实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质

实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶（PPO）活性测定及酶学性质

一、实验目的

1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。

2了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。

二、实验原理

马铃薯不耐储藏，在加工过程中去皮切分后非常容易发生酶促褐变，使外观品质和营养价值大为降低，制约着马铃薯的开发利用。酶促褐变是马铃薯加工产业必须解决的难题。其中多酚氧化酶是导致马铃薯等果蔬发生酶促褐变的重要酶类。多酚氧化酶活性大小直接影响酶促褐变程度。

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等．是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶．普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，使组织形成褐变．以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。研究多酚氧化酶的特性对食品的加工与保藏工艺有非常重要的意义。因此，检测食品中多酚氧化酶具有重要意义。

多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在一定的温度、pH条件下，有氧存在时，能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质，单位时间内有色物质在410nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值的变化确定PPO的酶活大小。

多酚氧化酶

邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2O

2——————→邻醌＋H

2

O

三、试验材料、试剂及试验用品

1．材料：马铃薯块茎。

2．仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；试管；移液管；容量瓶

3．试剂：L 磷酸缓冲液（pH=）；L邻苯二酚；L磷酸氢二钠；L磷酸二氢钠；10mmol/L柠檬酸；10mmol/L抗坏血酸；10mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；10mmol/L亚硫酸钠

四、实验方法：

1.多酚氧化酶的提取

取马铃薯块茎样品，加入预冷的磷酸缓冲液（）3ml，研磨匀浆，转移到离心管中，再用7mL磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液，在４℃下离心（8000r/min）5min，取上清液为多酚氧化酶提取液，并量取粗酶液体积。

2.多酚氧化酶活性测定

采用比色法测定。将ｍl邻苯二酚加入2ｍl磷酸缓冲液（ｐＨ）中，加入ｍl酶提取液，立即于波长410nm下测定吸光值，2min后再计吸光值，以不加酶提取液的反应液做对照(注意空白为： ml缓冲液和 mL邻苯二酚溶液)。以每分钟吸光度变化为1个多酚氧化酶活性单位。

表1 多酚氧化酶活性测定

3.多酚氧化酶酶活的计算公式：

以每克样每分钟内A410增加为1个酶活力单位U。

△A410×酶提取液总量（ml）

酶活力（g min）＝———————————————————

×反应时间(min)×样品鲜重(g)×测定时酶液用量(ml)

4 酶学特性

PH对多酚氧化酶活性的影响

室温下在试管中加入已配好的不同pH值的缓冲溶液，邻苯二酚，多酚氧化酶粗酶液mL，混匀后迅速测定吸光度，转换为多酚氧化酶的活性。以缓冲液pH值为横坐标，多酚氧化酶活性为纵坐标，作出酶活—pH曲线，以确定最适pH值。

表2 pH对多酚氧化酶活性的影响

温度对多酚氧化酶活性的影响

试管中加入pH 的磷酸盐缓冲溶液, 以邻苯二酚溶液为底物,在不同温度（常温、40、60℃的温度条件)下保温5min后，加入多酚氧化酶粗酶液，混匀后在室温下测定多酚氧化酶的活性。以温度为横坐标，多酚氧化酶活性为纵坐标，作出酶活—温度曲线，以确定最适温度。

表3 温度对多酚氧化酶活性的影响

抑制剂对多酚氧化酶活性的影响

将抑制剂抗坏血酸（VC）、柠檬酸、亚硫酸钠、EDTA分别用的磷酸盐缓冲溶液配制成10mmol/L的溶液，在室温下分别取上述抑制剂，以邻苯二酚溶液为底物，加入多酚氧化酶粗酶液，混匀后在室温下测定多酚氧化酶的活性。以抑制类型为横坐标，多酚氧化酶活性为纵坐标，绘制抑制剂对酶活影响的图形，分析抑制剂对酶活性影响。

表4抑制剂对多酚氧化酶活性的影响

五、注意事项

1、反应混合液必须现配现用，否则会因邻苯二酚自动氧化而失效；

2、在试验中加入一种酚结合剂--聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），它能与酚类化合物强烈地发生缔合作用，从而消去酶反应体系中的底物，使 PPO活性的测定更接近其真值。

3、使用分光光度计时要求动作快速、熟练。

4、加样时，先加缓冲溶液，再加底物邻苯二酚，摇匀，在测量之前最后加酶提取液。

六、思考题

1. 本试验中使用到磷酸缓冲液，请问磷酸缓冲液在本试验中的作用

2. 试分析不同温度、pH对马铃薯多酚氧化酶的影响

3. 谈谈你对多酚氧化酶活性性质的认识。

参考文献：

曹建康，姜微波，赵玉梅编着.果蔬采后生理生化实验指导.中国轻工业出版社,.

毛丽梅，邓红，马安德，卢晓翠。食品安全综合实习指导.科学出版社,.

104-105

李彩霞张芬琴张喜峰赵金梅白生文

醇酚的性质实验报告

醇酚的性质实验报告 篇一：实验六酚的性质与鉴定 实验六酚的性质与鉴定 一、实验目的 1、熟悉酚的基本性质； 2、掌握酚的鉴别方法。 二、实验原理 酚的分子中，由于羟基中的氧原子与苯环形成P-π共轭，电子云向苯环偏移，溶于水后可以电离出氢离子，显示弱酸性。 但是苯酚的酸性比碳酸弱。若将苯酚钠与碳酸钠溶液反应，可以析出苯酚。用这种方法可以分离苯酚。 苯酚可以和NaOH反应，但不与NaHCO3反应。 利用醇、酚与NaOH和NaHCO3反应性的不同，可鉴别和分离酚和醇。 苯酚与溴水在常温下可立即反应生成2，4，6-三溴苯酚白色沉淀。反应很灵敏，很稀的苯酚溶液就能与溴水生成沉淀。故此反应可用作苯酚的鉴别和定量测定。

（白色） 酚类可以与FeCl3溶液反应显色，用于鉴别酚类。苯酚可以用于制备酚酞。 棕红色蓝紫色 三、实验器材 仪器：试管、试管架、试管夹、酒精灯、pH试纸 无机试剂： NaOH（5％），饱和溴水， NaHCO3(5％,饱和)，的Na2CO3(5％)， 5％FeCl3 ，HCl(5％)溶液； 有机试剂：苯酚 四、实验步骤 1、酚的溶解性和弱酸性 将0.2 g的苯酚放在试管中，加入3mL水，振荡试管后观察是否溶解。用玻璃棒蘸1滴溶液，以广泛pH试纸测定其酸碱性。然后再加热试管，直到苯酚全部溶解。 将上述溶液分装在3支试管中，冷却后出现浑浊，在其中一支试管中加入2～3滴5％的NaOH溶液，观察是否溶解。再滴加5％的盐酸，有何变化？在另2支试管中分别加入5％

