磷脂酶A1催化水解大豆油研究

磷脂酶A1催化水解大豆油研究

宋坷珂，汪勇，唐书泽

(暨南大学食品科学与工程系，广东 广州 510632)

摘要：通过正交试验获得了磷脂酶A1催化水解大豆油的最佳水解条件：水解温度35 ℃、加酶量26 U/g 、加水量40%，水解时间8 h 。在此条件下，以KOH 计，水解体系上层油层酸值达65.51 mg/g 。当用0.1%的氯化钙水溶液作为水解反应物时，和蒸馏水相比，钙离子对维持磷脂酶A1多次循环利用的残余活力有促进作用。水解反应残余活力的磷脂酶A1再加上50%的新添加酶，表现出很强的催化水解活力，酶回收使用6次时，残余酶活力仍然有初次使用活力的86.88%。

关键词：磷脂酶A1；大豆油；水解；甘油二酯

中图分类号：Q55；文献标识码：A ；文章篇号:1673-9078(2009)01-0055-04

Hydrolysis of Soybean Oil Catalyzed by Phospholipase A1

SONG Ke-ke, W ANG Y ong, TANG Shu-ze

(Department of Food Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou 510632, China)

Abstract: The optimal conditions for partial hydrolysis of soybean oil catalyzed by phospholipase A1 were obtained by the orthogonal experiment, which were reaction temperature 35℃, water content 40 wt%, enzyme dosage 26 U/g and reaction time 8 h. Under these conditions, the acid value of reaction mixture in the upper oil layer reached of 65.51 mg KOH/g. Using 0.1 % of calcium chloride solution as the reactant at the circulated reactions, the residual activity of the enzyme was improved by calcium ion. The mixture of recycled enzyme and 50% of fresh phospholipase A1 showed high hydrolysis activity. After used for six batches, the residual enzyme activity reached 86.88%.

Key words: phospholipase A1; soybean oil; hydrolysis, hydrolysis, diacylglycerol

磷脂酶A1是一类可以水解磷脂Sn-1位酯键获得2-酰基-溶血磷脂和脂肪酸的酶，广泛存在于动植物和微生物中[1]。磷脂酶A1的种类很多，有些磷脂酶A1有严格的底物特异性，磷脂酰丝氨酸（PS ）特异性磷脂酶A1只催化水解磷脂酰丝氨酸，磷脂酸（PA ）特异性磷脂酶A1只催化水解磷脂酸。但是属于胰脂酶基因家族的磷脂酶A1具有广泛的底物催化特性即可以催化磷脂水解又可以催化甘油三酯水解。当催化甘油三酯水解时生成甘油二酯和脂肪酸[2]。商品化的磷脂酶A1（Lecitase Ultra ） 是一种羧酸酯水解酶，由经基因改造的米曲霉深层发酵而得，和同类脂肪酶相

比，其酶活力高且价格便宜，具有很好的应用前景[3]。

甘油二酯(Diacylglycerol ，DAG )是食用油脂的天然成分，也是油脂在人体内代谢的中间产物，属GRAS 物质。甘油二酯食用安全，口感、色泽和风味与普通的甘油三酯无异[4]。但是DAG 在烹调油中含量极少，其含量不足10%[5]。近年的营养研究表明，甘二酯具有的保健功能与其特殊的代谢途径有关，它具有预防

收稿日期：2008-09-20

作者简介：宋坷珂（1986-），男，在读硕士，研究方向为食品科学 通讯作者：唐书泽教授

和治疗肥胖、高血脂及心脑血管疾病的作用，具有吸

收速度快，供能及时，不增加肠道负担等优点[6-8]]。另外，DAG 在食品、医药、化工中有广泛的应用，具有较好的工业应用前景[9]。

本论文主要研究磷脂酶A1催化水解大豆油工艺参数，以及磷脂酶A1的回收利用等方面，为工业化生产提供参考。 1 材料与方法

1.1 材料与试剂

Lecitase Ultra ：A1位磷脂酶，丹麦诺维信公司，活力单位10000 U/mL ；大豆油：东海粮油工业有限公司；无水乙醇（AR ）；石油醚（AR ，沸程：60~90℃）；邻苯二甲酸氢钾（AR ）；1%酚酞；氯化钙（AR ）；甘油标准品（AR ）。 1.2 仪器

PL602-S 型电子天平；TB-128型电子天平；W5180P 型恒温浴锅和搅拌器；DT5-4型离心机；DHG-9123A 型电热恒温鼓风干燥箱；GC-900A 气相色谱仪。

1.3 试验方法

55

1.3.1 磷脂酶A1催化水解大豆油甘油三酯正交试验

根据前期酶解试验数据，设计四因素三水平L9(34)正交实验，因素水平见表1。按照正交表条件反应，每次水解大豆油50.00 g，反应结束后将反应液在3000 r/min的条件下离心10 min分层，上层是粗甘油二酯，下层是水溶液。取上层样品测定酸值。

表1磷脂酶A1 催化水解大豆油L9（34）正交表

Table 1 Orthogonal test for the hydrolysis of soy oil by

phospholipase A1

水平

因素

A(加酶量

/U·g-1)

B(反应时

间/h)

C(温度

/ ℃)

D(加水量/%,

以油质量计)

1 18 4 35 36

2 22 6 40 40

3 26 8 45

44 1.3.2 不同体系下磷脂酶A1残余酶活力比较

准确称取50.00 g大豆油于250 mL圆底烧瓶中，加入0.10 mL磷脂酶A1和20.00 g蒸馏水，在40 ℃、300 r/min条件下反应4 h，反应完毕，将反应液在3000 r/min的条件下离心10 min，离心后分为两层。上层粗甘油二酯测定酸值。将剩余下层水溶液取至一新250 mL圆底烧瓶中，补充蒸馏水至20.00 g，再加入50.00 g大豆油在原条件重复此水解反应。用0.1%和0.01%的CaCl2水溶液替代蒸馏水做对照试验。

1.3.3 磷脂酶A1回收利用

准确称取50.00 g大豆油于250 mL圆底烧瓶中，加入0.10 mL磷脂酶A1和20.00 g 0.1%CaCl2水溶液，在40℃、300 r/min条件下反应4 h，反应完毕，将反应液在3000 r/min的条件下离心10 min，离心后分为两层。上层粗甘油二酯测定酸值，下层水溶液取1 mL 测定甘油含量。将剩余下层水溶液取至一新250 mL 圆底烧瓶中，补充0.1%CaCl2水溶液至20.00 g，再加0.05 mL新的磷脂酶A1溶液，加入新的50.00 g大豆油以原条件下重复此水解反应。循环反应6次后终止反应。

