出病原菌，避免漏检与误诊，临床医护人员和实验室工作人员应掌握微生物标本的选择，采集，运送，保存及处理的一般原则。 一、标本采集的一般原则 1.早期采集 采集时间最好在病程早期，急性期，且必须在使用抗菌药物之前采集，确保病原菌的检出。 2.无菌操作 采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近或皮肤黏膜正常菌群的污染，使病原菌与正常菌群混淆，造成临床误诊。采集的标本应存放在无菌容器内，容器不能使用消毒剂处理，标本中也不能添加防腐剂，以免降低病原菌的检出。3.适量的标本 标本量过少可能导致假阴性结果。 4.适当的采集方法 对于厌氧菌，需氧菌或兼性厌氧菌的采集方法是不同的，用于厌氧菌培养的标本应尽量用注射器采集抽取物，室温保存，不能冷藏和冷冻。 5.盛放标本的容器 采集标本应存放在无菌，防漏，应带有螺旋盖的容器内。 二、标本的运送 1.标本采集后立即送检，若有延迟也应在2小时内送到实验室，否则会影响病原菌的检出，一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。 2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。 三、不同标本的采集，运送 （一）血液标本采集，运送
1.血培养指针征 当患者出现：发热（大于38度）或低温（小于36度），寒战，白细胞增多,皮肤黏膜出血，休克，多器官衰竭，血压降低，c反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，具备上述一种或几种体征时，临床怀疑菌血症应采集血液标本进行血培养，对入院危重感染患者应在未使用抗菌药物治疗前，及时做血培养。 2.对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集２套以上血培养标本。成年患者：推荐同时采集２－３套（不同部位）血培养标本（即双瓶双臂同时采集血培养标本），采血量每瓶不少于5ml;婴幼儿患者：推荐同时采集２次（不同部位）血培养标本,采血量每瓶不少于2ml。（少于病人总血容量的1%）.在采取血培养后的2—5天内，无需重复采取血培养。两个例外：细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。 3.血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。 检出率与采血量成比例增长，每增加1ml的血液，病原菌的检出率就会相应增加。儿童患者血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。采用一对（需氧瓶+厌氧瓶）组合，比采用二个需氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。采血量不能满足推荐的量时，应首先满足需氧瓶的需要。 推荐从外周静脉采集血液标本,不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读。 4.血标本采集的注意事项 在采血之前，血培养瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥。然后再进行穿刺部位的皮肤消毒。严格按照“酒精、含碘消毒剂、酒精”的消毒步骤操作，并等待足够的消毒时间。严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套.不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头;采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室,血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。 (二)痰培养标本采集，运送 1.痰培养指征 上呼吸道感染包括咽炎，喉炎，会咽炎等都可采集鼻，鼻咽，口咽拭子标本