的NaHCO3溶液和5％的Na2CO3溶液，观察是否溶解。 2、酚类与FeCl3溶液的显色反应 在试管中加入1%苯酚0.5mL，再加入1～2滴1% FeCl3溶液，观察和记录各试管中所显示的颜色。 3、与溴水的反应 在1支试管中加入2滴苯酚饱和水溶液，再加2 mL水稀释，在另一只试管中加入2 mL自来水，然后在两只试管中逐滴加入饱和溴水，比较两只试管中的现象。写出反应方程式。 五、思考题 1、如何鉴别醇和酚？ 2、举例说明具有什么结构的化合物能与FeCl3溶液发生显色反应？ 3、为什么苯酚比苯和甲苯容易发生溴代反应？ 篇二：有机化学实验十一醇、酚的鉴定 实验十一醇、酚的鉴定 一．实验目的： 1. 进一步认识醇类的性质; 2比较醇,酚之间的化学

醇和酚的鉴定的实验报告3篇

醇和酚的鉴定的实验报告3篇 篇一：实验醇和酚的性质【实验目的】 1.进行醇和酚主要化学性质的实验操作。 2.熟练进行水浴加热和点滴板使用的操作。 3.能较快地设计出①伯醇、仲醇与叔醇；②一元醇与多元醇；③醇与酚类物质的鉴别方案，并进行实验操作。 4.具有严肃和实事求是的科学态度，养成爱护公物，节省试剂的良好品德。 【实验用品】 金属钠、无水乙醇、酚酞试剂、仲丁醇、叔丁醇、蒸馏水、卢卡斯试剂、1.5mol/L 硫酸、0.17mol/L重铬酸钾溶液、100g/L NaOH溶液、乙醇、醋酸、48g/L CuSO4溶液、甘油、蓝色石蕊试纸、0.1mol/L苯酚溶液、饱和碳酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液、溴水、0.06mol/L三氯化铁溶液、0.03mol/L 高锰酸钾溶液、浓硫酸。 试管、烧杯、酒精灯、玻璃棒、点滴板、广泛pH试纸、表面皿。 【实验原理】 羟基是醇的官能团、O－H键和C－O键容易断裂发生化学反应；同时，α-H和β-H有一定的活泼性，使得醇能发生氧化反应、消除反应等；而邻多元醇除了具有一般醇的化学性质，由于它们分子中相邻羟基的相互影响，具有一些特殊的性质，如甘油能与Cu(OH)2作用。酚类化合物分子中含有羟基，O－H键已发生断裂，在水溶液中能电离出少量氢

离子，使酚溶液显示弱酸性；－OH受苯环上大π键的影响，使得C－OH键显示一定的活性，易发生氧化反应；而苯环也受－OH的影响，使得苯环上的H的活性增强，易发生取代反应。 【实验指导】（实验内容、步骤、操作事项） 一、醇的化学性质 1. 醇钠的生成及水解 在干燥试管中，加入无水乙醇1mL，并加一小粒新切的、用滤纸擦干的金属钠，观察反应放出的气体和试管是否发热。随着反应的进行，试管内溶液变稠。当钠完全溶解后，冷却，试管内溶液逐渐凝结成固体。然后滴加水直到固体消失，再加一滴酚酞试液，观察并解释发生的变化。 2. 醇的氧化 取4支试管，分别加入5滴仲丁醇、叔丁醇和蒸馏水，然后各加入10滴1.5mol/L硫酸和0.17mol/L重铬酸钾溶液，振摇，观察并及时记录出现变化快慢的时间。 3. 与卢卡斯试剂反应 取3支试管，分别各加入5滴仲丁醇、叔丁醇，在50～60℃水浴中加热，然后同时向3支试管中各加入5滴卢卡斯试剂，振摇、静置，观察并解释产生的现象。 4. 甘油与氢氧化铜反应 取2支试管各加入10滴100g/L NaOH溶液和48g/L CuSO4溶液，混匀后，分别加入乙醇、甘油各10滴，振摇，静置，观察现象并解释发生的变化。

多酚氧化酶活性测定及控制[文献综述]

毕业论文文献综述 生物工程 多酚氧化酶活性测定及控制 1 前言 多酚氧化酶（PPO）广泛存在于自然界，在果实和蔬菜收获后，PPO所引起的反应常常会使果肉发生褐变、产生异味和损失营养。本文总结了多酚氧化酶的活性测定方法以及对其活性的控制，主要研究了抑制剂对其活性的影响，为果蔬贮藏和加工中酶促褐变的防治提供思路。 多酚氧化酶（PPO）作为一种植物酶类，是引起果蔬褐变的主要因素。鲜切果蔬因组织被切分使PPO与酚类底物的接触机会增加，酚类物质被氧化成棕褐色的醌，导致产品褐变。抑制PPO活性取决于抑制剂的性质和浓度、底物的可利用性、pH值和温度。一些还原剂、酶类、螯合剂和蜂蜜等均已被用于防止果蔬酶褐变。本文主要总结了抑制剂对于控制果蔬PPO活性的研究。 2 主题部分 2.1 从果蔬中提取PPO（以莲藕为例） 2.1.1 丙酮法（丙酮法提取所得酶液比活力最高。适合需大量制样时使用） 将莲藕洗净，去皮，切碎，加4倍量预冷至．18。C的丙酮(w／v为1：4)捣碎，搅拌3min，抽滤，冷风吹干残渣后，混匀，得丙酮粉。称取丙酮粉O．5 g，加入0．2 mol／L，pH为5．4的预冷磷酸二氢钠．柠檬酸缓冲液20ml，搅拌3min，8 000r／min离心10min，所得上层清液即为粗酶液。【1】 2.1.2 匀浆法（匀浆法提取的酶液没有活性） 将莲藕洗净，去皮，切碎，加入0．05mol／L，pH5．4的预冷磷酸氢二钠．柠檬酸缓冲溶液(含5％的PVPP)，料液比为1：2．2，捣碎，搅拌，抽滤。向滤渣中加入0．05mol／L，pH5．4磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液(W／V为1：1)再次搅拌，抽滤，两次滤液合并，8 000r／min离心10rain，所得上清液即为粗酶液。【2】 2.2.3 匀浆浸提法（匀浆浸提法提取所得粗酶液活性最高，操作简便，提取所得粗酶液活性

醇酚性质实验

实验三醇、酚的性质 一、实验目的 1、验证醇、酚的一般性质。 2、比较醇和酚之间化学性质的差异。 二、实验原理 1、醇的性质与鉴定 醇类的特征反应主要发生在羟基上。羟基中的氢原子比较活泼，可被金属钠取代，生成醇钠，同时放出氢气： 2RCH2 OH＋2Na 2RCH2 ONa＋H2 ↑ 醇钠水解后生成氢氧化钠，可用酚酞检验。 醇与金属钠的反应速度随烃基增大而减慢。 醇分子中的羟基还可被卤原子取代，生成卤代烃： RCH2 ＯH ＋ H X RCH2 X＋H2 O 与羟基相连的烃基结构不同，反应活性也不相同。叔醇最活泼，反应速率最快，仲醇次之，伯醇反应速率最慢。 三、仪器、药品 1、仪器试管（Φ15X150mm），烧杯(300mL)、酒精灯，电炉。 2、药品无水乙醇、金属钠、酚酞溶液、正丁醇、仲丁醇、叔丁醇、甘

