搜档网
当前位置:搜档网 › 对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价

对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价

对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价
对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价

对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价

温晓峥,谢仲丽

(广安市人民医院检验科,四川广安638001)

[摘要] 目的:评价科玛嘉念珠菌显色培养基的效果,采用该培养基鉴定48株临床分离的酵母菌,并与AP I20C A UX鉴定结果作比较。结果:48株酵母菌总的鉴定符合率为79 2%,白色念珠菌为93 1%,光滑念珠菌为76 9%,热带念珠菌为33 3%。结论:科玛嘉念珠菌显色培养基可基本满足临床对酵母菌鉴定的需要,且价格适中,需时较短,宜于在基层推广使用。

[关键词] 酵母菌;鉴定;科玛嘉念珠菌显色培养基

[中图分类号]R446 5 [文献标识码]A [文章编号]1003-403X(2000)04-0253-02

酵母样真菌已成为临床及细菌学实验室高度重视的一类病原菌。由于不同菌种对抗真菌药物的敏感性不同,所以对临床分离株鉴定到种,对于临床用药的选择具有重要价值。但传统鉴定方法繁琐而自动化鉴定系统昂贵,在临床的应用均很受限,因此快速鉴定的推广应用显得尤为重要。本文采用郑州博赛科技有限责任公司生产的科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定法对临床分离的48株酵母菌进行鉴定,并与生物梅里埃API 20C AU X试纸条鉴定结果相比较,现报告如下。

1 材料与方法

1 1 菌株来源

从324份痰、尿、分泌物、腹水等临床标本中分离的48株酵母样真菌。

1 2 菌种分离鉴定

按常规方法根据标本直接接种或增菌后接种沙氏琼脂和科玛嘉念珠菌显色培养基(显色基),28 培养24小时后挑取可疑菌落作革兰染色,确定为念珠菌后作进一步鉴定:按说明接种API20C AUX试条,30 培养24h、48h、72h后读取结果,使用APILAB Plus软件鉴定到种;在显色基上生长的翠绿色菌落为白色念珠菌,兰灰色菌落为热带念珠菌,粉红色菌落边缘模糊有微毛的为克柔氏念珠菌,紫红色菌落为光滑念珠菌,乳白色菌落为其它念珠菌。

2 结果

2 1 显色基的分离效果

本文的48株酵母菌在沙氏琼脂和显色基上均能生长,二者对杂菌的抑制率一致。

2 2 显色基的鉴定效果

经显色基鉴定为白色念珠菌的29株中,有27株与API鉴定结果一致,其它2株分别为光滑念珠菌和土生念珠菌;经显色基鉴定为光滑念珠菌的13株中,有10株与API一致,其余3株分别为2株酿酒酵母菌、1株无名念珠菌;显色基鉴定的3株热带念珠菌,仅有1株与API相符,另2株为土生念珠菌和无名念珠菌;此外,尚有3株菌显色基无法鉴定,经API鉴定为2株无名念珠菌和1株土生念珠菌。

3 讨论

酵母菌生长较慢,传统的鉴定方法繁琐、需时较长且准确率不高,而采用YBC鉴定卡或API试纸条等自动或半自动的方法进行鉴定虽然能将菌鉴定到种,但价格昂贵,不适宜中小医院。

科玛嘉念珠菌显色培养基中含有多种底物,可分别与白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌的不同酶类作用,呈现不同的颜色反应,从而达到在分离菌株的同时进行鉴定[1]。这一过程需时约24~ 48h,可比传统鉴定法和API试纸条法提前1~3天出报告,这对于及时给临床提供治疗依据具有重要意义。该培养基制备简单,使用易于掌握,价格较为适中,适合在基层单位推广。

通过科玛嘉念珠菌显色基可鉴定的白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌是目前临床真菌感染的主要病原菌,占95%以上[2],根据我们目前的应用情况,该培养基对前三种菌的总鉴定率达到84 4%,对白色念珠菌的鉴定率更达到93 1%,所以使用该培养基对临床疑真菌感染标本进行分离鉴定,基本可满足需要。由于热带念珠菌分离株数过少,克柔念珠菌未分离出,所以对这两种菌株的鉴定效果尚需进一步观察总结。科玛嘉念珠菌显色培养基的另一优点是可方便地发现真菌的混合感染(本文的一株白

253

心肌肌钙蛋白!在非梗死性心脏病实验诊断中的应用

饶绍琴1,兰大丽1,传良敏1,陈大义2

(1.四川省人民医院,四川成都610072;2.四川省卫生管理干部学院,四川成都610041)

[摘要] 目的:评价肌钙蛋白!对几种非梗死性心脏病的临床诊断价值。方法:采集86例不稳定性心胶痛(U A)、62例风湿性心脏病(RHD)和64例急性心肌炎(AM)患者的同一血样本,同时检测心肌肌钙蛋白(CT nI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-M B),进行了组间比较,并分别对U A组和RHD组、AM组间差异作对比分析。结果:CT nI阳性率在UA 组均显著高于RHD组和AM组(P<0.01)。结论:CT nI对UA的早期诊断,降低心肌梗死或猝死的发生有重要价值。

[关键词] 肌钙蛋白!;不稳定心绞痛;风湿性心脏病;

[中图分类号]R446.1 [文献标识码]A [文章编号]1003-403X(2000)04-0254-02

急性心肌炎、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶早在1979年[1]心电图和心肌酶学的变化就作为心肌损伤诊断的主要指标,现已被临床广泛采用。近年来的研究报道肌钙蛋白(TnI)是来源于心肌组织,对心肌损伤高度特异[2],并作为急性心肌梗死的特异性指标之一。为了解肌钙蛋白(TnI)对非梗死性心脏疾病的诊断价值,我们对212例非梗死性心脏疾病患者做了肌钙蛋白!(T nI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK -MB)检测,对TnI在非梗死性心脏疾病的临床诊断意义进行了探讨。

