visfatin对大鼠肝脏胆固醇代谢及SREBP

【】 目的 探讨visfatin对血浆胆固醇代谢和肝胆固醇合成的 影响 . 方法 将空载体转染对照组NC组,大鼠visfatin基因真核表达质粒转染普通饲料组NT组和高脂组HT大鼠，并测定转染前后各组大鼠血浆胆固醇及肝脏HMG CoA还原酶和固醇调节元件结合蛋白 2SREBP2mRNA表达的变化. 结果 visfatin质粒注射3 d后，NT和HT组大鼠血浆胆固醇均较注射前明显下降［1.61±0.18 vs1.25±0.09mmolL和2.37±0.11vs1.74±0.12mmolL，均P0.05］ 高密度脂蛋白胆固醇HDLC也明显降低［0.83±0.09vs0.56±0.09mmolL 和1.32±0.09 vs 0.91±0.04mmolL, P0.05］ NT和HT组大鼠SREBP2 mRNA表达均明显高于NC组［0.37±0.06，0.36±0.07 vs 0.21±0.04，均 P0.05］, NT组HMG CoA还原酶mRNA水平明显高于NC，HT组［0.89±0.13 vs 0.37±0.07和0.55±0.16, 均P＜0.05］，NC组与HT组无明显差异. 结论 visfatin可能通过促进SREBP2和HMG CoA还原酶表达来调节体内胆固醇代谢. 论文代写
【关键词】 内脂素 胆固醇 HMG CoA还原酶 固醇调节元件结合蛋白 2 论文代写
0引言 毕业论文网
visfatin又称前B细胞克隆增强因子PBEF，是最近发现的一种脂肪细胞因子,也称为内脂素. 研究 表明，visfatin具有类胰岛素作用，能够促进脂肪的合成与聚集［1 2］. 目前 的研究大多集中在visfatin与2型糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖的关系，但其与胆固醇代谢的关系目前并不清楚. 固醇调节元件结合蛋白SREBP2与羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶HMG CoA还原酶是主要的胆固醇生物合成通路的调控元件，与胆固醇代谢密切相关. 因此，我们通过构建大鼠visfatin基因重组真核表达质粒并导入大鼠体内，探讨visfatin过表达对肝SREBP2与HMG CoA还原酶表达的影响，从而 分析 其对胆固醇代谢的调节作用. 代写论文
1材料和方法 论文网
1.1材料去内毒素质粒大量提取试剂盒Omega公司 TrizolInvitrogen公司 反转录酶MMLV，Taq DNA聚合酶TaKaRa公司 羊抗鼠visfatin多克隆抗体Santa Cruz公司 HRP标记的兔抗羊二抗中杉金桥公司 化学发光试剂盒康成生物公司 DYYIII稳压稳流电泳仪、双垂直板蛋白电泳槽北京六一仪器厂 半干转印迹电转系统，BIORAD Gradient Cycler PCR仪Biorad 日立7020型全自动生化分析仪 SD雄性大鼠15只第三军医大学大坪 医院 实验动物中心. 毕业论文网
1.2方法 论文网
1.2.1pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒的构建本课题组前期构建，经DNA测序鉴定，导入基因无突变，构建成功. 论文代写
1.2.2动物分组及处理将大鼠15只随机分为正常饮食pcDNA3.1+空质粒注射组NC组, n=5、正常饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组NT组, n=5和高脂饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组HT组, n=5. 各

组大鼠喂养16 wk. 高脂饲料组成为 蛋白质12%，脂肪54%，碳水化合物34%. 用空载及表达质粒注射于大鼠股四头肌，1 mgkg. 于注射前后72 h各取其空腹血，分离血浆，于第2次取血后处死大鼠取肝脏组织. 毕业论文网
1.2.3HMG CoA还原酶和SREBP2表达测定用常规方法提取大鼠肝组织总RNA，用逆转录聚合酶链反应RTPCR半定量测定肝HMG CoA还原酶和 SREBP2 mRNA，以βactin为内参. HMG CoA还原酶上游引物为 5′CCTGCGTGTCCCTGGTCCTA 3′ 下游引物 5′CTTTGGGTTACTGGGTTTGG 3′. SREBP2上游引物 5′GGCTCTGGCCGCAATGTA 3′ 下游引物 5′TGACCGAGGAGCGTGAGT 3′. βactin上游引物 5′ CCACTGCC GCATCCTCTTCCTC 3′ 下游引物 5′ TCCTGCTTGCTGATCCACATCT 3′. 毕业论文
1.2.4其他指标测定采用Western Blot法测定血浆visfatin水平 血浆总胆固醇TC、高密度脂蛋白胆固醇HDLC、低密度脂蛋白胆固醇LDLC在全自动生化分析仪进行测定. 论文代写
统计学处理 各项数据资料以x±s表示，组内比较采用配对t检验，组间比较用方差分析，多组间两两比较用StudentNewmanKeuls检验，数据处理采用SAS8.0软件. 论文代写
2结果 毕业论文网
2.1血浆visfatin水平变化质粒注射后NT，HT组血浆visfatin水平较注射前均升高［1.59±0.04 vs1.04±0.15和1.90±0.12 vs 1.04±0.15, 均P0.05 ］, 而NC组在注射前后无明显差异图1. 1,3,5: 质粒注射前血浆visfatin 2,4,6: 质粒注射后血浆visfatin; NC组 正常饮食pcDNA3.1+空质粒注射组 NT组 正常饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组 HT组 高脂饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组. 论文网