油、乙二醇、甲醇、苯酚、2%苯酚水溶液、卢卡斯试剂、浓盐酸、6mol/L H2SO4溶液、10%NaOH溶液、5%K2 Cr2 O7溶液、5%NaHCO3溶液、1%FeCl3溶液、5%CuSO4溶液、饱和溴水、蓝色石蕊试纸。 四、实验步骤 ㈠醇的性质 1、乙醇与金属钠作用 取1ml无水乙醇于干燥试管中，小心投入一小粒金属钠（绿豆大小），观察现象。待金属钠全部消失后，在水浴上加热，蒸去未反应的乙醇，观察有无固体析出（是什么？）。将所得固体加1ml水使其溶解，然后滴入1～2滴酚酞溶液，现察观象，说明原因。 2、醇与卢卡斯试剂作用： 在三支干燥试管中，分别加入5滴正丁醇、仲丁醇．叔丁醇，再各加入lmL卢卡斯试剂(最好保持在26—27`C)，振摇，管口塞上塞子．静置片刻，观察是否有浑浊及分层现象，记下各种醇出现浑浊的时间。 对有这作用的样品，可用lmL浓盐酸代替卢卡斯试剂做同样实验。比较结果。说明原因。 3、醇的氧化： 取三支试管，各加入5%K2 Cr2 O7溶液lmL和6mol/L H2SO4液1mL。在第—只试管中加l0滴正丁醇，第二只试管中加10滴仲丁醇，第三只试管中加10滴叔丁醇，振摇试管。观察溶液颜色是否改变及反应快慢。 4、多元醇与氢氧化铜作用： 取三支试管，各加入l0滴5%CuSO4溶液和l0%NaOH溶液1mL，此时立即生成氢氧化铜沉淀。在振摇中分别加入10滴甘油、乙二醇、无水乙

多酚氧化酶活性测定

实验二十六植物体内多酚氧化酶活性的测定 一、目的 通过实验，掌握植物体内多酚氧化酶活性的测定方法。 二、原理 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在有氧的条件下，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下： 多酚氧化酶 邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2 O 2 ——————→ 邻醌＋ H 2 O 三、材料、仪器及试剂 1. 材料：马铃薯块茎等 2. 仪器：UV－1206或UV－1240分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵或匀浆机；试管；移液管；纱布袋等。 3. 试剂：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；0.01mol·L－1pH 6.5磷酸缓冲液；0.1m mol·L －1pH6.5磷酸缓冲液；0.05 mol·L－1pH5.5磷酸缓冲液；30%饱和度硫酸铵；0.1 mol·L－1儿茶酚； 20％三氯乙酸。 四、实验步骤 1. 粗酶液的制备 称取马铃薯块茎5g于研钵中，加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和100ml 0.1mol·L－1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2～3ml 0.01mol·L－1 pH6.5磷酸缓冲液中，即为粗制酶液。 2. 活性酶的测定

在试管中加入3.9ml 0.05 mol·L－1 pH5.5磷酸缓冲液，1.0ml 0.1 mol·L－1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ，然后加入0.5ml酶液（可视酶活性增减用量），迅速摇匀，倒入比色杯内，于525nm波长处以时间扫描方式，在1～2min 内测定吸光度变化（A）值。 五、酶活性的计算 值变化0.01为1个酶活力单位，按下式计算多酚氧化酶的活力以每min内A 525 和比活性。 A 酶提取液总量（ml） 酶活力（0.01A·min－1）＝———————×——————————— 0.01×反应时间测定时酶液用量（ml） A 酶提取液总量（ml） 酶的比活性(0.01A·g－1Fw·min)=————————×—————————— 0.01×W×反应时间测定时酶液用量（ml） 公式中：A —为反应时间内吸光度的变化值；W为样品鲜重（g）。

有机化学实验十一醇、酚的鉴定

实验十一醇、酚的鉴定 一．实验目的： 1.进一步认识醇类的性质; 2比较醇,酚之间的化学性质的差异; 3. 认识羟基和烃基的相互影响. 二．实验重点和难点： 1.醇酚之间的化学性质的差异; 2.认识羟基和烃基的相互影响. 实验类型：基础性实验学时：4学时 三．实验装置和药品： 实验仪器: 试管滴管烧杯酒精灯pH试纸 化学药品: 甲醇乙醇丁醇辛醇1%高锰酸钾异丙醇 5%氢氧化钠10%硫酸铜乙二醇10%盐酸 10%三氯化铁苯酚间苯二酚对苯二酚 邻硝基苯酚水杨酸苯甲酸溴水甘油 四．实验原理： 醇和酚的结构中都含有羟基,但醇中的羟基与烃基相。酚中羟基与芳环直接相连,因此它们的化学性质上有许多不相同的地方。 1．醇的性质： a.醇和乙酰氯直接作用生成酯的反应可用于醇的定性试验： CH3COCl + ROH ———→CH3COOR + HCl 低级醇的乙酰酯有香味，容易检出。高级醇的乙酰酯因香味很淡或无香味而不适用。 b.含10个碳以下的醇和硝酸铈铵溶液作用可生成红色的络合物,溶液的颜色由橘黄色变成红色,此反应可用来鉴别化合物中是否含有羟基。 （NH4）2Ce(NO3)6+ROH———→(NH4)2Ce(OR)(NO3)5+HNO3 c.铬酸是鉴别醇和醛、酮的一个重要试剂，反应在丙酮溶液中进行，可迅速获得明确的结果，铬酸试剂可氧化伯醇，仲醇及所有醛类，在5秒內产生明显的颜色.溶液由橙色变为蓝绿色.而在试验条件下,叔醇和酮不起反应,因此,铬酸试验可使伯醇与叔醇区别开来. H2SO4 H2CrO7+RCH2OH(或)R2CHOH———→Cr2(SO4)3+RCO2H+R2C=O d.不同类型的醇与氯化锌—盐酸（Lucas）试剂反应的速度不同，三级醇最快，二级醇次之，一级醇最慢，故可用来区别一、二、三级醇，含3—6个碳原子的醇可溶于氯化锌—盐酸溶液中，反应后由于生成不溶于试剂的卤代烷，故会出现混浊或分层，利用各种醇出现混浊或分层的速度不同可加以区别；含6个碳原子以上的醇类不溶于水，故不能用此法检验；而甲醇和乙醇由于生成相应卤代烷的挥发性，故此法也不适用。 ZnCl2 ROH + HCl ——→RCl + H2O e.醇与3，5—二硝基苯甲酰氯作用得到固体的酯，有固定的熔点，并且容易纯化，可作为衍生物来鉴定醇； f. 多元醇的氧化：用费林试剂氧化多元醇，多元醇能与新鲜的氢氧化铜反应生成绛蓝色溶液，醇羟基数越多，反应越快。