1 材料与方法

1 1 检测对象

不稳定心绞痛(UA)组86例,其中男48例,女38例,年龄31-89岁,平均59岁,诊断标准按美国AH CPR临床指南(1994),所有患者均无急性心肌梗死(AM I)的典型临床表现及特征性动态演变的心电图改变。风湿性心脏病(RHD)62例,其中男32例,女30例,年龄18-57岁,平均37岁,诊断按琼斯标准,由超声心动图证实。急性心肌炎(AM)组64例,男35例,女29例,年龄21-57岁,平均42岁,AM诊断,按照全国心肌炎心肌病专题座谈会拟定的标准。

1 2 方法

肌钙蛋白I测定:采用美国Bioseed公司T nI固相层析免疫分析试剂作快速定性检测。样本为130 l血清或血浆,用定量加样器加入试剂样品孔中,15分钟读取结果,以测定区出现紫红色色带为阳性。阳性判断的临界值为0.2 g/L。肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-M B)采用美国Beckm an公司原装试剂,用Beckman?cx4全自动生化分析仪检测,参考值分别为140U/L及8.5U/L。

1 3 标本采集

静脉采血3ml及时分离血清,进行上述项目测定,如不能及时测定则分离血清放置-20 冰箱保存,4 冰箱溶化后分析测定。

1 4 统计方法

计数资料的显著性检验采用 2检验,数据用均数#标准差( x#s)表示,其显著性检验采用t检验。

2 结果

2 1 三组病人的TnI、CK、CK-M B检测结果,见表1。资料显示UA组TnI阳性率明显高于RH D组及AM组(P<0.01)。UA组的CK及CK-M B值与RH D组和AM组比较,未见显著性差异(P>0.05)。值得提出的是在发病72h后,9例UA患者TnI阳性,但CK值未超过正常参考值上限140.0U/L,仅有1例CK-M B超过正常参考值上限8.6U/L。

白念珠菌和一株土生念珠菌就分自同一痰标本),这是传统方法和自动化鉴定都不及的。

一些阴性杆菌能在科马嘉念珠菌显色基上生长并呈色,如大肠埃希菌显紫红色,但菌落直径12mm,较湿润,与酵母菌菌落有明显区别。

[参考文献][1] 张军民,周贵民 临床细菌检验快速方法应用进展[J].中华医学

检验杂志,1998;21?325.

[2] Pfaller M A,Houston A,Coffman S,et al.Appli cati on of CHROM a

gar Candi da for rapid S creening of clinical specimens for Candida albi cans,Candida krusei and Can dida(Torulopsis)glabrata[J].J Clin M i cro,1996;34?58.

(2000-08-29收稿)

254

科玛嘉念珠菌显色培养基使用说明

念珠菌显色培养基使用说明书 此培养基用于分离和鉴定主要的念珠菌。 【组分】 蛋白胨:10.2g/L 琼脂:15g/L 色素:22g/L 氯霉素:0.5g/L pH :6.1±0.2 【操作】 1、取瓶内干粉,用1000ml蒸馏水或纯水溶解,可按47.7g/L的比例扩大或缩小。 2、将上述干粉缓慢倒入蒸馏水或纯水中,搅拌溶解。 3、将混合好的培养基加热至100℃,并按常规不断搅拌。如果用高压灭菌器,不加压,加 热不超过100℃。混合物也可以在微波炉内加热,用此法加热,煮沸后,混合物立即移出微波炉并轻轻搅拌,而后再移入微波炉加热,直至琼脂等完全溶解(大量大气泡代替泡沫产生,大约需要2分钟)。 4、加热后的培养基水浴冷却至45℃,轻轻地摇动均匀,倾入已灭菌的带盖的培养皿中 (90mm的15ml/皿,70mm的10ml/ 皿),使其凝固。此培养基在室温可保存一天或冰箱内贮存数天(避光,2-8℃)。 5、划线或涂布接种(冰箱内保存的应回复至室温),在25-30℃培养48小时。 【结果】 初筛念珠菌属菌落色彩 白色念珠菌 热带念珠菌 克柔氏见丝酵母菌光滑念珠菌 其他念珠菌绿色、翠绿色(直径约2mm)蓝灰色、铁蓝色(直径约1.5mm)粉红色(模糊有微毛菌落较大)(直径约4~5mm)紫色(直径约2mm)白色 【参考文献】 1、Odds,F.C.and R.Bernacts.J.Clin.Microbiol.1994;32:1923 2、Beighton.D.et al.J.Clin.microbiol.1995;33:3025 3、Pfalier,M.A.et al.J.Clin.microbiol.1996;34:58 4、E T S Houangg.et al.J.Clin.Pathol,1997;50:563 CHROM agar公司中国区特约经销商:北京赛为思生物技术开发中心

白色念珠菌

白色念珠菌 白色念珠菌 白假丝酵母菌(candida Albicans)又称白色念珠菌,广泛存在于自然界,也存在于正常人口腔,上呼吸道,肠道及阴道,一般在正常机体中数量少,不引起疾病。为条件致病性真菌。 假丝酵母菌俗称念珠菌,有81个种,其中有11种对人有致病性:白假丝酵母菌、为最常见的致病菌。此外,热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引起疾病。 编辑本段生存年代 类似的菌类化石在世界各地的前寒武纪岩石中都有发现。 编辑本段生存环境 念珠菌对热的抵抗力不强,加热至60℃1小时后即可死亡。但对干燥、日光、紫外线及化学制剂等抵抗力较强。在假丝酵母菌中80%~90%病原体为白假丝酵母菌10%~20%为光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌热带假丝酵母菌等。白假丝酵母菌为条件致病菌,10%~20%非孕妇女及30%孕妇阴道中有此菌寄生但菌量极少,呈酵母相,并不引起症状。念珠菌生长最适宜的pH值为5.5,阴道的弱酸性环境能保持阴道的自洁功能,正常人为3.7-4.5,但阴道的弱酸性改变为pH5.5后,假丝酵母菌大量繁殖,并转变为菌丝相鵻,才引发阴道炎症状。因此用Ph4弱酸配方的女性护理液除了适合日常的清洁保养外,治病期间使用娇妍弱酸配方的女性护理液对霉菌的生长繁殖会有抑制作用。 编辑本段白色念珠菌在DYMD系统的位置 临床真菌按其所致疾病的症状和体征进行分类,DYMD系统(皮肤真菌、酵母菌、真菌)这一分类模式已得到公认,是以组织发生学、生理学及形态学特征为基础,将真菌分类为类酵母菌和丝状真菌,又进一步按其组织亲和性分别将它们分为皮肤真菌和真菌。

