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薄层色谱法鉴别广东土牛膝中的泽兰素

薄层色谱法鉴别广东土牛膝中的泽兰素
薄层色谱法鉴别广东土牛膝中的泽兰素

薄层色谱法鉴别广东土牛膝中的泽兰素

【摘要】目的:建立广东土牛膝的鉴别方法。方法:分别以广东土牛膝药材和泽兰素为工作对照和对照品,利用薄层色谱法增加了广东土牛膝中黄酮类成分的鉴别。结果:供试品色谱中,在与广东土牛膝对照药材和泽兰素对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,分离度高。结论:所建立的方法能很好地对广东土牛膝中的黄酮类成分进行质量控制。

【关键词】广东土牛膝;泽兰素;薄层色谱

广东土牛膝为菊科植物华泽兰Eupatorium chinense L.的干燥根,具有清热解毒,凉血利咽等功效,临床上用于白喉,咽喉肿痛,感冒高热,麻疹热毒,肺热咳嗽;外伤肿痛,毒蛇咬伤。该药材标准收载于《广东省中药材标准》(第一册)中[1]。然而,该药材质量标准尚未完善,如薄层鉴别中缺少有效单体作,甚至是适当的指标性成分为对照手段。因此,为控制该中药材质量,本文分别以广东土牛膝药材和有效成分泽兰素[2,3]为工作对照和对照品,利用薄层色谱法(TLC)对广东土牛膝药材中的黄酮类化学成分进行了研究。现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器薄层色谱扫描仪-成像系统(生产厂家:瑞士CAMAG公司;型号:REPROSTAR 3),Sartorius BS400s电子天平,超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,250W/40kHz)。

1.2试药广东土牛膝(产地:广东、广西,批号:20101001、20101101、20101201,均购自东莞市中药饮片有限公司),广东土牛膝对照药材(购自广州市清平药材市场,由东莞市食品药品检验所朱寿光鉴定);泽兰素对照品(自制,由中山大学药学院徐新军教授提供);甲醇、正己烷、三氯甲烷(均为分析纯,广州化学试剂厂)。

2方法与结果

取广东土牛膝药材适量,粉碎,过4号筛,取粉末1g,置具塞锥形瓶中,加入甲醇25ml超声处理30分钟,过滤,滤液蒸干,残渣再用1ml甲醇溶解,即得。另取广东土牛膝对照药材1g,同法制成对照药材溶液。再取泽兰素对照品,加甲醇溶解制成每mL含0.2mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典

薄层色谱操作规程

薄层色谱鉴别操作规程 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比,用于鉴别。 1.仪器与材料 (1)薄层板 市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板,如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。 自制薄层板在保证色谱质量的前提下,如需对薄层板进行特别处理和化学改性,以适应供试品分离的要求时,也可用实验室自制的薄层板。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等,其颗粒大小,一般要求粒径为10~40μm,加水或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2%~0.5%)适量调成糊状,均匀涂布于玻板上。使用涂布器徐布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。玻板应光滑、平整,洗净后不附水珠。 (2)点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 (3)展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸,展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 (4)显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器,要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出;浸溃显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用;蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 (5)检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱,可附加摄像设备供拍摄图像用,暗箱内光源应有足够的光照度。 2.操作方法 (1)薄层板制备 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁,但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破

薄层色谱鉴别

章节题目实验三中药薄层色谱鉴定 教学目的和要求掌握中药的薄层色谱法鉴定的实验技术。 掌握丹参等中药薄层色谱鉴定的特征和方法。 熟悉含有不同类别化学成分中药薄层色谱鉴别的条件及方法。 重点难点重点:丹参等中药薄层色谱鉴定的特征和方法。 难点:含有不同类别化学成分中药薄层色谱鉴别的条件及方法 教学设计 课前预习 1、薄层色谱的基本原理和应用。 2、供试样品溶液的制备方法。 课前准备 仪器:电吹风、薄层板、烧杯、磁力搅拌器、玻璃棒、天平、容量瓶、分液漏斗、刻度试管、具塞三角瓶、研钵、层析缸、量筒、毛细管、烘箱、移液管等。 试剂:丹参粉末 材料:硅胶G、CMC-Na、蒸馏水、乙醚、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚(30-60℃)等 对照品:丹参对照药材、丹参酮II A 。 教学过程 一、复习提问 1、薄层色谱法原理? 2、薄层色谱法的操作步骤。 二、引入课题 波曾色谱法快速、简便、灵敏,是目前中药化学(真实性)定性鉴别中使用最多的色谱法之一。 三、新课教学 [实验目的] 1、掌握中药的薄层色谱法鉴定的实验技术。 2、掌握丹参等中药薄层色谱鉴定的特征和方法。 3、熟悉含有不同类别化学成分中药薄层色谱鉴别的条件及方法。 [实验原理] 1、原理

薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC 表示,又称薄层层析,属于固-液吸附色谱。样品在薄层板上的吸附剂(固定相)和溶剂(移动相)之间进行分离。由于各种化合物的吸附能力各不相同,在展开剂上移时,它们进行不同程度的解吸,从而达到分离的目的。 2、薄层色谱的用途: (1)化合物的定性检验。(通过与已知标准物对比的方法进行未知物的鉴定) 在条件完全一致的情况,纯碎的化合物在薄层色谱中呈现一定的移动距离,称比移值(Rf 值),所以利用薄层色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多,如薄层的厚度,吸附剂颗粒的大小,酸碱性,活性等级,外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以,要获得重现的比移值就比 较困难。为此,在测定某一试样时,最好用已知样品进行对照。 距离溶剂前沿至原点中心的点中心的距离溶质最高浓度中心至原 f R (2)快速分离少量物质。 (几到几十微克,甚至0.01μg) (3)跟踪反应进程。在进行化学反应时,常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失,来判断反应是否完成。 (4)化合物纯度的检验(只出现一个斑点,且无拖尾现象,为纯物质。) 此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。 [实验内容] 1、薄层板的制备 制薄层板的主要原料是吸附剂和粘结剂。吸附剂:最常用于 TLC 的吸附剂为硅胶 G 、硅胶GF254、 硅胶HF254。本实验用的吸附剂为硅胶 G 。 粘结剂:一般用所羧甲基纤维素钠(CMC-Na ),也有用淀粉的。CMC-Na 为粉状固体,用时先加水,水浴上熬成糊状,配成0.2%-0.5%水溶液。 制板: 将1份硅胶G 加3份0.4% CMC-Na 水溶液,研磨混合均匀后(在平铺玻璃板上能晃动但不能流动),将其均匀涂布于薄层板上( 10X 10),厚度为0.2-0.3mm ,为使其坦平,可将载玻片用手端平晃动,致坦平为止,放在干净平坦的台面上晾干,然后放入110℃烘箱活化30分钟,分干燥器备用。 制备好的薄层板要求表面平滑、均匀、无麻点、无气泡、无破损及污染。 2、供试品溶液制备 取丹参粉末1g ,加乙醚5ml ,置具塞试管中,振摇,放置1h ,滤过挥干,残渣加乙酸乙酯1ml 使溶解。

萝芙木的薄层色谱鉴别

表5 4味药群提取工艺正交设计及实验结果方差分析表 方差来源s f v F显著性A30 98215 498 21 B2 8421 040 55 C193 72296 8651 35P<0 05误差3 7721 89 F0 05(2,2)=19到5味药所含有效成分以水溶性成分为主,本次实验直接探讨以水为溶剂的最佳煎煮方法。 该方主药为苦参,故以苦参总生物碱为测定指标是合理的。但有文献记载 4 ,生物碱可与鞣质的水溶液生成难溶或不溶的沉淀。据此,我们对苦参和忠伦 5汤进行预试验,考察生物碱溶出率,结果5味药一起煎煮时总生物碱溶出率只有理论值的52%,认为这与诃子所含大量鞣质有关。故对苦参和其它4味药进行了分别提取和测定,结果较满意。 参考文献 1 白清云,等 中国医学百科全书 蒙医学 上海:上海科技出版社,19: 2 章育中,等 苦参及其制剂中生物 碱的薄层分离和含量测定 药学学报, 1981,16(4):283 3 国家药典委员会 中华人民共和国 药典2000年版(一部) 北京:化学工业 出版社,2000:附录63 4 肖崇厚 中药化学 上海:上海科 技出版社,1997:573 (收稿日期:2001年3月29日) 萝芙木的薄层色谱鉴别 广西民族医药研究所(530001)戴 斌 丘翠嫦 陈少锋 摘 要 目的:对萝芙木(Ra uvol f ia verticillata)质量标准进行修订研究。方法:采用新拟薄层色谱法对广西产萝芙木不同产地、不同采集期、不同药用部位(根、茎及枝叶)及总碱 降压灵 等7件样品的薄层色谱进行考察。结果:广西产萝芙木不同药用部位的薄层色谱有4个以上明显的色谱斑点,而不受产地、采期的影响,均未检出与对照品利血平色谱相同斑点;该方法简便、灵敏、重视性好。为萝芙木标准修订提供了科学依据。 关键词 萝芙木 降压灵 薄层色谱法 萝芙木为夹竹桃科植物萝芙木Rauvol f ia verticillata(Loru.) Baill的根及茎。 1 其药用价值在我国历代本草中虽未见记载,但在广西壮、瑶等民族民间中很早就有应用萝芙木属植物治疗高血压、头痛、斑痧、肝炎等疾病的经验,称 假棵焦 (象州)、 腊夺 (那坡)、 萝芙亮 (金秀)等。 2,3 自从1949年印度人Vakil运用蛇根木(R.serpenina)治疗高血压症获得成功之后,引起了各国的重视,我国学者于50年代发现其同属植物萝芙木及云南萝芙木的总生物碱亦具有同样的降压作用, 5~7 广西医药研究所制药厂自60年代始研制成 降压灵 ,用于临床,随后 载入 广西药品标准 1,8 ,鉴 别项列有以利血平为对照品的薄 层色谱法。但近年来在实际执行 中存在如下问题:一是连年大量 采挖,药源日渐减少,药用部位 由单一根扩大到全株使用;二是 广西产萝芙木及 降压灵 按 标准 方法检识不出利血平对 照品相应荧光斑点。为此,我们 对萝芙木的薄层色谱鉴别方法进 行改进研究,对萝芙木不同产 地、不同采集期的根、茎和枝叶 以及不同品种萝芙木(7种)的 薄层色谱鉴别进行了对比试验, 为萝芙木质量标准的修订提供了 依据,现将实验结果报道如下。 1 实验材料来源及编号 A.萝芙木:下列4件标本 样品经鉴定均为Rauvol f ia verticil lata:A-11990年5月采于广西 靖西(90360),为萝芙木茎枝叶 (A la)及根(A 1b)。A 2 1999年6月采于靖西(99025 2981),为萝芙木枝叶(A 2a)。 A 31999年7月采于广西药植 园(99061 3002),为萝芙木小 枝叶(A 3a)。A 41999年7 月采于乐业,为萝芙木的全株 (99074 3005)、茎枝叶(A 4a)及根(A 4b)。 B 降压灵 原料药材: 1999年7月由广西医药研究所 药厂提供。为萝芙木(广西产、

