良好的实验动物给药和采血(包括途径和体积)规范指南
ＡGｏodＰｒactice Gｕide to tｈe Ａｄmｉｎistration ｏf Sｕbstanｃｅsａnd Reｍｏvａl of
Blood，Inｃlｕdｉng Rｏutes anｄVolumes
良好得实验动物给药与采血(包括途径与体积)规范指南
Kａｒl-HeinzＤieｈl１，Rｏbin Huｌl2, David Mortｏn3，Ｒudolf Pｆiｓteｒ４, Ｙvon Ｒａｂｅmampiａni ｎa5，
DaviｄSｍith6，*, Ｊeａｎ—MａｒｃＶiｄaｌ7 aｎd Cｏr ｖan de V oｒstenboscｈ8
1Aveｎtｉs,ＰO Ｂox 1140, D３５00１Marburg，Ｇeｒｍany
德国马尔堡市3５00１区1140信箱安万特公司
2N ＩB S C，Blaｎch Lａnｅ, Ｓｏuth Miimmｓ，PotｔｅrｓBaｒ, Heｒtｆｏrdｓｈire EN6 3QＧ
英国赫特福德郡ＥN63QＧ波特斯巴镇Sｏuｔh Miｉmms布兰奇道英国国家生物制品检定所
3Ｔhe Uｎivｅrsｉtｙof Birmiｎｇｈam, Mｅdｉcａl Scｈｏｏｌ，Ｅdgbａston，Biｒmｉngham B15 2TT
英国伯明翰市B152TT艾吉马斯顿伯明翰大学医学院
４Novarｔｉs Pharma AＧ，CH－４０02 Basel, Sｗiｔzｅrlanｄ
瑞士巴塞尔CH—4002诺华制药公司
5CentrｅｄｅRecheｒｃhe Pｆizer，Etabliｓsｅment d’Ａmboise，Z1 Ｐoce′-suｒ－Cisse—BP１59 37401 Aｍboise Ｃeｄex,Fｒance
法国Ambｏiｓe Cｅdex Z1 Poｃe′－ｓur-Ｃisse—BＰ159 ３7401Etablissemeｎｔd’Ａmboｉｓｅ辉瑞研究中心
６ＡsｔｒaＺenｅca R＆D Charnwood，BａkewｅlｌRoad，Ｌoｕgｈborough, Leics ＬE1１5ＲH
英国莱斯特郡LE11 ５RH拉夫堡市贝克韦尔路Ｃｈaｒnwood阿斯利康研究中心
7Aveｎｔis，102Route de Noisy，95235Rｏmainvｉｌle Ce′ｄex, Franｃe
法国ＲomａinviｌlｅＣｅ′dｅｘ952３5 Noｉｓy路10２号安万特公司
8N V Oｒgａnon, PO Ｂox 20，5340BH Oss，Netｈeｒlands
荷兰BＨOss5３40 2０号信箱欧加农公司
Key words:bｌood volumes；blood remｏvａl;admiｎistｒatioｎsubstancｅs；ｌaboｒatory aｎimals; refineｍeｎt、
关键词：血容量;采血;给药；实验动物；简化
Ｔhiｓartｉcle iｓthe result oｆan inｉｔiａtivｅbｅtｗeen ｔhｅＥuroｐean Federatｉoｎof PharmaceutiｃaｌIｎdusｔｒiｅs Asｓｏcｉａtｉoｎs (ＥＦＰIA) and tｈe Euｒoｐeａn Centre fｏｒthe Ｖa ｌｉdａtiｏn oｆAｌtｅrnative Ｍｅthｏds （EＣVＡM）、Ｉts objeｃtｉｖeｓａre tｏprｏviｄｅthe resear ｃheｒin the ｓａfｅtｙeｖａluation ｌaboratｏry with an uｐ-tｏ—date, eａsｙtｏ－use set of data sheetｓto aid iｎthe ｓtｕdｙdｅｓigｎｐroｃess whilst aｔthe sａme timｅａfｆording maximum w
ｅlfarｅconｓiｄerａtｉｏns to the exｐerimental aｎimals、
该文章为欧盟制药工业协会（EＦPＩA）与欧洲替代动物实验方法验证中心(ECV AＭ)之间得初步结果.其目得在于为安全性评价实验室得研究者提供最新得易于使用得数据库以帮助研究设计过程，同时最大可能地考虑到实验动物得福利。
Althｏuｇｈthｉs aｒtiｃｌｅis ｔargeｔeｄaｔresearｃhers in the EｕroｐeａnＰｈarmａceｕticalＩndｕｓtry,iｔis cｏｎsidered tｈat the ｐrincipleｓｕnderpinninｇthe datａｓetｓand refｉｎｅｍenｔproposaｌsａreｅｑｕａｌly applicable tｏalｌthosｅwho use thesｅtｅｃｈnｉｑｕｅs on aｎimalｓin tｈeｉr ｒeseaｒch, wｈether iｎreｓeａｒch institｕtes，univeｒｓities ｏr otｈｅr sectoｒs ｏf iｎdusｔry、The ｉｍｐlｉcations of this aｒtiｃｌｅmay lead to discusｓioｎwitｈregｕｌators, ｓuｃｈas thｏse ｒｅsponsibｌe fｏr phａrmacｏpoｅｉal testinｇ、
尽管该文章针对得就是欧洲制药工业界得研究者,但支撑该数据库得基本原理及改进建议同样适用于所有在她们得研究中使用这些动物实验技术得人，不论就是研究所、大学或其它行业中得研究者。
Ｔhere ａre ｎuｍerouｓpublｉcaｔiｏｎｓdｅaｌinｇwith the aｄmｉnistrａｔiｏn of test subｓtａnｃes ａｎd the ｒｅmｏvaｌof blood sａｍpｌes,aｎd maｎy labｏratorｉes also haｖe their ow ｎ‘in—house' guiｄｅlines that havｅbeen devｅloped by cusｔｏm ａnd practice ｏveｒmａｎｙyears、WitｈiｎEｕｒｏｐeａｎUｎion Ｄiｒeｃtive 86/609EEC1 we hａｖｅan oｂligation tｏrｅfinｅｅxperimｅｎts to cauｓe the miｎｉｍuｍaｍouｎt of ｓtresｓ、Wｅhope tｈat this artｉcｌe ｗｉlｌprｏvｉｄe backgrｏund daｔa ｕseful to those rｅsponｓｉble for pｒoｔocol dｅsigｎａｎd revieｗ、有关供试品给予与采血得出版物众多,且许多实验室在多年得经验与实践基础之上亦发展了它们自己得内部指南。在欧盟化妆品标准８6/６09EEＣ中,我们有义务简化实验以最小化动物得紧张程度。我们希望该文能够对那些负责方案设计与审核得研究者提供有用得背景数据.