对妇产科医生来说,不同种类的真菌医学相关性大不相同,迄今未发现由真菌引起的妇科疾患,由皮肤真菌引起的外阴及其周围的皮肤感染也极少见。妇产科临床所见的真菌感染大多为白假丝酵母菌属的酵母菌所致。 阴道内定居的酵母菌有白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、蔷薇色假丝酵母菌、酿酒假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、季以蒙假丝酵母菌等。引起人类假丝酵母菌病主要是白假丝酵母菌,占80%~90%,已鉴别有200多种白色假丝酵母菌,所有菌株似乎均具有寄居或引起阴道炎的同等能力。随着时代的变迁,假丝酵母菌耐药的增加,其菌种发生改变,白假丝酵母菌在外阴阴道炎中的比例有所下降,而其他假丝酵母菌所致的外阴阴道炎增加。所以,妇产科学中原称的白假丝酵母菌外阴阴道炎似太绝对和肯定,目前称为假丝酵母菌外阴阴道炎为宜,但菌种仍以白假丝酵母菌为主。 编辑本段特征 本菌细胞呈圆形或卵圆形,很象酵母菌,直径3~6μm,比葡萄球菌大5~6倍,革兰阳性,但着色不均匀。出芽方式繁殖。在病灶材料中常见真菌细胞出芽生成假菌丝,假菌丝长短不一,并不分 白色念珠菌 枝,假菌丝收缩断裂又成为芽生的菌细。 此菌正常情况下呈卵圆形,白假丝酵母菌与机体处于共生状态,不引起疾病。当某些因素破坏这种平衡状态,白假丝酵母菌由酵母相转为菌丝相,在局部大量生长繁殖,引起皮肤、黏膜甚至全身性的假丝酵母菌病。当机体的正常防御功能受损导致内源性感染,如创伤、抗生素应用及细胞毒药物使用致菌群失调或黏膜屏障功能改变、皮质激素应用、营养失调、免疫功能缺陷等。白假丝酵母菌为双相菌,正常情况下一般为酵母相,致病时转化为菌丝相。因此在细胞涂片或组织切片中发现假菌丝是假丝酵母菌感染的重要证据。 编辑本段致病机制的毒力因素 感染及致病机理

