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硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量比较

硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量比较
硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量比较

蒽酮法测还原糖

总糖的含量的测定(蒽酮法) 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应,反应后溶液呈蓝绿色,在620 nm 处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。 三、实验器材 1.吸管 2.试管 3.分光光度计 4.水浴锅 5.电炉 6.电子分析天平 四、实验试剂 1.蒽酮试剂:取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中,当时配制使用。 2.标准葡萄糖溶液(0.1 mg/ml):100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml(可滴加几滴甲苯作防腐剂)。 3. 6 mol/l HCl溶液。

4.10 % NaOH溶液:称取10 g NaOH固体,溶于蒸馏水并稀释至100 ml。 五、实验操作 1.制作标准曲线 取干净试管7支,按下表进行操作。 表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作 2.样品的处理(见实验四) 取上述实验四的水解液,冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性,然后用蒸馏水定容至100 ml,过滤,取滤液10 ml,用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液,用于糖含量的测定。 测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量(同标准曲线)。

样品中糖含量的计算: w —糖的质量分数(%); C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml); V —样品稀释后的体积(ml ); m —样品的质量(mg )。 w= CV m ×100%

实验一、硫酸苯酚法测多糖含量

实验一 硫酸-苯酚法测多糖含量 1.目的要求 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量 2.方法原理 糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3.主要实验仪器及材料 浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。 4.掌握要点 硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。 5.试剂配制 1)葡萄糖标准液的配制 准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。2)90%苯酚液的配制 准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存 3)6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤 管号0 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 2)待测样品多糖的测定与计算 将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测定方法,以样液为参比液,测定溶液的吸光值,按回归方程计算待测溶液的多糖浓度,注意乘换算系数。

苯酚硫酸法测多糖含量

苯酚硫酸法测多糖含量 Company Document number:WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT

一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制 1. 浓硫酸:分析纯,% 2. 5%苯酚:取苯酚5 g,置100 ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀后,置棕色试剂瓶中,冰箱中冷藏储存备用。 3. 标准葡聚糖(Dextran,Pharmacia)或分析纯葡萄糖。准确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中,蒸馏水溶解定容。 2、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)10mg于250ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取、、、、、、及,各以蒸馏水补至,然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸,摇匀冷却,室温放置20min以后于490nm测光密度,以水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。 123456780 标准葡萄糖溶液 (mL) 蒸馏水(mL) 5%苯酚(mL) 浓硫酸(mL) 3 注意事项

(1)此法简单、快速、灵敏、重复性好,对每种糖仅制作一条标准曲线,颜色持久。 (2)制作标准线宜用相应的标准多糖,如用葡萄糖,应以校正系数校正μg数。(3)对杂多糖,分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算 (4)测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在——之间。比如:小于之下可以考虑取样品时取2克,仍取样品液,如大于可以减半取的样品液测定。 (5)正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。注意硫酸的纯度。空白的颜色很深,说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌(苯酚氧化生成)的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大,一般是5%但是没遇到你说的那么严重,不是深红色的做的好的时候颜色很浅,颜色深点也有肯能。 操作的时候有几条你需要注意的,这些对你的检测结果影响极大 1、苯酚需要重蒸,配制的苯酚溶液需要妥善保存。 2、样品检测的时候,向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀,加入硫酸基本操作:硫酸沿壁加,最好能旋转比色管,让硫酸能均匀的沿壁流下。 3、加完硫酸需要立即摇匀,前提是塞子要配套,不怕烫热、冷水浴,要准确。

蒽酮比色法测总糖

[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42. 1. 2 试剂 0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中,溶解后转移至容量瓶中,用蒸馏水定容至100 mL. 蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中,加入蒸馏水25 mL, ,缓慢加入98% 质量分数)浓硫酸75 mL, ,边加边搅(于冰水浴中完成),直至蕙酮溶解,冷却至室温后使用(临用新配)。 浓盐酸、浓硫酸、NaOH ,以上试剂均为分析纯,实验用水为蒸馏水。 1. 3 方法 1. 3. 1 显色剂(蒽酮硫醇溶液)用量选择。向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ,并加入蒸馏水至1m L, ,分别加入不同量的显色剂显色测定,以0. 1 mL, 蒸馏水为空 白对照。 1.3.2 显色时间选择。向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ,在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀,改变沸水浴时问,冷却至室温后测体系吸光度。 1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量,再分别加入9mL 显色剂,进行显色测定。 1.3.4 正交试验确定提取条件。采用正交试验,考查 4 个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问)对实验的影响,因素水平见表 1.

