【红茶馆】SSR攻略5.0
作者前言：亲们好~感谢购买攻略，我叫B导
我们做游戏工作室很多年了，也涉猎过很多游戏，剑灵、梦幻西游、上古世纪、疾风之刃、天涯明月刀，英雄联盟，传奇，新飞飞等等。其实现在游戏有一个
风向，那就是策划都丧心病狂了，基本上没什么老老实实卖东西的了，只要没
抽奖，没脸说自己是个游戏，对于抽奖其实我们早有心得。但最开始起源于剑
灵有个马尾，很受欢迎，抽奖才抽得到，那时候我的会员，妹子们很多，她们
喜欢，就叫我帮开，我那时候每天都在帮忙抽奖，后来实在是累，但是还是很
多人，他们就建议我收钱代抽，于是代抽业务就一直在做，后来呢还是很多人
找我帮忙，而代抽费用高昂，于是有人建议我们写个攻略给他们参详。就一直
在做各种抽奖教学，以及代抽，延续至今。游戏充值的数额接近400万。
400万是个什么概念呢？每个游戏抽奖金额都不一样，有几块钱，也有几十块钱，平均10块钱一次来算，我们在各种游戏抽奖也抽了40万下了。一个一般的鼠标，点个100万下就差不多可以告废了。所以说，先要感谢你买攻略，更要恭喜你买到攻略，因为我们对抽奖真的太有心得了，现在迫切的想把这些想
法分享给你。
除此攻略，我做游戏教学也很久了，在很多游戏的相关贴吧论坛都可以看到我
发的教学贴，但我教学有个习惯，会首先详细的告诉你原理以及其中的运作机制，但是如果过于详细的话，就会变成学术上的探讨，那么大家都会失去阅读
的兴趣了，所以我尽量会浅显的讲，然后举一些通俗易懂的例子来说给大家听。即使如此，要把一个东西说通说透还是很复杂，所以希望你多看几遍，看不懂
一定要问客服，以免操作错误损失了你自己的钱财！
因为通俗易懂，所以很多人觉得我写的东西都特别有趣，我也不会直接告诉你
应该怎么做怎么做，我在写这份攻略的时候，看了网上一些玄学的帖子，那些
作者们大言不惭的告诉人们，几点钟抽，画什么形状，几频道抽，其实他说的
越肯定，就越发说明他是胡说八道，因为他没有论据能支撑自己的观点，只能
说一些简短且让你无法去反驳的话，来证明自己是对的。所以各种抽奖方法，
都被冠上“玄学”这个称号，实际上，玩游戏玩的久的，都知道，“玄学”在
游戏内实际上是一个贬义词，来源于最初一些盛行抽奖的游戏，有很多喜欢装
B的人，想当然的乱说一些方法，规律，大家试了毫无效果，有人就会调侃说
这是“玄学”。
显然，我们攻略不会这样，20元虽不多，但你花钱购买，是我的客户，我就会让你感觉到这份攻略与所谓“玄学”是不同的，是有理有据令人信服的。总之
我想说，这份攻略绝不是瞎胡扯。但越发是有理有据的内容，就越得严谨，所
以我要说明白，没有什么方法是必出你想要的东西的，但这个攻略你理解吸收
了绝对可以提高对游戏抽奖的理解。我会告诉你规律，但是能不能顺应这个规
律去抽到想要的东西，所需要的因素很多。希望亲如果没抽到，也别怨恨。而
是积极的来联系我们，我们帮你解答你的疑问，以及告诉你正确的操作方式。
总而言之，20元只能抽一次符，而你花这个钱，购买这个攻略，我不敢说你赚大发了，但是绝对超值，另外，大家花钱买攻略，想学习的是抽奖画符技巧，
以及怎么样让自己更容易出SSR，但是我还是要多一句嘴，这个游戏式神只代表了技能，不代表强度，就像你玩其他的游戏，选择职业一样，它只是技能不
一样，而强度是跟式神培养有关的，例如御魂，等级，星级。所以呢，SSR固然很好，但是他并不代表“强”，所以你要使用超出你经济承受范围的钱，去
抽SSR，我是极力不推荐的，因为在我看来这样做很傻，图中充了46万的土豪，后来充值额度已经突破了90万，接近了100万人民币，但是他打斗技，
很少用SSR，大多数情况是一只白狼射爆全场，所花的钱，大部分都花在了御魂上。（关于新手对式神的理解，在后面附录部分会详细说明，新手必看。）
这个游戏，开局看式神，中期看御魂，后期就纯粹看套路了。不管无论如何，
式神在你强不强这方面，占的比重很小，请大家抽奖有度，小赌怡情，大赌伤身，这是作为一个同为玩家的我，而不是写攻略的作者的劝告。
最后给一个能联系到我的方式，QQ：798339371。如果有迫切想法想要说出来，可以加我，但是如果只是寻常的抽奖问题，或是攻略没弄懂，可直接联系淘宝
客服，解答问题这方面的能力，他是SSR级，我是N卡。祝游戏愉快。
目录以及阅读指南：
第一部分：伪随机（对计算机、游戏抽奖、初始号的机制讲解）
第二部分：阴阳师中的伪随机（对阴阳师奖池制度讲解）
第三部分：判断奖池状态（核心重要内容，判断是否可以抽奖）
第四部分：频道选择（核心重要内容，抽奖前必备准备工作）
第五部分：时间段选择（核心重要内容，判断什么时间段容易出好东西）
第六部分：如何抽SSR/指定SSR？（针对想抽SSR玩家的建议）
第七部分：常见问题汇总（部分没弄懂的可以参考此章）
第八部分：重要点总结（看完全篇以后请温习一遍此部分）
第九部分：附录（针对萌新玩家，包括如何得蓝票，游戏初步指南等）
第一部分：伪随机
可能各位买攻略之前，甚至看到这里的时候，心里都是持怀疑态度的，毕竟，抽奖与运气这两个东西永远是挂钩在一起的，有方法能抽出好东西？就像告诉你有方法可以让你彩票中奖一样，那大家肯定会怀疑，这很正常，因为这是与生俱来的观念。
那么呢，为了扭转这种观念，我决定第一部分来给大家介绍伪随机的概念。
首先以一篇故事来举例什么叫作伪随机：
农夫有一头牛快病死了，他这头牛300元买的，现在100元卖没人要，显然很亏，于是这个农夫在自己的村子里，想了这么一个办法，举办一个抽奖玩法，1元抽一次奖，中奖者可以牵回去这头牛，虽然牛病得要死，但是1元是有机会中一头牛的，人人都这么想，于是都跑去抽奖，结果，这个养牛的农夫反而赚了500元。为什么弄游戏的各个代理商，运营商，都喜欢弄抽奖呢？道理显而易见，抽奖会使人花费更多的钱，并且，对赌沉迷是人类的天性。设置抽奖赌博更容易赚钱。
这是一个有关商业的小故事，B导摘来用了，那么这个例子仅此而已吗？我们较真一点，换个方向思考一下。
奖品只有一头牛，而农夫赚了500元，假设每个人都只抽1元的话，那么就是有500个人参与抽奖，每人中奖概率是500分之1。这是正常的逻辑。然而事实不可能跟计算一样简单。我们假设，500个人来抽奖，但是第200个人就把牛抽走了。
那么后面的300人，他们中奖的概率则并不是百分之一，而是百分之零。
显然，后面来参与这次抽奖活动的300个人，他们参与的就不叫抽奖活动了，只是去送钱给这位狡猾的农夫而已。这就叫作“伪随机“