3种酵母样真菌鉴定方法的比较

1 进修生 收稿日期:2001-04-103种酵母样真菌鉴定方法的比较农生洲 韦柳宏1 陈松峰 (广西壮族自治区人民医院检验科 南宁 530021) 为综合评价目前我国实验室常规手工发酵鉴定法(常规法)、生物梅里埃A T B Fug us卡鉴定法(仪器法)和近年国内开始应用的科玛嘉(CHRo M ag ar)酵母样真菌显色培养基鉴定法(显色法)等3种酵母样真菌鉴定方法的优劣。我们同时用这3种方法对实验室保存的122株酵母样真菌标准菌株进行了鉴定比较,报道如下。 1 材料与方法 1.1 菌株来源:122株实验菌为实验室历年保存的标准菌株,其中白假丝酵母菌53株,热带假丝酵母菌31株,光滑球假丝酵母菌18株,近平滑假丝酵母菌11株,克柔氏假丝酵母菌3株,季也蒙假丝酵母菌、葡萄牙假丝酵母菌各2株,粘红假丝酵母菌、酿酒假丝酵母菌各1株。 1.2 试剂:沙氏培养基和各种手工用发酵管均购自杭州天和微生物试剂公司;Fug us卡及其配套仪器A T B Ex pressio n 为法国生物梅里埃公司产品;显色培养基则购自郑州搏赛科技有限责任公司。 1.3 鉴定方法:常规法鉴定按卫生部医政司颁发的《全国临床检验操作规程》进行;Fug us卡法按配套的操作手册取菌制成悬液,加样后置37℃培养24h后上机鉴定;显色法则取F ugus卡法剩余的悬液直接接种于显色培养基制成的平板上,置37℃培养,每隔24h观察一次结果,据菌落颜色进行判定;翠绿色为白假丝酵母菌,兰灰色为热带假丝酵母菌,紫红色边缘模糊有微毛为克柔氏假丝酵母菌菌,整个菌落湿润且紫红色为光滑球假丝酵母菌,白色为其它假丝酵母菌。 2 结 果 2.1 培养鉴定耗时:常规法和仪器法需预先用沙氏培养基培养出真菌,平均耗时大约72h,再加上鉴定耗时又分别平均约需72h和24h,常规法培养鉴定总共平均约需6d,仪器法约需4d;显色法集培养与鉴定于一体,耗时平均约需4 d。 2.2 鉴定结果:122株酵母样真菌的鉴定中,三法对53株白假丝酵母菌鉴定全部正确。其它69株菌中,常规法有11株无法鉴定到种,占总株数9.0%(11/122)。此外有5株热带假丝酵母菌鉴定错误,3株错定为光滑球假丝酵母菌,2株错定为近平滑假丝酵母菌。有3株光滑球假丝酵母菌鉴定错误,1株误定为热带假丝酵母菌,2株误定为近平滑假丝酵母菌。有2株近平滑假丝酵母菌鉴定错误,1株误为热带假丝酵母菌,1株误为光滑球假丝酵母菌。除无法鉴定到种的11株菌后,鉴定错误率仍有9.0%(10/111);显色法对白假丝酵母菌等该法能鉴定的6种酵母样真菌鉴定准确率达100%,其它菌株却无法鉴定到种,占总株数4.1%(5/122); F ugus卡法全部菌株均可鉴定到种,且准确率达100%。详见表1。 表1 122株酵母菌样真菌3种方法鉴定结果比较(株) 菌名菌株数常规法显色法仪器法 白假丝酵母菌 53 53 53 53 热带假丝酵母菌31273131 光滑球假丝酵母菌18171818 近平滑假丝酵母菌11111111 克柔氏假丝酵母菌3133 粘红假丝酵母菌1111 季也蒙假丝酵母菌2102 葡萄牙假丝酵母菌2002 酿酒假丝酵母菌1001 2.3 成本核算:常规法鉴定每一株菌平均约需10元,仪器法平均约需50元,显色法平均约需15元。 3 讨 论 当前酵母样真菌引起的临床感染正呈逐步增加之势,临床医师急需实验室准确快速地检出病原体以协助诊治[1]。纵观本试验结果,加上预先真菌培养时间常规法鉴定耗时总共需要至少6d左右,且操作繁琐,生化结果判定较困难,即使是标准菌株,结果仍极易出错。而如F ugus卡等仪器测试卡法,虽然鉴定耗时较短,操作也简便,鉴定结果准确率又高且可配套进行体外药敏试验,但因仪器和试卡均为进口产品,价格昂贵,只适合在有大量标本的大型综合性医院应用。从本研究可看出,显色法培养加鉴定耗时平均仅需48h,与应用仪器法耗时基本相等,且培养基制备方便,价格适中,结果判定简便快速准确,虽然有一部分菌株无法鉴定到种,但已能鉴定出目前临床感染95%以上的3~4种酵母样真菌感染[2],故不失为一种替代常规法在中小医院普及开展的酵母样真菌检验方法。 参 考 文 献 1 周贵民,谢 灵.国内酵母菌感染和实验室诊断的现状及建议.中华医学检验杂志,1996,19(5):301-303. 2Pfaller M A,Housto n A,Co ffman S.A pplicatio n of CHR OM ag ar Ca ndida for r apid scr eening o f clinical specimens for Candida A lbicans,Candida tro picalis, Candida K rusei,and Candida(T or ulopsis)glabrata.J Clin M icr o bilo l,1996,34(1):58-61. ? 764?广西医科大学学报 JOURNA L OF GU ANGXI M EDICAL UNIVERSIT Y  2002Oct;19(5)

细菌真菌放线菌培养基配方

。 细菌培养基:肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的一. 培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。 肉膏蛋白胨培养基 1.药品比例: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,琼脂15~20g,水1000mL, PH7.4~7.6 2.实验器材: 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡

萄糖、孟加拉红、链霉素、 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO、NaCl、K HPO·3HO、MgSO·7HO、222434 FeSO·7HO、4.5mL 无菌水6 管,10%酚液,49.5mL 无菌水( 带玻璃珠)124 瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3.配置方法 (1)称药品:按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量,用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。 (2)加热溶解:在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至.

所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中, 再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补 足所失的水分。 (3)调pH:检测培养基的pH,若pH 偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH 范围。若偏碱,则用lmol/L HCl 进行调节。pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 (4)过滤:液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4 层纱 布趁热过滤,以利培养的观察。但是供一般

沙门氏菌快速检测方法

沙门氏菌快速检测方法 1试剂与仪器 1.1所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2仪器:分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3所用试剂和培养基 1.3.1缓冲蛋白胨水(BPW)培养基 称取BPW培养基20.1g,加入蒸馏水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,以90mL/瓶分装到各锥形瓶,并于121℃灭菌15min,冷至常温。 1.3.2四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液 取TTB增菌液基础93.6g,加入蒸馏水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于锥形瓶中,每瓶100mL。 将锥形瓶放入灭菌锅中,121℃灭菌20min;冷至30℃,每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支(开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面),混合均匀。 2、操作步骤 2.1配制BPW培养基(第一天) 2.2培养基冷却至室温后,对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min 后使用。(第一天) 2.3预增菌(第一天) 称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶,并及时盖上盖子,150rpm下振荡10min,于36℃±1℃培养18h左右。 2.4配制TTB增菌液(第一天) 2.5增菌(第二天) 2.5.1接种和培养 轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于9mLTTB增菌液内,于42℃±1℃培养18h~24h。 2.5.2培养现象 菌名菌号生长状况 TTB培养特征 静置后浑浊CMCC(B)50071 伤寒沙门氏菌良好 静置后浑浊良好鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 静置后清亮不生长大肠埃希氏菌 ATCC25922