1.4 分析方法

1.4.1 酸值的测定

油脂酸值分析按照GB/T 5530-1995酸碱滴定法1.4.2 甘油含量测定（气相色谱法）

分别称取约 0.01、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 g 的甘油标准品，精确至0.1 mg，用蒸馏水配制成0.10、0.50、1.00、 2.00、 5.00、10.00 mg/mL的标准溶液,用气相色谱仪测定峰面积，以峰面积和浓度作标准曲线。

取下层水解溶液样品，进HP-5型毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）测定峰面积，色谱条件为：柱箱温度：210 ℃；汽化温度：250 ℃；离子火焰检测器温度：190 ℃；进样量：1 μL，分流比80:1，载气为N2。样品峰面积通过标准曲线，求得样品中甘油含量。

2 结果与讨论

2.1 正交试验

酶解正交试验结果见表2，从表2中可以看出影响酶解反应因素的主次按强到弱依次是反应温度、加酶量、加水量和反应时间。最佳反应条件是A3B3C1D2，即：加酶量26 U/g、反应时间8 h、反应温度35℃、加水量40%。在此条件下进行验证试验，得水解液油层酸值为65.51 mg/g（以KOH计）。

表2 磷脂酶A1催化水解大豆油正交试验结果 Table 2 Results of the orthogonal test for the hydrolysis of

soy oil by phospholipase A1

实验号 A B C D

酸值/(mg/g,KOH计)

1 1 1 1 1 44.58

2 1 2 2 2 40.30

3 1 3 3 3 22.97

4 2 1 2 3 36.80

5 2 2 3 1 26.05

6 2 3 1 2 53.36

7 3 1 3 2 43.76

8 3 2 1 3 53.79

9 3 3 2 1 62.54

K1 107.85125.14151.73 133.17

K2 116.21120.14139.64 137.42

K3 160.09138.8792.78 113.56

R 52.2418.7358.95 23.86

2.2 不同体系磷脂酶A1残余酶活力比较

含有不同钙离子含量的水溶液作为水解反应物，其对磷脂酶A1残余活力的影响也不同。在初次催化反应时，不同体系磷脂酶A1的活力基本一致。但是随着循环利用次数增加，由于搅拌剪切作用，磷脂酶A1的催化活力下降。当采用0.1%的氯化钙水溶液水解时，水解反应循环四次残余酶活力和初次相比仍然有33%的活力（图1），而蒸馏水和0.01%氯化钙水溶液在第四次的残余活力和初次水解相比只有不到10%。和脂肪酶一样，一些磷脂酶A1是钙离子依赖型酶，钙离子在维持酶的空间构象以及活力中心结构上起到至关重要的作用[10]。同时钙离子也可以提高酶蛋白的热稳定性，所以反应体系中加入一定量的钙离

56

子有助于维持酶的活力。

图1 循环反应次数与水解体系上层酸值的关系 Fig.1 Effect of reaction batches on acid value of reaction

mixture in the upper oil layer in different reaction system

2.3 磷脂酶A1回收利用

图2 不同循环反应次数与水解体系上层酸值的关系

Fig.2 Effect of reaction batches on acid value of reaction mixture in the upper oil layer with mixture of recycled enzyme

and 50% of fresh phospholipase A1

由于不断新加入磷脂酶A1，体系总的酶量不断升高，这就保证了酶的催化活性。如图2所示，利用上次催化水解的残余酶活力，同时再加入50%的新鲜酶活力催化大豆油水解。循环水解反应6次后，上层酸值仍然达到44.91 mg/g(以KOH 计)，和初次水解相比，相对酶活力为86.88%。

图3不同循环反应次数与水解体系下层甘油含量的关系

Fig.3 Effect of reaction batches on glycerol content of reaction

mixture in the lower oil layer

但是磷脂酶A1催化水解甘油三酯产物不光是甘油二酯和脂肪酸，和脂肪酶类似磷脂酶A1还会催化甘油二酯水解成甘油一酯，催化水解甘油一酯生成甘油[11]。如图3所示，水解体系下层水溶液中甘油含量随着循环水解次数的增加而增加，当反应6次后，下层甘油含量可以达到20%。下层体系甘油含量的升高抑制了甘油一酯水解反应，相应地也抑制了甘油三酯的水解反应。酶的回收利用可以节省酶的用量，从而降低生产成本。

3 结论

3.1 通过正交实验得磷脂酶A1催化水解大豆油最佳反应条件为：水解温度35℃、加酶量26 U/g 、加水量40%，水解时间8h 。在此条件下水解液油层酸值达65.51 mg/g(以KOH 计)。

3.2 钙离子对于维持磷脂酶A1活力有一定作用，0.1%的氯化钙水溶液作为水解反应物和蒸馏水相比，可以大大提高多次循环反应时磷脂酶A1的残余活力。 3.3 通过添加50%的新鲜酶液可以达到重复利用磷脂酶A1水解大豆油的目的，循环水解6次，酶活力和初次催化水解相比，仍然有86.88%的残余活力。 参考文献