1.3.5 水溶性总搪的提取。取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中,加入30 mL, 蒸馏水,在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中,加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ,冷却后,滴加一滴酚酞,用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。 1. 3. 6 水溶性总搪的测定。取提取液 1 mL 于10mL 试管中,在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀,在沸水浴中加热9 mLn ,冷却后放置30min 测定吸光度。从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。 2 结果与分析 2. 1 吸收曲线 用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描,结果发现在625 nm 处有最大吸收,故本实验采用625 nm 为测定波长。 2. 2 显色剂用量 由图 1 可以看出,当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大,故实验采用显色剂用量为9 m l。

苯酚硫酸法测总糖

苯酚-硫酸法 苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 [试剂] 6%苯酚: 先配置80%苯酚:80g苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20g水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。 再配置6%苯酚:取75ul的80%苯酚于烧杯中,加入960ul水(每次测定均需现配),测定的时候就用6%的苯酚来测! 浓硫酸 [操作] 1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。 2.样品含量测定: 吸取2.0ml样品,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置30分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。 可能有以下问题需要注意:

1。苯酚是否重蒸、其溶液浓度、是否现配现用 2。加入硫酸后是否加热、显色时间的确定 3。阁下所选波长:这个最为重要,因为已糖及其甲基化衍生物在490nm下有最大吸收峰,而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。如果阁下的多糖样品不是单一品而是数种混合(纯化也难一达到100%纯),则波长一定要扫描过再做 4。加浓硫酸前要摇匀,加之后也要摇匀。 苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 试剂 1.浓硫酸:分析纯,95.5% 2.80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。 3.6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配) 4.标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。 5.15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 6.5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

测蛋白、多糖的方法

一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制 ①浓硫酸:分析纯,95.5% ②80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配) ③5%苯酚:取苯酚100 g,加铝片0. 1 g和碳酸钠0. 05 g,常压蒸馏,收集182℃馏分。称取 该馏分(100%苯酚)5 g,置100 ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀后,置棕色试剂瓶中, 冰箱中冷藏储存备用。 ④标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia)或分析纯葡萄糖。准确称取20m g经105℃干 燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中,蒸馏水溶解定容。 2、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml,各以蒸馏水补至1.0ml,然后加入6%(5%,9%)苯 酚0.5ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20min以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同 样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。 1 2 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液(mL)0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 蒸馏水(mL)0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 6%苯酚(mL)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸(mL) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 3 注意事项 (1)此法简单、快速、灵敏、重复性好,对每种糖仅制作一条标准曲线,颜色持久。(2)制作标准线宜用相应的标准多糖,如用葡萄糖,应以校正系数0.9校正μg数。

蒽酮-硫酸法测残糖含量

蒽酮-硫酸法测残糖含量 (1)原理 糖类与浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物,可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质,反应后溶液呈蓝绿色,于620nm处有最大吸收,显色与多糖含量有线性关系。 (2)试剂 ①蒽酮试剂。溶解0.2g蒽酮于浓硫酸(A.R.95.5%)100ml中,当日配制试用。具体实验 过程中,应视样品分数多少来准备蒽酮试剂的配置量。比如实测样品有50份,为了保证结果的可靠性,安排个份样品试验重复数为3。因为每个试验点实测需要4ml蒽酮试剂,所以至少应配置的体积为4×3×50=600ml。此时还应考虑预实验和实验差错所消耗蒽酮试剂量。 ②标准糖试剂。葡聚糖溶液(可加数滴甲苯防腐) (3)操作及其注意事项 分别取0.1g/l的葡萄糖溶液0.05,0.10,0.20,0.30,0.40,0.60,0.80ml,用蒸馏水补到1.00ml,分别加入4.00ml蒽酮试剂,迅速进入冰水浴中冷却,各管加完后一起浸入沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发。自水浴重新煮沸开始计时,准确煮沸10min,冷却后进行比色。以光密度为纵坐标,糖的含量微克数为横坐标,制作标准曲线。或使用计算器进行一元回归得出计算式,以便于计算使用。 (4)样品含量测定 取糖浓度为50μg/ml左右的样品溶液1.00ml,一式3份分别置于不同试管中,对照加入1.0ml 蒸馏水,然后给各管加入蒽酮试剂,以标准曲线方法进行比色测定。根据标准曲线和样品浓度计算含量。 色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰。此外,试管在加入蒽酮试剂过程中,移液管尖端在试管中所停留的高度对于加入蒽酮试剂的速度影响较大,而且对反应产生颜色的深浅都会产生一定的影响。因此,实验操作应该注意。