显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用

显色培养基在几种食源性致病菌快速检测中的应用 显色培养基是一种鉴定微生物的快速检测技术,它的原理是通过在培养基中加入微生物自身代谢生产的酶,根据相应显色底物反应的颜色对菌种进行判断与鉴定。显色培养基较传统培养基具有灵敏度高、特异性大的优点,是一种新型的分离培养。大肠杆菌显色培养基、沙门氏菌培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等这几种食源性致病菌已经有效、广泛应用于食品、环境卫生、医药等领域,取得了一定的成效。但显色培养基尚还存在一些假阳(阴)等问题,这就影响了检测的结果,因此还需要进一步的研究。 标签:显色培养基;食源性致病菌;快速检测;应用 随着人们生活水平逐渐的提高和近年来一系列食品安全问题的出现,食品的安全问题越来越受到人们的重视。食品安全问题与微生物密切相关,微生物可造成食品环境的污染,因此,微生物的检测技术已经成为检测食品安全问题的重要工具。微生物传统的检测方法耗时长,操作步骤繁琐,已经不能满足当今食品、环境卫生、医药等领域检测的需要。研究各种新型微生物的检测技术,提高检测的效率是有效预防和控制各种微生物感染的有效措施[1]。本文就显色培养基在大肠杆菌显色培养基、沙门氏菌培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等食源性致病菌快速检测中的应用进行研究总结。显色培养基的原理是通过在培养基上加入微生物自身代谢产生的酶的底物,底物是由发色基团和微生物可代谢物质组成,为无色,但在特异性酶作用下游离出发色基团并显示一定颜色,直接观察菌落颜色,对菌种做出鉴定,减少了对菌株进行纯培养和进一步生化鉴定的步骤[2]。 1 几种食源性致病菌应用显色培养基快速检测的近况 1.1 显色培养基在大肠杆菌应用的研究研究表明,绝大多数的大肠杆菌具有β-D-葡萄糖苷酸酶(β-D-Gud),利用β-葡萄糖醛酸酶分解底物,使色源游离出来显色而区分大肠杆菌和其它的细菌。沙门菌、志贺氏菌和耶尔森氏菌不能产生β-D-Gud,因此可以利用β-D-Gud底物有效检测大肠杆菌。底物被β-D-Gud 水解后产生显色物质使菌落呈现特殊的蓝色或黄色。显色酶的底物通常是苯酚的衍生物,如有o (p)-硝基酚、p-硝基苯酚、羟基吲哚、5-溴- 4-氯- 3-吲哚、5-溴-6-氯-3-吲哚、6-氯-3-吲哚、N-甲基吲哚、5-碘-3-吲哚等的化合物[3]。 1.2 显色培养基在沙门氏菌应用的研究沙门氏菌是一类重要的食源性致病菌,它能够产生辛酯酶,除沙雷氏菌属外,其它各属细菌不具备这一功能,因此可以鉴别沙门氏菌属和其它肠菌科细菌。根据这一原理,以丙烯乙二醇和5-溴-4-氯-3-吲哚-B-D半乳糖吡喃糖苷酸(X-GAL)为底物来检测沙门氏菌,沙门氏菌能水解乙二醇产酸,但不能水解X-GAL,在培养基上产生特殊的红色菌落。这种显色方法具有敏感性高、特异性高的特点,操作步骤较为简单、检测效率高[4]。 1.3 显色培养基在金黄色葡萄球菌应用的研究金黄色葡萄球菌是食源性致

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 2 2 2 2 摘要:本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术,了解沙门氏菌的一些生化特性;本实验先用显色培养基找出可疑菌落,再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌,再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词:沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一,其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称,泛指 2000 多种有紧密连系的细菌,包括引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病,但是,在世界范围内的细菌性食物中毒事件中,由沙门氏菌引起的占大多数。因此,采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌,已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1仪器设备 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃ 吸管:1 mL(具 0.01 mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度或微量移液器及吸头

电子天平PL602-S,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司; 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B,上海申安医疗器械厂 1.1.2试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3培养基 蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋(BS)琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷(ONPG)培养基 1.2 实验方法 1.2.1培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤 蛋白胨水(BPW):称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约 10 min,煮沸溶解,调节 pH,高压灭菌 121 ℃,15 min。分装10瓶,每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿(TTB):高压灭菌 121 ℃,15 min灭菌冷却后至30℃,每100ml 基础培养液加碘液2ml,煌绿液1ml 1.2.1.2配制培养基的注意事项 (1)按照说明书上的用量进行换算,称取准确分量的合成培养基粉末; (2)加热煮沸溶解培养基时,留意锅内水位的变化,水位下降可再添加适量的水,以免水分蒸发过多,导致后面分装不够量; (3)往试管中放小导管时,注意处理气泡。 1.2.2 沙门氏菌群检测 1.2.2.1沙门氏菌检测程序

