TaKaRa Universal Buffer 宝生物双酶切缓冲液

Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表

■ 说明

使用二种酶同时进行DNA切断反应(Double Digestion) 时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa采用Universal Buffer表示系统，并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性。尽管如此，在进行Double Digestion时，有时还会难以找到合适的Universal Buffer。

本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了在Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer条件。在本表中，各Universal Buffer之前表示的[数字×] 是指各Universal Buffer的反应体系中的最终浓度。TaKaRa销售产品中添附的Universal Buffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1×时稀释至10倍，2×时稀释至5倍进行使用。

■ 注意

◇ 1 μg DNA中添加10 U的限制酶，在50 μl的反应体系中，37℃下反应1小时可以完全降解DNA。

◇为防止Star活性的产生，请将反应体系中的甘油含量，尽量控制在10%以下。

◇根据DNA的种类，各DNA的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生Double Digestion不能顺利进行的可能。

(完整版)生物化学名词解释大全

第一章蛋白质 1．两性离子：指在同一氨基酸分子上含有等量的正负两种电荷，又称兼性离子或偶极离子。 2．必需氨基酸：指人体（和其它哺乳动物）自身不能合成，机体又必需，需要从饮食中获得的氨基酸。 3.氨基酸的等电点：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH 值，用符号pI表示。 4．稀有氨基酸：指存在于蛋白质中的20 种常见氨基酸以外的其它罕见氨基酸，它们是正常氨基酸的衍生物。 5．非蛋白质氨基酸：指不存在于蛋白质分子中而以游离状态和结合状态存在于生物体的各种组织和细胞的氨基酸。 6．构型：指在立体异构体中不对称碳原子上相连的各原子或取代基团的空间排布。构型的转变伴随着共价键的断裂和重新形成。 7．蛋白质的一级结构：指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，以及二硫键的位置。 8．构象：指有机分子中，不改变共价键结构，仅单键周围的原子旋转所产生的原子的空间排布。一种构象改变为另一种构象时，不涉及共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活性。 9．蛋白质的二级结构：指在蛋白质分子中的局部区域内，多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。 10．结构域：指蛋白质多肽链在二级结构的基础上进一步卷曲折叠成几个相对独立的近似球形的组装体。 11．蛋白质的三级结构：指蛋白质在二级结构的基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的构象。 12．氢键：指蛋白质在二级结构的基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的构象。 13．蛋白质的四级结构：指多亚基蛋白质分子中各个具有三级结构的多肽链以适当方式聚合所呈现的三维结构。 14．离子键：带相反电荷的基团之间的静电引力，也称为静电键或盐键。15．超二级结构：指蛋白质分子中相邻的二级结构单位组合在一起所形成的有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体。 16．疏水键：非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。如蛋白质分子中的疏水侧链避开水相而相互聚集而形成的作用力。 17．范德华力：中性原子之间通过瞬间静电相互作用产生的一种弱的分子间的力。当两个原子之间的距离为它们的范德华半径之和时，范德华力最强。 18．盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐（如硫酸氨），使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。 19．盐溶：在蛋白质溶液中加入少量中性盐使蛋白质溶解度增加的现象。20．蛋白质的变性作用：蛋白质分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键遭到破坏导致天然构象的破坏，但其一级结构不发生改变。 21．蛋白质的复性：指在一定条件下，变性的蛋白质分子恢复其原有的天然构象并恢复生物活性的现象。 22．蛋白质的沉淀作用：在外界因素影响下，蛋白质分子失去水化膜或被中和其