苯酚-硫酸法测定多糖的含量

多糖浓度测定及标准曲线谭夕东 苯酚-硫酸法 1. 对照品的溶液的制备取干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。 供试品的溶液的制备精密量取本品50ml,置250ml量瓶中,加30%硫酸锌溶液5ml,在水浴中加热5分钟后,在振摇下立即加入亚铁氰化钾试液5ml,冷却后加水至刻度,摇匀,滤过,弃取初滤液,取续滤液25ml,置500ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。 测定方法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml,分别置10ml量瓶中,各加2%苯酚溶液0.5ml,硫酸5ml,摇匀,置水浴中加热15分钟,放冷,用水稀释至刻度,摇匀,照分光光度法测定。 2.标准曲线的绘制: 精密称取千燥恒重的葡萄糖100mg,用水溶解并稀释至100ml,备用。精密吸取备用液10ml加水稀释至100ml定容,得葡萄糖标准液。精密吸取标准液100、200、…700微升,分别置于试管内,各加水使成2ml,再各加5%苯酚试剂1.0ml,各管迅速滴加浓硫酸5.0ml,立刻摇匀。沸水加热15分钟,迅速冷却,另取2ml水,同法操作加入试剂作空白对照.用紫外可见分光光度计在入=490nm测定吸光度。以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程 海藻酸钠样品1g,用100mL蒸馏水溶解并定容。 壳聚糖溶液的配制: ①先将50mL冰醋酸溶于1000mL的蒸馏水中制成5%的乙酸水溶液1000mL待用。 ②称取壳聚糖5g溶于500mL5%的乙酸水溶液中配成10g/L的壳聚糖乙酸溶液。或精密称取壳聚糖40 mg于100 mL量瓶中,用0. 5 mol·L-1’醋酸溶解并定容。 几丁质不溶于水、稀酸、稀碱及绝大部分溶剂中,据目前所知,几丁质仅能溶于少数溶剂,如六氟异丙酮,六氟丙酮水合物、吡咯烷酮的氯化锂溶液,一些氯醇和浓酸等。 1

苯酚-硫酸法

简介 苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 原理 多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 试剂 1.浓硫酸:分析纯,95.5% 2.80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。 3.6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配) 4.标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。 5.15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 6.5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 7.6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。 8.6mol/L 盐酸 操作 1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。 2.样品含量测定: ①取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液于10毫升离心管中,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液,重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意:总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。 ②离心,转速3000转/分钟,共三次。第一次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。(测肝胰腺样品时,每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。) ③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。 ④定容取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液,以蒸馏补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。 注意 (1)此法简单、快速、灵敏、重复性好,对每种糖仅制作一条标准曲线,颜色持久。 (2)制作标准线宜用相应的标准多糖,如用葡萄糖,应以校正系数0.9校正μg数。 (3)对杂多糖,分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。 (4)测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如:小

实验硫酸苯酚法测多糖含量

实验硫酸苯酚法测多糖 含量 GE GROUP system office room 【GEIHUA16H-GEIHUA GEIHUA8Q8-

实验一 硫酸-苯酚法测多糖含量 1.目的要求 2.测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量 3.2.方法原理 4.糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 5.3.主要实验仪器及材料 6.浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。7.4.掌握要点 8.硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。 9.5.试剂配制 10.1)葡萄糖标准液的配制 11.准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。 12.2)90%苯酚液的配制 13.准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存 3)6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤 7.管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8.葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 9.苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 10.浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 11.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 12.2)待测样品多糖的测定与计算

