蒲公英水提取物对链脲佐菌素致糖尿病大鼠的降血糖作用及其机制_李雪石

STZ诱导的小鼠糖尿病模型

STZ诱导的小鼠糖尿病模型 糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征，易发生心、脑、肾等并发症。糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代谢下降，脂肪酸代谢增加，心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性，并在此基袖上出现氧化应激，导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加，同时出现心肌的损伤，心肌的结构和功能均发生改变，最后导致糖尿病患者的死亡。 1.实验动物 SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。 2.实验分组： 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.模型周期 24W 4.主要试剂及配制方法 柠檬酸、柠檬酸三钠、链脲佐霉素(Streptozocin,STZ) 1.柠檬酸钠缓冲液配制：将 2.10g柠檬酸加入双蒸水100ml配成柠檬酸母液，称为A液；将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液。 2.STZ溶液的配制：将STZ溶于0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22μm滤菌器过滤除菌。注意避光配制，现用现配。 5.建模方法 1.术前12h禁食 2.模型组小鼠按照120mg/kg剂量的STZ进行腹腔注射，对照组给予给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。 3.STZ注射3d后，测空腹血糖，选择血糖高于16.7mmol/L纳入正式实验。

链脲佐菌素STZ诱导I型糖尿病

小剂量多次链脲佐菌素腹腔注射诱导1型糖尿病小鼠模型及模型鉴定 摘要：目的考察对C57BL/6J小剂量多次链脲佐菌素腹腔注射诱导1型糖尿病模型的成模率、 模型鉴定及稳定性。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、链脲佐菌素50mg/kg多次 给药组，考察多次给药后链脲佐菌素对小鼠血糖、血清胰岛素、IL-10、IFN-γ、胰腺组织的影响。 结果50mg/kg多次给药诱导C57BL/6J小鼠成模率为83.64%，空腹血糖值显著升高(P<0.01)， 血清胰岛素和IL-10值明显下降(P<0.01)，血清IFN-γ含量明显增加(P<0.01)，胰腺组织中胰岛数 目显著减少，胰岛周围及胰岛内出现胰岛炎。结论小剂量(50mg/kg)多次链脲佐菌素腹腔注射 C57BL/6J可诱导稳定可靠的1型糖尿病小鼠模型。 关键词：链脲佐菌素；1型糖尿病模型；腹腔注射；小剂量多次 Multiple low dose intraperitoneal injection of streptozotocin-induced type 1 diabetes mice and model identification Abstract：Objective To investigate the molded rate of type 1 diabetes and model stability of C57BL/6J induced by intraperitoneal injection of multiple low dose strptozotocin. Method Male C57BL/6J were randomly divided into normal control group and streptozotozin 50mg/kg dose group, blood glucose, serum insulin, IL-10 and IFN-γ were measured after repeated administration of streptozotocin. Results The molded rate of multiple 50mg/kg dose group was 83.64%, the fasting blood glucose serum IFN-γ level were significantly higher than the normal group while the serum insulin and IL-10 values decreased significantly (P<0.01). The number of islets of pancreatic tissue was significant reduction and insulitis occurs surrounding the islets. Conclusion Multiple low dose (50mg/kg) intraperitoneal injection of streptozotocin in C57BL/6J can induce stable mouse model of type 1 diabetes. Key words: streptozotocin; type 1 diabetes model; intraperitoneal injection; multiple low dose 胰岛素依赖型糖尿病又名1型糖尿病，是由于机体自身反应性免疫应答攻击胰岛β细胞，使其遭破坏、功能缺失，从而导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病。由于β细胞具有产生胰岛素和调节血糖的功能，β细胞群的毁坏最终导致了血糖的失调和高糖血症的发生。这种疾病的发生通常被认为是由于遗传易感性以及免疫系统对环境的免疫应反应答亢进而引起。因此，可以说1型糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的一种代谢异常综合征。胰岛素依赖型糖尿病已成为危害青少年健康最主要的慢性病之一，其治疗仍然是全球医疗的棘手问题。糖尿病带来的危害，几乎都来自它的并发症。血糖控制良好与否与并发症密切相关，因此治疗目标是达到最佳血糖控制，以延缓或防止并发症。[1]。建立可靠的动物模型是治疗1型糖尿病的必备条件。目前诱导1型糖尿病模型的方法众多，如化学诱导法、T细胞介