薄层色谱操作注意事项

薄层色谱操作注意事项 影响薄层色谱分析的因素有很多,比如样品处理方法、薄层板制备技巧、点样方法、展开剂的遴选、温湿度的掌控等等很多方面,在这里对其操作要点作一下简单介绍: 1铺制薄层板:铺板用的匀浆不宜过稠或过稀:过稠,板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀,水蒸发后,板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1:2~3,硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间,根据经验来定,与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断,越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外,也影响板涂层的厚度,进一步影响上样量。涂层薄,点样易过载;涂层厚,显色不那么明显。通常,板的质量对薄层鉴别的影响不是很大,影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。 2点样:尽量用小的点样管。如果有足够的耐性,最好只用1微升的点样管。这样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。样品溶液的含水量越小越好,样品溶液含水量大,点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 薄层色谱用于定量时,点样是最主要的误差来源。 供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力,所以在点样的同时,样品在原点就可是成环形展开,原点直径的扩散促进了这种展开,Kaiser称之为“上样环形色谱效应”。如果样品在溶剂中的溶解度很大,原点将变成空心环。这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。 供试液的溶剂在原点的残留,也会改变展开的选择性,特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更明显。再者,亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分(特别在高湿度环境)对色谱的影响也不可低估。因此点样时的同步干燥或继后干燥以除去原点残存的溶剂是需要的。但应尽可能避免高温加热,如用吹风筒加热,样品变为固态后,部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上,而促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应,导致样品的变性(尤其热不稳定物质),至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动速度慢得多而形成拖尾(斑点拖尾的原因之一)。

实验一更年安片薄层色谱鉴别

实验一更年安片薄层色谱鉴别 一.目的要求 1 掌握薄层荧光法的原理及操作。 2 掌握薄层色谱法在中药制剂鉴别中的应用。 二.基本原理 更年安片由地黄、泽泻、五味子、制何首乌等药味组成,可利用薄层色谱法对五味子和制何首乌进行鉴别。五味子中主要有效成分为木脂素类,五味子甲素为其主要有效成分之一,可吸收UV光,在硅胶GF254薄层板上形成暗斑,用对照药材和对照品进行对照,可鉴别制剂中五味子;制何首乌中主要有效成分为蒽醌类,主要为大黄素和大黄素甲醚等成分,在可见光下呈黄色,在氨蒸气中斑点呈红色,紫外光(254nm或365nm)照射下产生荧光,在硅胶G薄板上可在可见光、紫外光或显色后检视其斑点,用对照药材和对照品进行对照,可鉴别制剂中何首乌。 三.仪器与试药 1、双槽层析缸、玻璃板10×20cm、三用紫外线分析仪、分析天平(0.01mg)。 2、硅胶G、硅胶GF254。 3、五味子、何首乌(中国药品生物制品检定所) 4、五味子甲素、大黄素、大黄素甲醚(中国药品生物制品检定所) 5、更年安片(市售) 四.操作步骤 (一)五味子鉴别 1.薄层板制备:含0.3%的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板(实验前自制)。 2.供试品溶液制备:取更年安片20片,除去糖衣,研碎,加氯仿30mL,置水浴上加热回流90分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加氯仿1mL使溶解,作为供试品溶液。 3.对照溶液制备:取五味子对照药材0.5g,同上法制成对照药材溶液。取五味子甲素对照品,加氯仿制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。 4.薄层层析:将薄层板的边缘修饰整齐,作好标记。用毛细管吸取上述三种溶液各4μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15 ﹕5﹕1)的上层溶液为展开剂,预平衡15~30分钟,展距10cm,取出,晾干,置 紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱及对照品色谱 相应的位置上,显相同颜色的斑点。