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溶血卵磷脂对肉仔鸡脂类代谢的影响

溶血卵磷脂对肉仔鸡脂类代谢的影响 杨丹丹,黄　进,王　恬3 (南京农业大学动物科技学院,江苏南京　210095) 摘要:选200羽1日龄AA肉仔鸡,随机分成对照组和试验组(每组10个重复),试验组日粮添加011%溶血卵磷脂,研究溶血卵磷脂对肉鸡脂类代谢的影响。结果表明:溶血卵磷脂降低肝脏系数和肝脂率(P>0105)、血清总甘油三酯与低密度脂蛋白胆固醇(LDL2C)(P>0105)、LDL2 C/HDL2C和葡萄糖含量(P<0105),提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL2C)和游离脂肪酸含量(P<0105),上调肉仔鸡肝脏载脂蛋白B(P< 0101)和脂肪酸合成酶(P=01155)mRNA表达水平;而对肉仔鸡的42日龄体重、腹脂率、皮下脂肪厚、肌间脂肪厚、腿肌和胸肌含脂率以及血清总胆固醇、三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸、促甲状腺激素刺激激素和胰岛素含量均无显著影响(P>0105)。结果提示:溶血卵磷脂对肉仔鸡有减少肝脂肪沉积及降血脂作用。 关键词:溶血卵磷脂;肉仔鸡;脂类代谢 中图分类号:S81617 文献标识码:A 文章编号:052925130(2008)0520018204 Effect of lysolec ith i n on li p i d m et abolis m i n bro ilers Y ANG Dan2dan,HUANG J in,WANG Tian3 (College of Ani m al Science and Technol ogy,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China) Ab s trac t:T wo hundreds of12day2old A rborAcre br oiler chicks were random ly all ocated int o contr ol and treated gr oup s with ten rep licates, res pectively.The trial diet was supp le mented with011%lys olecithin t o deter m ine effects of lys olecithin on li p id metabolis m in br oilers.The results showed that lys olecithin supp le mentati on decreased although not significant in the liver index,ether extract(EE)percentage,seru m t otal triglyceride and LDL2C(P>0105),but significant in LDL2C/HDL2C and seru m glucose(P<0105).Significant increases in HDL2C, free fatty acid(P<0105)and hepatic exp ressi on of apoli pop r otein B(P<0101)were als o observed in lys olecithin2supp lemented birds, while the body weight and percentage of abdom inal fat,subcutaneous fat dep th,inter2muscular fat dep th,EE percentage of breast,high mus2 cle and concentrati ons of seru m t otal cholester ol,T3,T4,TSH and I N S at422day old were not affected(P>0105).The results indicated that dietary lys olecithin could decrease hepatic fat accu mulati on and seru m li p ids level. Key wo rd s:lys olecithin;br oiler;li p id metabolis m 食物磷脂可促进动物对脂肪的吸收,调节机体脂类代谢,降低血液胆固醇含量[1-2]。溶血卵磷脂是由磷脂失去一分子脂肪酸生成的一种表面活性物质,目前作为一种优良的乳化剂应用于动物日粮,能促进动物的生长和对脂类等营养物质的吸收[3-4],但溶血卵磷脂对肉仔鸡脂类代谢的影响国内外尚未见报道。本试验主要研究日粮中添加011%溶血卵磷脂对AA肉仔鸡体脂重分配的作用,并通过对相关血清生化指标和肝脏载脂蛋白B(ApoB)、脂肪酸合成酶(F AS)基因mRNA表达水平的分析来初步探讨其作用机理。 　 收稿日期:2007207216 基金项目:国家重点基础研究发展计划(973) (2004CB117500)。 作者简介:杨丹丹(19832),女,硕士研究生。 3通讯作者。1　材料和方法 111　溶血卵磷脂和试验动物 溶血卵磷脂由美国建明工业(珠海)有限公司提供(含20%溶血卵磷脂)。试验动物为1日龄商品代AA肉鸡,购自江苏南京迈皋桥鸡场。 112　试验日粮 参照美国NRC(1994)肉鸡营养需要配制0～3周龄和4～6周龄两个阶段试验日粮(见表1),以粉料饲喂,试验组日粮中添加011%溶血卵磷脂。对照组和试验组2组同一阶段的日粮营养含量大致相同, 0～3周龄:ME12101MJ/kg,CP20%;4～6周龄: ME12130MJ/kg,CP18%。

酶法水解原淀粉

(翻译)酶法水解原淀粉 摘要：原淀粉颗粒存在半微晶结构能抵抗淀粉酶的水解，但是当淀粉糊化时很容易被水解和转化为糖和糊精。影响酶在体内和体外水解的速率和历程的各因素是相互关联的，在这方面的研究也是很复杂的。本文试图讨论一下这方面的问题并给读者提供一些跟这些特征有关的重要信息资源，文章中的每个不同的标题都可以转换成一个综述，因此应该根据文章素材选择性的阅读。 内容 1.引言. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.颗粒大小. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.颗粒形状. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.混合颗粒. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5.直链淀粉的含量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6.脂质的量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7.磷酸盐含量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8.结晶度和双螺旋. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9.结构. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10.环境. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11.糊化. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12.淀粉酶的来源. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13.其它影响因素. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14.结论. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.引言： 加工过的淀粉已经从半微晶的结构转变为无定型结构，而原淀粉则不然，因此原淀粉颗粒可以抗酶解，淀粉类食品在烹调时可以保存较高的营养价值。细菌、真菌、植物、动物和人类生产的α-淀粉酶（尽管不一定有相同的化学结构）是一种内切酶，从分子内部任意的水解α-1, 4键，可以降低淀粉分子的分子量（直链淀粉和支链淀粉）。经过大量的水解，淀粉最终转化为糖和糊精，称为各种DE糖浆，在这里，水解能力是以水解产物（每单位质量）当作葡萄糖量来结算的。商业葡萄糖浆就是利用这种方法生产的，过去葡萄糖浆的生产多用无机酸来水解淀粉，酶处理可以生产更高质量的产品。 如上所述，α-淀粉酶在自然界中到处都存在。许多动物（包括人类）是在唾液或胰腺中分泌酶的，许多动物的胰腺（该胰腺进入人类的十二指肠）将食品淹没时，利用其中的淀粉酶将淀粉水解，此时所生成的任何葡萄糖都可以被小肠直接吸收，刷状缘酶（生产麦芽糖的麦芽糖酶和水解糊精α-1,6键的糊精酶）和α-淀粉酶使葡萄糖的消化过程继续进行，更多的葡萄糖被人体吸收。考虑到α-淀粉酶水解淀粉颗粒的产物，读者会提到更多细节性的工作。没有被消化的淀粉被输送到动物的大肠内，在肠内被肠内菌群发酵（产生气体），热量以短链脂肪酸的形式释放随可能被吸收掉。据一些作者（Dobreva and Ivanova, 1989).）报道直链和支链淀粉水解的方式是不同的。 α-淀粉酶水解原淀粉的控制与水解机制将在下面进行论述。 很多评论是建立在体外研究的基础上的，这些研究与体内研究有着不同的的动力