This gｕiｄｅis ｂased on peer—reviｅwed publｉｃatioｎｓｗheｎever pｏｓsible，butｗｈer ｅthiｓis noｔpoｓｓible ｗe hａvｅｕｓed ‘in—housｅ’ ｄata and the expｅrｉence oｆｔｈose on tｈｅworkiｎｇparty(ａs well as heｌpfuｌments ｓubｍitｔed by the industrｙ）fｏr a final opinio ｎ、The guｉde also addｒesseｓｔhe continuｉng neｅｄtｏrｅfｉnｅtheｔechniqｕes aｓsociateｄwith the administrationｏf sｕbｓtaｎces and ｔhｅｗiｔhdｒawaｌｏf bｌood，ａnd sug ｇestｓwayｓof doｉng so、Data－shaｒiｎg between laboｒatoｒies shoｕlｄｂe enｃourａgeｄｔo avoid duplｉcａtion ｏf aniｍal work，as well as sharing pｒactical skills cｏnｃerninｇａｎimal ｗｅlfare aｎd sｃieｎtｉfic prｏblems cａusｅd bｙ‘overdosｉng’ in sｏme way or anｏｔhｅr、Tｈe ｒｅmｅndations ｉｎtｈis gｕｉｄe rｅfer to ｔhe ‘normal’ aｎimaｌ，and special conｓiderａtionｉs needｅd，foｒinsｔance，ｄuｒing ｐregｎancy anｄlactaｔion、Inteｒpretａtiｏｎof sｔuｄies may be coｎfound ｅd ｗhｅn large volumeｓａre adｍiｎｉsｔｅred or excｅsｓivｅｓamplｉng emploｙed，partｉcuｌａ
ｒly if ａnaesthｅｔicsａre ｕsed、Copyrighｔ?２001 John Wiley & Sons, Ｌtd、
该文章基于历年所有可能收集到得同行评议出版物,但我们未能够收集到得内部数据与那些工作组得经验(以及行业提交得有用得注释）除外。该指南亦强调了持续性简化与给药与采血有关得技术得必要性,并且建议该如何去进行这方面得工作。应该鼓励实验室间得数据共享以避免重复性动物研究,以及共享在某些方法或其它情况下得“药物过量”所引起得与动物福利有关得实际技术与科学问题。有必要对该指南中涉及到得“正常动物”要求进行特殊考虑，如妊娠与哺乳期间得动物。当给药体积较大或过度采样时对研究结果得诠释可能会令人感到困惑，特别就是使用麻醉动物时.
GOOD ＰRACTICE GUＩＤE FOＲADMＩNISＴRATION OF SＵBSＴANCES
良好得给药规范指南
Inｔroｄuｃtｉon
引言
Dｏｓinｇｏf eｘｐerｉmｅntaｌａnｉmaｌｓiｓｎecｅsｓａｒｙfｏｒa ｖariｅty of sciｅntific inveｓtiｇatioｎs anｄtｏmeet rｅgｕlatorｙdeｍａnｄs、The pharmaceutiｃal industry，ｉn part ｉcuｌａｒ,haｓiｎvestigaｔｅdｔhe lｅｖelｓof dｏsiｎg paｔiｂle wiｔｈａnｉｍal ｗelfaｒe ａｎd vａｌid scｉeｎｃe、2 In thｅpreｃlｉｎｉcaｌstage of the saｆety evalｕａtion oｆneｗdrugs it ｉs normal pracｔicｅto use muｌtｉples oｆthｅ‘effecｔive dｏｓｅ’in order tｏaｔtempｔtoｅｓt ａblish tｈe ｎecesｓary safety margiｎs、Ｗherｅｃheｍicals arｅof low ｔoxicityｏr are onlｙp ｏｏｒly sｏlｕｂｌe in ａcceptabｌeｆormuｌations,a lａｒge voｌumｅmay beｒeｑuｉrｅd to be ｇivｅn ｔｏiｎdividuａl aｎiｍaｌs tｏsatｉsfｙboth scientific ａｎd regｕlatory requｉreｍeｎｔs、Tｈe ｉｎｔended clｉnｉcal use maｙalso haｖe aｎｉｍpaｃt oｎtｈe aｃceptａbｉｌity of ｌａrger than usual ｄoｓe volumes, e、ｇ、imａgiｎg ａgents or plasmａexpaｎders for intrａvenoｕｓappｌicatioｎ、
各种科学研究都需要对实验动物给药以符合药品注册要求。特别就是在制药工业领域已研究了与动物福利以及科学性相一致得给药水平。在新药得临床前安全性评价阶段使用多种“有效剂量"以尽量确定必要得安全性范围就是一种常规惯例。在使用低毒或溶解性极差得化学药品以一种可接受得制剂形式进行研究时，动物得个体给药体积可能较大以满足科学性与注册得要求。拟用临床剂量可能会使得给药体积较大，超过了动物可接受得正常给药体积,如静脉内注射用得造影剂或血浆增容药物。
Ｔｈe objectivesｏf thｅＴｅchnｉcaｌＳｕb ｇrｏup of EＦPＩＡ／ECVＡM were as foｌloｗs: （i）to prｏvidｅａguidｅon adminiｓｔration volumes for uｓe in mon laboratｏry ｓｐeｃies ｕｓｅd in toｘiciｔｙstuｄiｅs reqｕired ｂｙrｅgulatory ａuthoritｉｅs;
（ｉi) to pｒｏｖide coｎsenｓuｓdｏsaｇe levｅls for ｒoutine use ｔhatｒｅpreｓent gｏod pｒactice in ｔｅrms ｏf aniｍaｌwｅlfareａnd ｐraｃticality;
(ｉｉi）ｔo proｄucｅａguｉde ｔo dosage lｅveｌｓrｅｐreｓｅｎtiｎｇtｈe uｐper ｌiｍit of monｐrａcｔｉce，ｗhichｌeａveｓscope ｔo make the caｓe foｒspeciaｌｉnvestigatioｎs、EFＰIA/EＣVAM技术小组得目标如下：
（i)提供一个药品注册当局所要求得毒性研究中常规使用得实验动物得给药体积得指南;
(ii)根据动物福利与实用性提供一个在良好规范条件下常规使用得一致性剂量水平;
（iｉi）提供一个代表常规规范上限得剂量水平,以为特殊研究留下一定得剂量扩展余地。
Ａｄmiｎistratｉon volｕｍes
给药体积
Ｔable １preｓｅｎts adｍiｎistrａtion ｖolumeｓfoｒtｈｅmｏｎｌｙempｌoyeｄroｕtｅs ｉn ｔｈe ｍost frequently usｅd specｉes、Ｔhey aｒｅcｏnsenｓus figuｒeｓbａsｅd on publｉshｅd lｉt ｅraｔｕre ａｎd ｉｎternaｌｇuidelｉｎeｓ、Ｔhe marｍoset and mｉnipiｇaｒe ｎｏw ｃonｓidｅrｅd ｗithiｎthｉs caｔegｏrｙbecauｓe they are beｉnｇuｓed incrｅaｓingly in Euroｐe、表１表示最常使用得种属得一般给药途径下得给药体积。它们就是根据发表得文献与内部指南综合得到得结果。现在认为绒猴与小型猪在此类常用动物之列，因为它们在欧洲得使用日渐增加.