黄芪显微鉴别和薄层色谱法鉴别

黄芪显微鉴别和薄层色谱法鉴别 一黄芪简介 黄芪作为常用的补气中药,其药材为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. var. mongholicus (Bge.)Hsiao 或膜荚黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根。饮片加工方法,除去杂质,大小分开,洗净,润透,切厚片,干燥。晒干。功善补气固表,利尿托毒,排脓,敛疮生肌。用于气虚乏力,食少便溏,中气下陷,久泻脱肛,便血崩漏,表虚自汗,气虚水肿,痈疽难溃,久溃不敛,血虚痿黄,内热消渴;慢性肾炎蛋白尿,糖尿病。 二黄芪显微鉴别 粉末黄白色。纤维成束或散离,壁厚,表面有纵裂纹,初生壁常与次生壁分离,两端常断裂成须状,或较平截。具缘纹孔导管无色或橙黄色,具缘纹孔排列紧密。石细胞少见,类三角形、圆形、长圆形或形状不规则,壁较厚。薄壁细胞中含淀粉粒。木栓细胞表面观类多角形或类方形,垂周壁薄,有的细波状弯曲。 黄 芪 纤 维 束 黄 芪 木 栓 细 胞

黄芪导管 黄芪石细胞 黄芪淀粉粒

三薄层色谱法鉴别 取黄芪粉末2g,加甲醇20ml,加热回流1小时,滤过,滤液加于中性氧化铝柱(100?120目,5g,内径为10?15mm)上,用40 %甲醇100ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水30ml使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g,同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每lml含lmg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,日光下显相同的棕褐色斑点;紫外光灯(365nm)下显相同的橙红色荧光斑点。

牛膝薄层色谱以及显微鉴别

牛膝薄层色谱以及显微鉴别 (一)牛膝简介 牛膝为常用中药。为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根。始载于《神农本草经》。具有补肝肾、强筋骨、散瘀通经、利尿通淋、引血下行的功能。用于腰 膝酸痛、筋骨无力、经闭癓瘕、肝阳眩晕等病症。 牛膝中药饮片呈圆柱形的段。外表皮灰黄色或淡棕色,有微细的纵皱纹及横长皮孔。质硬脆,易折断,受潮变软。切面平坦,淡棕色或棕色,略呈角质样而油润,中心维管束木部较大,黄白色,其外围散有多数黄白色点状维管束,断续排列成2?4 轮。气微,味微甜而稍苦涩。见下图 (二)薄层色谱鉴别 分别取牛膝中药饮片(购自河南、安徽)约1g,剪碎,各加80%甲醇30ml,加热回流3小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水15ml,微热使溶解,加在D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm,柱高为10cm)上,用水100ml洗脱,弃去水液,再用20%乙醇100ml洗脱,弃去洗脱液,继用80%乙醇100ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加80% 甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取牛膝对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl分别点于同一硅胶G 薄层板上,以三氣甲烷-甲醇-水-甲酸(7 : 3 : 0.5 : 0.05)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105°C加热至斑点显色淸晰。置紫外光365nm下供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。见下图

(三)牛膝显微鉴别 牛 膝 薄 壁 细 胞 中 含 有 草 酸 钙 砂 晶

薄层色谱

薄层层析—APC药片的剖析 实 验 报 告 【实验目的】: 1、学习薄层色谱分离的原理 2、掌握薄层色谱分离的操作方法。 3、掌握薄层板制备,点样,展开等操作。 【实验原理】: 色谱法是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不同,让混合物的溶液流经该物质,经过反复的吸附和分配等作用,从而将各组分分开。其中流动的体系叫做流动相。流动相可以是气体,也可以使液体。固定不动的物质成为固定相,固定相可以是固体吸附剂,也可以是液体(吸附在支持剂上)。根据组分在固定相中的作用原理不同,可以分为吸附色谱、分配色谱、