对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价

对科玛嘉念珠菌显色培养基效果的评价 温晓峥,谢仲丽 (广安市人民医院检验科,四川广安638001) [摘要] 目的:评价科玛嘉念珠菌显色培养基的效果,采用该培养基鉴定48株临床分离的酵母菌,并与AP I20C A UX鉴定结果作比较。结果:48株酵母菌总的鉴定符合率为79 2%,白色念珠菌为93 1%,光滑念珠菌为76 9%,热带念珠菌为33 3%。结论:科玛嘉念珠菌显色培养基可基本满足临床对酵母菌鉴定的需要,且价格适中,需时较短,宜于在基层推广使用。 [关键词] 酵母菌;鉴定;科玛嘉念珠菌显色培养基 [中图分类号]R446 5 [文献标识码]A [文章编号]1003-403X(2000)04-0253-02 酵母样真菌已成为临床及细菌学实验室高度重视的一类病原菌。由于不同菌种对抗真菌药物的敏感性不同,所以对临床分离株鉴定到种,对于临床用药的选择具有重要价值。但传统鉴定方法繁琐而自动化鉴定系统昂贵,在临床的应用均很受限,因此快速鉴定的推广应用显得尤为重要。本文采用郑州博赛科技有限责任公司生产的科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定法对临床分离的48株酵母菌进行鉴定,并与生物梅里埃API 20C AU X试纸条鉴定结果相比较,现报告如下。 1 材料与方法 1 1 菌株来源 从324份痰、尿、分泌物、腹水等临床标本中分离的48株酵母样真菌。 1 2 菌种分离鉴定 按常规方法根据标本直接接种或增菌后接种沙氏琼脂和科玛嘉念珠菌显色培养基(显色基),28 培养24小时后挑取可疑菌落作革兰染色,确定为念珠菌后作进一步鉴定:按说明接种API20C AUX试条,30 培养24h、48h、72h后读取结果,使用APILAB Plus软件鉴定到种;在显色基上生长的翠绿色菌落为白色念珠菌,兰灰色菌落为热带念珠菌,粉红色菌落边缘模糊有微毛的为克柔氏念珠菌,紫红色菌落为光滑念珠菌,乳白色菌落为其它念珠菌。 2 结果 2 1 显色基的分离效果 本文的48株酵母菌在沙氏琼脂和显色基上均能生长,二者对杂菌的抑制率一致。 2 2 显色基的鉴定效果 经显色基鉴定为白色念珠菌的29株中,有27株与API鉴定结果一致,其它2株分别为光滑念珠菌和土生念珠菌;经显色基鉴定为光滑念珠菌的13株中,有10株与API一致,其余3株分别为2株酿酒酵母菌、1株无名念珠菌;显色基鉴定的3株热带念珠菌,仅有1株与API相符,另2株为土生念珠菌和无名念珠菌;此外,尚有3株菌显色基无法鉴定,经API鉴定为2株无名念珠菌和1株土生念珠菌。 3 讨论 酵母菌生长较慢,传统的鉴定方法繁琐、需时较长且准确率不高,而采用YBC鉴定卡或API试纸条等自动或半自动的方法进行鉴定虽然能将菌鉴定到种,但价格昂贵,不适宜中小医院。 科玛嘉念珠菌显色培养基中含有多种底物,可分别与白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌的不同酶类作用,呈现不同的颜色反应,从而达到在分离菌株的同时进行鉴定[1]。这一过程需时约24~ 48h,可比传统鉴定法和API试纸条法提前1~3天出报告,这对于及时给临床提供治疗依据具有重要意义。该培养基制备简单,使用易于掌握,价格较为适中,适合在基层单位推广。 通过科玛嘉念珠菌显色基可鉴定的白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌是目前临床真菌感染的主要病原菌,占95%以上[2],根据我们目前的应用情况,该培养基对前三种菌的总鉴定率达到84 4%,对白色念珠菌的鉴定率更达到93 1%,所以使用该培养基对临床疑真菌感染标本进行分离鉴定,基本可满足需要。由于热带念珠菌分离株数过少,克柔念珠菌未分离出,所以对这两种菌株的鉴定效果尚需进一步观察总结。科玛嘉念珠菌显色培养基的另一优点是可方便地发现真菌的混合感染(本文的一株白 253

常用细菌培养基配方

常用抗生素 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml) 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

弧菌显色培养基

品种名称:弧菌显色培养基 英文名称:Chromogenic Vibrio Agar 品种编号:CRM008 培养基用途:用于水产品及食物中毒样品中弧菌特别是副溶血性弧菌的分离和鉴定。 弧菌显色培养基使用原理: 蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;蔗糖为可发酵的糖类;抑菌剂抑制大部分非弧菌细菌,氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;混合色素与副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌所对应的酶发生特异性反应,水解底物,释放出显色基团,在淡黄色平板上产生品红色菌落(副溶血性弧菌)和绿-蓝绿色的菌落(霍乱弧菌和创伤弧菌)。 图册: 弧菌显色培养基配方(每升): 蛋白胨19.8g 酵母膏粉5g 蔗糖20g

氯化钠10g 抑菌剂1.5g 琼脂13g 混合色素3g 最终pH 9.0±0.2 弧菌显色培养基使用方法 1、取瓶内干粉培养基72.3克,用100ml蒸馏水或纯水溶解,可按比例扩增或缩小。搅拌加热煮沸至完全溶解,不需高压灭菌,冷至约50℃,倾注灭菌平皿。 2、以无菌操作取检样25 g(mL),加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225 mL,用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min,或拍击式均质器拍击2 min,或用Pulsifier脉冲式样品处理器均质30秒,制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器,则将样品放入无菌乳钵中磨碎,然后放在500 mL的灭菌容器内,加225 mL3%氯化钠碱性蛋白胨水,并充分振荡。 3、增菌:将1:10稀释液于36 ±1 ℃培养8~18h。 4、分离:在增菌液中用接种环取一环,于弧菌显色平板上划线分离,于36 ±1 ℃培养18~24 h。 5、通过验证试验进一步确认假定性副溶血性弧菌和其他弧菌,如氧化酶、革兰氏染色、生化鉴定等。 弧菌显色培养基质量控制: 本品倾注平皿后呈淡黄色,下列菌株接种后36±1℃培养18-24小时生长情况如下表: 质控菌株生长情况菌落色泽 副溶血性弧菌ATCC17802 良好品红色 霍乱弧菌VBO非01 良好绿-蓝绿色 溶藻弧菌ATCC33787 良好无色 大肠埃希氏菌ATCC25922 不长- 注:最后的鉴定须做补充试验。