138磷脂类产品中溶血磷脂的控制

发布日期 20061113 栏目化药药物评价>>化药质量控制 标题磷脂类产品中溶血磷脂的控制 作者张震陈海峰 部门 正文内容审评四部审评八室张震陈海峰 磷脂是一类含有磷酸的脂类化合物，广泛存在于自然界的动植物体内，是生物膜的 主要组成成分，并参与细胞膜对蛋白质的识别和信号传导。机体中主要含有两大类磷脂，甘油磷脂和鞘磷脂。甘油磷脂以甘油为母体结构，一般常见的磷脂类化合物如磷 脂酰胆碱（PhosphatidylCholine，PC）、磷脂酰乙醇胺（Phosphatidyl Ethanolamine，PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）等皆属于甘油磷脂；鞘磷脂以神经鞘 氨醇为母体构成。 1、磷脂的结构 从结构上分析，磷脂类化合物一般由具有强极性的亲水性部分和16～22个碳的脂 肪酸疏水链构成，脂肪酸主要包括软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生四 烯酸等。由于构成磷脂的脂肪酸具有不同的长度和不饱和度，因而磷脂类产品皆为混 合物。 磷脂类化合物在药物制剂工业中应用广泛，可作为营养输液剂中的活性成分，也是 脂肪乳剂、脂质体等静脉制剂中常用的乳化剂。其中最常用的磷脂为卵磷脂。卵磷脂 按其来源不同可分为蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂（又称大豆磷脂）。卵磷脂的主要成分 为磷脂酰胆碱，另外，还含有少量磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇等成分。蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂的区别在于磷脂结构中脂肪酸的不饱和度不同，大豆磷脂具 有更高的不饱和度。 卵磷脂的基本结构如下： 2、溶血磷脂

溶血磷脂是磷脂的降解产物，由于最常用的磷脂类化合物为卵磷脂，因而溶血磷脂一般是指溶血卵磷脂，或称溶血磷脂酰胆碱（Lyso-phosphatidylCholine，L-PC），此外，还有溶血磷脂酰乙醇胺等。 溶血磷脂是磷脂1位或2位酯键水解或酶解产生的单链脂肪酰磷脂衍生物。按磷脂酯键断裂的方式不同，溶血磷脂可分为溶血磷脂2和溶血磷脂1。溶血磷脂是机体内 磷脂的正常代谢产物，体内磷脂代谢产生溶血磷脂的过程由磷脂酶A1和磷脂酶A2催化。磷脂酶A1可催化甘油磷脂的第1位酯键断裂，生成溶血磷脂2；而磷脂酶A2可 催化甘油磷脂的第2位酯键断裂，生成溶血磷脂1。 在磷脂类产品的制备和贮藏过程中磷脂也会发生部分分解，生成溶血磷脂。正常情 况下，由于化学位阻的原因，磷脂类产品中溶血磷脂1和溶血磷脂2的比例大约为1：9，即溶血磷脂2占绝大比例。 溶血磷脂（溶血磷脂酰胆碱）的结构如下： 溶血磷脂是一类具有较强表面活性的性质，能使红细胞及其他细胞膜破裂，引起溶血 或细胞坏死。但在正常生理条件下，由于体内磷脂酶的存在位置和存在数量受到严格 控制，因而机体并不会受到伤害。体内的溶血磷脂可通过磷脂酶B代谢脱去另一分子 脂肪酸转变为甘油磷酸胆碱，使其失去溶解细胞膜的作用。 三、磷脂类产品中溶血磷脂的测定和控制 由于溶血磷脂的溶血或溶解细胞膜作用，因而除溶血磷脂类产品（可制成脂质体， 为活性成分，用于治疗动脉粥样硬化）外，磷脂类产品中皆要对其中溶血磷脂的量进 行严格控制。溶血磷脂的含量测定一般可采用HPLC法或TLC法。近年来，还发展了 一些测定的新方法、新技术。 HPLC法是磷脂及溶血磷脂含量控制的常用方法。由于磷脂分子中同时含有亲水和 疏水部分，因而所表现出来的表面活性给磷脂的色谱分析带来困难。另外，磷脂类化 合物紫外吸收一般都较弱，加大了检测难度。虽然近年来HPLC技术取得了较大进步，但磷脂类产品色谱分析的分辨率、准确度和测定动力学问题仍不令人十分满意。 采用HPLC法测定溶血磷脂的含量一般采用正相色谱法，多采用硅胶柱，以己烷/庚烷－异丙醇系统为流动相，梯度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测。由于磷脂的表面

大米蛋白质的酶法水解及其性质研究

大米蛋白质的酶法水解及其性质研究注 王章存姚惠源 (江南大学食品学院,无锡214036) 摘要本文通过三种蛋白酶催化反应动力学特性的比较,确定用碱性蛋白酶Alcalase作为水解大米分离蛋白的酶制剂,并通过正交试验分别获得高溶解性、高发泡性、高乳化性大米蛋白水解物的酶反应条件。本实验所得到的大米蛋白水解物最大溶解度为50.2%,最大发泡力为50m L,最大乳化力为73.6mL/g。 关键词大米蛋白蛋白酶蛋白质水解 0前言 大米蛋白以其合理的氨基酸组成、较高的生物利用率及特有的低敏性等特点被视为优质蛋白质11-32。而在味精和淀粉生产中的大量副产品蛋白质未被充分利用,其主要原因是大米蛋白的水溶性较差,为此大米蛋白的开发利用被列入国家十五科技攻关课题。目前国内外对大米蛋白的提取多采用碱溶技术。作者认为对大米蛋白的开发利用宜首先获得高纯度大米蛋白,然后采用不同的改性方法使其适用于不同的用途。为此作者曾制备蛋白含量达90%的大米分离蛋白粉。当然该分离蛋白的物化功能尚不能满足食品加工的需要。为此本文探讨酶法水解大米分离蛋白(RPI)改善其物化功能性的技术措施。 1材料和方法 1.1材料 大米分离蛋白:由本实验室制备,蛋白质含量89.5%,粗灰分1.2%。 蛋白酶为诺维信公司产品,酶制剂品种是Pro-tamex,Alcalase和Neutrase(标示每g酶活力分别为1. 5,3.0和1.5安森单位)。 市售纯正花生油。 1.2试验方法 1.2.1三种蛋白酶的比较(复合酶Protamex、碱性酶 注:国家十五科技攻关项目 收稿日期:2003-03-11 王章存:男,1963年出生,博士研究生,副教授,粮油食品生物技术研究Alcalase、中性酶Neutrase) 配制5%的大米分离蛋白的悬浊液(pH值为7.0、7.5、7.0分别用于复合酶P(Protamex)、碱性酶A(A-l calase)和中性酶N(Neutrase)试验),酶的用量分别为0.1%(E/S),于50e下保温,每隔30min取样一次,沸水浴中灭酶3min,离心(1000r/min@5min)后,测定上清液中蛋白质含量。 1.2.2酶水解反应条件的优化 采用正交试验方法,以获得高溶解性、高发泡性、高乳化性的蛋白水解物为目的,考查的影响因子是蛋白浓度、酶添加量和反应时间。 每组试验结束后在45e以下真空浓缩和干燥。所得产物用于溶解、发泡和乳化性能指标的测定。1.2.3测定方法 蛋白质含量测定:采用Folin-酚试剂法142。 蛋白质溶解度:以上清液中蛋白质含量占反应体系中蛋白总量的百分比表示。 起泡性测定:取3g样品加50mL去离子水,用0.05mol/LNaOH或HCl调pH7后搅拌30min,再加去离子水至100mL作为测试液(水温为35e),于1000r/min转速下搅拌3min,立即测定泡沫体积。放置30min后测定下层析出液体的体积,以判断泡沫的稳定性。 乳化性测定152:取1%的蛋白质溶液50mL加入纯花生油,并用电导仪监测至电导率下降为零时停止加油,此时滴加花生油的总量即为该蛋白质样品的最大乳化量,以每g蛋白质乳化油的毫升数表示(mL/ g)。 2003年10月第18卷第5期 中国粮油学报 Journal of the Chinese Cereals and Oils Association Vol.18,No.5 Oct.2003