那么，游戏中抽卡/抽奖也真的有技巧吗？不是看谁的血统更欧吗？
错误，抽奖是有技巧的，但是跟你的血统也有一定关联，各占五分。
如果说你是在现实中，参与什么公正的抽奖活动，那的确是看运气，但是你现在处于一个虚拟程序中，你所面对的，是与游戏策划之间心态上的博弈，以及一堆堆游戏数值。所以没有纯粹的概率，我们面对的是一堆死程序，要学会怎么抽奖，首先就要学会去分析策划的心理状态，以及计算机相关简单知识。
在介绍什么技巧之前，先为大家好好的介绍一下计算机中的伪随机。
基本上所有游戏都有抽奖，只要是抽奖，就是概率事件。
但是，在计算机程序中，绝大多数概率事件，都是伪随机事件。
因为电脑压根就不知道【随机】是什么东西。因为很简单，不管是电脑运作还是各种
程序运作，都是一行一行的代码在运作。
代码是一个死板的东西，他只是一串很长的序列，他是固定死的，是不能变化的，只
能通过一些复杂的算法，让这个序列看上去没有什么规律，让人产生【随机】的感觉
而已。
有一本书叫做《入侵的艺术》，第一章讲的就是有几个年轻人，他们研究了这些电脑
序列的算法，然后在拉斯维加斯赌博机里面大赚特赚的故事。
所以呢，在我们玩的任何游戏中，或是在电脑中任何随机事件，都是假的，只是电脑
设置了一套复杂的算法，让你产生随机的感觉而已！
我只是给大家简单的讲原理，不希望把我们这个攻略变的很复杂，所以你如果想知道
相关的知识，可以去学习一些计算机专业的知识。
这是其一，计算机是无法进行随机的。
其二，伪随机也是为了保护公司与玩家的利益，数值策划故意设置的。这个等下在说。
先举个简单浅显的例子，大家可能用QQ音乐或者网易云等音乐播放器听歌。
里面有个功能，叫做随机播放。这就是伪随机的一种。
但他不是真正意义上的，给你随便播放某一首歌，因为程序无法做到这样。
其次，就算真的这样了，对你也未必是件好事。
他的运作过程是，首先将你的播放列表打乱，然后按这个打乱的顺序播放。
所以很多人经常用随机播放听自己的歌单，总是会发生一种情况。
我听到这首歌，就知道下一首歌是什么歌了。
例如下面这个例子就很好的说明了这个问题，我选择播放模式是随机播放，放的是《演员》，播放完了以后，下一首歌播放的是《祝君好》，这时候我在点击播放上一首，又变回了《演员》。
所以我列表的顺序虽然被打乱了，但是他是按照打乱以后的顺序放的。这就是典型的
伪随机例子。
为什么程序员们要这么做呢？前面说了，有时候，伪随机不只是保护公司的利益，也是为了保护玩家的利益。
打个比方，你用随机播放，恰巧歌单里面歌曲又不多。
就十首，那么每首歌概率都是百分之10。
而如果真真正正的随机播放，很有可能连续把同一首歌放10遍，这是一个相对糟糕的体验吧？
所以程序员们不会这么做，在游戏里也是一样，如果按概率来算。
那很有可能，你把同样的式神连续抽出十几次，那不是要疯掉？
以上随机播放只是简单的讲了一个程序伪随机的例子。
在游戏中也是这样的，
如果不弄伪随机，纯粹按概率来搞。
那就无法控制变量。很可能SSR一下子就泛滥了。
其次。也是变相保护非洲玩家。
有很多有强化的游戏有一个这样的设定，在你失败了N次以后会默认让你强化成功一次。为何呢？因为就是怕你不玩了。
世界上所有的庄家都一样，不怕你赢钱，就怕你不赌。
后来这一设置在氪金游戏领域里面大大运用，再之后，手游干脆不设置这么繁杂的数
据了，直接给你充钱保底，简单明了！
但是，阴阳师没有这一设定。
说句实话，阴阳师真的很火，但它这么火的原因，除了跟游戏自身比同类手游质量高
以外，还有一个更重要的原因，就是此款游戏对于运气的依赖。
阴阳师所有的游戏步骤都依靠概率，购买道具也不会提供保底，对赌沉迷是人的天性，大量的玩家在社交媒体上面吐槽自己的运气，我们在9月，10月，看的最多的话就是：这个游戏没有SSR。
导致了大量没接触过的网友们对此游戏好奇，然后跟着入坑，大量的玩家吐槽自己抽
不到SSR，而抽到SSR的玩家，觉得自己运气好，自然而然就会在社交媒体上炫耀
一番，而游戏本身的内容已经被抽卡掩盖了，如此自来水式的宣传，阴阳师想不火也难，所以这就是网易不设置保底的理由。
那么，不知道大家又发现了一个问题没有呢？
小号特别容易中奖。
这跟腾讯的某些游戏的作风很像，某些游戏里面，腾讯是拼命的讨好小号，0氪党。
他们一抽奖就容易出好东西，而氪金玩家往往难出好东西。
这也是伪随机一种，而且，是数值策划们故意加进去的设定。
原因很简单，前面就说了跟风的例子。这样的做法，可以让无价值玩家免费当游戏公
司的托。
那么如何让玩家自主的帮忙网易做宣传呢？？当然就是送你SSR，让你去截图装逼啊！
你以为为什么每次抽奖，右下角有个微博分享，微信分享？
包括几天没玩，回归就送符，以及各种召唤好友的活动，反正网易这一切的一切，都
是为了给自己的产品打造知名度，当然，这是营销上面的事情，跟抽奖技巧无关。
其实这个道理想想也是很简单的，有一种人，他不充钱，他就永远不会充钱，有另一
种人，玩游戏只是为了跟风凑热闹。
这样的玩家往往是建个小号就进来了，玩不了几天就弃坑，也注定不会花一分钱，对
于公司来说是无价值玩家！网易干脆让小号中奖概率提高，还能免费帮他做广告，宣传，当托。
请注意一点，但凡你这个号等级升上去以后，或是冲钱了以后，这种神秘的加成
BUFF就没有了，原因很简单，策划们的目的已经达到了。
你之于公司来说，你的价值要么是在线玩游戏，提高游戏的活跃度，要么你冲钱，给
公司带来收入。无论哪一种，只要你玩，你就有价值，那就尽量少给你SSR，让你的游戏周期延长一点。
如果你可能玩个1天就弃坑，跟风几天就消逝热情，给你SSR也不会亏什么，反正你也不打算充钱，我也留不住你，让你帮我打广告。
那很多人会问，如果我是有价值玩家，还被送了SSR怎么办呢？网易不亏么？
这个问题就更简单了，假如你是真心愿意充钱的，送你一个SSR只会让你充更多的钱。因为我在文章开头就说过了，SSR在你最终的强度比例中，只占了很少的部分。
所以在这个问题上说了这么多，我想在这里劝告一些想重金砸某个式神的新玩家。
如果你要某个式神，请直接买二手，也就是人家不玩的号。
这是一个很简单的概率问题，如果你不信邪，我可以给你计算一下。
以上这个图，是阴阳师游戏内的一个隐藏成就，达成了这些条件，你就可以解锁这些
成就，月见黑头像框，在游戏内相当一部分人持有，也就是说，相当一部分人，500