实验五-酚、醇、醛、酮的化学性质实验报

时间： 年 月 日 地点：生科院B108实验室 温度： 实验名称：酚、醇、醛、酮的化学性质 实验性质：基础性 实验要求：必修 实验五 酚、醇、醛、酮的化学性质 一．实验目的 1．学习经典的化学分析方法，了解经典化学分析方法操作简单、成本低廉、易于观察、适用性强的特点； 2.通过实验进一步理解掌握醇、酚、醛、酮的相关化学性质。 二．实验原理 1．卢卡氏实验： 因含C 3—－C6的各种醇类均溶于卢卡氏试剂，反应能生成不溶于试剂的氯代烷，使反应液呈浑浊状，静置后溶液有分层现象出现，反应前后有显著变化，便于观察； 2．高碘酸实验： CH 2(OH)(CHOH)nCH 2OH ＋ (n ＋1) HIO 4 H 2O + 2HCHO ＋ (n ＋1) HIO 3 3．酚和三氯化铁的反应： 2 +2Fecl +2Fecl 3 +2HCl 4．与2，4－二硝基苯肼的反应：共轭醛酮与2，4－二硝基苯胺反应生成的沉淀为红色或桔红色； 5．碘仿反应： NaOH （R ） CH 3I + Nao (R) 三．实验器材 正丁醇、仲丁醇、叔丁醇、卢卡氏试剂、乙二醇、甘油水溶液、高碘酸溶液、饱和亚硫酸溶液、希夫试剂、苯酚、三氯化铁溶液、甲醛、乙醛、丙酮、2，4-二硝基苯肼试剂、碘溶液、氢氧化钠溶液 四．操作步骤 1．卢卡氏实验： 取三支试管分别加入1mL 正丁醇、仲丁醇、叔丁醇，然后各加2mL 卢卡氏试剂；用软木塞塞住管口，观察记录混合液变混浊及分层时间； 2．高碘酸实验： 取两支试管分别加入3滴10%乙二醇、10%甘油水溶液，然后各加3滴5%高碘酸溶液，混合静置5min,各加3~4滴饱和亚硫酸溶液，最后再加1滴希夫试剂，静置数分钟，分别观察溶液颜色变化； 3．苯酚和三氯化铁的反应： 取一支试管加入5滴苯酚，3滴1%三氯化铁溶液； 4．醛，酮与2，4－二硝基苯肼的反应： OH OH CH 3 —C —OH O —C —H O

化学性质实验报告

( 实验报告) 姓名：____________________ 单位：____________________ 日期：____________________ 编号：YB-BH-054082 化学性质实验报告Chemical property experiment report

化学性质实验报告 有机实验报告 糖、氨基酸和蛋白质的鉴定 一、糖的鉴定 糖类化合物：又称碳水化合物，是多羟基醛或多羟基酮及其缩聚物和某些衍生物的总称，一般由碳、氢与氧三种元素所组成。 实验目的： （1）进一步了解糖的化学性质；（2）掌握鉴定糖的方法及其原理。 （一）-萘酚试验（molish)糖类化合物一个比较普遍的定性反应是molish 反应。即在浓硫酸存在下，糖与-萘酚(molish试剂）作用生成紫色环。 实验方法 取3支试管，编号，分别加入0.5 ml 0.5%的各待测糖水溶液，滴入2滴molish试剂（-萘酚的乙醇溶液），摇匀。把试管倾斜450，沿管壁慢慢加入约1ml浓硫酸（切勿摇 动），小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。硫酸在下层,试液在上层样品：葡萄糖、蔗糖及淀粉 解释:

糖被浓硫酸脱水生成糠醛或糠醛衍生物，后者进一步与 -萘酚缩合生成紫红色 物质，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫色环。 （二）fehling试验 （1）实验原理 fehling试剂：含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，fehling试剂中需加入酒石酸钾钠，它与cu2＋形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子。 （2）操作方法 取4支试管，编号，分别加入fehling试剂i和ii 各0.5ml。摇匀并置于水浴中微热后，分别加入5滴待测糖溶液，振荡后置于沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察颜色变化及有无沉淀析出。fehling试剂i：称取3.5 g硫酸铜溶于100 ml蒸馏水中, 得淡蓝色的fehling试剂i。 fehling试剂ii：将17g酒石酸钾钠溶于20ml热水中，然后加入20 ml 含 5 g naoh的水溶液，稀释至100 ml得无色透明的 fehling试剂ii。 样品：葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖 解释: 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。

醇和酚的鉴定的实验报告

醇和酚的鉴定的实验报告 篇一：实验醇和酚的性质 【实验目的】 1. 进行醇和酚主要化学性质的实验操作。 2. 熟练进行水浴加热和点滴板使用的操作。 3. 能较快地设计出①伯醇、仲醇与叔醇；②一元醇与多元醇；③醇与酚类物质的鉴别方案，并进行实验操作。 4. 具有严肃和实事求是的科学态度，养成爱护公物，节省试剂的良好品德。 【实验用品】金属钠、无水乙醇、酚酞试剂、仲丁醇、叔丁醇、蒸馏水、卢卡斯 试剂、1.5mol/L 硫酸、0.17mol/L重铬酸钾溶液、100g/L NaOH溶液、乙醇、醋酸、48g/L CuSO4溶液、甘油、蓝色石蕊试纸、0.1mol/L苯酚溶液、饱和碳酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液、溴水、0.06mol/L 三氯化铁溶液、0.03mol/L 高锰酸钾溶液、浓硫酸。 试管、烧杯、酒精灯、玻璃棒、点滴板、广泛pH试纸、表面皿。 【实验原理】 羟基是醇的官能团、O- H键和C- 0键容易断裂发生化学反应；同时，a -H和B -H有一定的活泼性，使得醇能发生氧化反应、消除反应等；而邻多元醇除了具有一般醇的化学性质，由于它们分子中相邻羟基的相互影响，具有一些特殊的性质，如甘油能与Cu(OH)2作用。酚类化合物分子中含有羟基，O- H 键已发生断裂，在水溶液中能电离

出少量氢离子，使酚溶液显示弱酸性；- 0H受苯环上大n键的影响，使得C- 0H键显示一定的活性，易发生氧化反应；而苯环也受- 0H的影响，使得苯环上的H的活性增强，易发生取代反应。 【实验指导】 一、醇的化学性质 1. 醇钠的生成及水解 在干燥试管中，加入无水乙醇1mL并加一小粒新切的、用滤纸擦干的金属钠，观察反应放出的气体和试管是否发热。随着反应的进行，试管内溶液变稠。当钠完全溶解后，冷却，试管内溶液逐渐凝结成固体。然后滴加水直到固体消失，再加一滴酚酞试液，观察并解释发生的变化。 2. 醇的氧化 取 4 支试管，分别加入 5 滴仲丁醇、叔丁醇和蒸馏水，然后各加入10滴1.5mol/L 硫酸和0.17mol/L 重铬酸钾溶液，振摇，观察并及时记录出现变化快慢的时间。 3. 与卢卡斯试剂反应 取3支试管，分别各加入5滴仲丁醇、叔丁醇，在50?60C水浴中加热，然后同时向 3 支试管中各加入 5 滴卢卡斯试剂，振摇、静置，观察并解释产生的现象。 4. 甘油与氢氧化铜反应