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量 一. 实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮(C14H10O)脱水缩合,形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收,在150 μg/mL范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度,糖含量在30 μg左右就能进行测定。 二. 试剂器材 蒽酮试剂:精密称取0.1g蒽酮,加80%浓H2SO4100 mL使溶解,摇匀。当日配制使用; 葡萄糖标准液:将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中,12hr后精密称取100mg,用蒸馏水定容至100ml; 其他器材:分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。 三. 操作步骤 葡萄糖标准曲线的制作 取7支具塞试管,按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液,每个浓度做2-3个重复: 管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL,振荡混匀,各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出,迅速浸于冰水浴中冷却15min。 在625nm波长下以第1管为空白,迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。 样品的测定 将样品溶液糖浓度调整到测定范围,精确吸取2mL置于干燥洁净试管中,在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL,振荡混匀,各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出,迅速浸于冰水浴中冷却15min,每个浓度做2-3个重复。 在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线,由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度,并计算其糖含量。 四. 注意事项 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物,不但可测定戊糖与已糖,且可测所有寡糖类和多糖类,包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。 在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值,但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。 不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时则可避免此种误差。

硫酸苯酚法测可溶性总糖含量

硫酸苯酚法测可溶性总糖含量 一、测定原理 可溶性糖主要有能溶于水及乙醇的可溶性单糖和寡聚糖。糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚所合成一种橙红色化合物,在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,因此可用比色法在此波长下测定。硫酸苯酚法可以用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高且不受蛋白质存在的影响,产生的颜色稳定时间160min以上。 二、实验试剂 1.90%苯酚溶液:称取90g苯酚,加蒸馏水定容至100ml。 2.9%苯酚溶液:取3ml 90%苯酚溶液,加蒸馏水至30ml,现配先用。 3.浓硫酸(比重) 4.1%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在 80 ℃下烘至恒重,精确称取 1.000 g ,加少量水溶解,移入100ml容量瓶中,加入浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度。 5.100μg/L 蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液lml加入 100ml容量瓶中,加蒸馏水定容。 三、仪器设备 分光光度计,50ml比色管7支,移液管 四、实验步骤 1.标准曲线的制作 取20 ml刻度试管6支,从0~5分别编号,按表1加入溶液和水,然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以5~20 s 时间加入5ml浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8ml,在室温下放置30 min ,显色。然后以空白为参比,在485 nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。 2 膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25 ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。 3.测定吸取样品液于试管中(重复2次),加蒸馏水 ml,同制作标准曲线的步骤,按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量,计算测试样品中糖

粗多糖检测方法(蒽酮比色法)

粗多糖检测方法(蒽酮比色法): 1 主要仪器 (1)离心机( 4000r/min )。 (2)离心瓶容量 100ml 或具盖 10ml 离心管。 (3)分光光度计。 (4)水浴锅。 2 试剂 实验用水为双蒸水;所用试剂为分析纯级。 (1)葡萄糖标准液:准确称取I.OOOOg经过98?100 C干燥至恒重的分析纯葡萄糖,加水溶解后以水稀释至 1000ml ,此溶液 1ml 含 1mg 葡萄糖,用前稀 释10倍(0.1mg/ml ),现用现配。 (2) 0.2%蒽酮硫酸溶液:称取0.2g蒽酮置于烧杯中,缓慢加入100ml浓硫酸(分析纯),溶解后呈黄色透明溶液,现用现配。 3 测定步骤 (1)样品处理:准确称取样品 1?2g 按上法用乙醇沉淀多糖,然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至 100?250ml (使样液含糖量在 0.02? 0.05mg/ml 间)。过滤,弃去初滤液即为待测液。 (2)标准曲线的绘制:准确吸取葡萄糖标准液( 0.1mg/ml ) 0、0.1、0.2、 0.4、0.6、0.8、1.0ml 于 10ml 具塞比色管中,加水至 1.0ml ,加入蒽酮 试剂 5ml 充分混匀,在沸水浴中加热 10min ,取出在流水中冷却 20min 后,在 620nm 波长下,以试剂空白调零,测定各管的吸收值绘制标准曲(3) 样品测定:准确吸取样品待测液10ml (含糖20?80⑷)按标准曲线绘 制步骤于 620nm 波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。