蛋白酶催化蛋白质水解

蛋白酶催化蛋白质水解 1、酶的重要性 生命的最主要、最基本的特征在于生物体的新陈代谢，具体表现为活体经常由外部摄取所需要的物质，以生物能为动力，经过体内同化、更新、异构化，并排出一些物质，发散热能至外界。机体或单个细胞的所有这些化学反应，基本上是在催化剂作用下完成的。酶是人体内新陈代谢的催化剂，只有酶存在，人体内才能进行各项生化反应。人体内酶越多，越完整，其生命就越健康。当人体内没有了活性酶，生命也就结束。人类的疾病，大多数均与酶缺乏或合成障碍有关。 2、酶的生物学功能 在生物体内，酶发挥着非常广泛的功能，具体功能如下： （1）信号转导和细胞活动的调控都离不开酶。特别是激酶和磷酸酶的参与。 （2）酶也能产生运动。通过催化肌球蛋白上ATP的水解产生肌肉收缩，并且能够作为细胞骨架的一部分参与运送胞内物质。 （3）参与在动物消化系统的工作。以淀粉酶和蛋白酶为代表的一些酶可以将进入消化道的大分子（淀粉和蛋白质）降解为小分子，以便于肠道吸收。淀粉不能被肠道直接吸收，而酶可以将淀粉水解为麦芽糖或更进一步水解为葡萄糖等肠道可以吸收的小分子。不同的酶分解不同的食物底物。

（4）在代谢途径中，多个酶以特定的顺序发挥功能：前一个酶的产物是后一个酶的底物；每个酶催化反应后，产物被传递到另一个酶。有些情况下，不同的酶可以平行地催化同一个反应，从而允许进行更为复杂的调控：比如一个酶可以以较低的活性持续地催化该反应，而另一个酶在被诱导后可以较高的活性进行催化。酶的存在确定了整个代谢按正确的途径进行；而一旦没有酶的存在，代谢既不能按所需步骤进行，也无法以足够的速度完成合成以满足细胞的需要。实际上如果没有酶，代谢途径，如糖酵解，无法独立进行。例如，葡萄糖可以直接与ATP反应使得其一个或多个碳原子被磷酸化；在没有酶的催化时，这个反应进行得非常缓慢以致可以忽略；而一旦加入己糖激酶，在6位上的碳原子的磷酸化反应获得极大加速，虽然其他碳原子的磷酸化反应也在缓慢进行，但在一段时间后检测可以发现，绝大多数产物为葡萄糖-6-磷酸。于是每个细胞就可以通过这样一套功能性酶来完成代谢途径的整个反应网络。3、酶的分类 酶可分为二类，第一类是所谓的单纯酶，其催化活性仅由酶蛋白提供；第二类称为结合酶，除了蛋白质外，还需含有其他成分才呈现催化活性。这些成分包括无机离子，Fe卄、Zn卄.Mn卄等或有机化合物，如硫胺素焦磷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸等。这些化学组分称为辅助因子，这类化合物称为辅酶。这类酶也称为全酶。 按国际生化会的规定，将现已分离得到的2000多种酶按所催化的反应类型分类，可分为以下六种。

分泌型磷脂酶A2、溶血磷脂酸与多发性硬化相关性研究及临床意义(新)