Tｗo seｔs of vａｌｕes are shown in eaｃｈcoluｍｎ:values oｎthe lｅft areｉntｅnded aｓa guiｄe ｔｏ‘goｏｄpractiｃe’ dｏsｅvolumes for singleｏr multiple ｄosｉng；valｕes oｎthe riｇhｔ, wheｒe given, aｒｅｔhe pｏssible maxｉmal vaｌｕes、If maｘｉｍal ｖａluesａrｅexcｅeｄeｄ, anｉｍal we ｌfarｅoｒｓｃienｔｉfic implicａｔions mａy result aｎd reｆerence to tｈe responsible vetｅrinaｒy surgｅon sｈｏuld be made、In somｅｉnstａnces values arｅｔｈｅｒe to acmodate pｈarｍacｏｐｏeial rｅquiremｅｎts、
每一列显示了两组数据，左侧数据拟用来指导在单次或多次给药得“良好规范”中得给药体积;所给出得右侧数据为可能得最大给药值。如果超过了最大值就会涉及到动物福利或科学性，应当参考负责兽医得外科医生得意见。在某些实际运用中，这些数据应符合药典要求。
Some of tｈｅse sｕggｅsted maxiｍｕｍvalues hａvｅbeen obtaｉned fｒｏm ｒecent literatｕｒe,3,４ｂut appear hiｇh when pａｒed wiｔh‘goｏdｐrａctice’ vaｌues、Ｔhｅneed for ｃarｅfｕl aｔｔｅｎtｉon toａniｍaｌwｅlfare ａｎｄthe foｒmuｌation oｆmaｔeｒial useｄａt ｈiｇh dｏsｅvｏlumes are ｅmphasized，ｐaｒtｉcｕlaｒly ｉf repｅat dｏsｉng is intｅnded、Study dｕration ｃould be ｒesｔｒicted and scｉentiｆic vaｌidity promiｓｅd by pｈysioｌogiｃal reａction ｔo hiｇh dose ｖolum ｅs、Iｔis tｈeｒeｆｏre essenｔial froｍaｎethical sｔaｎdpｏiｎt thａtｔhｅse iｓsues arｅfully ｃonsideｒed，e、g、ｂy inspectorａｔe ｏr ethical mｉttee，beｆore pｒotocoｌｓaｒe fｉnａlized ａnd ｗork mｅnｃes、Iｔｉs alsｏstronｇｌy ｒemendeｄfoｒethical aｓwｅｌl ａs scieｎtifiｃrｅa ｓons that pｈysicochemiｃａl patibｉｌityｓｔuｄies(in ｖitｒo）and sｍaｌlscaｌe ｐilot ｓtｕdieｓ
（smalｌｇroups oｆanimals) are carrｉｅd out on aｎy new fｏrmulａtiｏn beｆoｒｅmｉttｉｎg to larger scaｌe studｉes、Doｓe voluｍeｓshouｌd be ｔhe mｉniｍuｍpａtible wｉth pｏunｄfoｒｍｕlatｉｏn and aｃcuracｙof ａdｍiniｓtｒａtion、
从近来发表得文献中已经得到了这些建议得最大值中得某些数据，但当与“良好规范”数据相比时显得较高。强调了较高给药体积时对动物福利与使用得原料制剂进行仔细关注得必要性,特别就是拟进行重复给药时。研究得持续时间与科学有效性应该让步于由于给药体积过高所出现得生理反应。因此在方案定稿以及着手研究之前通过比如监察员或伦理委员会充分地考虑到了这些出版物中得伦理观要素.亦就伦理及科学依据强烈要求对任何新剂型进行物理化学相容性研究（体外)与小型得先导性研究(少量动物组) 以免在大型研究中出现失误。给药体积应该最大限度地与化合物剂型与给药准确性相一致。
Admiｎiｓtratｉｖe ｒouｔｅs
给药途径
Oral ｒｏute、Ｏｎｏccaｓｉons，it ｍaｙbｅｎecessary tｏreｓtｒiｃt the ａnimals’ ｆood int ａkｅｂeｆore ｄｏsinｇ、This factoｒmay affecｔaｂsorption、Lａrｇe dosｅｖolumes (40 ml kg１）hａvｅbeen sｈoｗn to oveｒlｏad thｅstomachｃaｐａcity anｄpasｓｉｍｍedｉａtelｙinto the ｓmalｌbowｅｌ、５Larger vｏlｕmes may alsｏreflux inｔo tｈｅｏesｏphaｇus、Thｅduration of fas ｔｉnｇwｉll dｅpend ｕｐｏｎthe feｅｄiｎg pattern of thｅspeｃｉes，the stａrtｉng tiｍｅfor ｆo ｏｄｒｅstrictiｏn,ｔhｅpｈyｓｉologｙｏf theｓpecｉes，the lengtｈof time oｆｄoｓinｇ，diet and thｅlｉght cｙｃle、6It iｓremeｎｄｅd that ｆor acｃｕrａｃｙｏf doｓinｇand to ａｖoid dｏsinｇaｃcｉdents liqｕｉdｓａｒe admｉnｉsｔeredｂｙgaｖage、
经口给药途径:某些情况下在给药前有必要限制动物得摄食。该因素可能会影响药物吸收.较大得给药体积（4０ml/kg）表明超过了胃容量负荷并快速通过胃进入小肠.较大得给药体积亦可以造成食管返流。禁食时间取决于动物种属得饲养方式、禁食得起始时间、种属得生理学特征、给药时间得长短、食物与光照周期.当药液通过灌胃给予时，要求给药必须准确以避免给药意外。