生物化学基本知识

第六章生物化学实验基本知识 主编：齐锦生编委： 孔德娟齐锦生许丽辉杨崇辉周秀霞罗湘衡君智炜张晓玲王芳 实验室要求 一、实验课的目的 1、加深理解：加深对生物化学基本理论的理解。 2、掌握技术：掌握生物化学的基本实验方法和实验技术（四大基本技术：离心、电泳、层析、比色）及分子生物学的一些基本技术和方法。 3、培养能力：培养学生的思维能力、动手能力和表达能力。 4、掌握精髓：科学的精髓是实事求是、敢于探索、善于创新的精神，要对实验中出现的一切反常现象进行讨论，并大胆提出自己的看法。 二、生化实验室规则和要求 1、预习：课前要预习实验教材，了解实验目的、原理，熟悉操作规程。 2、秩序：自觉遵守纪律，维护教学秩序，不准迟到、早退，保持安静，严禁谈笑打闹，听从教师指导，未经教师同意，不得随意离开实验室。 3、整洁：搞好实验环境和仪器的卫生整洁，实验台面必须保持整洁，仪器药品要井然有序，公用试剂用毕，应立即盖严放回原处，勿使药品试剂撒在实验台面和地面。实验完毕，需将药品试剂排列整齐，仪器要洗净倒置放好。固体废物，如滤纸、棉花、血块不得倒入水池中，以免堵塞下水道；一般性废液可倒入水池中冲走，但强酸强碱或有毒有害溶液必须用水高度稀释后，方可倒入水池中，同时放水冲走，以免腐蚀水管。全体同学由班长安排轮流值日，负责当天实验室卫生、安全和一些服务性工作，经教师验收合格后，方可离开实验室。 4、节约：使用仪器、药品、试剂及各种物品必须厉行节约，并节约水电。应特别注意保持药品和试剂的纯净，严防混杂、乱用和污染。使用和洗涤仪器应小心仔细，防止损坏，贵重仪器使用前应熟悉使用方法，严格遵守操作规程，严禁随意开动，发现故障后应立即报告指导教师，不要自己动手检修，如有损坏按学校规定赔偿。 5、安全：注意人身和国家财产安全是至关重要的，要时刻注意防火、防水、防电、防危险品、防事故，以免发生意外。实验室内严禁吸烟。使用乙醚、苯、乙醇、丙酮等易燃品时，不允许在电炉、酒精灯上直接加热。实验中须远离火源，如有危险发生，应首先关掉电源；有机溶剂着火时，勿用水泼，以免扩大燃烧面积，可用沙土、灭火器具灭之。用火时必须严格做到：火着人在，人走火灭。用毕电器后及时切断电源。加热试剂、液体时，管口不要对人，要十分小心操作，避免灼伤人。实验室内一切物品未经本室负责教师批准，严禁携带出室外，有毒物品尤其如此。借物必须办理登记手续。

各种缓冲液的配制方法大全

磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2mol/L 溶液为28.40克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2mol/L 溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1mol/L 溶液为21.01克/升 20%盐酸溶液如何配置： 取浓盐酸（质量百分比浓度为36.5%）一个体积（如100毫升），加入到96.5毫升水中就可以了。 36.5%*100*1.17=20%*m m=213.5(克) 所需水的质量为;213.5-117=96.5克，也就是96.5毫升水。 PH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 1 9.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55

《生物化学》常用名词解释(一)

《生物化学》常用名词解释 （一） 1.氨基酸（aminoacids）: 是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在α-碳上。氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。 2.必需氨基酸（essentialaminoacids）： 指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从饮食中获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等氨基酸 3.非必需氨基酸（nonessentialaminoacids）： 指人（或其它脊椎动物）自己能由简单的前体合成的，不需要由饮食供给的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。 4.等电点（pI，isoelectricpoint）： 使分子处于兼性分子状态，在电场中不迁移（分子的净电荷为零）的pH值。 5.茚三酮反应（ninhydrinreaction）： 在加热条件下，氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色（与脯氨酸反应生成黄色）化合物的反应。 6.肽键（peptidebond）： 一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合，除去一分子水形成的酰胺键。 7.肽（peptides）：

两个或两个以上氨基酸通过肽键共价连接形成的聚合物。 8.蛋白质一级结构(primarystructure)： 指蛋白质中共价连接的氨基酸残基的排列顺序。 9.层析(chromatography)： 按照在移动相（可以是气体或液体）和固定相（可以是液体或固体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。 10.离子交换层析(ion-exchangecolumnchromatography)： 使用带有固定的带电基团的聚合树脂或凝胶层析柱分离离子化合物的层析方法。 11.透析（dialysis）： 通过小分子经半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。 12.凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)： 也叫做分子排阻层析（molecular-exclusionchromatography）。一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。 13.亲和层析（affinitychromatography）： 利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。 14.高压液相层析（HPLC，high-pressureliquidchromatography）： 使用颗粒极细的介质，在高压下分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。