4 结果计算: m1 X= --------------- x F x n x 100% m x 1000 式中 X—样品中粗多糖含量(以葡萄糖计)(%); m1 —由标准曲线查得样品液含糖质量( mg ); m —样品质量( g ); n —稀释倍数; F—换算因子。 换算因子的测定:准确称取被测物质的纯品 20mg 置 100ml 容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,吸取 0.2 ?0.4ml 于 10ml 具塞比色管中,加水至 1.0ml 按上法测定。从标准曲线中查出供试液中相当于标准葡萄糖的质量 (mg ) m F = ————— m1x n 式中 m —多糖纯品的质量( mg ); m1 —多糖纯品供试液中相当于标准葡萄糖的质量( mg ); n —供试液的稀释倍数;

总糖的测定:苯酚硫酸法

总糖的测定:苯酚硫酸法 2008-12-06 22:38:00 作者:来源:互联网浏览次数:758 文字大小:【大】【中】【小】 苯酚-硫酸法测定总糖 [原理] 多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 [试剂] 1.浓硫酸:分析纯,95.5% 2. 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。 3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配) 4.标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。 5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。 7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。 8. 6mol/L 盐酸 [操作] 1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0. 4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5. 0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。 2.样品含量测定:

①取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液于10毫升离心管中,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液,重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意:总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。 ②离心,转速3000转/分钟,共三次。第一次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。(测肝胰腺样品时,每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。) ③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。 ④定容取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液,以蒸馏补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。 [注意] 测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如:小于0.1之下可以考虑取样品时取2克,仍取0.2ml样品液,如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。

实验一 硫酸苯酚法测多糖含量

实验一硫酸-苯酚法测多糖含量 1.目的要求 2.测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量3.2.方法原理 4.糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 5.3.主要实验仪器及材料 6.浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。7.4.掌握要点 8.硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。 9.5.试剂配制 10.1)葡萄糖标准液的配制

11.准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。 12.2)90%苯酚液的配制 13.准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存 3)6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤 7.管号0 1 2 3 4 5 6 7 8.葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 9.苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 10.浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 11.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml 的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程12.2)待测样品多糖的测定与计算

苯酚硫酸法测定多糖

苯酚—硫酸法测定党参总糖 1.材料与方法 1.1 材料与试剂,仪器 1.1.1 材料、试剂 党参(肉党、普通纹党、产于中寨的纹党);95%乙醇;苯酚;浓硫酸均为分析纯。 1.1.2 仪器与设备 FA-2400分析天平,101A型电热鼓风干燥箱,Mb型可调式电热板,电热恒温水浴锅,SK5200H超声清洗器,UV-9100紫外-可见分光光度计 1.2 方法 1.2.2 供试品溶液的制备 取党参粉末2g,置圆底烧瓶中,加95%乙醇3次(20.20.20ml)每次2h,过滤,蒸干乙醇,残渣用水溶解,在电热板上加热,提取3次(50.50.50ml),每次2h,过滤,滤液置于50ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度摇匀。 1.2.3 标准溶液的配制 精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖10mg置于100 mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度摇匀,得0.1mg/mL的储备溶液,备用。 1.2.3 5%苯酚溶液的制备 精确量取6.3ml 80%的苯酚溶液转移至100ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀后置于棕色试剂瓶中,备用。(实验室苯酚为师姐配好的80%的溶液,避光密封保存于冰箱中,用时水浴加热使其成为透亮的溶液) 1.2.4 标准曲线的制备 精确吸取葡萄糖标准液0、1、2、3、4、5、6 mL,分别置于10 mL 容量瓶中,以蒸馏水补至 10 mL摇匀,依次吸取2ml加入试管中,加入苯酚液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL,混匀,在室温放置30 min后,于波长490 nm处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。 (10*10-2mg.ml*1/10=10*10-3mg.ml-1=10μg/ml.20.30.40.50.60) 1.2.5 样品的测定 准确吸取供试品溶液0.1 mL加水定容至10mL,精确吸取此稀释液2mL于试管中,按标准曲线制备的方法测定吸光度值,并根据回归方程,求得其浓度,计算样品中总糖的含量。(党参溶液的浓度=2/50*0.1/10=1/2500g.ml-1=1/2.5 mg.ml-1=400μg.ml-1) 2 结果与分析