·论著·分泌型磷脂酶A2、溶血磷脂酸与多发性 硬化相关性研究及临床意义 蒋东晓连艳芬 【摘要】目的观察多发性硬化（MS）患者血及脑脊液中分泌型磷脂酶A2（sPLA2）和溶血磷 脂酸（LPA）水平的变化及相关性。方法选取21例急性期MS患者（急性期MS组），20例缓解期 MS患者（缓解期MS组），21例非炎性、血管性神经系统疾病患者（对照组），测定三组血sPLA2、血 浆LPA及脑脊液sPLA2、LPA水平，并进行比较。结果急性期MS组血及脑脊液sPLA2、LPA水 平均显著高于缓解期MS组和对照组（P＜0.01）。急性期MS组经治疗后血及脑脊液sPLA2、LPA 水平显著低于治疗前（P＜0.01）。急性期MS组治疗前后血sPLA2与LPA水平存在相关性（r＝ 0.962，P＝0.000；r＝0.848，P＝0.000）；急性期MS组治疗前后脑脊液sPLA2与LPA水平存在相关 性（r＝0.968，P＝0.000；r＝0.850，P＝0.000）。结论血及脑脊液sPLA2、LPA水平可作为评估MS 患者疾病活动性的炎性标志物。 【关键词】多发性硬化；分泌型磷脂酶A2；溶血磷脂酸 The relationship and clinical significance of secretory phospholipase A2and lysophosphatidic acid in multiple sclerosis Jiang Dongxiao,Lian Yanfen.Department of Neruology,Weihai Wendong Central Hospital Affiliated of Weifang Medical College,Shandong Weihai264400,China Corresponding author:Jiang Dongxiao,Email:jdx_jiang@https://www.sodocs.net/doc/b710313276.html, [Abstract]Objective To explore the levels of secretory phospholipase A2(sPLA2)and lysophosphatidic acid(LPA)in blood and cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis(MS),and to explore the relationship between the levels of these inflammatory biomarkers and disease activity of MS.Methods Blood samples were collected from21MS patients of acute period(acute period of MS group),20MS patients of remitting period(remitting period of MS group)and21patients with non inflammatory and vascular neurologic disease(control group).The levels of sPLA2and LPA in blood and cerebrospinal fluid were measured and compared.Results The levels of sPLA2and LPA in blood and cerebrospinal fluid before treatment in acute period of MS group were significantly higher than those in remitting period of MS group(P＜0.01)and in control group(P＜0.01).The levels of sPLA2and LPA in blood and cerebrospinal fluid after treatment were significantly lower than those before treatment in acute period of MS group(P＜0.01).The levels of sPLA2and LPA in blood before and after treatment had correlations in acute period of MS group(r＝0.962,P＝0.000；r＝0.848,P＝0.000).The levels of sPLA2 and LPA in cerebrospinal fluid before and after treatment had correlations in the acute period group(r＝ 0.968,P＝0.000；r＝0.850,P＝0.000).Conclusions The levels of sPLA2and LPA in blood and cerebrospinal fluid may be used as inflammatory biomarkers for disease activity in MS patients. [Key words]Multiple sclerosis;Secretory phospholipase A2;Lysophosphatidic acid 多发性硬化（MS）是一种慢性中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病，临床以多发病灶及病程反复为特点，其病理表现主要是淋巴细胞和巨噬细胞对髓鞘 的破坏及继发性轴索损害[1]。分泌型磷脂酶A2（sPLA2）为钙依赖的磷脂酶家族成员之一，由血管平滑肌细胞与巨噬细胞等产生，它能够水解细胞膜磷脂的第2位酰基，产生溶血磷脂酸（LPA）、游离脂肪酸及多种炎性因子，如白细胞介素、血小板激活因子前体等[2-3]。LPA是调节细胞生存与凋亡的重要信号分子，与肿瘤、动脉粥样硬化及缺血性心脑 DOI：10.3760/cma.j.jssn.1673-4904.2016.11.001 作者单位：264400潍坊医学院附属威海市文登中心医院神经内科 通信作者：蒋东晓，Email：jdx_jiang@https://www.sodocs.net/doc/b710313276.html,

腈水解酶催化腈水解的研究进展_刘颖

腈水解酶催化腈水解的研究进展 刘颖，苏昕*1 （沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院，沈阳 110016） 摘要:腈水解酶催化具有毒性、致畸性、致癌性的腈水解合成羧酸因其反应条件温和、成本低、环境污染少及高选择性（立体、化学、区域）而备受学者和企业家的青睐，产物羧酸广泛用于精细化工、医药中间体、维生素前体等，具有高增值价值，因此腈水解酶具有良好的工业应用前景和巨大的经济价值。目前对腈水解酶的来源、作用机制、筛选途径、酶结构、催化特性以及腈水解酶基因克隆、纯化、固定化、修饰等研究均有报道。参考20余篇文献，本文综述腈水解酶催化腈类化合物水解的研究进展。 关键词：腈水解酶，腈化合物，生物催化 Advances in nitrilase hydrolyzing nitriles LIU Ying, SU Xin* (School of Life Science and Biopharmaceutics, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China) Abstract: The nitrilases attract substantial attention from scholars and entrepreneurs because of their mild reaction conditions, low-cost, small environmental pollution and high selectivity (stereo-, chemical-, regional-) when hydrolyzing toxic, mutagenic and carcinogenic nitriles. The production of carboxylic acid with high added value is widely used in fine chemicals, pharmaceutical intermediates and vitamin premises. Therefore, the nitrilase has good application prospect and the great economic value. Articles about the sources of enzyme, mechanism, screening approach, structure, catalytic properties, nitrilase gene cloning, purification of nitrilase, immobilization, modification etc have been reported. Based on more than 20 domestic and foreign literatures, recent progress on nitrilases hydrolyzing nitriles was reviewed. Keywords: Nitrilase, Nitriles, Biocatalysis 腈是一类含?CN基团的有机物，是合成酰胺、羧酸、酯等的起始原料。它们不仅种类繁多而且自然界中分布广泛，如用作溶剂的乙腈、高聚物的单体丙烯腈、杀虫剂溴苯腈和碘苯腈、微生物和植物中产生的蓖麻碱等[1]。大多数腈化合物具有毒性、致畸性、致癌性[2]，但由其水解得到的羧酸被广泛应用于精细化工、医药中间体及维生素前体等，具有较高的增值价值。腈的化学水解反应条件苛刻（高温、高压、强酸或强碱）且伴随有大量盐类形成，为后续的分离纯化带来困难，也造成一定的环境污染[3]，因此在工业上的应用有一定局限性。腈水解酶( EC 3.5.5.1)直接催化腈生成相应羧酸，虽存在活性低、稳定性差等缺点，但其作为卓越的生物催化剂因反应条件温和、环境污染少、成本低、高选择性而备受学者和企业家的关注（见图1）。 基金项目：沈阳市科学技术计划项目（项目号：F11-243-1-00） 作者简介：刘颖（1989-）女，硕士，从事生物转化研究。E-mail:ailsaly@sina.,cn 通讯作者：苏昕（1966-）女，副教授，博士，主要从事转基因植物、生物转化及抗菌药物的研究。 E-mail:suxin1966@https://www.sodocs.net/doc/b710313276.html,