常用缓冲溶液配制方法

毫升甘氨酸毫升，再加水稀释至毫升

NaHPO- 2HO分子量=,mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O7 - H b O分子量=,mol/L 溶液为21.01克/升。 4 .柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液 pH 钠离子浓度 (mol/L) 酸（克） a - h2O 氢氧化钠 （克） NaOH 97% 盐酸（毫升） HCl （浓） 最终 （升） 210 84 160 10 210 83 116 10 210 83 106 10 210 83 45 10 245 144 68 10 285 186 105 10 266 156 126 10 ① 体积 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化

钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（mol/L ） 柠檬酸钠Na C6H5O7 ? 2HQ分子量，mol/L 溶液为29.41克/毫升。.乙酸-乙酸钠缓冲液（）

Nc2Ac- 3H2O分子量=,mol/L 溶液为27.22克/升。 7.磷酸盐缓冲液 (1)磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液() NaHPO -12^0分子量=,mol/L溶液为克/升。 NaHPQ?2H2O分子量=,mol/L溶液为克/升。

磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个 值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：NaHPQ：PKa1 =, pKa2=；NaHPO： pKa1 =,PKa2= 溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释10倍后pH的变化小于。 其缺点为：①易与常见的钙Ca24离子、镁Mg24离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 )磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液() pH mol/L/15Na 2HPO （毫升）mol/L pKa 配酸性缓冲液: 用NaHPO, pH= 1 ?4, 配中性缓冲液: 用混合的两种磷酸盐，pH= 6?8, 配碱性缓冲液: 用NaHPO, pH= 10?12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难 pH范围宽；③pH 15M11.876 克15M9.078 克0.05M0.2M

生物实验常用缓冲液和酶的配制

实验室常用技术参数资料 一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 2．常用核酸的长度与分子量

3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算 1μg=10-6g1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g （2）分光光度换算： 1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml （3）DNA摩尔换算： 1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端 1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿 1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿 1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿 （4）蛋白摩尔换算： 100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg

100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿 （5）蛋白质/DNA换算： 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质 10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA 4．常用蛋白质分子量标准参照物

5．常用DNA分子量标准参照物 续上表

二、常用缓冲液 1．分子克隆常用缓冲液 2．磷酸缓冲液 （1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 （一）基本概念 ⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）: 1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl- ＋H+ HCl是酸，Cl-是它的共轭碱。 pH = pKa+log{[质子受体]/[质子供体]} ⑵缓冲体系的设计： 1960年，N.E.Good和他的同事们提出，适合生命科学研究使用的缓冲体系应具有以下特性： ① pKa值在6-8之间； ②在水中的溶解度高； ③不易穿透生物膜； ④盐效应小； ⑤离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小； ⑥不与金属离子生成复合物或沉淀； ⑦该缓冲剂化学稳定； ⑧紫外和可见光波长范围内光吸收小； ⑨易制得高纯度的盐。 （二）生物化学常用缓冲液 ⑴磷酸盐缓冲液： 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级

解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21 Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1-4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6-8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10-12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为： ①容易配制成各种浓度的缓冲液； ②适用的pH范围宽； ③pH受温度的影响小； ④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。 其缺点为： ①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀； ②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵ Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液： Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5-8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0-9.0 Tris-HCl缓冲液的优点是： ①因为Tris的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由

柠檬酸钠缓冲液0.01mol L, pH6.0说明书

柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L，pH6.0说明书 货号：C1010 规格：1L/2L 保存：室温密封保存，有效期12个月。 产品说明： 细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阴性染色结果。所以要求在进行免疫组化染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高检测的准确性。 柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L，pH6.0是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。 通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。 按照每个片子需要10ml抗原修复液计算，1L抗原修复液可以用于100个样本的抗原修复。 使用方法： 本产品是干粉形式，使用前用去离子水或蒸馏水按产品规格溶解至1L或2L，即可使用。 1.对于石蜡切片： a.脱蜡：二甲苯3次，每次3-5min→无水乙醇2次，每次3-5min→95％乙醇1次，3-5min→90%乙醇1次，3-5min→75％乙醇1次，3-5min→蒸馏水洗2次，每次3-5min。