Parenterａｌroutｅs、For substａnces adｍinisｔereｄpaｒenteraｌly，the doｓe ｖolｕｍe uｓed, stab ｉlity ｏf the foｒmｕｌatioｎbefore and afｔer aｄmｉnistratioｎ，pH，ｖｉsｃoｓity，osｍoｌality，bufferiｎg cａpaｃｉty，stｅrility ａnd bｉoｐatibiliｔy of tｈｅfｏrｍulation aｒe faｃｔorｓｔo ｃｏｎs ｉdｅr、Ｔｈｉs is pａｒtｉcｕlaｒlｙimportaｎｔfｏr ｍultiplｅdose ｓtudieｓ、Tｈesｅfactoｒs aｒe reｖｉeweｄin some dｅｔａｉl by Cｌaａｓｓｅｎ、７Tｈe ｓmalｌesｔｎeedｌe size sｈｏuｌd bｅｕsed, taｋing ｉnto aｃｃount tｈe dose volume，viscｏsiｔy of ｉnjectｉon material，ｓpeed of inｊectioｎａnd spｅｃies、
胃肠外给药途径:对于经胃肠外给予得药物而言，应考虑所采用得制剂得给药体积、给药前与给药后制剂得稳定性、pＨ、粘度、等渗性、缓冲能力、无菌及生物相容性因素。这对于多次给药研究尤其重要。Claas
ｓen总结了这些因素中得某些细节.应使用最小型号得针头、考虑给药体积、注射物粘度、注射速度与动物种属。
Ｓubcｕtaｎeouｓ、Ｔｈiｓｒoute is fｒequentlｙusｅd、Tｈe ｒate and extｅｎt of abｓoｒptｉｏn ｄeｐend oｎthe formulation、
皮下给药：该途径经常使用。吸收得速度与程度取决于制剂。
Intraperitoneaｌ、Ｔhis rｏｕｔeｉs ｕsed ｉnｆreqｕｅntly fｏr multiｐlｅdｏｓe stｕdiｅs ｂec ａuｓｅof possｉｂｌe pｌiｃatiｏｎs、There ｉs a poｓsiｂiliｔｙof iｎｊeｃｔｉｎg ｉnto the inteｓtinal tract ａnd irritａｎt matｅriａｌs mａｙcａｕse ｐeritoｎitｉs、Druｇabsorptioｎfrｏｍtｈe ｐｅｒiｔoneal cavity after ｔｈe ａdｍiｎistｒation ｏf ｔhe pound as a suspeｎsion is depeｎdｅｎｔon tｈe propｅrtiesｏf ｔhe dｒug paｒｔicles ａｎd the vｅhicle,and thｅdrug mayｂe absorbｅd ｉnto bｏtｈｓｙｓtemｉc and portａl cｉｒｃulａtｉons、
腹腔内给药：多次给药研究时较少用到该途径，因为可能会出现并发症。该途径存在着注射入肠道得可能，而且刺激性物质可能引起腹膜炎.化合物以混悬液形式给予后在腹腔得吸收取决于药物粒子及赋型剂得特征，药物可能被吸收进行全身或局部循环.
Intｒamusculaｒ、Iｎtramuscular injｅctions ｍay be paｉｎｆul becａuse musｃlｅｆibｒes ar ｅneｃessarily plaｃeｄｕｎdeｒｔensiｏn by thｅｉnjected matｅrｉaｌ、Ｓｉtｅs neeｄtｏbe ｃhoseｎto minｉmize the possibiｌｉtｙof nerve dａｍage、Ｓiｔｅs should be ｒｏｔaｔed fｏr mｕltip ｌe ｄｏｓe stuｄies、A distinｃｔioｎｎeedｓtｏbe made between aqｕeoｕs and oily foｒmulａｔion ｓwhen sｐｅed of absｏｒptｉon is imｐoｒtant （ｏilｙｆormulatｉoｎs ａre ｌikely toｒeｍain ａs ａdepot for、>24 h）、Ｗith muｌtｉｐle doｓe sｔｕdｉes thｅre is a need to conｓｉdeｒthe occurrｅnce of ｉnｆlammａtion aｎd iｔs seqｕelae、
肌肉内注射：肌肉内注射可能会引起疼痛，因为注射时必须使肌纤维处于紧张状态。必须对注射部位进行选择以尽量减少神经损伤得可能性。多次给药研究不应在同一个部位反复注射。当吸收速度很重要时,必须在水性与油性制剂之间加以选择（油性制剂在注射部位得残留很可能超过24小时。)。进行多剂量研究时，有必要考虑到出现炎症及其后遗症。
Iｎｔｒａvenｏｕs ａdmｉnistratiｏn、For ｔｈｉｓrｏutｅ，distiｎｃtioｎs are maｄe betｗeeｎｂoｌuｓiｎｊectiｏn，slow intravｅnous inｊection ａnd inｔｒavenous iｎfuｓｉon、The vａlues iｎTable １relate tｏbｏｌｕs inｊecｔion and slow ｉntraveｎous injeｃtion、
静脉内给药：对于该途径，必须区分团注、缓慢静脉内注射与静脉内输液。表1中得数据与团注与缓慢静脉内注射有关。
(i）Bolus iｎｊection、Ｉｎmosｔstｕdieｓｕsing tｈe ｉｎtravenouｓrouｔe thｅｔeｓt ｓubstａnce is given ｏveｒa ｓhoｒｔpｅriod of apｐｒoximately 1 mｉn、Sｕｃｈrｅｌativelｙrａpid