离子交换色谱、排阻色谱等。按操作条件可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气象色谱和高压液相色谱等。流动相的极性小于固定相极性时为正相色谱,而流动相的极性大于固定相的极性时为反相色谱。 薄层色谱常用TLC表示,又称薄层层析,属于固-液吸附色谱。它是将吸附剂(如氧化铝、硅胶等)或支持剂(如纤维素粉、硅藻土等)均匀地涂布在一块玻片上,形成一薄层,把要层析的样品点到薄板上,再用适当的溶剂展开而达到分离和鉴别的方法。 根据原理不同,薄层层析可分为吸附层析和分配层析两类。分配层析是由于样品在支持剂上通过两种溶剂间的反复分配作用而得到分离和鉴别。吸附层析是利用吸附剂对样品所含的不同物质吸附能力不同以及展开剂对被吸附的不同物质溶解力不同,在层析过程中,随着展开剂的展开,薄层上就连续不断地发生溶解、吸附、再溶解,再吸附的现象。被吸附剂吸附较弱的(即在展开剂中易溶解的)成分随展开剂移动较快;而被吸附剂吸附得较强的(即在展开剂中不易溶解的)成分,随展开剂移动较慢,从而得以分离,形成不同的斑点。根据样品中各成分的比移值(Rf值)与已知对照品比较进行定性鉴定。 比移值是薄层色谱法中原点到斑点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值。又称Rf值,是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。在一定的色谱条件下,特定化合物的Rf 值是一个常数,因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。 在显色时,样品展开后,如果本身带有颜色,可以直接看到斑点的位置。对于无色的有机物可以采取以下两种方法显色: (1)显色剂法:常用的显色剂有碘和三氯化铁水溶液等。许多有机化合物能与碘生成棕色或黄色的络合物。利用这一性质,在一密闭的容器中放入几粒碘,将展开并干燥的薄层板放入其中,稍稍加热,让碘升华,当样品与碘蒸气反应后,薄层板上的样品点处即可显示处棕色或黄色的斑点,取出薄层板用铅笔将点圈好即可。除饱和烃和卤代烃外,均可采用此法。三氯化铁水溶液可用于带有酚烃基化合物的显色。 (2)紫外光显色法:用硅胶GF254制成的薄层板,由于加入荧光剂,在254nm 波长的紫外灯下,可观察到暗色斑点,此斑点就是样品点。 薄层层析有许多优点:它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点,同时展开速率快,一般仅需15~20分钟;混合物易分离,分辨力一般比以往的纸层析高10~100倍,它既适用于只有0.01μg的样品分离,又能分离大于500mg 的样品作制备用,而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外,在进行化学反应时,薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的

薄层色谱分析步骤及注意事项

是物理化学分析现对此 通常玻璃 用微量进样器进行点样。点样,先用铅笔在 以免点样斑点过。

③薄层板点样后,应待溶剂挥发完,再放人展开室中展开。 ④展开应密闭,展距一般为8~15cm。薄层板放入展开室时,展开剂不能没过样点。一般情况下,展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。 ⑤展开剂每次展开后,都需要换,不能重复使用。 ⑥展开后的薄层板用适当的方法,使溶剂挥发完全,然后进行检视。 ⑦Rf值一般控制在0.3~0.8,当Rf值很大或很小时,应适当改变流动相的比例。 ⑷斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后,常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分,在用显色剂时,显色剂喷洒要均匀,量要适度。紫外光灯的功率越大,暗室越暗,检出效果就越好。 展开分离后,化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。 注意事项 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀:过稠,板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀,水蒸发后,板表面较粗糙匀浆配比般是硅胶G:水=1:2~3,硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间,根据经验来定,与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断,越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外,也影响板涂层的厚度,进一步影响上样量。涂层薄,点样易过载;涂层厚,显色不那么明显。通常,板的质量对薄层鉴别的影响不是很,影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。 点样 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性,最好只用1微升的点样管。样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。样品溶液的含水量越小越好,样品溶液含水量大,点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 展开剂配制 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗,强烈振摇使混合液充分混匀,放置,如果分层,取用体积大的一层作展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸,振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂,会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求,尽量达到实验室仪器的最高精确度,比如:取1