张符没出一个 SSR。一张符是20块钱，按礼包价格15元左右计算，也就是7500人
民币。
7500人民币没出一个SSR，都有相当一部分人，那大家知道SSR有多难出吧？虽然我们攻略，绝不可能让你变成这种人，但是你要知道，目前游戏内有十个SSR式神。
你可以就要茨木童子，但是也可能你把其余9个SSR都搞到手，就是抽不出来这个。
所以呢，要某个SSR式神，直接买二手。
还有很多萌新问自抽号、初始号是什么东西。
这里一并说一下，初始号跟我上面所说的二手号并不是一个东西。
所谓自抽号，就是一些商家，他们通过脚本，建立无数个小号，然后这些小号，每天
领新手符，大概可以积攒十来张符，你用这个小号去抽奖，抽到垃圾就弃用，抽到自
己心仪的SSR就用它开局玩。一个自抽号大约在2元左右。
但是需要注意，网易目前很针对自抽号，很容易把你抽出的式神回收！
初始号，就是自抽号已经抽出SSR的号，所以用不用这个东西进行开局，请见仁见智。
第二部分：阴阳师中的伪随机
伪随机都有这么几种玩法
洗牌 (Shuffle)
周期性（Periodicity）
钦定（蛤？）
以及各种各样的玩法，但是主要是这几种。
我上面说的音乐播放器的例子就是洗牌
而强化武器失败XXX次必成功就是钦定
小号更容易中奖，也是钦定。
而各种抽奖运用的最多的就是周期性阴阳师抽卡也是
那么周期性是什么意思呢？也就是会周期刷新的。
说白了，就是奖池刷新。
稀缺原理告诉我们，一个东西越稀有也就越值钱，那么如何让这些东西保持稀缺，就
是数值策划们需要考虑的事情，所以与其设置概率，倒不如伪随机，更可控。
简单点来说，我一天就投放那么几个SSR，没有了的时候你再怎么抽也不管用。
如果你不信我这个说法，我可以给你举一个例子。
在2016年国庆节左右的一次更新中，阴阳师迎来了第九位SSR式神，妖刀姬。
因为颜值，技能，CV等，该式神一度成为最受玩家们欢迎的SSR之一。结果，在10月份末尾的几天，诡异的事情发生了，不管是IOS区，安卓区，双线区，海外区，联
营区等，所有的区，所有的服务器，所有的频道，再无一个妖刀姬出现。那几天内，
妖刀姬的初始号一而再再而三的涨价，后来多家卖初始号店铺直接断货！
官方也并没有发文对此事进行表态，突然少了一个SSR，有些细心的玩家们，发现【神眷】N天没有出妖刀姬了，于是提出了这个问题，后来有一部分人推测，可能妖
刀姬要大改，甚至要重做！
而11.11日光棍节那一天，阴阳师发布了首个资料片，迎来了史上最重大的一次更新，结果，数十个式神进行了修改，御魂也进行了大改，但是关于妖刀姬的平衡性改动，
一点也没有。所以推测妖刀要大概甚至重做，根本是子虚乌有。
但是11.11更新以后，长达十几天没见天日的妖刀姬，终于又能抽出来了。
官方始终未对此事进行任何发声，有些人说可能是因为概率，大家都没抽出来而已，
我想说的是，别骗自己了，又或者说，官方出了什么概率BUG，我想说，如果你对游戏营运有一点了解，应该会知道，每次出抽奖之前，基本上都会大量跑数据进行测试，不可能存在出现什么BUG这种情况，就算真的是BUG，一个小补丁的事情马上就修
复了。
那么为什么凭空诡异消失掉再也抽不出来了？我想答案显而易见。
——奖池里的妖刀姬已经空了，官方就设置了那么多个在里面。
所以，显然为了控制SSR式神的数量，官方有一个大的暗奖池设置在内，只是我们看不到这种东西而已。这就是奖池制的抽奖，而绝非概率制。
但是好在，除了有一个大的暗奖池，每天奖池也会刷新的，他投放SSR不会在某一个时间段内一次性投放光，而会在一整天不同的时间段内投放完毕，投放数量多少也是
根据当前大区抽奖次数来决定的。
打个比方，你们老板叫你做活动送出五部IPHONE手机，一天之内，你不可能在早上
8点就把五部全部送出去，那样你下午就没得玩了，而一般正确的做法就是，早上玩
的人少送一部，下午玩的人少，也送一部，晚上参与活动的人多了，送三部。而晚上
人潮久久没有散去，奖品已经没了，为了提升人气，你们老板很可能在给你增加几部
手机让你送出去！
为了保证SSR的稀有率，只有抽奖的次数到达了一定的数量，奖池才会更新。
所以，这也是很多人觉得IOS区难抽，而双线区，安卓区都比较好抽的原因。
因为安卓有黑科技，可以用某些程序刷初始号，所以刷初始号的人比较多，而IOS则比较麻烦。而且安卓全是脚本，刷初始号的人多了，抽奖的次数也就上去了自然而然SSR式神就刷新的更多。
另外，网易对于版本控制，也会调整奖池，例如在某个版本满大街都是姑获鸟，人手
必备，没个这个式神基本玩不了这个游戏，那么自然，为了游戏的多样性，策划是不
愿意见到这种情况的，除了削弱姑获鸟以外，还会减少它在奖池中的数量，增加其他
冷门式神的数量，从而达到引导玩家练不同的式神，让游戏多元化的目的。（关于各
个式神出来的概率，会在后文第6部分中详细介绍。）
看到这里，你明白了奖池制度吗？
说白了，大家都认为抽奖是概率，也就是说拼脸，欧洲人出SSR，非洲人出R。是错
误的。
这是因为多数人抽奖，但是并没有对抽奖这个东西本身去进行分析，只是把抽奖这个
行为与运气挂钩起来，只要抽奖我们就联系到运气，受周围环境的影响，这是从小与
生俱来的观念，也只有像B导这样处在这么奇怪的一个行业，亦或是游戏数值策划，
才会研究它吧。
所以结论显而易见，虽然看脸，但是这是个奖池，脸好重要，但我们同样有规律可循。总结奖池制：
这奖池有100个式神，里面有1个SSR，9个SR，90个R。
这就是一个奖池。
当这100个式神被玩家们抽完，那么奖池会再刷新一遍。
这仅仅是一个比方。
那么，假如你现在正好遇到了当前奖池。
SSR，SR，已经一个不剩，也就是说你在这段时间内，不管怎么抽都是R。
抽一下15~20元，算一下抽个几下你还剩多少钱？
所以呢，这也是抽奖的一个重点，请无论如何不要连抽。
在一个时间段内SSR，SR就那么多，连抽的话，出R比例会超大幅度上涨！
所以我们抽奖，最重要的技巧就是判断奖池状态！碰见合适的奖池状态，我们抽几张
即可。
我会在下文详细教你如何判断奖池状态。
第三部分：判断奖池状态
前文已经明确的表明了，我们抽奖需要看奖池抽。
那么怎么判断奖池呢？好在这个游戏是有抽奖提示的。
也就是系统的【神眷】，在游戏内，别的玩家抽中了SR，SSR，会在这个频道内进行广播通报。
虽然这种提示系统设置是为了刺激大家消费，看到人家中了自己也想去抽，这是一个消费陷阱，但是，我们也可以反过来利用这种消费陷阱。