硫酸苯酚法测多糖含量

硫酸-苯酚法测多糖含量 1.目的要求 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量,如1型。 2.方法原理 糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3.主要实验仪器及材料 浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。 4.掌握要点 硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。 5.试剂配制 1)葡萄糖标准液的配制 准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。2)90%苯酚液的配制 准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存可达半年。 3)6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。 6. 实验步骤 表1 标准曲线的制作步骤 管号0 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 2)待测样品多糖的测定与计算 将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测定方法,以样液为参比液,测定溶液的吸光值,按回归方程计算待测溶液的多糖浓度,注意

苯酚_硫酸比色法测定多糖含量

生物药物 随着对生物药物、天然药物和保健食品研究的深入,多糖的研究进展很快。目前多糖含量的测定方法尚无统一标准,广泛应用的是苯酚-硫酸比色法。该法具有简单、快速、无需多糖纯品和贵重仪器等优点,且对水溶性样品和非水溶性样品均可测定。 1 苯酚-硫酸比色法原理 苯酚-硫酸比色法测定多糖含量是由Dubois等[1,2]提出的。其原理是:多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解,产生单糖,并迅速脱水成糠醛衍生物,该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应,生成橙黄色物质,在波长490nm处和一定浓度范围内,其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系,从而可用比色法测定其含量。 2 实验方法 2.1 标准溶液的配制 精密称取105℃下干燥至恒重的葡萄糖约100.0mg,置100mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,配得葡萄糖标准溶液。 2.2 供试品贮备液的配制 将样品进行适当处理(如真空干燥、回流提取等,根据各品种不同而有差异),取适量,按一定比例稀释,配制供试品贮备液。 2.3 苯酚溶液的配制 称取苯酚100g,加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g,常压蒸馏,收集(180±2)℃馏分。精密称取该馏分约10.0g置于200mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀后转置于棕色试剂瓶中,即得苯酚溶液,将其置于冰箱中备用。2.4 测定条件选择 2.4.1 反应温度选择 精密吸取供试品贮备液、葡萄糖标准液各1.0mL于100mL量瓶中,用水稀释至刻度,分别作为供试品溶液和对照品溶液。分别吸取供试品溶液1.0mL于两个具塞试管中,各加苯酚液1.0mL,并分别迅速滴加浓硫酸5.0mL。一份于水浴中煮沸15min,另一份于40℃水浴中恒温30min。另取两份对照品溶液1.0mL同上操作。取出,冷却至室温,15min后于490nm处测其A值,选取A较高的作为实验温度。 2.4.2 苯酚及硫酸用量选择 分别吸取供试品液和对照品液1.0mL5份,各加入苯酚液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL,加水至2.0mL,再各滴加浓硫酸5.0mL,40℃恒温30min后,测其A值,从苯酚液加入量达到某一值开始,A值基本保持不变,说明苯酚液量达到该值以上时,反应都能完成。另取供试品液和对照品液0.6mL各5份,分别加苯酚液1.0mL,再分别滴加浓硫酸2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL,并均用水稀释至8.0mL,根据A的稳定性,计算硫酸的最佳加入体积。 2.4.3 反应时间选择及稳定性 分别取供试品液和对照品溶液1.0mL4份,各加苯酚液1.0mL,浓硫酸5.0mL,于选定温度分别恒温10,20,30,40min。测得A值,加热到一定时间以后,A值不再变化,说明加热该时间即可使反应完全。另测反应完成后样品在不同时间内的A值,结果应在1h以上稳定。 2.5 标准曲线的绘制 依据2.4确定的测定条件,精密吸取葡萄糖标准 苯酚-硫酸比色法测定多糖含量张青 张天民 (山东正大福瑞达制药有限公司 济南 250014)

实验一、硫酸苯酚法测多糖含量

实验一 硫酸-苯酚法测多糖含量 1. 目的要求 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量 2?方法原理 糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈 线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖 含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3?主要实验仪器及材料 浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。 4.掌握要点 硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。 5 .试剂配制 1)葡萄糖标准液的配制 准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液, 摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。 2)90%苯酚液的配制 准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90 %苯酚液,棕色瓶中避光保存 3)6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。 6.实验步骤表1标准曲线的制作步骤 AvV 口吕号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表 2方法在操作,先在冰水浴中加入 0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20mi n, 取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。用 exceL软件求得回归方程 2)待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测

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