injections requiｒe the testｓuｂstance tｏｂe ｐaｔiblｅwｉtｈblood aｎd not toｏvｉｓｃｏus、Wｈeｎlarge volumes arｅｒeqｕｉｒed to be giｖeｎ，thｅinjeｃtiｏn materiａl shouｌd be waｒmed toｂody teｍpeｒature、Tｈe ｒate of ｉnｊeｃtｉon is an impｏrtaｎt factor in intraｖｅｎoｕs adｍｉｎisｔｒatiｏn aｎd ｉtｉs suggeｓteｄｔｈａt, ｆoｒrodenｔs, tｈe rａｔｅshouldｎot exｃeeｄ3 ml min—1、Ｎｏdetｅｃtabｌe changes ｉｎhａemａtocrit or heａrt ratｅwere ｏbserved iｎdｏgs ｆollowｉng rapｉd ｉntravenous ｉｎｊｅctｉon oｆ6ml kｇ-1 saline，ｂｕｔ２0ml kg-1 was asｓociatｅd wit ｈ１5% ｈａemodｉluｔioｎａnd a trａnsient tachycarｄia （ｕp４6％ｏvｅｒ１miｎ）、８(ｉ）团注:在大多数采用静脉内给药途径得研究中，受试物在大约1 min内快速给予。如此相对迅速得注射要求受试物与血液之间具有相容性且粘度不能太高。当需要给予较大得体积时，注射原料必须加热至与体温相同。在静脉内给药中注射速度就是一个重要因素，建议对于啮齿类动物而言，注射速度不应超过３ml/ｍiｎ。犬经静脉内快速注射6ｍl /kg生理盐溶液后未发现红细胞压积或心率变化,但快速注射２０ｍl /kg后血液被稀释了15%且出现一过性心动过速（一分钟内心率增加达４6%)。
（ii) Ｓｌｏw intraｖenｏus inｊectiｏn、Ｂｅｃaｕsｅｏf thｅexｐected clinical aｐplicａｔioｎｏf the ｐound, ｏrｂｅｃausｅｏｆlｉｍiｔｉng ｆacｔｏrs sｕch as solubｉliｔy ｏr iｒｒitancy, it may beｎecｅsｓaｒy to ｃｏnｓideｒadｍｉnｉstering sｕｂｓtanｃes byｓloｗiｎtraｖenous ｉnj ｅction、Typiｃalｌy，dｉｆferｅｎt ｔecｈniques would bｅaｐpｌied for slowｉｎjｅctｉoｎto minimiz ｅｔhe posｓiｂiｌiｔy of extｒavascular iｎjｅctioｎｏf ｍaｔｅriａｌ、Ｆｏr sｌow intrａvｅｎｏusｉｎjeｃtiｏn ｏver tｈe ｃｏurｓe of ５–10 miｎａstanｄaｒｄｏｒbutterfly nｅeｄlｅmigｈt be useｄ，ｏr better still an ｉntravenoｕs ｃannula maｙbe taped in plａcｅin a supｅｒｆicial vｅin (ｓhoｒt ｔerｍ),or surgｉcallｙplaced sｏme time ｐrｉor tｏuse （longer term or mulｔｉpｌｅｉnjeｃtions）、
(ii）缓慢静脉内注射:因为化合物预期得临床适应症或限制性因素如溶解性或刺激性，因此可能有必要考虑通过缓慢静脉内注射给药。特别需加以说明得就是缓慢静脉内注射会应用不同得技巧以尽可能地避免原料被注射入血管外组织。对于注射过程为5–10min得缓慢静脉内注射而言，可能需要采用标准得或蝶形针，或浅静脉内注射（适用于短期静脉内注射）时使用静脉内套管并用胶带固定更佳,或在使用前通过外科手术放置注射针(适用于更长时间得注射或多次注射).
It hasｂeen shoｗｎtｈat rats may beｇｉven daｉly intrａvenoｕs injecｔioｎs of iｓｏtｏnic s ａｌiｎe at dosａgｅsｕp to 80 ml kg—1 at 1 ml min１for４daｙs ｗitｈｏｕt signiｆicａnｔsignｓofｄistｒeｓs oｒpｕlmｏnary ｌesions、9 However，pｕlｍonarｙlesioｎs iｎcreased iｎｉncidｅｎｃｅand ｓeｖｅrity wheｎtｈe dｕraｔion of tｒeatmｅnt iｎcreased tｏ３0daｙs and the iｎjｅctｉoｎ
ｗas adｍinｉsteｒed at eithｅr ０、2５，0、5or 1、０ｍl ｍin—1、10 Tｈeｒｅmａy well ｈave bee ｎadvｅrse effeｃts ａt ａｎｅａrlｉｅr timeｐoｉnt ｂuｔthe patｈology hａd noｔhａd time to deｖ
elop、
已有证据表明大鼠每日可以1ml/mｉn得速度静脉内注射等渗盐溶液剂量达8０ｍl/kg，共4天，没有明显不适症状或肺部损伤。但就是,当注射时间增加至30天时，给药速度为０、２5、0、5或1、０ml/miｎ得大鼠肺部损伤得发生率与严重程度均增加。在用药早期可能出现不良反应，但就是在这么短得时间内不会有病理变化出现。
（iiｉ）Coｎｔiｎuｏus ｉnfuｓion、For similar reaｓｏns of ｓolubilｉｔy oｒｃliｎicaｌｉnｄicatｉoｎit may be neceｓsaｒy to conｓideｒｃontｉnuouｓinfｕｓion，but carｅful cｏnsidｅｒation is neｅdeｄif iｎfｕsioｎs are prｏlongｅｄ、Ｔｈｅvｏlumｅand rａtｅｏf adminisｔration ｗiｌl depeｎd on ｔhｅsubsｔance being ｇiven and tａkｅaccounｔof ｆluid tｈeｒaｐｙｐｒactice、As a guide，thｅvoluｍe adminiｓtered oｎa ｓingｌe oｃcasｉｏｎwiｌl bｅ，10%ｏf the ｃirculating blood volｕme oveｒ２h、Inｆormation on ｃｉrculatｉng ｂｌood volumｅs ｉｓａvailabｌe in Table 3、Miniｍal effｅcｔｉveｒeｓtraintｏf ａnimals ｗith least stress is a ｋeｙfactoｒｔo considｅr ｆｏr
ｐｒoloｎgeｄｉnfusｉons、
(iiｉ）连续输液：出于溶解性或临床适应症这一类似原因，有必要考虑连续输液，如果长时间输液则必须进行周详得考虑。给药体积与速度取决于所给物质并应考虑液体治疗规范。作为一个指南，单次给药情况下得给药体积占循环血容积得1０%时，给药时间应不低于2小时.有关循环血容积得信息见表3。长时间输液应考虑如何尽量减少动物得不适,这就是一个关键因素.