以上已经举例了阴阳师的抽奖运作机制，没错，如果奖池空了，我们怎么抽都是R，除非奖池再次刷新。
但是上面举的100个式神的例子是比较极端的，有时候，SR也会混在大量的R里面出来。但是通常只有1、2个，而且很少。也有的SSR会混在大量的R里面出，不过这种情况更少了。碰到这种情况你就没法判断了。我们也不必去赌这种小概率的事件。
好消息是，大部分SR、SSR，都是有规律的抱团出的。
重要点一：也就是说，按照相反的来，如果当前频道【神眷】内，中奖频率极低的话，那绝对不要抽！
如下图所示
如上图所示，这种情况千万不要抽，将近10分钟，就一只吸血鸟一只清姬。如果你在这十分钟以内抽完了你的符，后果可想而知。
什么10连R，20连R，基本都是这样发生的。
所以你就是给人当垫子了，我们一定要避免这种情况！
重要点二：所以我们选择的时间，一定要选择神眷大量涌
出的时间。
如下图所示！在沉寂了好几分钟以后，随着第一只SR一出，几秒钟不到的时间连续出一大堆SR，后面还有一大堆没截图。
SSR分子标记简介
微卫星DNA标记技术及其在遗传多样性研究中的应用 摘要微卫星DNA的高突变率、中性、共显性及其在真核基因组中的普遍性，使其成为 居群遗传学研究、种质资源鉴定、亲缘关系分析和图谱构建的优越的分子标记。本研究系统介绍了微卫星DNA在结构和功能上的特点，并对微卫星DNA标记技术应用的遗传学机理和一般方法进行了扼要的阐述。另外，本研究还探讨了微卫星DNA标记技术在遗传多样性研究中的应用现状，并进一步提出其发展前景。 关键词：微卫星DNA；微卫星DNA标记；遗传多样性 大量重复序列的存在是真核生物基因组的主要特点之一，而且这些重复序列的拷贝数可高达百万份以上。真核生物的基因组中，重复序列占有很大比重（＞50%）。按照重复序列在染色体上的分布方式，分为散布重复和串联重复（VNTR）两种类型。散布重复序列的拷贝数很多，在重复单位之间彼此常有序列的变化，难以用做分子标记。串联重复序列根据重复单元数目的大小又分为卫星序列(satellites)、小卫星序列(mini-satellites)和微卫星序列(microsatellites)3种类型。其中，卫星序列的重复单元大，一般分布在染色体的异染色质区，采用分子标记系统来揭示其多态性有一定的困难；小卫星序列主要存在于染色体近端粒处，通常以15~75个核苷酸为核心序列，长度从几十到几千个碱基不等；微卫星序列一般较短，属于以1~6个核苷酸为基本单元的简单串联重复。 微卫星DNA是真核生物基因组重复序列中的主要组成部分。微卫星DNA也称简单串联重复序列（SSRs）或简单串联重复序列多态性（STRP）。这些位点由非常短的串联重复DNA 片段（1-5个碱基）组成。微卫星DNA 最早是在人类基因组研究中发现的，它极其丰富，分布在整个基因组中[1]。人类基因组最普遍的微卫星是那些含有A、AC、AAAN、AAN 或AG（这里N 代表G、C或T）的序列。这5组重复序列大约占到人类基因组微卫星总量的75%。微卫星DNA 序列在大多数的其它动、植物基因组中也先后被发现，并且通过聚合酶链式反应可以确定其类型[2]。（AT）n和（A TT）n 是首先于大豆中发现的在不同的株系中长度有所不同的重复序列，它们也是第一个被定位的植物微卫星座位。Wang等[3]发现微卫星序列中所有的单、双和四核苷酸重复序列都分布在DNA非编码区，而含G-C 碱基对的三核苷酸重复序列有57%位于编码区。微卫星重复序列在植物中出现的几率比动物中少得多。在植物中，约29kb中有20bp的微卫星序列[4]，例如鹰嘴豆中（TAA）n、（GA） 和（CA）n 序列在平均60kb的长度中出现于12000个位点上[5]；而动物中，约每6kb中就n 有20bp的微卫星重复序列。另外，研究还发现植物中最丰富的微卫星是（A）n，其次是（AT）n，再次是（GA）n。
SSR标记的原理
简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR) 1.简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA) n和(TG) n每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目10一60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。 2.SSR标记的基本原理：根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称为“微卫星DNA”其两端的序列高度保守，可设计双引物进行PCR扩增，揭示其多态性。 3.SSR具有以下一些优点：(l)一般检测到的是一个单一的多等位基因位点；(2)微卫星呈共显性遗传，故可鉴别杂合子和纯合子；(3)所需DNA量少。显然，在采用SSR技术分析微卫星DNA多态性时必须知道重复序列两端的DNA序列的信息。如不能直接从DNA数据库查寻则首先必须对其进行测序。 4.SSR的分类 根据SSR核心序列排列方式的不同，可分为3种类型： 完全型(perfect)。指核心序列以不间断的重复方式首尾相连构成的DNA。如：ATATATATATATATATATATATATATATATATAT
不完全型(imperfect)。指在SSR的核心序列之间有3个以下的非重复碱基,但两端的连续重复核心序列重复数大于3 。如：ATATATATGGATATATATATCGATATATATATATATATGGATATATATA T 复合型(compound) 。指2个或2个以上的串联核心序列由3个或3个以上的连续的非重复碱基分隔开,但这种连续性的核心序列重复数不少于5 。如：ATATATATATATATGGGATATATATATATA 3种类型中完全型是SSR标记中应用较多的一种类型。 5.SSR在植物基因组中的分布 SSR广泛分布于各种真核生物的基因组中，大约每隔10～50kb 就存在一个SSR。哺乳动物中的SSR的数量大约为植物中的5～6倍。在植物中，平均23.3kb就有一个SSR；双子叶植物中的SSR数量大于单子叶植物，前者两个SSR之间的平均间距为21.2kb，后者为64.6kb；核DNA中的SSR数量多于细胞质DNA中的SSR，绝大多数单碱基重复型及2碱基重复型SSR存在于非编码区，3碱基重复型多位于编码区。 6.微卫星的利用价值 由于核心序列重复数的不同，等位的SSR位点可呈现出多态性（SSLP，simple sequence length polymorphism）。大多表现为共显性遗传，有的表现为显性遗传。由于SSR DNA两侧序列（离开20bp 以上）表现出保守特征，所以可设计出上下游PCR引物，扩增出包