蛋白酶催化蛋白质水解

蛋白酶催化蛋白质水解集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-

蛋白酶催化蛋白质水解1、酶的重要性 生命的最主要、最基本的特征在于生物体的新陈代谢，具体表现为活体经常由外部摄取所需要的物质，以生物能为动力，经过体内同化、更新、异构化，并排出一些物质，发散热能至外界。机体或单个细胞的所有这些化学反应，基本上是在催化剂作用下完成的。酶是人体内新陈代谢的催化剂，只有酶存在，人体内才能进行各项生化反应。人体内酶越多，越完整，其生命就越健康。当人体内没有了活性酶，生命也就结束。人类的疾病，大多数均与酶缺乏或合成障碍有关。 2、酶的生物学功能 在生物体内，酶发挥着非常广泛的功能，具体功能如下： （1）信号转导和细胞活动的调控都离不开酶。特别是激酶和磷酸酶的参与。 （2）酶也能产生运动。通过催化肌球蛋白上ATP的水解产生肌肉收缩，并且能够作为细胞骨架的一部分参与运送胞内物质。 （3）参与在动物消化系统的工作。以淀粉酶和蛋白酶为代表的一些酶可以将进入消化道的大分子（淀粉和蛋白质）降解为小分子，以便于肠道吸收。淀粉不能被肠道直接吸收，而酶可以将淀粉水解为麦芽糖或更进一步水解为葡萄糖等肠道可以吸收的小分子。不同的酶分解不同的食物底物。

（4）在代谢途径中，多个酶以特定的顺序发挥功能：前一个酶的产物是后一个酶的底物；每个酶催化反应后，产物被传递到另一个酶。有些情况下，不同的酶可以平行地催化同一个反应，从而允许进行更为复杂的调控：比如一个酶可以以较低的活性持续地催化该反应，而另一个酶在被诱导后可以较高的活性进行催化。酶的存在确定了整个代谢按正确的途径进行；而一旦没有酶的存在，代谢既不能按所需步骤进行，也无法以足够的速度完成合成以满足细胞的需要。实际上如果没有酶，代谢途径，如糖酵解，无法独立进行。例如，葡萄糖可以直接与ATP反应使得其一个或多个碳原子被磷酸化；在没有酶的催化时，这个反应进行得非常缓慢以致可以忽略；而一旦加入己糖激酶，在6位上的碳原子的磷酸化反应获得极大加速，虽然其他碳原子的磷酸化反应也在缓慢进行，但在一段时间后检测可以发现，绝大多数产物为葡萄糖-6-磷酸。于是每个细胞就可以通过这样一套功能性酶来完成代谢途径的整个反应网络。 3、酶的分类 酶可分为二类，第一类是所谓的单纯酶，其催化活性仅由酶蛋白提供；第二类称为结合酶，除了蛋白质外，还需含有其他成分才呈现催化活性。这些成分包括无机离子，Fe卄、Zn卄.Mn卄等或有机化合物，如硫胺素焦磷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸等。这些化学组分称为辅助因子，这类化合物称为辅酶。这类酶也称为全酶。 按国际生化会的规定，将现已分离得到的2000多种酶按所催化的反应类型分类，可分为以下六种。

138磷脂类产品中溶血磷脂的控制

发布日期 栏目化药药物评价>>化药质量控制 标题磷脂类产品中溶血磷脂的控制 作者张震陈海峰 部门 正文内容审评四部审评八室张震陈海峰 磷脂是一类含有磷酸的脂类化合物，广泛存在于自然界的动植物体内，是生物膜的主要组成成分，并参与细胞膜对蛋白质的识别和信号传导。机体中主要含有两大类磷脂，甘油磷脂和鞘磷脂。甘油磷脂以甘油为母体结构，一般常见的磷脂类化合物如磷脂酰胆碱（PhosphatidylCholine，PC）、磷脂酰乙醇胺（Phosphatidyl Ethanolamine，PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）等皆属于甘油磷脂；鞘磷脂以神经鞘氨醇为母体构成。 1、磷脂的结构 从结构上分析，磷脂类化合物一般由具有强极性的亲水性部分和16～22个碳的脂肪酸疏水链构成，脂肪酸主要包括软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸等。由于构成磷脂的脂肪酸具有不同的长度和不饱和度，因而磷脂类产品皆为混合物。 磷脂类化合物在药物制剂工业中应用广泛，可作为营养输液剂中的活性成分，也是脂肪乳剂、脂质体等静脉制剂中常用的乳化剂。其中最常用的磷脂为卵磷脂。卵磷脂按其来源不同可分为蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂（又称大豆磷脂）。卵磷脂的主要成分为磷脂酰胆碱，另外，还含有少量磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇等成分。蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂的区别在于磷脂结构中脂肪酸的不饱和度不同，大豆磷脂具有更高的不饱和度。 卵磷脂的基本结构如下： 2、溶血磷脂

溶血磷脂是磷脂的降解产物，由于最常用的磷脂类化合物为卵磷脂，因而溶血磷脂一般是指溶血卵磷脂，或称溶血磷脂酰胆碱（Lyso-phosphatidylCholine，L-PC），此外，还有溶血磷脂酰乙醇胺等。 溶血磷脂是磷脂1位或2位酯键水解或酶解产生的单链脂肪酰磷脂衍生物。按磷脂酯键断裂的方式不同，溶血磷脂可分为溶血磷脂2和溶血磷脂1。溶血磷脂是机体内磷脂的正常代谢产物，体内磷脂代谢产生溶血磷脂的过程由磷脂酶A1和磷脂酶A2催化。磷脂酶A1可催化甘油磷脂的第1位酯键断裂，生成溶血磷脂2；而磷脂酶A2可催化甘油磷脂的第2位酯键断裂，生成溶血磷脂1。 在磷脂类产品的制备和贮藏过程中磷脂也会发生部分分解，生成溶血磷脂。正常情况下，由于化学位阻的原因，磷脂类产品中溶血磷脂1和溶血磷脂2的比例大约为1：9，即溶血磷脂2占绝大比例。 溶血磷脂（溶血磷脂酰胆碱）的结构如下： 溶血磷脂是一类具有较强表面活性的性质，能使红细胞及其他细胞膜破裂，引起溶血或细胞坏死。但在正常生理条件下，由于体内磷脂酶的存在位置和存在数量受到严格控制，因而机体并不会受到伤害。体内的溶血磷脂可通过磷脂酶B代谢脱去另一分子脂肪酸转变为甘油磷酸胆碱，使其失去溶解细胞膜的作用。 三、磷脂类产品中溶血磷脂的测定和控制 由于溶血磷脂的溶血或溶解细胞膜作用，因而除溶血磷脂类产品（可制成脂质体，为活性成分，用于治疗动脉粥样硬化）外，磷脂类产品中皆要对其中溶血磷脂的量进行严格控制。溶血磷脂的含量测定一般可采用HPLC法或TLC法。近年来，还发展了一些测定的新方法、新技术。 HPLC法是磷脂及溶血磷脂含量控制的常用方法。由于磷脂分子中同时含有亲水和疏水部分，因而所表现出来的表面活性给磷脂的色谱分析带来困难。另外，磷脂类化合物紫外吸收一般都较弱，加大了检测难度。虽然近年来HPLC技术取得了较大进步，但磷脂类产品色谱分析的分辨率、准确度和测定动力学问题仍不令人十分满意。 采用HPLC法测定溶血磷脂的含量一般采用正相色谱法，多采用硅胶柱，以己烷/庚烷－异丙醇系统为流动相，梯度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测。由于磷脂的表面