科玛嘉改良大肠杆菌O157显色培养基使用说明书

法国科玛嘉改良大肠杆菌O157显色培养基使用说明书 此培养基用于大肠杆菌O157的分离和鉴定。 一、组分 琼脂15.0g/L 蛋白胨、酵母粉13.0g/L 色素 1.2g/L 添加剂A 1瓶 添加剂B 1瓶 pH 7.0±0.2 二、操作 1.称取瓶内干粉,用1000ml蒸馏水或纯水溶解,可按29.2g/L的比例扩大或缩小。 2.上述干粉缓慢倒入蒸馏水中,充分搅拌溶解。 3.加热至100℃,并按常规不断搅拌。如果用高压灭菌锅,不要加压,加热不能超过100℃, 混合物也可以在微波炉内加热,使用微波炉加热时,煮沸后立即移出微波炉并不断搅拌,而后移入微波炉再加热,直至完全溶解(大气泡代替泡沫产生,大约需要2分钟)。 4.冷却至45-50℃,待用。 5.在添加剂A中加入1ml无菌水和在添加剂B中加入1ml95%乙醇,放置在37℃水浴加 热10分钟,轻轻摇动待内容物全部溶解方可使用。然后以无菌手续分别加入到培养基中,轻轻混匀。(添加剂A和B各1ml,可用于1000ml培养基,可按比例放大或缩小,剩余的添加剂可以保存在-20℃冰箱中,有效期半年),然后把混匀的培养基倾入培养皿或试管。 三、贮存 1.添加剂A和B,4℃保存,有效期一年。 2.干粉保存在15-30℃环境下。倾注好的培养基在室温可保存1天,4℃冰箱中可贮存两星期。 四、结果 划线接种(如果培养基刚从冰箱中取出,要恢复至室温后才能使用),37℃培养24小时。初筛微生物菌落颜色 大肠杆菌O157 浅红色至淡紫色,中心灰褐色 大肠菌群铁蓝色 ★建议通过乳胶试验验证可疑菌落。 CHROM agar公司中国区特约经销商:北京赛为思生物技术开发中心

第五章 微生物的营养和培养基习题整理

第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于:() A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于:() A.光能自养 B. 光能异养C.化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是:() A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A,B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是:() A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有:() A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于()型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是:() A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是:() A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是:() A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量,后者需要能量 C. 前者不需要载体,后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子(生长因素)是:() A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B,C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供:() A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为:() A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的:() A. 10% B. 30% C. 50% D.70%

白色念珠菌

赛润ELISA classic 白色念珠菌IgG/IgM/IgA 目录 1.用途 2. 诊断意义 3. 赛润ELISA classic - 检测原理 4.试剂盒组成 5.检测所需物质,试剂盒未提供 6.储存和稳定性 7.赛润ELISA classic的检验步骤 7.1 注意事项 7.2 样品准备和储存 7.3 试剂盒反应试剂的准备 7.4 检测程序概要 7.5 检测过程 8. 检测结果评估 8.1 4PL单点定量法 8.2 检验有效性标准 8.3 计算赛润ELISA classic白色念珠菌IgG/IgM/IgA(定量) 8.4 检测结果分析 9.性能特性 9.1 重复性 9.2 敏感性和特异性 10.警告 10.1警告和安全措施 10.2废料处理 11.参考文献 V9.03/06-1

赛润ELISA classic白色念珠菌IgG/IgM/IgA试剂盒 用于人抗体(IgG/IgM/IgA)的酶联免疫检测 - 体外诊断用- IgG试剂盒(定量) 编号: ESR117G IgM试剂盒(定量) 编号: ESR117M IgA试剂盒(定量) 编号: ESR117A 检测评估标准: Dade Behring BEP ? III / BEP ? 2000, DSX, 手动操作 1.用途 赛润ELISA classic白色念珠菌IgG/IgM/IgA试剂盒主要用于定性和/或定量检测人血清或血浆中抗白色念珠菌的抗体。由于细胞质和数量减少的细胞壁成份组成的复合抗原的存在,使得能够在浅表性和侵入性霉菌病感染的不同时期,进行抗念珠菌属抗体的检测,。 2.诊断依据 白色念珠菌是属于类酵母真菌科的、普遍存在的一种酵母菌。 表1:具有医学相关性的真菌

真菌培养常用培养基

[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂,沙堡弱培养基,SDA] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。(三)目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。 [沙氏液基,SDB] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,SDA with antibiotic] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g

蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素。250mg放线菌酮,121摄氏度10分钟灭菌后备用。[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,modified SDA] (一)组成 葡萄糖20.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。 (三)目的 保存菌种培养基。 [马铃薯葡萄糖琼脂,PDA] (一)组成 马铃薯200.0g 葡萄糖20.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 先将马铃薯洗净去皮切片,加水180ml,煮沸30分钟后过滤,再加葡萄糖、琼脂,将过滤

液补足到1000ml,121摄氏度灭菌后备用。 (三)用途 此培养基是培养真菌较好的培养基,同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。 [玉米吐温80琼脂,CMA with T w80] (一)组成 玉米粉40.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml 吐温80 10ml (二)制法 先将玉米粉混于水中,65摄氏度水浴一小时,过滤,再补足水量,然后加入琼脂和吐温80,121摄氏度10分钟灭菌后备用。 (三)用途 用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝;红色毛癣菌在此培养基产色素较好。 [米饭培养基rice grain medium] (一)组成 大米300.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 将3g大米放入试管中,加入10ml蒸馏水,高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