SSR标记的原理步骤
SSR:微卫星DNA又叫简单重复序列，指的是基因组中由1～6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA，广泛分布于基因组的不同位置，长度一般在200bp以下。研究表明，微卫星在真核生物的基因组中的含量非常丰富，而且常常是随机分布于核DNA中。 微卫星中重复单位的数目存在高度变异，这些变异表现为微卫星数目的整倍性变异或重复单位序列中的序列有可能不完全相同，因而造成多个位点的多态性。如果能够将这些变异揭示出来，就能发现不同的SSR在不同的种甚至不同个体间的多态性，基于这一想法，人们发展起了SSR标记。 SSR标记又称为sequence tagged microsatellite site,简写为STMS，是目前最常用的微卫星标记之一。由于基因组中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列，因而可以将微卫星侧翼的DNA片段克隆、测序，然后根据微卫星的侧翼序列就可以人工合成引物进行PCR扩增，从而将单个微卫星位点扩增出来。由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，个体的扩增产物在长度上的变化就产生长度的多态性，这一多态性称为简单序列重复长度多态性(SSLP)，每一扩增位点就代表了这一位点的一对等位基因。由于SSR重复数目变化很大，所以SSR标记能揭示比RFLP高得多的多态性，这就是SSR标记的原理。? 与其它分子标记相比，SSR标记具有以下优点：(1)数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高；(2)具有多等位基因的特性，提供的信息量高；(3)以孟德尔方式遗传，呈共显性； (4)每个位点由设计的引物顺序决定，便于不同的实验室相互交流合作开发引物。因而目前该技术已广泛用于遗传图谱的构建〔11，12，18，19，33〕、目标基因的标定〔8，9，21，22，26〕、指纹图〔22〕的绘制等研究中。但应看到，SSR标记的建立首先要对微卫星侧翼序列进行克隆、测序、人工设计合成引物以及标记的定位、作图等基础性研究，因而其开发费用相当高，各个实验室必须进行合作才能开发更多的标记。由于SSR标记具有较大的应用价值，且种属特异性较强，目前在一些主要的农作物中SSR标记研究都进行了合作，共同进行STMS引物的开发。 操作步骤 1、在25μl反应体系中，加入 模板DNA 1μl（20ng）； SSR引物1μl（0.15μM） 10×PCR缓冲液2.5μl MgCl2 2μl (25mM) dNTP 2μl (0.2mM) Tap 酶1单位 加ddH2O至25μl 2、反应在PE 9600热循环仪上进行。PCR反应先95℃变性4min,接着94℃45s、55℃30s 和72℃60s,35个循环,最后在72℃下延伸5min。PCR扩谱产物在测序电泳仪上用5%聚丙烯酰胺凝胶分离。点样时,样品量为5μl,电泳缓冲液为1×TBE,电泳工作电流50mA,电压1500V,时间约2～3h。DNA染色采用银染法。电泳结束后,凝胶连同胶板一起,经过固定、染色、显影、固定等步骤染色。电泳和银染具体操作与AFLP相似。 3、数据分析： 用BIO-RAD公司的Quantity One 软件统计，再用NTSYS软件计算出遗传相似性系数，用UPGMA法进行聚类分析构建聚类图。
EST-SSSR分子标记的建立
课程名称： 分子育种学 指导老师： 海瑞 成绩： 实验名称： EST-SSR 标记的开发 实验类型： 综合型 分工： 奕-EST 获取+结果分析+引物设计 王鹏潮-SSR 筛选+SSR 统计+结果分析 一、实验目的和要求 1、了解SSR 标记的开发策略； 2、明确EST-SSR 标记的特点和建立EST-SSR 标记的原理； 3、熟悉EST-SSR 标记的过程，掌握EST-SSR 标记的开发技术。 二、实验容和原理 1、实验容 通过从现有的EST 文库中获取序列，再用软件对其进行SSR 查找与引物设计。 2、实验原理 1）微卫星DNA 真核基因组中存在着大量的串联重复序列, 按重复单位的大小, 串联重复可分为卫星（重复序列>70bp ）、小卫星（6～70bp ）和微卫星DNA （1-6bp ）。 微卫星（Microsatellite, MS ）是指基因组中以少数几个核苷酸（多数为2～4个）为单位多次串联重复组成的长达几十个核苷酸的序列，又称简单序列重复（Simple Sequence Repeats , SSR ）或短串联重复（Short Tandem Repeats , STR ）、或简单序列长度多态性（Simple Sequence Length Polymorphism ，SSLP ）。 重复数目是可变的，重复序列两侧都有物种特异性的保守序列，所以通过设计引物进行PCR 扩增，就可以检测到不同的DNA 区域重复数目的多态性。 2）SSR 标记的开发策略 SSR 包括基因组SSR （genomic SSR 或gSSR ）和表达区EST-SSR （genic-SSR 或EST-SSR ）。gSSR 是基于基因组序列开发的，开发起来费时费力，而且因为探针的缘故，种类比较局限。而EST —SSR 则是存在于表达的基因序列的SSR ，不包括含子及非表达的调控区等之中的SSR ，通常三个碱基重复的占多数，与不引起基因翻译过程中移码现象的发生相一致。 建立SSR 标记的前提是必需知道重复序列两列的DNA 序列。 与其他标记相比，SSR 标记具有如下特点： （1）数量较为丰富，覆盖整个染色体组； （2）具有多等位基因特性，信息含量高； （3）以孟德尔方式遗传，呈共显性； （4）易于利用PCR 技术分析，对DNA 数量和纯度要求不高，结果重复性好； （5）每个位点由引物序列决定，便于交换。 近年来，EST-SSR 标记的开发引起关注。数量迅速增加的ESTs 为开发新的SSR 标记提供了宝贵的资源，各种植物中约有5-10%的EST 含有可用于建立标记的SSR 。建立EST-SSR 标记要经济得多，而且EST-SSR 标记来源于DNA 的转录区域，比gSSR 标记具有更高的通用性，此外，标记-信息量高。