茶叶多酚氧化酶活性测试

江南大学-食品化学实验讲义茶葉多酚氧化酶的活性測定 茶葉多酚氧化酶的活性測定 一、目的要求 通過實驗，掌握茶葉多酚氧化酶活性的測定方法。 二、基本原理 茶葉多酚氧化酶是茶樹體內最重要的酶類之一，它不僅在茶樹生理代謝 過程中起著重要作用，而且在茶葉加工，尤其在紅茶製造過程中，催化 多酚類物質的氧化也起著主導作用。 多酚氧化酶的活性檢測方法，包括檢壓法、分光光度法、氧電極法和滴 定法等。多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶，在一定的溫度、pH條件下， 有氧存在時，能使催化鄰苯二酚氧化生成有色物質，單位時間內有色物 質在460nm處的吸光度與酶活性強弱成正相關，即可計算出多酚氧化酶 的活力和比活性。反應式如下： 多酚氧化酶 鄰苯二酚（兒茶酚）＋1∕2 O2——————→ 鄰醌＋ H2O 三、材料、儀器及試劑 1、材料：茶樹鮮葉。 2、儀器：721型分光光度計；離心機；恆溫水浴；研缽或勻漿機；試管；移液管；紗布袋等。 3、試劑：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；0.1M磷酸緩衝液（pH6.5）；硫酸銨；1%鄰苯二酚溶液；0.1%脯氨酸溶液；6M尿素溶液或20%三氯醋酸。 四、操作步驟 1、粗酶液的製備 稱取洗盡茶樹鮮葉5.0g於研缽（或勻漿機）中，加入2g 不溶性聚乙烯吡 咯烷酮（事先用蒸餾水浸洗，然後過濾以除去雜質）和100ml 0.1M pH6.5磷酸緩衝液,磨成勻漿，用幾層紗布袋過濾，濾液加入30%飽和度硫酸銨，

離心除沉澱，上清液再加硫酸銨使達60％飽和度，離心收集沉澱。將所 得沉澱溶於2~3ml 0.1M pH6.5磷酸緩衝液中，即為粗製酶液。 2、活性酶的測定 取酶液1ml於離心管中，加入3ml反應混合液（2.0ml 0.1M pH6.5磷酸緩 衝液，0.6ml 1%鄰苯二酚溶液；0.4ml 0.1%脯氨酸溶液），在37℃恆溫水 浴中保溫10min，立即加入6M尿素溶液3ml或20%三氯醋酸1ml終止反應。 4000rpm離心10min。取上清液，用1cm比色皿，在460nm波長處，在1~2min內測定吸光度值（A）。空白對照用緩衝液代替反應液中的鄰 苯二酚，其它條件相同。 五、酶活性的計算 以每克樣每分鐘內A460增加0.1為1個酶活力單位。 A460×酶提取液總量（ml） 酶活力（0.1A?g-1?min-1）＝—————————————————————————— 0.1×反應時間（min）×樣品鮮重（g）×測定時酶液用量（ml） 六、注意事項 1、反應混合液必須現配現用，否則會因鄰苯二酚自動氧化而失效；鄰苯 二酚還可用兒茶素代替。 2、脯氨酸是用作有色氧化產物形成的穩定劑和加速劑。

(实验化学)乙醇和苯酚的性质实验

《实验化学》专题2 物质性质的探究 课题2 乙醇和苯酚的性质 路桥中学张红岗 一、实验目的 1.通过实验的方法进一步认识乙醇,苯酚的重要的物理性质和化学性质 2.通过实验对比的方法,认识乙醇、苯酚因结构上的差异引起性质差异的原因,并能比较醇羟基和酚羟基的化学活性 3.学习实验室制备酚醛树脂的方法,学会水浴加热方法 4.体验运用实验方法探究物质性质的过程 5.初步形成一定的分析,推理与归纳能力 二、实验药品 无水乙醇、苯酚晶体、钠单质、乙醚、苯、丙酮、四氯化碳、5%K2Cr2O7溶液2mol/L的硫酸溶液、浓硫酸、2mol/LNaOH溶液、0.01mol/LKMnO4溶液、 浓溴水、FeCl3溶液、稀盐酸、大理石、饱和碳酸氢钠溶液 三、实验操作和现象 结论：事实上实验现象与我们推测的不符合! 以乙醚做溶剂时,乙醇与钠反应比苯酚与钠反应快! 事实上：如果用苯、丙酮、四氯化碳等溶剂来代替乙醚，也不能明显的观察到苯酚与钠反应比乙醇与钠反应快

为什么在乙醚中，苯酚与钠反应比乙醇与钠反应要慢一些呢？ 原因猜测: 原因一: 乙醇钠易溶于乙醇、乙醚而苯酚钠难溶于乙醚,类似于实验室制CO2不能用块状CaCO3与稀H2SO4反应一样,反应过程中,生成的苯酚钠附着在钠块表面,使反应减慢 原因二:考虑氢键的影响 苯酚羟基氢与苯环共轭∏键之间形成的氢键比乙醇分子间的氢键要强.正是这种强的氢键约束了羟基氢,破坏这类氢键需要更高的能量 原因三:从分子结构上分析: 苯酚中羟基氢与苯环之间形成氢键,羟基氢被∏电子云所笼罩,紧扣其中, 金属钠首先接触的是∏电子云,电子传入必然受到∏电子云排斥,所以苯酚与金属钠的反应活化能比钠与乙醇反应的活化能要高 结论:以乙醚为溶剂, 乙醇.苯酚与钠反应这个实验 可以验证: 乙醇和苯酚都能和钠反应 不能证明: 苯酚羟基氢比乙醇的羟基氢活泼 如果做这个实验的目的是证明乙醇和苯酚都能和钠反应, 则这个实验可以达到目的如果做这个实验的目的是证明苯酚羟基氢比乙醇的羟基氢活泼, 则这个实验不能达到目的 那么如何证明苯酚中的羟基比乙醇中的羟基更活泼呢？其实方法很多 如：１、.取两只试管，加入２ml的稀NaOH溶液，加入１－２滴酚酞，取０.４６g乙醇和０.９４g苯酚加入试管中， 加入苯酚的试管溶液颜色明显变浅，加入乙醇的试管溶液颜色变化不大 ２、取适量乙醇和苯酚，分别配制成同物质的量浓度的溶液，分别滴加到NaAlO2溶液中，能产生浑浊的是苯酚溶液 C6H5OH+ NaAlO2 + H2O ===== C6H5ONa+Al(OH)3 （注：此实验也可以用酸性KMnO4代替酸性K2Cr2O7溶液）