b.抗原修复：将切片浸泡在柠檬酸修复液中，95-100℃加热约15min(加热时间可以控制在10-20min 内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。柠檬酸修复液使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30min内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5min。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。 2.对于冰冻切片： 用免疫染色洗涤液洗涤切片5min。将切片浸泡在柠檬酸修复液中，95-100℃加热约15min(加热时间可以控制在10-20min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。柠檬酸修复液使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30min内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5min。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。 3.对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。 注意事项： 抗原修复过程可以使用索莱宝的的抗原修复盒进行操作。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。

分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制方法

（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配制方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配制方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配制方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。

（pH5.2）□配制量100mL □配制方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配制方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配制方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱

生物化学 常用试剂配制

常用试剂配制-生物、化学．常规试剂配制和测定方法

一、溶液的配制1000 mL）1. Mandels营养盐溶液（g）称重 量（名 14 ）)硫酸铵（(NHSO42420 ）磷酸二氢钾（KHPO423 尿素）HNCONH （223 ）MgSO·7HO硫酸镁（244 O）氯化钙（CaCl·2H22注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 微量元素溶液（1000 mL）2. Mandels）量（g称重名

3.7 氯化钴（CoCl·O）6H221.4 ）·ZnSO7HO硫酸锌（241.6 O）MnSO硫酸锰（·H245.0 ）硫酸亚铁（FeSO·7HO24后的蒸馏水配制。注：用煮沸10 min 3. DNS试剂的配制（1000 mL） （1）取：3,5-二硝基水杨酸（CHNO）7.5 g 7472氢氧化钠（NaOH ）14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min） （2）加入：酒石酸钾钠（CHOKNa·4HO）216.0 g 24465.5 mL ℃水浴中融化）50 苯酚（在 6.0 g 偏重亚硫酸钠（NaSO）522使5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置

用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。注意：倒入瓶中时要尽量装满！！ 的配制（1000 mL）4. 考马斯亮蓝G-250mL 乙醇中，加入100 mL 即0.1g溶于50 95%称考马斯亮蓝G-250 100 mg）（w/v85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含0.01 % w/v）磷酸。（w/v）乙醇，8.5 %（，考马斯亮蓝G-2504.7 % 1000 mL）5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（(g) 量量Mn

生物化学与分子生物学常用试剂配方

30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 100mL 将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。 【保存条件】 4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存 【注意事项】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液） 称取15.0gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】 室温保存，两年有效。 【注意事项】 配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。 电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。 摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法 10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS 配制20mL 【组分浓度】10%(w/v)SDS 【配制方法】 称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存 【保存条件】 室温保存 【注意事项】 对人体有害，请注意防护。 摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

生化考研常见大题

生物化学答疑库 1.糖类化合物有哪些生物学功能？---------------答案 2.葡萄糖溶液为什么有变旋现象？---------------答案 3.什么是糖蛋白？有何生物学功能？-------------答案 4.纤维素和糖原都是由D-葡萄糖经1→4连接的大分子，相对分子质量相当，是什么结构特点造成它们的物理性质和生物学功能上有很大的差异？ -------------------答案 5.天然脂肪酸在结构上有哪些共同特点----------答案 6.为什么多不饱和脂肪酸容易受到脂质过氧化？---答案 7.人和动物体胆固醇可能转变为哪些具有重要生理意义的类固醇物质？ ---------------------------------------------------------------------------------答案 8.判断氨基酸所带的净电荷，用pI-pH比pH-pI更好，为什么？ -------------------------------------------------------------------------------------------答案 9.甘氨酸是乙酸甲基上的氢被氨基取代生成的，为什么乙酸羧基的pKa是4.75，而甘氨酸羧基的pKa是2.34？------------------------------------------- -------答案