SSR标记实验步骤
SSR标记实验步骤 简介： SSR简单序列重复标记（Simple sequence repeat, 简称SSR标记），也叫微卫星序列重复，是由一类由几个核苷酸（1－5个）为重复单位组成的长达几十个核苷酸的重复序列，长度较短，广泛分布在染色体上。由于重复单位的次数的不同或重复程度的不完全相同，造成了SSR长度的高度变异性，由此而产生SSR标记或SSLP标记。虽然SSR在基因组上的位置不尽相同，但是其两端序列多是保守的单拷贝序列，因此可以用微卫星区域特定顺序设计成对引物，通过PCR技术，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，即可显示SSR位点在不同个体间的多态性。 优点：（1）标记数量丰富，具有较多的等位变异，广泛分布于各条染色体上； （2）是共显性标记，呈孟德尔遗传； （3）技术重复性好，易于操作，结果可靠。 缺点：开发此类标记需要预先得知标记两端的序列信息，而且引物合成费用较高。 操作程序： 取叶片→磨样→提取DNA→PCR扩增→电泳检测→染色→读带标记
1、DNA提取 按照Doyle和Dickson(1987)CTAB法（`Cetyl triethyl ammonium bromide）并略加改进的程序进行，具体步骤如下： ①成熟期取叶片加液氮研磨成粉末状，转入1.5ml离心管中，-20℃冰箱保存； ②加入600ul 65℃的2×CTAB混匀并置于65℃水浴中保温30～60分钟； ③取出，冷却，上下摇匀后，加入600微升24:1的氯仿异戊醇； ④12000转/分钟离心10分钟，取上清液于另一个1.5ml的离心管中； ⑤加异丙醇，12000转/分钟离心10分钟，倒掉上清液； ⑥干后用100%的洒精清洗，干后加适量TE 2、PCR扩增 模板DNA的浓度大约25ng/ul，扩增反应体系为20ul。具体如下：Sterile ddH2O 11ul PCR Buffer 3ul dNTP-mix 0.5ul Primer1 1ul Primer2 1ul Taq polymerase 0.5ul(2U/μL) DNA 3ul PCR扩增程序为：（2h30min）
SSR分子标记遗传分析
SSR分子标记遗传分析 实验原理： SSR简单序列重复标记（Simple sequence repeat, 简称SSR标记），也叫微卫星序列重复，是由一类由几个核苷酸（1－5个）为重复单位组成的长达几十个核苷酸的重复序列，长度较短，广泛分布在染色体上。由于重复单位的次数的不同或重复程度的不完全相同，造成了SSR长度的高度变异性，由此而产生SSR标记。虽然SSR在基因组上的位置不尽相同，但是其两端序列多是保守的单拷贝序列，因此可以用微卫星区域特定顺序设计成对引物，通过PCR技术，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，即可显示SSR位点在不同个体间的多态性。 优点：（1）标记数量丰富，具有较多的等位变异，广泛分布于各条染色体上； （2）是共显性标记，呈孟德尔遗传； （3）技术重复性好，易于操作，结果可靠。 缺点：开发此类标记需要预先得知标记两端的序列信息，而且引物合成费用较高 实验材料： 欧美山杨杂种幼嫩叶片 实验器具、药品： 模板DNA、dNTP、PCR提取Buffer、Mg2+、上游引物、下游引物、Taq酶、去离子水、琼脂糖、Gel-RED染色剂、1×TAE、PCR仪、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外凝胶成像系统 SSR引物及退火温度 位点Loci 重复单元 Repeat unit 引物序列(5′-3′) Primer sequence (5′-3′) 退火温度 T(℃) PTR2 (TGG)8AAGAAGAACTCGAAGA TGAAGAACT(F) ACTGACAAAACCCCTAA TCTAACAA(R) 63℃ PTR7 (CT)5A T(CT)6A TTTGA TGCCTCTTCCTTCCAGT(F) TA TTTTCA TTTTCCCTTTGCTTT(R) 49.4℃ PTR14 (TGG)5TCCGTTTTTGCA TCTCAAGAA TCAC(F) A TACTCGCTTTA TAACACCA TTGTC(R) 55.4℃ 实验步骤： 1.总DNA的提取 采用CTAB法提取植物总DNA （1）取700ul CTAB提取液加入20ul巯基乙醇于65℃金属浴内预热； （2）称取适量植物叶片,放入消过毒的研钵中,迅速加入液氮研磨成白色粉末； （3）将粉末移入提取液,混匀,65℃水浴（或金属浴）30min,其间不时的温和摇匀； （4）加入700ul氯仿:异戊醇(24:1)轻轻摇匀,10000rpm 离心10min,取上清(重复2次)；（5）加入700ul异丙醇室温沉淀10min,10000rpm 离心10min,弃上清； （6）用70%乙醇洗两次,37℃气干.去除DNA表面的盐或试剂小分子物质； （7）加入20ul灭菌的去离子水溶解DNA； （8）利用0.7%的琼脂糖凝胶电泳检测提取的总DNA的含量和纯度。 2.总DNA的检测
SSR标记电泳
3.1.2.4 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶分离可以达到几个碱基，以便真实的反应各样品的多态性，本实验采用用8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离。 3.1.2. 4.1 凝胶的制备 （1）玻璃板的清洗：用洗涤灵或洗衣粉把玻璃板反复擦洗干净，用蒸馏水冲洗干净，放置干燥，备用。 （2）电泳凝胶的配制（常用6％和8％的非变性凝胶）： （4）按表4中顺序加入各组分（注意：TEMED一定要最后加入），充分摇匀后用注射器将配好的胶轻轻灌入好两玻璃板之间，当胶加到上部时，在灌胶口插入梳子，并注意防止梳子底部产生气泡。若有漏出，应及时补加聚丙烯酰胺溶液。置室温让其聚合1h以上。 3.1.2. 4.2 扩增产物的电泳 （1）电泳缓冲液：待凝胶聚合完后，在电泳槽中加入1×TBE（用5×TBE稀释）的电泳缓冲液。 （2）上样：1.5-2μl，用移液枪吸取混合液轻轻加入点样孔中，尽量缩短加样时间。 （3）电泳：将梳子轻轻拔出，170V预电泳1.5-2小时(50bp左右的用1个半小时）。电泳结束后，切断电源，卸下玻璃板，准备染色。 3.1. 4.2.3 扩增产物的快速银染显色 非变性聚丙烯酰胺电泳的银染方法参考Sanguinetti等1994并经改进简化如下：