多酚氧化酶特性研究

多酚氧化酶特性研究 摘要: 采用分光光度法, 对板栗仁多酚氧化酶( PPO) 的催化特性、最适波长、最适反应时间、最适温度、最适pH 值、热稳定性等性质进行了研究, 同时研究了Vc、EDTA、NaCl、柠檬酸4种添加剂对板栗仁多酚氧化酶活性的影响。结果表明: 板栗仁多酚氧化酶催化氧化产物的最大吸收波长为410nm, 最佳反应时间为3min, 最适反应温度为30℃ , 最适pH 值为6. 0, 米氏常数Km = 0.0694mo l/L, Vmax = 3.918OD/min。95℃水浴处理5min该酶已基本失活, 其中V c和EDTA对板栗仁多酚氧化酶酶促褐变有很好的抑制效果。 关键词: 板栗; 多酚氧化酶; 褐变; 抑制多酚氧化酶( Polyphenolox idase, PPO ) 是由核基因编码的铜金属酶, 其酶促褐变机制是: 内源性酚类物质在多酚氧化酶的催化下氧化生成醌, 醌再相互作用生成高分子聚合物, 从而导致褐色素的生成。它能催化两类不同的反应, 可以使一元酚羟基化, 生成相应的邻二羟基化合物;也可以氧化邻苯二酚生成醌[ 1]。而酚类物质是果疏组织褐变的物质基础, 不同植物、同一植物的不同组织, 同一植物的不同品种、生长环境以及不同的发育期, 其褐变的主要酚类物质均有所不同, 导致酶褐变活性也有所差异。云南富产板栗, 但对板栗仁PPO 的活性及影响活性因素的研究则未见报道。1材料与方法 1.1材料 板栗市场购外观良好, 无病虫害, 无机械损伤新鲜的云南板栗。 1.2试剂与仪器 主要试剂: 聚乙烯吡咯烷酮( PVPP)、邻苯二酚、乙酸钠、冰乙酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醇、乙醛、盐酸、维生素C ( V c)、EDTA、柠檬酸、氯化钠等, 均为国产分析纯。 主要试验仪器: TGL - 16G 高速台式冷冻离心机、722W 型分光光度计、HH - 4型数显恒温水浴锅、冰箱等。 1.3试验方法 1.3.1粗酶液的制备 酶液提取参照文献[ 2] 的方法, 有所改进。称150g 冷冻鲜样, 加入PH 值6.0 的0.05mol /L冷冻磷酸缓冲液150mL 和15gPVPP, 打浆, 过滤, 于3℃下12000r /min 离心15min, 取上清液置于0~ 4℃保存备用。 1.3.2褐变度( BD) 的检测 称5g 样品加入15mL 蒸馏水中研磨, 离心( 14000r/min、15min)。沉淀溶于15mL 甲醇甲酸溶液(体积比1:1), 充分浸提15min 后离心。 将两次所得上清液混匀后用蒸水定容为25mL, 离心, 取上清液检测410nm 下的吸光值An ×10 表示。 1.3.3总酚( TP) 的提取和含量检测 称取5g 样品, 加入15mL 乙醛- 盐酸溶液( pH3.0) 研磨, 在恒温水浴中震荡1h, 取出离心15000r /min, 30min, 量取滤液体积, 吸取5mL, 用蒸水定容到50mL, 测定A 值, 用邻苯二酚做标准曲线。 1.3.4酶活性的测定 取2mL 0.2mol/L 邻苯二酚溶液和2mL一定pH值的磷酸缓冲溶液加入到试管中, 然后加入0.5ml的粗酶液, 水浴保温3min后立即倒人比色管中, 在410nm波长处测定反应混合液的吸光值变化(△A), 每30s读数1次, 共记录3min。空白用

茶鲜叶多酚氧化酶的活性测定(3学时)解析

实验一茶鲜叶多酚氧化酶的活性测定（3学时） 一、目的要求 1、通过实验，掌握茶叶多酚氧化酶活性的测定方法。 2、理解酶活性测定常规方法及一般原理。 二、基本原理 茶叶多酚氧化酶是茶树体内最重要的酶类之一，它不仅在茶树生理代谢过程中起着重要作用，而且在茶叶加工，尤其在红茶制造过程中，催化多酚类物质的氧化也起着主导作用。 多酚氧化酶的活性检测方法，包括检压法、分光光度法、氧电极法和滴定法等。多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在一定的温度、pH条件下，有氧存在时，能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质，单位时间内有色物质在460nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下： 多酚氧化酶 邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2 O2 ——————→ 邻醌＋H2O 三、仪器及试剂 1、材料：茶树鲜叶。 2、仪器：721型分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵或匀浆机；试管；移液管；纱布袋等。 3、试剂：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；0.1M磷酸缓冲液（pH6.5）；硫酸铵；1%邻苯二酚溶液；0.1%脯氨酸溶液；6M尿素溶液或20%三氯醋酸。 四、操作步骤 1、粗酶液的制备：称取洗尽茶树鲜叶5.0g于研钵（或匀浆机）中，加入2g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和100ml 0.1M pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2~3ml 0.1M pH6.5磷酸缓冲液中，即为粗制酶液。 2、活性酶的测定：取酶液1ml于离心管中，加入3ml反应混合液（2.0ml 0.1M pH6.5磷酸缓冲液，0.6ml 1%邻苯二酚溶液；0.4ml 0.1%脯氨酸溶液），在37℃恒温水浴中保温10min，立即加入6M尿素溶液3ml或20%三氯醋酸1ml终止反应。4000rpm离心10min。取上清液，用1cm比色皿，在460nm波长处，在1~2min内测定吸光度值（A）。空白对照用缓冲液代替反应液中的邻苯二酚，其它条件相同。 五、结果计算 以每克样每分钟内A460增加0.1为1个酶活力单位。

实验四 醇、酚、醛、酮、羧酸以及衍生物的性质

实验报告 学院：第二临床医学院专业：临床医学年级：级班级：班姓名：学号：日期：2014,5,5 实验课程：有机化学实验 实验名称：实验四多元醇、酚、醛、酮、羧酸以及衍生物的性质 【实验目的】 认识多元醇、酚、醛、酮的一般性质，并掌握其鉴定方法。 认识羧酸及其衍生物的一般性质。 【实验原理】 一、多元醇与氢氧化铜（以乙二醇为例）： 多元醇绛蓝色 二、苯酚的弱酸性： C6H5OH+NaOH→C6H5ONa+H2O C6H5OH+Na2CO3→C6H5ONa+NaHCO3 C6H5OH+Na2HCO3不反应 三、醛、酮的性质 1、醛、酮的亲核加成反应 2、碘仿反应 3、与斐林试剂的反应 四、羧酸的性质 1、成盐试验（与氢氧化钠作用）