STZ糖尿病模型(来自丁香园)

造模方法 （1）链脲佐菌素（Streptozotocin）诱导大鼠糖尿病模型方法 将大鼠禁食12h，按60mg/kg体重腹腔注射STZ，每日1次，连续2次，成功制备Ⅰ型糖尿病大鼠模型，并且该模型具有高血糖、体重减轻、多饮多食多尿的特点，与临床Ⅰ型糖尿病吻合；但在此实验中，若造模组只腹腔注射STZ一次，并给予高热量饲料饲养12周，则可制备Ⅱ型糖尿病动物模型，且按该法制备出的模型具有超重、糖耐量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点，类似于Ⅱ型糖尿病病人的临床特征。Ⅰ型糖尿病与Ⅱ型糖尿病动物模型的制备可能与STZ注射的剂量有关系：大剂量（常为120mg/kg）注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成Ⅰ型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类Ⅱ型糖尿病的动物模型。 https://www.sodocs.net/doc/be7198910.html,/bbs/actions/archive/post/5636508_0.html （2）你还是采用腹腔的比较好！按65或是70给都可以。最好是给STZ后7天开始测定血糖分组为好，这样血糖已经稳定了！ 我给我的一个朋友用ALLOXAN，尾静脉。大鼠，50mg/kg,全都死亡了！ 给STZ前有的说禁食，有的说不用，但还是禁的好些，给STZ后，也不要立即给予食物，1小时后再给。还有腹腔注射的手法要正确！！给STZ要快，最好在冰水中冷却溶液！ https://www.sodocs.net/doc/be7198910.html,/bbs/actions/archive/post/672237_0.html （3）链脲霉素（STZ）诱导的高血糖动物模型 STZ水溶液不稳定，对小鼠的生物半衰期仅有5min左右，需要快速静脉注射。造型剂量犬50mg/kg，静注，可引起糖尿病，动物死亡率较高；如15mg/kg，连续3天也可。大鼠60-80mg/kg，iv或ip，小鼠100-200mg/kg，iv或ip。STZ诱导的高血糖动物模型一般不自发缓解。需要注意的是，给药时常把STZ溶解于0.1mol/L的柠檬酸缓冲液中，临用前配制。注射后72h血糖可稳定升高，有三多症状。血糖在11.1mmol/L以上可作为成功模型选用。造型时STZ应新鲜配制，分组时各组动物的平均血糖值相差不宜大于20mg/dl，血糖值升高不符合要求的动物应剔除。 https://www.sodocs.net/doc/be7198910.html,/bbs/actions/archive/post/2191173_0.html （4）STZ是一种广谱抗癌药，曾用来治疗巨胰岛瘤。能破坏胰岛B细胞，大剂量可诱导1型糖尿病，小剂量反复注射可致2型糖尿病。 STZ造模： 大鼠（Sprague Dawley 或Wistar）一般是i.p. 50～60mg/kg,剂量太大死亡率高，如果打到160mg/kg以上基本上死光。 小鼠一般是i.p. 80mg/kg以上，可打到120mg/kg也挺好的。可耐受到160mg/kg左右，状态尚可。这是常见的KM种小鼠所用剂量。如果用C57BL／6J近交系小鼠（被毛褐色），据文献报道用30～40mg/kg就可以了，因其对STZ很敏感。 关于糖尿病模型成功的标准：文献报道有以造模五天或一周后血糖值高于11.1mmol/L （200mg/dL）或16.7mmol/L(300mg/dL)为标准的。 正常KM小鼠血糖值：常见为85～90mg/dL,可在60～170之间波动； 正常大鼠血糖值：常见为70～80mg/dL，可在50～135之间波动。 据上，我个人认为以血糖高于16.7mmol/L(300mg/dL)为标准较好。 关于禁食：