（1）漂洗：在塑料盘中加入200ml蒸馏水漂洗1次，再加入200ml蒸馏水。染色：加入2ml 10％AgNO3 (10g AgNO3加入到100ml蒸馏水中)后，平行摇动5～8min。 （2）漂洗：倒掉定影液，加入蒸馏水漂洗2～3次，洗净后，倒掉蒸馏水。（3）显色：在瓷盘中加入200ml蒸馏水，10ml 30%NAOH和2ml甲醛，迅速振动，使显影液均匀作用，然后平行摇动10分钟左右，直至显影。 （4）洗涤：清楚显影后，倒掉显影液，加入蒸馏水清洗凝胶1～2次，彻底去掉显影液，以免保存时变色。 （5）保存：用蒸馏水冲洗干净，放在胶片上吸干水，上面盖上保鲜膜，统计带型，并照相或扫描。
EST-SSSR分子标记的建立
课程名称： 分子育种学 指导老师： 崔海瑞 成绩： 实验名称： EST-SSR 标记的开发 实验类型： 综合型 分工： 谢奕-EST 获取+结果分析+引物设计 王鹏潮-SSR 筛选+SSR 统计+结果分析 一、实验目的和要求 1、了解SSR 标记的开发策略； 2、明确EST-SSR 标记的特点和建立EST-SSR 标记的原理； 3、熟悉EST-SSR 标记的过程，掌握EST-SSR 标记的开发技术。 二、实验内容和原理 1、实验内容 通过从现有的EST 文库中获取序列，再用软件对其进行SSR 查找与引物设计。 2、实验原理 1）微卫星DNA 真核基因组中存在着大量的串联重复序列, 按重复单位的大小, 串联重复可分为卫星（重复序列>70bp ）、小卫星（6～70bp ）和微卫星DNA （1-6bp ）。 微卫星（Microsatellite, MS ）是指基因组中以少数几个核苷酸（多数为2～4个）为单位多次串联重复组成的长达几十个核苷酸的序列，又称简单序列重复（Simple Sequence Repeats , SSR ）或短串联重复（Short Tandem Repeats , STR ）、或简单序列长度多态性（Simple Sequence Length Polymorphism ，SSLP ）。 重复数目是可变的，重复序列两侧都有物种特异性的保守序列，所以通过设计引物进行PCR 扩增，就可以检测到不同的DNA 区域重复数目的多态性。 2）SSR 标记的开发策略 SSR 包括基因组SSR （genomic SSR 或gSSR ）和表达区EST-SSR （genic-SSR 或EST-SSR ）。gSSR 是基于基因组序列开发的，开发起来费时费力，而且因为探针的缘故，种类比较局限。而EST —SSR 则是存在于表达的基因序列内的SSR ，不包括内含子及非表达的调控区等之中的SSR ，通常三个碱基重复的占多数，与不引起基因翻译过程中移码现象的发生相一致。 建立SSR 标记的前提是必需知道重复序列两列的DNA 序列。 与其他标记相比，SSR 标记具有如下特点： （1）数量较为丰富，覆盖整个染色体组； （2）具有多等位基因特性，信息含量高； （3）以孟德尔方式遗传，呈共显性； （4）易于利用PCR 技术分析，对DNA 数量和纯度要求不高，结果重复性好； （5）每个位点由引物序列决定，便于交换。 近年来，EST-SSR 标记的开发引起关注。数量迅速增加的ESTs 为开发新的SSR 标记提供了宝贵的资源，各种植物中约有5-10%的EST 含有可用于建立标记的SSR 。建立EST-SSR 标记要经济得多，而且EST-SSR 标记来源于DNA 的转录区域，比gSSR 标记具有更高的通用性，此外，标记-信息量高。
SSR分子标记实验流程
实验流程及操作 SSR分子标记开发的流程主要有DNA提取、DNA质量监测、PCR扩增反应和非聚丙烯酰胺凝胶电泳。 1油棕DNA的提取 DNA的提取一般有改良的CTAB法和SDS法，本实验室采用的是CTAB提取法。由于购买液氮不变，提取液用的是CTAB提取缓冲液，其配方是：2%(w)CTAB，50 mol·L-1Tris·HCl (pH8.0)，1.4 mol·L-1NaCl，20 mmol·L-1EDTA，2%(!) β- 巯基乙醇。具体操作方法如下： 取2g嫩叶片在约600ulCTA提取液进行磨样，直至所磨样品看不到嫩叶残渣为止；将磨好的样品分装到对应离心管中，之后在65℃的水浴锅中煮45min-1h 后，期间每隔10分钟左右将其拿起来轻轻摇匀约30次，水浴时间到后降温至室温；在水浴好后的离心管中加入500ul氯仿异戊醇并缓慢混匀30次，静置5min；在把样品配平后，在离心机中以10000rmp，25℃，离心8min；离心好后用移液枪吸取上清液，加入等体积冰冻的无水乙醇，轻轻混匀后静置10min；最后将DNA用枪头挑出，用75%乙醇或乙醇铵浸泡过夜，让其风干；风干后DNA用50ulddH2O培养于-20℃冰箱中。 2DNA质量检测 将获得的DNA样品稀释1000倍后，用紫外分光光度计分别测定不同样品的DNA溶液在260、280nm波长下的OD值,以及OD260/OD280的比值，计算样品的纯度，并通过260nm处的吸光值计算样品中的DNA含量。取1ulDNA,，加1ul10×loading buffer 和8ulddH2O 于ρ= 0.008 g·mL-1琼脂糖凝胶电泳，电压100v，电泳45min，于紫外透射仪下检测DNA降解情况[5～7]。 其中，水平电泳的步骤是：①、制胶：1﹪琼脂糖凝胶：1×TAE 50ml；REGULAR （琼脂糖） 0.5g；Goldview Nuleie 4ul∕Bioteko Corporation 2ul（染色剂）。 ②、点样：点样时需加溴酚蓝，即：5ul样品+5ul溴酚蓝。③、将胶放入电泳槽，接上电源进行电泳，时间约为30min，电源电压为120v。 3 SSR-PCR扩增 PCR反应前将提取的DNA样品稀释200倍。 PCR扩增反应体系的总体积为20ul，其中，ddH2O 4.8ul，10×Buffer 1ul,25mMMg2+ 0.8ul,10umPrimerL 0.5ul,10umPrimerR 0.5ul,10mMdNTP 0.2ul，5u/ulTaｑ酶 0.2ul，DNA模板 2ul，矿物油 10ul（防止蒸发）。 扩增的程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s,54.7℃退火30s,30个循环，72℃再延伸7min。 4电泳 ⑴装板：将玻璃板用洗洁剂冲洗干净后檫拭干净，然后按照说明书的说明正确装好板；板装好后封底，封底所用的试剂是1g琼脂糖+100ml 水。