10.（1）Ala，Ser，Phe，Leu，Arg，Asp，Lys 和His的混合液中pH3.9进行纸电泳，哪些向阳极移动？哪些向阴极移动？（2）为什么带相同净电荷的氨基酸如Gly和Leu在纸电泳时迁移率会稍有差别？ ----------------------------------------------------------------------答案 11.（1）由20种氨基酸组成的20肽，若每种氨基酸残基在肽链中只能出现1次，有可能形成多少种不同的肽链？（2）由20种氨基酸组成的20肽，若在肽链的任一位置20种氨基酸出现的概率相等，有可能形成多少种不同的肽链？ ----------------------------------------------答案 12.在大多数氨基酸中，-COOH的pKa都接近2.0，-NH 的pKa都接近9.0。但是，在肽链中，-COOH的pKa为3.8，而-NH3＋的pKa值为7.8。你能解释这种差别吗？----答案 13. -螺旋的稳定性不仅取决于肽链部的氢键，而且还与氨基酸侧链的性质相关。室温下，在溶液中下列多聚氨基酸哪些能形成螺旋？哪些能形成其他有规则的结构？哪些能形成无规则的结构？并说明其理由。（1）多聚亮氨酸pH7.0；（2）多聚异亮氨酸pH7.0；(3) 多聚精氨酸pH7.0；(4) 多聚精氨酸pH13.0；（5）多聚谷氨酸pH1.5；(6) 多聚氨酸pH7.0；(7) 多聚羟脯氨酸pH7.0.-答案 14.球蛋白的相对分子质量增加时，亲水残基和疏水残基的相对比例会发生什么变化？

(精编资料推荐)TBST缓冲液配制及使用方法

TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液 用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力. 如果配置1000ml的TBST： 先称量NaCl 40g ，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl 47.6g，倒入刚才的那个烧杯中,：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加吐温20， 5ml,转入1000ml 容量瓶中，在定容，转移即可。 TBST缓冲液是以进口粉剂为原材料配制，品质稳定。 ?·主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印 ?迹膜； ?·无色液体，0.22 μm膜过滤纯化； ?·室温储存，效期为18个月； ?使用说明 ?·1×TBST缓冲液配制：900 ml去离子水与100 ml 10×TBST缓冲液充分混匀； ?友情提示 ?·室温条件下保存，如果低温保存溶液，可能会产生沉淀，可摇晃 ?或加热溶解；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作； 用来洗细胞的TBS/PBS最好加KCl，这样比较接近体液的电解质比例 其他用途如WB等可以忽略，只要电导和离子浓度符合要求就可以了。个别去垢剂如SDS 遇到钾会沉淀，所以更不能加KCl pH和盐浓度看自己需要而定，不用拘泥于书本，当然一般来说是等渗的150mM NaCl

保存条件： 1：室温保存，12个月 2：如果低温保存溶液，可能会有晶体沉淀产生，可通过摇晃或加热溶解即可使用。注意事项： 1：说明：TBST缓冲液，PH 7.2-7.5； 2：颜色为无色透明液体； 3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作； 使用说明： 1：使用前将10 X TBS缓冲液和Tween20按1:39混合，注意需在使用前新鲜配制。2：将混合后的TBST缓冲液（10X）加入到9份去离子水中，充分混匀即可使用。

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 ⑴ 磷酸盐缓冲液 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pK a 值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH 2PO 4 ： pK a1 ＝2.12， pK a2 ＝7.21 Na 2HPO 4 ： pK a1 ＝7.21， pK a2 ＝12.32 配酸性缓冲液：用 NaH 2PO 4 ，pH＝1～4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用 Na 2HPO 4 ，pH＝10～12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯 酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的 变化小于0.1。 其缺点为：①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵Tris（三羟甲基氨基甲烷，N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane）缓冲 液 Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5～8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0～9.0 配制常用的缓冲液的方法有两种：①按书后附录中所列该缓冲液表中的方法，分别配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按表中所列体积混合。由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用另一种方法；②若配1L 0.1mol/L 的Tris-HCl缓冲液：先称12.11g Tris碱溶于950mL～970mL 无离子水中，边 搅拌边滴加4N HCl，用pH计测定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水补足到1L。 Tris-HCl缓冲液的优点是：①因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这 一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。 其缺点是：①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，即： △pK a ／℃＝－0.031 ，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于 0℃～4℃。③易吸收空气中的CO 2 ，所以配制的缓冲液要盖严密封。④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