环孢菌素A对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏组织中MIP-1α mRNA表达的影响

［ 文章编号］　１６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０４－０６８３－０４［收稿日期］　２０１２－０３－ ０６［基金项目］　天津市卫生局科技基金资助课题（２０１０ｋｙ ０４）［作者简介］　穆　媛（１９７５－） ，女，天津市人，主治医师，主要从事内分泌及代谢性疾病研究。［通信作者］　穆　媛（Ｔｅｌ：０２２－２６１８３６３７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｙｕａｎｙ＠１２６．ｃｏｍ）环孢菌素Ａ对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏组织中 ＭＩＰ－１αｍ ＲＮＡ表达的影响穆　媛，庄映辉 （天津市第四中心医院内分泌科，天津３００１４０ ）［摘　要］　目的：探讨环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）对链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导的糖尿病大鼠肾脏巨噬细胞炎性蛋白－１α （ＭＩＰ－１α）ｍＲＮＡ表达的影响，阐明其相关机制。方法：雄性ＳＤ大鼠（Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ）按５０ｍｇ·ｋｇ－１尾静脉 注射ＳＴＺ诱导建立糖尿病大鼠模型。按随机原则分为正常对照组（ＣＯＮ组）、糖尿病模型组（ＤＭ组） 、胰岛素干预８周组（ＡＭＩ组）及ＣｓＡ　１ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１干预组（ＡＭＬ组）、ＣｓＡ　４ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１干预组（ ＡＭＭ组）和ＣｓＡ８ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１干预组（ ＡＭＨ组），每组１０只。采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＭＩＰ－１α的表达水平；比较ＣｓＡ各干预组ＭＡＳＳＯＮ阳性染色面积和光密度值。结果：与ＣＯＮ组比较，ＤＭ组大鼠淋巴细胞ＭＩＰ－１αｍＲ ＮＡ表达水平明显升高（Ｐ＜０．０５）。ＣｓＡ各干预组与ＤＭ组比较，ＭＡＳＳＯＮ阳性染色面积和光密度值均明显降低，差异有统计学 意义（Ｐ＜０．０１）。结论：糖尿病肾脏组织ＭＩＰ－１αｍＲ ＮＡ表达增加，肾脏纤维化明显。ＣｓＡ干预可以使肾脏ＭＩＰ－１αｍＲ ＮＡ表达降低，减轻肾脏纤维化进展。［关键词］　糖尿病肾病；环孢菌素Ａ；巨噬细胞炎性蛋白－１α ；肾纤维化［中图分类号］　Ｒ－３３２；Ｒ５８７．１ ［文献标志码］　Ａ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ　Ａ　ｉｎ　ｅｘｐ ｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＩＰ－１αｍＲＮＡｉｎ　ｋｉｄｎｅｙ　 ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ＳＴＺ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓＭＵ　Ｙｕａｎ，ＺＨＵＡＮＧ　Ｙｉｎｇ －ｈｕｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｆｏｕｒｔｈ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊ ｉｎ　３００１４０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　 ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ（ＣｓＡ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ－１α（ＭＩＰ－１α）ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｋｉｄｎｅｙ　 ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ（ＳＴＺ）－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ，ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅｒｅｌａｔｅｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍａｌｅ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｅｔ　ｕｐ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｉｔｈ　５０ｍｇ·ｋｇ－１　ｂｏｄｙ　 ｗｅｉｇｈｔ　ｂｙｔａｉｌ　ｖｅｉｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＴＺ．Ｔｈｅ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　 ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　６ｇｒｏｕｐｓ：ＣＯＮ（ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），ＤＭ（ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｍｏｄｅｌ），ＡＭＩ（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｓｕｌｉｎ），ＡＭＬ（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＣｓＡ　１ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１） ，ＡＭＭ（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＣｓＡ　４ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），ＡＭＨ（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＣｓＡ　８ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）ｇｒｏｕｐ ｓ（ｎ＝１０）．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ．Ｔｈｅ　ＭＡＳＳＯＮ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　 ａｒｅａｓ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ＣｓＡ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＣＯＮ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｅｘｐ ｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＭＩＰ－１αｍＲＮＡ　ｏｆ　ｒａｔ　ｌｙｍｐｔｈｏｃｙｔｅ　ｉｎ　ＤＭ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　 ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＤＭ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅＭＡＳＳＯＮ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｒｅａｓ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｖａｌｕｅｓ　ｉｎ　ＣｓＡ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　 ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ＭＩＰ－１αｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｋｉｄｎｅｙ　 ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｉｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｎｄ　ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｓｏｂｖｉｏｕｓ．ＣｓＡ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ＭＩＰ－１ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｋｉｄｎｅｙ　 ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅ　ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｋｅｙ　 ｗｏｒｄｓ：ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ；ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ　Ａ；ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ－１α；ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ３ ８６第３８卷　第４期 ２０１２年７月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版）Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．４　Ｊｕｌ．２０１２