SSR分子标记实验操作及其注意事项
SSR分子标记实验操作及其注意事项 SSR(Simple Sequence Repeats ) 又称微卫星DNA，是一类由几个(多为1~6个) 碱基组成的基序(motif )串联重复而成的DNA序列，其长度一般较短，它们广泛分布于整个基因组的不同位置上，每个座位上重复单位的数目及重复单位的序列都可能不完全相同，因而造成了每个座位上的多态性。SSR标记数量丰富，覆盖整个基因组，而且分布均匀，多态性高，呈共显性遗传，重复性好，操作简便，是一种理想的分子标记技术，被广泛应用于构建基因连锁图分子辅助育种品种鉴定遗传资源的保存等方面。 一、试剂配制 1.0.2%亲水binding silence（现配现用）：1500μL95%乙醇，7.5μL冰醋酸，再加入3μLbinding silence，混匀后使用。 2.0.5%疏水repel silence（购买后可直接使用） 3.TBE母液（5×TBE）：Tris Base,54g;硼酸,7.5g;EDTA(0.5M pH8.0),20ml.搅拌溶化，定容至1000ml，无需灭菌，室温保存，母液的pH值应保持在8.3左右。 4.Urea－TBE(一块胶板用量)：5×TBE,12ml;尿素,27g.加双蒸水溶解后定容至51ml，使用漏斗过滤。 5.40％丙烯酰胺：丙烯酰胺,380g;甲叉双丙烯酰胺,20g.加热至37℃使之溶解，加水定容至1000ml，用醋酸纤维素滤膜（入Nalge滤器，0.45μm孔径）过滤，棕色瓶避光保存于室温。 6.10％APS（过硫酸铵）：超纯过硫酸铵,2g;超纯水,18ml.溶解后，4℃保存。 7.TEMED（购买后可直接使用）：电泳级的TEMED可购自Bio-Rad，Sigma或其他供应商。 8.Loading buffer：去离子甲酰胺,50ml;0.5MEDTA(pH8.0),1ml;二甲苯腈蓝cyanol,0.125g;溴酚蓝,0.125g.混匀后置于4℃保存。 9.固定液：无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml。配制成终浓度为10％乙醇，0.5% 冰醋酸的固定液。 10.染色溶液(ACS 试剂)：无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml，AgNO3 1g。配制成终浓度为
ssr标记背景知识
额可获得信息：SSR基因定义，分类，常见的重复单元种类；SSR标记的原理及应用领域（定制化）；在动植物基因组中的分布情况；SSR引物来源；传统S SR分子标记分析技术路线（要与高通量的技术路线对比，找出高通量的优势）； SSR 简单序列重复（simple sequence repeat） SSR的产生是在DNA复制或修复过程中DNA滑动和错配或者有丝分裂、 减数分裂姐妹染色单体不均等交换的结果。 原理： 微卫星的突变率在不同物种、在同一物种的不同位点和同一位点的不同等位基因间存在很大差异。但尽管它们分布于基因组的位置不同，但其两端序列多是保守的单拷贝序列，因而可以根据这两端的序列设计一对特意引物，通过PCR技术将其间的核心微卫星DNA序列扩增出来，利用电泳分析技术就可获得其长度多态性。 显然，在采用SSR技术分析微卫星DNA多态性时必须知道重复序列两端的DN A序列的信息。如不能直接从DNA数据库查寻则首先必须对其进行测序【为什么要用二代测序技术进行物种SSR标记分析】。 评论|2 2012-05-09 11:45fmy029|三级 简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR) 简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA) n和(TG) n每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目10一60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。SSR标记的基本原理：根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称为“微卫星DNA”其两端的序列高度保守，可设计双引物进行PCR扩增，揭示其多态性。SSR具有以下 一些优点：(l)一般检测到的是一个单一的多等位基因位点；(2)微卫星呈共显性 遗传，故可鉴别杂合子和纯合子；(3)所需DNA量少【进行SSR分子标记研究 的优点】。 SSR的分类根据SSR核心序列排列方式的不同，可分为3种类型： 完全型(perfect)。指核心序列以不间断的重复方式首尾相连构成的DNA。如：ATATATATATATATATATATATATATATATATAT 不完全型(imperfect)。
批量开发SSR标记软件MISA的介绍
批量开发SSR标记软件:MISA的介绍 Posted on 12 五月2009 by 柳城，阅读605 简洁版 MISA工具提供批量识别和定位简单重复序列(SSR)，EST序列或是基因组序列都可以。另外，还提供一个与批量设计引物Primer3的接口工具，通过这个工具，可以把MISA识别出来的SSR，转为Primer3需要的格式，从而方便批量设计引物。 网址：http://pgrc.ipk-gatersleben.de/misa/ 注：要运行MISA，首先要确保已经装了Perl 下面分别介绍一下几个工具(.pl是perl文件的后缀名)： 1，misa.pl 用法：perl misa.pl