中国药典2005年版中药薄层色谱鉴别技术

中国药典2005年版中药薄层色谱鉴别技术 中药的真伪优劣直接关系到人民用药的安全和有效。在检验中药真伪方面通常采用的检测手段有形态鉴别、理化鉴别和光谱色谱分析等。而作为色谱技术一个分支的薄层色谱由于其独具的长处而被广泛应用于中药分析。自从《中华人民共和国药典》(1990年版一部)起,薄层色谱鉴别除有化学对照品作为鉴别药材的指标成分对照品以外,鉴于单一化学对照品不能反映药材的整体特征,一些多种植物共存的化学成分没有专属性,以及没有化学对照品鉴别就无法进行的问题,开始增加了“对照药材”,以药材对照品的色谱整体为特征进行对比鉴别,解决了上述存在的问题,并于1993年出版了《中华人民共和国药典1990年版中药薄层色谱彩色图集》,作为中药薄层鉴别的重要参考资料。在该书的第一章中根据多年的实践经验并参考Friedrich Geiss的《Fundamentals of Thin Layer Chromatography (Planar Chromatography)》一书的内容,从实用的角度叙述了薄层色谱实际操作中的各个环节的注意事项,起到了薄层色谱操作规范化的指导作用。但是直至中国药典2000年版,中药薄层色谱鉴别基本是以手工点样、实验室自制薄层板为基础的较为粗放的操作进行试验,由于硅胶材料的质量不高和手工操作的个体差异较大,致使色谱质量仍然不高,分离度、重现性均难以达到满意的效果。尽管自上世纪90年代以来,国外尤其是欧洲国家在薄层色谱技术及相应的仪器开发逐步有了很大发展,目前已经达到单元操作计算机自动化,高质量商品预制薄层板(常规板与高效板)代替了自制薄层板,进入一个高层次的仪器化和微机化的阶段。美国药典、欧洲药典等对草药(植物药)均采用薄层色谱鉴别,并有规范化的要求,以保证结果的专属性和可重现性,这对药典的实施是非常重要的。因而我国药典在中药的薄层色谱鉴别的应用和推广也需要在技术层面有明显的提高。在实验室条件方面。近年来由于政府对药检部门的设备投入的明显加大,致使中药检验的硬件设施也有了很大的提高,这就为进一步提高中药薄层色谱鉴别技术提供了良好的条件。为了进一步提高中药薄层色谱鉴别的技术水平和江别的专属性,并且为了提高实验结果的重现性,并达到国际间可以互通的要求,自2005年版开始,逐渐使用商品预制薄层板,进一步细化操作条件。对供试品溶液的制备、薄层板的活化、点样、展开、显色、色谱图像的拍摄和制作等均有新的规定。现就实验操作技术方面的一些共性问题讨论如下。 实施薄层色谱鉴别时,通常需要注意下列各项问题: 1.样品的预处理.供试品溶液的制备一般用溶剂提取法(液液萃取、加热回流、超声提取等),挥发油可直接用溶剂稀释即可。如样品含有较多的杂质,如鞣质、叶绿素、糖、粘液质等,应该采取适当的预处理将供试品溶液“除杂”,以便获得比较“洁净”的薄层色谱图像。尤其某些成分较为复杂的中药材和一些中药制剂,如人参需经过液液萃取或固液萃取、吸附净化等步骤,目的是减少杂质的干扰,提高色谱的清晰度,从而提高可鉴别性。 2.样品及对照药材取样和供试液及对照药材液制备应量化操作,目的是使样品的色谱与对照药材的色谱更有可比性。 3.定量点样,虽然[鉴别]不能也不应等同于定量测定,但在供试品溶液、对照药材溶液、化学对照品液均定量制备,在薄层板上定量点样,则样品得到的色谱不仅可以回答“有没有”和“是不是”