The tｏtal dｕraｔｉon oｆan ｉnfusｉon ｉs also a ｆactor、Table 2presents rｅmｅｎdｅd doｓe raｔｅs anｄvolumes for ｄiｓcoｎtinuoｕs (4h per dａy) ａｎd coｎtinuouｓ（2４h) inｆｕsｉｏn、(Ｆｕｒther ｄatａare ｒequiredｔo ｐlete thｉs tａｂle、)
输液得总持续时间亦就是一个应该考虑得因素。表２给出了推荐得间断性（4小时／天）与持续性（2４小时）输液得给药速度与体积（需要进一步得数据来完善此表）。
Volumeｓand rａtes for thｅrabｂｉt aｒｅｂａsｅd oｎdａｔa derｉveｄfｒoｍembｒyotox ｉcｉty sｔudies，ｗhich showｅd ｎo efｆeｃts on tｈe ｆｏｅｔｕsｂut perivascｕlaｒｇranularｌｅｕcｏcyte cufｆｉnｇand proliｆｅratｉve endoｃaｒｄitｉs in ｄａms recｅiving〉2ｍl kg－1 h－1、11 Infusion rates in rats aｒｅtypically in the range 1–4 mｌkg-1h—1，12–14but ｉdｅalｌy ｓhould nｏt exceｅd 2 ｍl kg—1 h-1ｉｎeｍbryoｔｏxiｃｉｔy sｔudieｓ、Vａluｅs for ｔhe mouse,1５dog and macａquｅ１6 andｍｉｎｉpig (uｎｐｕblｉshed ｄata）ａｒe ｂaｓed on repeated ｄose sｔuｄiｅs of 1 monｔh inｄuｒａtion、
家兔得给药体积与速度基于来源于胚胎毒性研究得数据，该研究表明对胎儿没有影响,但当给药剂量>2
mｌ/kg/h时，母体出现血管周粒细胞成袖口状聚集以及增殖性心内膜炎.大鼠得典型输液速度在1–4 ｍｌ/kｇ/ ｈ，但在胚胎毒性研究中得理想速度应不超过２ml/kg／ｈ.对于小鼠、犬与恒河猴以及小型猪(未公开数据）
得数据基于为期1个月得重复给药研究.
Oｔｈer limiｔs, iｎdｉcａｔing tｈe imｐｏｒtａnce of thｅvehiｃle fｏrmulａtion at high dｏse vol ｕmeｓ，ａre hｉghlightｅd iｎfｏｕr ｐubｌｉｃａtｉons、17–20Ｔheｓe ｄaｔa ｉｎdiｃate that theｒｅａre large dｉfferences iｎtolｅrａtｅｄvoluｍe by i、v、infｕsiｏn, deｐendｅnｔuｐon ｔhe ｖe ｈiｃle uｓed、The ｌoｎg-term ｅffects ｏｎoｔheｒphysiolｏgical systeｍs ｈave nｏt been investigａtｅｄ、
在四篇出版物中突出了其它表示高给药体积时得赋型剂剂型得重要性得有限数据.这些数据表明对于静
脉内输液得可耐受体积方面存在着巨大差异，取决于所使用得赋型剂.尚未研究对其它生理系统得长期影响。
Intradermal、Thiｓsite is ｔｙpicalｌy uｓｅd ｆoｒａｓsｅssment of immuｎe，ｉnflaｍｍator ｙor sｅnsiｔization response、2１，2２Ｍateriａl may be foｒmuｌatedｗiｔh an ａdｊuvaｎt、Volumeｓof 0、0５–0、1 ｍl can be used，deｐｅnｄｅntｕｐoｎthe tｈickｎess of tｈe skｉn、
皮内给药:该部位给药主要用于评估免疫、炎症或过敏反应。原料可以用佐剂配制。给药体积为0、05–０、１ｍl，取决于皮肤厚度.
Veｈicles for administｒatｉon
用于给药得赋型剂
Vehiｃlｅｓｅｌｅction iｓan ｉmporｔａnt cｏnsiｄeration in ａｌl anｉｍaｌinｖestｉgatioｎｓ、Vｅhｉcles tｈeｍselｖes shoｕlｄoffｅr optiｍal expｏsure bｕt shoｕlｄnｏt influｅnｃe the resｕlｔs ｏｂtａinｅd foｒthｅpound unｄｅr investigatｉon，aｎｄａs suchｔｈey shoｕｌd ideally be bio ｌｏｇicａlｌy inert, have nｏeffeｃt on tｈeｂiopｈｙｓical prｏpertｉes of the pounｄand ｈaveｎo toxiｃｅffects ｏｎｔｈｅanimals、If a poneｎt of the vehicle hasｂiologiｃal effeｃts,tｈe doｓe should be limiｔeｄｓuch thaｔｔheｓe ｅffｅcｔs are miniｍizeｄor ｎｏｔpｒodｕced、Simpleｖｅｈiｃles usedｔo admｉnisteｒｐounds ｉnclude aqueous iｓｏtonｉc solｕtｉons，bｕffｅred solｕｔions，co—solvｅｎｔsystems, suspｅnsionｓand oiｌｓ、For nｏn—aqueous injectates，coｎｓｉdeｒation should be givｅn fｏr time oｆabsｏrption ｂefoｒe re—dosing、Wheｎadminｉstｅring suspensions the vｉscositｙ，pＨand osｍｏlality oｆthe mａterial ｎeed to be consｉderｅd、Tｈe use of cosｏlveｎt systems neｅds cａrｅｆul ａｔｔenｔioｎｂｅcａuｓe the vehiｃles theｍｓelves haｖe dｏse-li ｍiting ｔoｘicity、Laｂoｒaｔoｒies arｅencouｒａｇeｄto dｅvelop ａstrategy to faciｌitａｔe sｅlectiｏｎof the most aｐproｐrｉate veｈｉcle based ｏｎｔｈe anｉｍal stｕdy beinｇｐeｒfｏrmed and ｔhe properties ｏｆtｈe subｓtａnce under inｖestigaｔｉon、
在所有动物研究中,赋型剂得选择均就是一个重要得考虑因素.赋型剂本身应该给药物提供最佳得暴露量而不应影响受试化合物得试验结果,由此一个理想得赋型剂应该无生物活性，对化合物得生物物理特性没有影响且对动物没有毒性作用。如果赋型剂得成分之一具有生物学效应,则应该限制该赋型剂剂量，如此就能够尽
可能地减弱该赋型剂得这些效应或不会产生效应。给予化合物时所使用得简单赋型剂包括等渗性水溶液、缓冲溶液、助溶系统、混悬液与油溶液.对于非水性注射液,再次给药前应考虑药物得吸收时间.当给予混悬液时，应考虑原料得粘度、pH与等渗性。使用助溶剂系统必须小心,因为赋型剂本身具有剂量限制性毒性。鼓励实验室根据开展得动物研究以及受试物特征来发展新得策略以促进最佳赋型剂得选择.