2、酯化反应 浓硫酸 CH3CH2OH+CH3COOH=CH3CH2OOCH3+H2O 加热 【实验步骤】 一、多元醇的性质 多元醇与氢氧化铜的反应 取3支试管，各加入8滴10%的氢氧化钠及5滴2%硫酸铜溶液，制得新鲜的氢氧化铜。3支试管中分别依次加入5滴乙二醇、甘油、1,3-丙二醇，观察现象。再加入几滴稀盐酸，观察变化。 二、苯酚的性质 苯酚的弱酸性 取3支试管，各加入5滴苯酚溶液，再分别加入5%氢氧化钠溶液、5%碳酸钠溶液、5%碳酸氢钠溶液5滴，振荡。比较3支试管中的现象。并说明原因。 三、醛、酮的性质 1、醛、酮的亲核加成反应（与2,4-二硝基苯肼的加成） 去5支试管，各加入10滴2,4-二硝基苯肼试剂再分别加入甲醛、乙醛、丙酮、苯乙酮、和苯甲醛，摇匀后静置，观察有无结晶析出，并注意结晶的颜色，若无沉淀析出可在温水中微热再观察。 2、碘仿反应 去6支试管，各加入3ml蒸馏水，分别加入甲醛、乙醛、丙酮、苯乙酮、95%乙醇、异丙醇5滴，再加入1ml碘液，滴加5%氢氧化钠溶液至红色消失为止，几分钟后观察有无沉淀析出，能否嗅到碘仿气味。如果只发现白色混浊把试管置于50-60℃的水浴中温热几分钟，再观察现象。 3、与斐林试剂的反应 取4支试管，各加入斐林试剂A5滴、斐林试剂B5滴，混匀，再分别加入甲醛、乙醛、丙酮、苯甲醛各5滴，振荡混匀，然后置于沸水浴中加热几分钟，观察现象，比较结果。

醇和酚的性质实验报告

醇和酚的性质实验报告 （文章一）：苯酚的性质探究-实验报告苯酚的性质探究实验报告（一）、实验目的：通过实验加深苯酚的重要性质的认识；了解检验苯酚的实验方法。+ NaOH + H2O （二）、实验原理： （三）、实验仪器、药品试管、试管架、滴管、烧杯、长导管酚酞、蒸馏水、5%NaOH溶液、稀盐酸、饱和溴水、FeCl3溶液 （四）、实验步骤+ 3Br2 Br +CO2+H2+ HCl + NaCl + NaHCO3 Br Br + 3HBr 【课后巩固】 （1）、除去苯中所含的苯酚,可采用的适宜方法是（）A. 加70℃以上的热水，分液B. 加足量NaOH溶液，分液C. 加适量浓溴水，过滤D. 加适量FeCl3溶液，过滤 （2）、欲从苯酚的乙醇溶液中回收苯酚，有下列操作：①蒸馏②过滤③静置分液④加入足量金属钠⑤通入过量CO2气体⑥加入足量的苛性钠溶液⑦加入足量的FeCl3溶液⑧加入乙酸与浓硫酸混合液加热，合理的操作顺序是（）A. ④⑤③B. ⑥①⑤③C. ⑧①D. ⑧②⑤③ （3）、下列关于苯酚的叙述中，正确的是（）A．苯酚呈弱酸性，能使石蕊试液显浅红色B．苯酚分子中的13个原子有可能处于同一平面上C．苯酚有强腐蚀性，沾在皮肤上可以用NaOH溶液洗涤D．苯酚能与FeCl3溶液反应生成紫色沉淀

（4）、A、B、C三种物质的分子式都是C7H8O 。若滴入FeCl3溶液，只有C呈紫色；若投入金属Na，只有B无变化。（1）写出A、B 的结构简式、。（2）C有多种同分异构体，若其一溴代物最多有两种，C的这种同分异构体的结构简式是。 （文章二）：(实验化学)乙醇和苯酚的性质实验《实验化学》专题2 物质性质的探究课题2 乙醇和苯酚的性质路桥中学张红岗（一）、实验目的 1.通过实验的方法进一步认识乙醇,苯酚的重要的物理性质和化学性质 2.通过实验对比的方法,认识乙醇、苯酚因结构上的差异引起性质差异的原因,并能比较醇羟基和酚羟基的化学活性 3.学习实验室制备酚醛树脂的方法,学会水浴加热方法 4.体验运用实验方法探究物质性质的过程 5.初步形成一定的分析,推理与归纳能力 （二）、实验药品无水乙醇、苯酚晶体、钠单质、乙醚、苯、丙酮、四氯化碳、5%K2Cr2O7溶液2mol/L的硫酸溶液、浓硫酸、2mol/LNaOH溶液、0.01mol/LKMnO4溶液、浓溴水、FeCl3溶液、稀盐酸、xx石、饱和碳酸氢钠溶液 （三）、实验操作和现象结论：事实上实验现象与我们推测的不符合! 以乙醚做溶剂时,乙醇与钠反应比苯酚与钠反应快! 事实上：如果用苯、丙酮、四氯化碳等溶剂来代替乙醚，也不能明显的观察到苯酚与钠反应比乙醇与钠反应快为什么在乙醚中，苯酚与钠反应比乙醇

多酚氧化酶的活性测定的报告

朴东日：多酚氧化酶活性的测定。一、试验目的 本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原 理及操作技术。 二、试验原理 酚氧化酶（PPO）催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓 冲液PH6.0的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色 的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生 变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。 三、试验材料、试剂及试验用品 材料：李子样本80个（按照80个预算药品）李子处理：果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发 育中期果实用1-MCP处理、发育中期果实用乙烯 处理。 药品：预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ １ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚 ４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４） 四、实验方法：

1.ＰＰＯ的提取取１ｇ李子果肉样品，冰浴研磨，加入预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ，在４℃下离心（４２００ｒ／ｍｉｎ）１０ｍｉｎ，取上清液为蜜柚果肉ＰＰＯ酶提取液。 2.ＰＰＯ活性测定采用比色法测定。将１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚加入４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）中，加入１ｍＬ酶液，立即于波长４２０ｎｍ下测定吸光度的变化，每隔２０ｓ记录１次，共记录３ｍｉｎ。以不加酶提取液的反应液做对照，以每分钟吸光度变化０．０１为１个ＰＰＯ酶活性单位。 3.最后作吸光度A与反应时间的关系曲线图，依据曲线最初直线段的斜率(ΔA/t)计算PPO活力。(注意空白为：2.5 mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚溶液)一个酶活力单位定义为：以每分钟每毫升增加吸光值0.001的酶量为一个酶活力单位U。 4.多酚氧化酶酶活的计算公式：E=M×60/V (式1)式中：M—每秒钟增加的吸光值V—粗酶液的体积/mL。