鉴别培养基

麦康凯琼脂 麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基,它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌,还能抑制革兰氏阳性菌生长,发酵乳糖的细菌能使培养基变红,这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。 麦康凯抑制阳性菌的生长,是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment created by fermenting lactose. Organisms that do not ferment lactose do not cause a color change. 配方g/l 蛋白胨 20.0 乳糖 10.0 胆盐 5.0 氯化钠 5.0 中性红 0.075 琼脂 12.0 pH 7.4±0. 配制 取52克CM7,加1升蒸馏水,加热至溶解完全,121℃灭菌15分钟。待琼脂表面变干方可接种。 特点 CM7符合世界卫生组织(WHO)推荐的培养基。工业用于检测水、乳制品和生物标本的大肠菌群和肠道致病菌,临床用于分离肠细菌。此培养基可抑制革兰氏阳性菌,可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。还可以区分耶尔森菌和巴斯德氏菌,巴斯德氏菌不能生长。 以下是各菌种在麦康凯琼脂经35℃培养24小时后的菌落外观: 菌种形态菌落颜色、 大肠杆菌红色、非黏液样有胆盐沉淀环 产气杆菌粉红色、黏液样 肠球菌红色、微小、圆形 链球菌苍白粉红色、不透明 绿脓杆菌棕绿色、荧光绿 乳糖发酵性菌红色 乳糖非发酵性菌无色 沙门氏菌无色大菌落 使用 按常规操作,将尿液、粪便、污水等标本接种至麦康凯琼脂,分离单菌落,35℃培养18-24小时。 其实该菌最重要的用途还不只是在肠道细菌的鉴别上,对于非发酵菌的鉴定中就有一项是麦康凯生长,主要是观察细菌对胆盐的耐受性的,在这里是作为一项生化反应试验而应用的。 另外,在实际工作中巧妙的利用不同细菌在各种不同的培养基上的生长特性就可以快速的对细菌进行初步分群和鉴定: 例如:痰标本,直接接种标本后的第二天,如果在血琼脂上形成针尖状透明小菌落,在巧克力培养基上形成无色到灰色半透明,光滑闪光菌落,在麦康凯上不生长,直接涂片均为G-细小杆菌,或者细丝状杆菌的就多半是嗜血杆菌; 而如果在CSF标本,血琼脂上生长良好,含万古霉素巧克力不生长,麦康凯上不生长,直接涂片是杆菌,氧化酶阴性,触酶阳性,动力阳性,哪怕染出来看起来是“G-杆菌”,我也不会考虑G-,而会毫不犹豫的判断为G+杆菌,李斯特菌!

真菌的分离及常用培养基

真菌的分离及常用培养基 关键词:真菌抗生素念珠菌白假丝酵母菌北纳创联北京标准物质网 医学真菌形态学观察是认识真菌的第一步,但仅通过光学显微镜对其进行观察并不能直接鉴定为真菌,需要对疑似相关病变部位的标本进行采集及分离,然后在合适的培养基进行培养。 一、病变部位标本的采集分离 通常采集疑似病变部位的皮肤附属物、分泌物、血液、痰液、脑脊液等体液,注意标本的新鲜度、无菌性、充足性,而且要对所采集标本进行正确消毒,杀死其中混有的杂菌。标本为脑脊液时,需进行离心,收集沉淀物进行培养,标本为血液时,需要先行增菌培养后再分离,这样可增加阳性率,未增菌培养的阴性结果并不能排除阳性结果。 二、真菌培养常用的培养基 目前商品化的真菌培养基多为干燥脱水的形式,可以按照配制说明书进行配制,值得注意的是,使用后的装培养基的瓶盖须拧严,防止受潮,以各下次使用。 1.沙保弱培养基及含抗生素的沙保弱培养基沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基,绝大多数的真菌均可以在其上生长,沙保弱培养基还可以添加抗生素,从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养,但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。 2.玉米粉(厚膜孢子)培养基多用于鉴别念珠菌属,培养基中的吐温可以促进白假丝酵母菌产生厚膜孢子,同时可以加入1%葡萄糖促进红色毛霉菌生长,并抑制须毛霉菌的生长。 3.土豆葡萄糖培养基土豆培养基中需将土豆切成小于1cm。的小块,常用于诱导真菌形成孢子或产生色素。 4.脑-心浸液琼脂培养基是一类营养丰富的真菌培养基,人工配制过程较为烦琐,一般通过商品化的培养基按照说明书进行配制。BHI多用于室温培养致病真菌,也可用于35~37℃培养致病真菌的酵母相。

显色培养基在微生物检测中的优势

微生物检测显色培养基在应用中的优势 显色培养基介绍: 随着微生物学检验技术的不断发展,近年来在新产品开发方面加大了投入,通过与科研单位的广泛合作,国际和国内研发出了显色培养基产品,显色干粉培养基是近年来发展起来的一种新型培养基。在传统培养基制作基础上,添加了新型组合式特异性发色酶底物,当细菌生长代谢过程中产生的特异性酶分解特异性发色底物后,目标菌形成不同颜色的菌落,从而对目标菌得到快速的分离和鉴别,同时也可以进行计数。该项技术是将现代化学合成技术、细菌代谢组学与目前尚不可替代的传统方法相结合应用于细菌检验领域的一项新技术。 与传统培养基相比,显色培养基克服了传统培养基在各种细菌分离、鉴别、计数等操作过程中比较复杂(需要有经验的技术人员)、敏感性低和特异性差的缺点。显色培养基在检测细菌时,培养24小时通过观察菌落颜色即能用肉眼对细菌进行定性或定量分析,既缩短了检测时间,又免除了后续生化鉴定的过程,极大提高了工作效率。 常用的几个显色培养基如下: 1、念珠菌显色培养基 可替代传统的沙保罗培养基;肉眼观察菌落颜色即可鉴定白色、热带、克柔氏及光滑念珠菌;对确定混合感染更为有效;培养基的配置简单,煮沸即可,无须高压灭菌; 操作简便,划线接种,37oC培养,36-48小时出结果; 是临床上诊断常见念珠菌感染的最好帮手。 2、沙门氏显色培养基 可替代传统的SS培养基; 肉眼观察菌落颜色,能初步鉴定包括伤寒杆菌、副伤寒杆菌在内的沙门氏菌,具有很高的特异性,可摒弃大量假阳性,减少漏检; 对确定混合感染更为有效; 培养基的配置简单,煮沸即可,无须高压灭菌; 操作简便,划线接种,37oC培养,24小时出结果; 对暴发性沙门氏菌感染引起的食物中毒尤为适用。 3、金黄色葡萄球菌显色培养基 可替代传统的高盐甘露醇及血平板培养基,具有较高的特异性、灵敏度,可消除假阴性及假阳性;肉眼观察菌落颜色即可用于金葡菌的初步鉴定,在此培养基中添加妥布霉素或甲氧西林等抗生素,可筛选耐甲氧西林金葡菌(MRSA);培养

相关主题