薄层色谱法检验中药应注意的问题

第9卷第17期·总第121期 2011年09月·上半月刊146 表2 不同运动量对小鼠常压耐缺氧及急性脑缺血缺氧实验的影响 (±s) 组别常压耐缺氧实验小鼠存活时间(min) 急性脑缺血缺氧小鼠张口呼吸时间(min) 空白对照组 54.8±16.1 14.0±1.4 模型对照组 89.0±13.7##—— 尼莫地平组 42.8±15.6** 17.0±0.8# 高运动量组 68.2±12.5* 18.5±3.0# 中运动量组 57.3±30.0 19.0±2.2## 低运动量组 62.5±15.4* 17.25±2.2#注:与空白对照组相比,#P<0.05,##P<0.01;与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01 3 讨论 3.1 不同运动量对亚硝酸钠导致记忆障碍小鼠的潜伏期的影响文献报道,亚硝酸钠一次性腹腔注射是复制小鼠记忆巩固障碍模型很常用的方法[9],大量的亚硝酸钠进入机体后,可以将原来正常的血红蛋白氧化,使其变为高铁血红蛋白,使其失去携氧的能力,引起机体各种组织缺氧[10]。脑组织缺氧,可以引起记忆巩固障碍。不同运动量能显著缩短亚硝酸钠导致记忆障碍小鼠的Morris水迷宫定向游泳实验的潜伏期,说明不同运动量可以改善亚硝酸钠导致记忆障碍小鼠的空间学习记忆能力。 3.2 不同运动量对亚硝酸钠模型小鼠的常压耐缺氧能力的影响将亚硝酸钠模型小鼠放在密闭广口瓶中,使小鼠进一步接受缺氧因素的损害。注射亚硝酸钠本身已经造成机体的组织缺氧,所以模型组小鼠对缺氧会产生适应现象,对缺氧已经有了较强的耐受力,所以放入广口瓶中的模型组小鼠存活时间较长;而尼莫地平与不同运动量均能对抗亚硝酸钠引起的缺氧作用,所以这些小鼠没有提前适应缺氧现象,不能耐受密闭缺氧,所以存活时间较短。 3.3 不同运动量对小鼠的耳廓微循环及耐急性缺血性缺氧能力的影响脑组织的供血供氧不足会导致神经细胞生化代谢过程下降,进而可引起脑老化、甚至导致痴呆,国内外已有相关报道[11]。本实验表明,不同运动量均能增大微动脉的管径,增加微动、微静脉的血流速度,所以能改善脑部血管微循环、增加脑部血流流量,延长小鼠断头张口呼吸持续时间,提高小鼠空间学习记忆能力。 由上可见,不同运动量能提高亚硝酸钠导致记忆障碍小鼠的学习记忆能力,对老年痴呆的学习记忆障碍症状有一定的改善作用,其作用机制可能与其扩张微动脉血管管径、改善微循环,增加脑血流量及提高机体耐缺氧能力有关。 参考文献 [1] Takako Kizaki, Tohru Takemasa, Takuya Sakurai, et al. Adaptation of macrophages to exercise training improves innate immunity[J]. Biochem. Biophys. Res. Commun.[J]. 2008,372(1):152-156. [2] Marina Bar-Shai, Eli Carmeli, Predrag Ljubuncic, et al. Exercise and immobilization in aging animals: The involvement of oxidative stress and NF-κB activation[J]. Free Radi.Bio.Med,2008,42(2):202-214. [3] 马尚峰,胡昔权,宿宝贵,等.运动训练对局灶性脑梗死大鼠神经功能、细胞 超微结构及突触小泡蛋白表达的影响[J].暨南大学学报(医学版),2007, 28(6):566-571. [4] 赵燕燕,刘新霞,陈春生,等.运动训练对老年痴呆小鼠的改善作用[J].中国 老年学杂志,2010,30(7):931-934. [5] HojjatAllah Alaei,RohAllah Moloudi,Ali Reza.Sarkaki.Effects of treadmill running on mid-term memory and swim speed in the rat with Morris water maze test[J].Brain Res.2008,12(1):72-75. [6] 赵燕燕,陈春生,刘新霞,等.运动训练对亚硝酸钠致记忆障碍模型小鼠学 习记忆能力的影响[J].中国老年学杂志,2009,24(2):110-112. [7] 孙淑华,王艳蓉,孟金萍,等.调内消癖丸对小鼠耳廓微循环的影响[J].中国 比较医学杂志,2007,17(1):36-38. [8] 刘新霞,赵燕燕,陈春生,等.不同运动量对小鼠微循环及耐缺氧能力的影 响[J].中国康复医学杂志,2008,23(9):786-789. [9] 刘新霞,纪雪飞,陆玲玲,等.文冠果果壳乙醇提取物对大鼠学习记忆障碍 的改善作用[J].中草药,2007,38(12):1859-1863. [10] 李淑娟,张力,张丹参,等.大黄酚抗衰老作用的实验研究[J].中国老年学 杂志.2005;25(11):1362-1364. [11] Erislav V, Zlokovic. Neurovascular mechanisms of Alzheimer’ s neurodegeneration[J]. TRENDS in Neuro,2005,28(4):202-208. (本文校对:裴蓓收稿日期:2011-07-12) 薄层色谱法检验中药应注意的问题 单红艳 摘要:自从有人类历史以来,中药一直是人类防病治病的主要来源。中药材质量的优劣,直接影响中成药的质量和疗效,从而直接关系到人民的用药安全有效和质量控制。薄层色谱法是鉴别中药的主要方法之一。现就该方法在检验中药的过程中应注意的问题进行了总结。 关键词:薄层色谱法;中药检验;药品鉴别 doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2011.17.104 文章编号:1672-2779(2011)-17-0146-02 中药是我国优秀传统文化的瑰宝,是我国医疗卫生保健事业中重要的保障力量。中药材质量的优劣,直接影响中成药的质量和疗效,从而直接关系到人民的用药安全有效和质量控制。 作者单位:河南省鹤壁市食品药品检验所(鹤壁458030) 薄层色谱鉴别的方法,是中药真实性鉴别的重要手段之一,具有快速、直观、信息量大的特点,能够从一个方面反映中药材的质量,控制中药材的质量。薄层色谱法系指将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描

防风显微及薄层色谱鉴别

防风显微鉴别及薄层色谱鉴别 一防风 防风,中药名,为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.)Schischk.的干燥根。功效祛风解表,胜湿止痛,止痉。用于感冒头痛,风湿痹痛,风疹瘙痒,破伤风等。防风性状及横切面见下图 二防风药材的横切面 1、木栓层 2、裂隙 3、韧皮部 4、形成层 5、导管 6、油管 7、射线 三防风粉末显微鉴别 粉末淡棕色。①油管多见,充满金黄色分泌物。②叶基维管束常

伴有纤维束。③网纹导管。④石细胞少见,黄绿色,长圆形或类长方形,壁较厚。⑤木栓细胞表面观多角形或类方形;断面观呈方形,微波状弯曲,有的呈短条状增厚。见下图 油 管 叶 基 维 管 束

纤维束 石细胞 导管

三 防风薄层色谱法鉴别 分别取防风(1号、2号)各1g ,各加70%乙醇30ml ,回流30分钟,过滤,蒸至无醇味,加水10ml 使完全溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml ,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的2%氢氧化钠液洗涤2次,每次20ml ,再用正丁醇饱和的水20ml 洗涤一次,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml 溶解,即得。另取防风对照药材(批号120947-201108)1g ,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验,吸取上述三种溶液各5μl , 木栓细胞断面观 木 栓细胞表面观