实验4、性质实验1

有机化学实验报告 实验名称：烃、卤代烃、醇、酚、醚、醛和酮的性质所在班级：专业班学号： 姓名： 实验时间：年月日实验成绩：

实验四 烃、卤代烃、醇、酚、醚、醛和酮的性质 【实验目的】 1、验证烃、芳香烃、卤代烃、醇、酚、醚、醛和酮的主要化学性质。 2、掌握烯、炔、芳香烃、卤代烃、醇、酚、醛和酮的鉴别方法。 【实验原理】 烃类中烷烃在一般情况下比较稳定，在特殊条件下可发生卤代反应。而烯烃和炔烃由于分子中具有不饱和双键（>C=C< ）和叁键（—C ≡C —），所以表现出加成，氧化等特征反应。具有R —C ≡CH 结构的炔烃，因含有活泼氢，能与重金属，如亚铜离子，银离子形成炔基金属化合物，故能够与烯烃和具有R —C ≡C —R 结构的炔类相区别。 芳烃由于在环状共扼体系中电子密度平均化的结果，它的化学性质比烯烃、炔烃稳定，难于发生加成反应和氧化反应，却易发生取代反应，构成了苯和其它芳香烃的特征反应。 卤代烃分子中的C-X 键比较活泼，—X 可以被—OH 、—NH 2、—CN 等取代，也可与硝酸银醇溶液作用，生成不溶性的卤化银沉淀。烃基的结构和卤素的种类是影响反应的主要因素，分子中卤素活泼性越大，反应进行越快。各种卤代烃卤素的活泼顺序如下： R-I > R-Br > R-Cl RCH=CHCH 2X ，PhCH 2X > 3°R-X > 2°R-X > 1°R-X >CH 3 -X > RCH=CHX ，Ph-X ； 醇类的特征反应与羟基有关，羟基中的氢原子可被金属钠取代生成醇钠。羟基还可被卤原子取代。伯、仲、叔醇与卢卡斯（Lucas ）试剂（无水氯化锌的浓盐酸溶液）作用时，反应速度不尽相同，生成的产物氯代烷不溶于卢卡斯试剂中，故可以根据出现混浊的快慢来鉴别伯、仲、叔醇。立即出现混浊放置分层为叔醇，经微热几分钟后出现混浊的为仲醇，无明显变化为伯醇。此外，伯仲醇易被氧化剂如高锰酸钾、重铬酸钾等氧化，而叔醇在室温下不易被氧化，故可用氧化反应区别叔醇。 多元醇如丙三醇、乙二醇及1，2-二醇等邻二醇都能与新配制的氢氧化铜溶液作用，生成深蓝色产物，此反应可用于邻二醇的鉴别。 酚的反应比较复杂，除具有酚羟基的特性外，还具有芳环上的取代反应。由于两者的相互影响，使酚具有弱酸性（比碳酸还弱），故溶于氢氧化钠溶液中，而不溶于碳酸氢钠溶液中。苦味酸（2，4，6-三硝基酚）则具有中强的酸性。苯酚与溴水反应可生成2，4，6-三溴苯酚的白色沉淀，可用于酚的鉴别。此外，苯酚容易被氧化，可使高锰酸钾紫色退去。与三氯化铁溶液发生特征性的颜色反应，可用于酚类的鉴别。 醚与浓的强无机酸作用可生成 盐，故乙醚可溶于浓硫酸中。当用水稀释时， 盐又分解为原来的醚和酸。用此可分离或除去混在卤代烷中的醚。蒸馏或使用乙醚时，严禁明火 醛和酮分子中含有羰基 (>C=O)，所以它们都能与许多试剂发生亲核加成反应。其中与2，4―二硝基苯肼加成时生成黄色2，4―二硝基苯腙沉淀是鉴别羰基化合物的常用方法。 (R)H R C O + NHNH 2 NO 2 NHN H(R) H 2O R C NO 2 2 NO 2+ 受羰基影响，α-H 比较活泼，容易发生卤代、缩合反应。 醛和甲基酮与亚硫酸氢钠发生加成反应，加成产物以结晶形式析出。如果将加成物与稀盐酸或稀碳酸钠溶液共热，则分解为原来的醛或甲基酮。因此这一反应可采用来鉴别和纯化醛或甲基酮。 R C O +(CH 3)H NaHSO 3 OH R SO 3Na C (CH 3)H 醛和酮结构上的区别，在反应中表现相互不同的特点。醛羰基碳上连接一个氢原子而有还原性，

实验六 酚的性质与鉴定

实验六酚的性质与鉴定 一、实验目的 1、熟悉酚的基本性质； 2、掌握酚的鉴别方法。 二、实验原理 酚的分子中，由于羟基中的氧原子与苯环形成P-π共轭，电子云向苯环偏移，溶于水后可以电离出氢离子，显示弱酸性。 但是苯酚的酸性比碳酸弱。若将苯酚钠与碳酸钠溶液反应，可以析出苯酚。用这种方法可以分离苯酚。 苯酚可以和NaOH反应，但不与NaHCO3反应。 利用醇、酚与NaOH和NaHCO3反应性的不同，可鉴别和分离酚和醇。 苯酚与溴水在常温下可立即反应生成2，4，6-三溴苯酚白色沉淀。反应很灵敏，很稀的苯酚溶液就能与溴水生成沉淀。故此反应可用作苯酚的鉴别和定量测定。 （白色） 酚类可以与FeCl3溶液反应显色，用于鉴别酚类。苯酚可以用于制备酚酞。 棕红色蓝紫色

三、实验器材 仪器：试管、试管架、试管夹、酒精灯、pH试纸 无机试剂：NaOH（5％），饱和溴水，NaHCO3(5％,饱和)，的Na2CO3(5％)， 5％FeCl3，HCl(5％)溶液； 有机试剂：苯酚 四、实验步骤 1、酚的溶解性和弱酸性 将0.2 g的苯酚放在试管中，加入3mL水，振荡试管后观察是否溶解。用玻璃棒蘸1滴溶液，以广泛pH试纸测定其酸碱性。然后再加热试管，直到苯酚全部溶解。 将上述溶液分装在3支试管中，冷却后出现浑浊，在其中一支试管中加入2～3滴5％的NaOH溶液，观察是否溶解。再滴加5％的盐酸，有何变化？在另2支试管中分别加入5％的NaHCO3溶液和5％的Na2CO3溶液，观察是否溶解。 2、酚类与FeCl3溶液的显色反应 在试管中加入1%苯酚0.5mL，再加入1～2滴1% FeCl3溶液，观察和记录各试管中所显示的颜色。 3、与溴水的反应 在1支试管中加入2滴苯酚饱和水溶液，再加2 mL水稀释，在另一只试管中加入2 mL自来水，然后在两只试管中逐滴加入饱和溴水，比较两只试管中的现象。写出反应方程式。 五、思考题 1、如何鉴别醇和酚？ 2、举例说明具有什么结构的化合物能与FeCl3溶液发生显色反应？ 3、为什么苯酚比苯和甲苯容易发生溴代反应？