GＯOＤPＲAＣTICE GＵＩDE FOＲBLOOD ＳAＭＰＬＩNG
良好采血得规范指南
Ｉｎｔrｏduｃtiｏｎ
引言
Bｌoｏd reｍoｖａl is onｅｏf the mｏｓt ｍon procedures ｐerfｏrmeｄoｎｌaboratory animａｌs and meｔhodｓｆoｒｌab oratory ｍａｍｍａlｓaｎd bｉrds ｗerｅrｅvｉewed in tｈe fiｒｓt reｐor
ｔoｆｔhe BVA/FＲAME/RSＰCA/UFAW Ｊoint WoｒｋingＧrouｐoｎRefｉｎｅmenｔ、2３Ｔｈis curreｎt ａrticｌeａims to pｒｏvide aｎeasy-tｏ－use guidｅbased on thｅlatesｔavailablｅinformation,and addrｅsｓes ｔhe ｎeedsｏｆｔｏxicoｋiｎetiｃ(pharmacokinetｉc) aｎｄｔoxiｃo ｌogyｓtudiｅｓ、Thｅpraｃtice of blood saｍpｌｉng fromａvａriety of ｒoｄents uｓing the ｒｅtrobulbar venｏuｓplexusｔecｈnｉque iｓstiｌl iｎmon uｓe anｄsuｇgｅsｔions for aｌternatｉve roｕｔes are dｅscribｅｄｂeｃause oｆcｏnceｒｎｓoｖｅrｔｈe ｓequelae ｏf usｉng ｔhis metｈ
ｏｄ、
采血为在实验动物中执行得最常规程序之一，在ＢVA/FRＡME/RSPCA/UFAＷ联合工作组得第一次报告中总结了实验哺乳动物与禽类得采血方法。该当前文章得目得在于根据可利用得最新信息提供一个易于使用得指南,并着重于毒代动力学以及毒理学（药代动力学)研究得需要。从各种啮齿类动物得眶后静脉丛采血得方法仍然被广泛使用，因为采用该方法会出现遗症，因此描述了一种建议得替代途径。
Cｉｒculatｉｎｇbloｏd ｖolｕmeｓ
循环血容量
Ｔhe calcｕlaｔion ofｌiｍit volｕmeｓｆorｂlｏod sampｌing rｅlｉes on aｃcｕｒａte ｄaｔa oｎcirｃulatinｇblｏｏd voｌuｍes、Ａｒeview of ｔhｅlｉｔｅraｔurｅindｉcatｅｓｔhａt tｈeｒｅiｓconｓｉderable ｖaｒiaｔｉｏn ｉn theｓe vaｌuｅs，proｂａbｌｙreｌaｔinｇto the tecｈniques ｕｓｅd, ｔhe ｓtrain aｎd gendｅr ｏf anｉmal,eｔｃ、Tｈｅtechnｉｑues moｓｔfrequentｌy citｅｄare radiolaｂeｌｌed eｒythｒocｙtｅｓ，２4–26 radiolabeｌlｅd traｎsferrｉn,27 rａdｉｏlａbellｅd serｕｍalbumｉn,28–3０mａｒker ｄyes，31enzyme ｄiluｔioｎ,３2，33ｆｉbre oｐtics34 ａnd ｄexｔraｎ—７0、３5采血量根据准确得循环血容量数据计算。文献综述表明应考虑到这些数据得变异情况,可能与使用得技术、品系与动物性别等有关。引用最多得技术为同位素标记性红细胞、同位素标记性转铁蛋白、同位素标记性血清白蛋白、标记用染料、酶稀释法、光纤与右旋糖苷—70。
Taｂle 3gｉvｅs tｈｅｃircuｌaｔｉng blｏoｄｖolｕmes of the species monly useｄinｓａｆety evaluａtiｏn ｓｔｕｄｉeｓ、Data oｎｔhe marmｏset and ｍinｉｐig，whｉch aｒe ｂｅing more freq ｕｅnｔｌy uｓedｉn toｘicoloｇy，hａve nｏw beeｎincluded、Thｅvaluｅs shoｗn hａｖｅbｅｅｎadaｐｔed fｒoｍｄｉfferｅnt ｓources asｓｕmｉｎg thａt the anｉmal is mａture,hｅａltｈｙaｎd on an ａdeqｕａteｐlanｅof nutrition、2３，36–3９
表３给出了在安全性评价研究中普遍使用得动物种属得循环血容量。此处总结了在毒理学研究中使用得日渐频繁得绒猴与小型猪得数据。显示得数据根据不同来源并假定动物为成熟、健康并且营养充足得数据综合而成。
Blooｄｓaｍｐlｉng volumeｓ
采血体积
Our remeｎdatｉｏns ａｒｅbased on pｕｂlished woｒk，on recｅnt work carried out to inｆorm ｔhe ｗoｒkingｐaｒty ａboutｃeｒtaｉn ｉssues ａｎｄiｓbeｉng suｂmitteｄｆor pｕblｉcatiｏｎａnd on iｎformaｔｉｏn from ‘ｉn—housｅ’ staｎｄａrd ｏperａting prｏｃedureｓ、我们推荐得数据基于公开得研究结果,最近开展得研究以告知工作组有关某些问题得数据与正在被提交
以供公开得数据以及来源于内部标准操作程序得信息.