分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。见下图

薄层色谱法鉴定丹皮酚

来自中国药典2005一部 牡丹皮 拼音名:Mudanpi 英文名:CORTEX MOUTAN 书页号:2005年版一部-119 本品为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。秋季采挖根部,除去细根和泥沙,剥取根皮,晒干。 【性状】本品呈筒状或半筒状,有纵剖开的裂缝,略向内卷曲或张开,长 5~20cm,直径0.5~1.2cm,厚0.1~0.4cm。外表面灰褐色或黄褐色,有多数横长 皮孔样突起及细根痕,栓皮脱落处粉红色;内表面淡灰黄色或浅棕色,有明显 的细纵纹,常见发亮的结晶。质硬而脆,易折断,断面较平坦,淡粉红色,粉 性。气芳香,味微苦而涩。 【鉴别】(1) 本品粉末淡红棕色。淀粉粒甚多,单粒类圆形或多角形,直 径3~16μm,脐点点状、裂缝状或飞鸟状;复粒由2~6 分粒组成。草酸钙簇晶 直径9~45μm,有时含晶细胞连接,簇晶排列成行,或一个细胞含数个簇晶。 木栓细胞长方形,壁稍厚,浅红色。 (2) 取本品粉末1g,加乙醚10ml,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液挥干,残渣加丙铜2ml使溶解,作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1ml 含 5mg 的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述两 种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(3:1) 为展 开剂,展开,取出,晾干,喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点 显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝褐色斑 点。 【检查】水分照水分测定法(附录ⅨH第二法)测定,不得过13.0%。 总灰分不得过5.0%(附录ⅨK)。 酸不溶性灰分不得过1.0%(附录IX K)。 【浸出物】照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法(附录X A)测定,用乙醇作溶剂,不得少于15.0%。 【含量测定】照高效液相色谱法(附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(45:55)为流动相;检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低 于5000。 对照品溶液的制备精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1ml含20μg 的 溶液,即得。 供试品溶液的制备取本品粗粉约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加 入甲醇50ml,密塞,摇匀,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)30分钟, 放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液1ml, 量10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

薄层色谱法验证方案

白术薄层鉴别方法验证方案 一、试液的配制 1、重现性取相同的供试品、对照药材溶液,由两名检验员同时做,做薄层鉴别实验,由色谱图实验结果,验证其重现性。 2、专属性取相同的供试品、对照药材溶液,利用正己烷试剂作为空白溶液,做薄层鉴别实验,由薄层色谱图结果,验证其专属性。 3、耐用性按1、2方法下做薄层色谱实验,分别点样于青岛海洋化工厂分厂、烟台大学生物科技与工程研究所制备的硅胶G 薄层板,由薄层色谱图结果,验证其耐用性。

一、试液的配制 1、重现性取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液,由两名检验员同时做,做薄层鉴别实验,由色谱图实验结果,验证其重现性。 2、专属性取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液,利用丙酮试剂作为空白溶液,做薄层鉴别实验,由薄层色谱图结果,验证其专属性。 3、耐用性按1、2方法下做薄层色谱实验,分别点样于青岛海洋化工厂分厂、烟台大学生物科技与工程研究所制备的硅胶G 薄层板,由薄层色谱图结果,验证其耐用性。

一、试液的配制 1、重现性取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液,由两名检验员同时做,做薄层鉴别实验,由色谱图实验结果,验证其重现性。 2、专属性取相同的供试品、对照药材溶液、对照品溶液,利用三氯甲烷试剂作为空白溶液,做薄层鉴别实验,由薄层色谱图结果,验证其专属性。 3、耐用性按1、2方法下做薄层色谱实验,分别点样于青岛海洋化工厂分厂、烟台大学生物科技与工程研究所制备的硅胶G 薄层板,由薄层色谱图结果,验证其耐用性。

HPLC法测五味子中五味子醇甲方法验证方案 一、标准曲线的制定利用已知纯度的对照品溶液,设计5个不同浓度,每个浓度制定一份供试品溶液,进行测定,以峰面积作为Y轴,浓度为X轴,并进行线性回归,得出回归方程,得出相关系数r。 二、方法的验证 1、准确度的测定用已知浓度的对照品溶液,利用加样回收率实验的方法,制备不同浓度的溶液6份,计算回收率的大小,并计算出RSD的大小。 2、精密度的测定取一批原药材,分别制成6份溶液,测定峰面积,计算平均值,并计算出RSD大小。 3、专属性采用纯甲醇试剂作为空白样品,连续进样三针,有色谱图结果,考察是否有干扰。 4、检验结果考察取一批原药材,分别制成3份溶液,分别进样一针,并计算出结果,确定方法的可靠性。

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