水解酶催化多功能性在Michael反应及Michael串联反应中的应用

目录 摘要 ............................................................................................................................... I ABSTRACT .................................................................................................................... III 第一章绪论 (1) 1.1酶多功能性简介 (1) 1.2酶催化多功能性在有机合成中的应用 (1) 1.3环丙烷类化合物的文献综述 (7) 1.4二氢吡喃化合物的文献综述 (9) 1.5课题研究的前景和意义 (13) 第二章α-猪胰淀粉酶催化串联反应合成硝基环丙烷化合物 (15) 2.1前言 (15) 2.2结果与讨论 (15) 2.3实验部分 (25) 2.4结论 (26) 2.5 -猪胰淀粉酶的活力测定 (27) 2.6产物表征及分析 (29) 第三章灰色链霉菌蛋白酶催化合成二氢吡喃化合物 (37) 3.1前言 (37) 3.2结果与讨论 (38) 3.3实验部分 (46) 3.4结论 (48) 3.5产物表征及分析 (49) 第四章灰色链霉菌蛋白酶催化的Michael加成反应 (71) 4.1前言 (71) 4.2结果与讨论 (72) 4.3实验部分 (80) 4.4结论 (82) 4.5产物表征及分析 (83) 参考文献 (91) 附录：部分化合物图谱 (99) 硕士期间科研成果 (155) 致谢 (157) 万方数据

酶催化柚皮苷水解

Applied Surface Science 257 (2011) 4096–4099 Contents lists available at ScienceDirect Applied Surface Science j o u r n a l h o m e p a g e :w w w.e l s e v i e r.c o m /l o c a t e /a p s u s c Immobilization of naringinase on mesoporous molecular sieve MCM-41and its application to debittering of white grapefruit Shengjiao Lei,Yongxia Xu,Gang Fan,Ming Xiao,Siyi Pan ? College of Food Science and Technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China a r t i c l e i n f o Article history: Received 7September 2010 Received in revised form 1December 2010Accepted 1December 2010 Available online 9 December 2010Keywords:Naringinase Immobilization MCM-41Debittering a b s t r a c t Naringinase was bound to mesoporous silica MCM-41via adsorption with glutaraldehyde and used to debitter white grapefruit.K m value of the immobilized naringinase was lower than that of free naring-inase.The immobilized catalysts showed excellent thermal stability and storage stability and could be recycled 6times retained about 44.57%activities.The unaltered structural order of the prepared cata-lyst was characterized with reference to bulky and surface properties by infrared spectroscopy (FT-IR),elemental analysis and nitrogen adsorption–desorption isotherms analysis. Published by Elsevier B.V. 1.Introduction Naringin is one of the major bitter substances in grapefruit juice.Naringinase,an enzymatic complex with ?-l -rhamnosidase (EC 3.2.1.40)and ?-d -glucosidase (EC 3.2.1.21)activities [1],can hydrolyze naringin to rhamnose,glucose and naringenin [2],which are not bitter.To reduce naringin in grape fruit,naringinase has been immobilized on various matrices using several methods including adsorption,cross linking,adsorption followed by cross linking,covalent attachment and physical entrapment [3–9]. Mesoporous molecular sieve has tunable pore size,large sur-face area,pore volume,high adsorption capacity,and an ordered porous network for free diffusion of substrates and reaction prod-ucts [10].Those unique properties make it a potentially ideal matrix for enzyme immobilization.Reports [11,12]have appeared on the catalytic application of MCM-41as a catalyst support on the immobilization of a couple of enzymes and it showed good performance. In the present study,naringinase was adsorbed onto MCM-41and crosslinked to silylated MCM-41by glutaraldehyde which provided a large number of aldehyde groups for the immobi-lized enzyme.Hydrolytic activity,thermal stability,reusability and kinetic mechanism of the immobilized naringinase were investigated and compared to the free one.Finally,immobilized naringinase was applied to hydrolyze naringin in the white grapefruits. ?Corresponding author. E-mail address:pansy 111@https://www.sodocs.net/doc/b710313276.html, (S.Pan). 2.Materials and methods 2.1.Materials Naringinase (CAS Number 9068-31-9)from Penicillum decum-bens (activity:396U g ?1solid)and naringin (96.6%)were obtained from Sigma Chemical Co (St Louis,MO,USA).Naringenin (HPLC,98%)and limonin (HPLC,98%)were from Chengdu Pus Bio-technology Co.,Ltd.Mesoporous MCM-41was from Shanghai Novel Chemical Technology Co.,Ltd.Acetonitrile and methanols were HPLC grade,and all other chemicals were analytical grade and obtained from various sources.White grapefruits used in this study were obtained from the orange garden of Wangchunhua Syrup Co.Ltd.,Songzi city,Hubei Province. 2.2.Preparation of immobilized naringinase by mesoporous MCM-41 8.0mg of naringinase in 20mL acetate buffer (0.2M,pH 4.0)was mixed with 0.2g of MCM-41(1.0%)and 0.4g glu-taraldehyde (2.0%)in a conical ?ask by stirring at 15?C and 170rpm for 6h [13].After 6h adsorption,MCM-41-naringinase was separated by centrifugation at 15?C and 10,000rpm (cov-erse to 0.2g)for 10min.The pelleted MCM-41-naringinase was washed three times with 0.2M acetate buffer (pH 4.0)and dried under room temperature for 3h and stored at 4?C before used [14]. 0169-4332/$–see front matter.Published by Elsevier B.V.doi: 10.1016/j.apsusc.2010.12.003