各种缓冲液配制方法

不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。

C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。

（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100

高中生物常见的缓冲液

高中生物常见的缓冲液 当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。 弱酸及其盐的混合溶液（如NaHCO3与H2CO3），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl），多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）等都是缓冲溶液。1．CO2缓冲液 光合作用实验里，CO2缓冲液有吸收CO2的能力，控制变量。CO2缓冲液是当反应系统内二氧化碳增多时，二氧化碳缓冲液吸收二氧化碳，反之，当系统内二氧化碳减少时，二氧化碳缓冲液释放二氧化碳。 2．碳酸氢盐缓冲液 人体血浆里最重要的缓冲体系是碳酸氢盐缓冲体系是：NaHCO3与H2CO3 H2CO3= H+ + HCO3﹣ pH= pKa + lg〔HCO3﹣〕/〔H2CO3〕 在正常血浆中，〔HCO3﹣〕︰〔H2CO3〕= 20︰1 pH=6.10+lg20/1=7.40 人体各组织、细胞代谢产生的CO2，主要通过血红蛋白和氧合血红蛋白的运输作用，被迅速运到肺部排出，故几乎不影响血浆的pH，当产生乳酸时，血液中HCO3﹣/ H2CO3缓冲对便发挥缓冲作用，其中HCO3﹣可与代谢产生乳酸产生CO2和H2O。 当人体新陈代谢过程中产生的碱进入血液时，与H2CO3作用产生HCO3﹣，随尿液排出体外，结果也使血液的pH 保持稳定。 3．磷酸盐缓冲液 磷酸盐缓冲液（简称PBS）的是常用的用于生物学研究的一个缓冲溶液。 磷酸盐缓冲液是由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成的溶液，用于样品的稀释，其中磷酸二氢钠酸性较强。如果血液中的pH值过高的话，多余的碱就会与酸磷酸二氢钠结合生成磷酸氢二钠，反之，过酸时就会与磷酸氢二钠反应产生磷酸二氢钠，这样pH值就会稳定在一定的范围内。

常用缓冲溶液配制方法

常用缓冲溶液的配制方法 1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L） X毫升 mol/L甘氨酸+Y毫升 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 ) 甘氨酸分子量 = ， mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液

Na 2HPO 4分子量 = ， mol/L 溶液为28.40克/升。 - Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液含35.01克/升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为21.01克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入 1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化 钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量， mol/L 溶液为29.41克/毫升。 ;

22 # 7．磷酸盐缓冲液 242 Na2HPO4·12H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 NaH2PO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝，pKa2＝；Na2HPO4：pKa1＝，pKa2＝ 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1～4，

配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10～12。 《 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH 变化小，如稀释10倍后pH 的变化小于。 其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 > 硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。 硼酸H3BO3,分子量=,溶液为12.37克/升。 ) 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）

生物化学常用专业术语中英文对照汇编手册

绪论（prelude） 生物化学biochemistry 无机离子inorganic 生物分子biomolecular 糖carbohydrate 脂lipid 核酸nucleic acid 蛋白质protein 维生素vitamin 酶enzyme 辅酶coenzyme 激素hormone 核苷酸nucleotide 氨基酸amino acid 葡萄糖glucose 单糖monosaccharide 双糖disaccharide 脂肪酸fatty acid 克隆技术cloning 克隆clone 糖类（carbohydrate） 糖carbohydrate/saccharide 糖生物学glycobiology 醛糖aldose 酮糖ketose 单糖monosaccharide 寡/低聚糖oligosaccharide 二糖disaccharide 三糖trisaccharide 多糖polysaccharide 复合糖compoud/complex saccharide 链状结构chain structure 构型configuration 构象conformation 异构isomerism 对映体enanthiomer 果糖fructose 半乳糖galactose 甘露糖mannose 环状结构ring structure 异头物anomer 不对称碳原子asymmetric carbon atom 投影式Fischer式 透视式Haworth式 椅式构象chain form 船式构象boat form 旋光性optical activity 比旋光度specific rotation 变旋性mutarotation