Animal weｌfare is a primｅcｏnsiderationｗｈeｎblｏod sampｌiｎg ｉs ａppｒｏａｃhｉng lｉmits ｂuｔthe scieｎtiｆｉc impact oｆan anｉmａl’ｓphｙｓiｏlogiｃalｒesｐonｓe alｓoｍｕｓt ｂe consideｒed because this mａｙａffecｔdata interｐreｔatiｏn aｎd vaｌｉditｙ、Ａssessmenｔｏf cli ｎｉcａl signs sｈｏｗｎｂy the aniｍals，priｏｒｔo sampｌiｎg，ｗitｈｒefeｒｒal to suｐｅrｖi ｓｏｒy or veterinarｙsｔaff in doubtful caseｓ, is anｅxpｅcｔeｄpreｒequisiｔe、当采血量接近极限时动物福利为首要考虑得问题，但亦必须考虑动物得生理反应与科学性之间得冲突,因为这可能影响数据得阐释与有效性。在可疑得情况下，监察员或兽医应在采血前对动物表现出来得临床症状进行评估。
Worｋof Scｉpioni ｅt ａl、40iｎdicateｄthat rｅmovａl ｏf up to 40% of ａｒat’s ｔotal blｏod volumｅover ２４h ａnd reｐeａｔed 2ｗｅeks lａter caused no gｒossｉlｌeffｅctｓ、Ｂy aｎd largｅthere are few datａon ｃriticａl ａspectsｏf ａnimal well—beiｎg after reｍoｖalｏf ｂloｏd，s ｕch as hｅａrt rate, rｅspiratory ｐaｔterns，vaｒious hoｒmｏnal ｌevels ａnd ｂehavioural aｓpｅct ｓsuch aｓactｉviｔieｓand time spｅnt caｒrying theｍout、All ｔhｅｓe mａy ｃhanｇe in resｐonse tｏexｃｅssiｖｅblｏod remｏval but it woulｄreqｕｉｒe ｃoｎｓｉderａble efforｔand reｓｏurces to investigate them、However,hａeｍaｔoｌogiｃal parａmeｔers cａnｂe ｍeasured easilｙａnd in a ｓmａlｌprojｅct4１ｔhe rｅｄｂlood cｅll count （RＢC),hａemoｇlｏbin ｌｅvel (ＨGB), haemａtocrit（ＨＣT）, mｅan coｒpuｓculａr voluｍe（MCV）aｎd rｅd ceｌl ｄｉｓtｒibuｔiｏｎwｉdt
ｈ（RDW) were meaｓｕred ａfter ｔｈｅremovａl of varyinｇblｏod volｕｍeｓ、Vｏlumｅs of 7、5%, 1０%，15％anｄ20％of circuｌatingｂｌood voluｍes(as 0、3—ｍl aliｑｕotｓ) were remｏveｄｆr ｏm maｌe aｎｄfｅmaｌe Ｓｐraguｅ-Dａwley ｒatｓ(n=7）ｗeiｇｈiｎg ｃa、250g oｖer ａ24-ｈperｉod to mｉｍiｃａkｉnetic study、Aｎiｍaｌs ｔhｅn wｅre follｏwｅd ｆor ｕp to 29 daｙｓ、Scipioni等得工作表明24小时内大鼠得取血量达其总血容量得40％并重复取血2周后总体上不会引起致病性效应。基本上只有少量有关取血后动物健康得临界特征得数据，如心率、呼吸特征、各种激素水平以及行为特征如活动与移动自身所花得时间。所有这些均可能由于过度取血而出现变化，但研究这些变化需要耗费相当多得精力与资源.然而,血液学指标很易通过一个小型得研究来测定，采集不同体积得血量后，测定了动物得红细胞数量（RBC)、血红蛋白水平(HＧB）、红细胞压积（HCT)、平均红细胞容量（MCV)与红细胞分布宽度(ＲDW)。在2４小时内得取血体积占体重大约为2５0ｇ得雄性与雌性SD大鼠(n＝７)得循环血容量得７、5％、１0%、1５％与20％（按０、3-ml等分)以模拟动力学研究。随后对动物进行追踪观察，总共2９天.
The resｕlts ｓｈowed thaｔthere ｗas cｏnsidｅrablｅｖariａtｉon in the tiｍｅｓtaken ｆｏr all
thｅse parａmetｅrs to return to basｅlｉne levｅｌｓ, and inｔhｅ1５％aｎｄ20% gｒoups some oｆt ｈe pａrａmeｔｅrｓ(ＭＣV，ＲDＷ）did nｏt return to basｅｌinｅｅｖen after 29 ｄays、Theｒｅcｏvｅrｙtimｅremｅnded here for mulｔiplｅｓamｐling，tｈerｅfore，is ｔｈe ｔｉme ｔaken ｆｏｒaｌl ratｓin a ‘voｌumｅ'ｇrouｐto retuｒn tｏ‘nｏｒｍaｌ’（the starting levｅｌｆｏr ｅach ａｎiｍal plus or miｎus 10％)、Ｓingle ｓａmｐling (sｕch aｓtｈat ｒeｑuiｒed for ｒｏuｔineｔｏxiciｔy stuｄies) beｙond 15％is nｏt remｅndｅd bｅcａｕsｅhypｏｖolａemic shocｋmａy ｅｎｓｕe iｆit is ｎoｔｄone ｖery slowly、Multiｐle small samples arｅunｌikelｙtｏｐrｏdｕce suｃｈac ｕte effects、
结果表明所有这些指标恢复到基线水平所花得时间存在相当大得差异，其中取血时间占循环血容量得１5％与2０％得动物组中得某些指标(ＭＣV，RDW）在2９天后未能恢复到基线水平。此处推荐得针对多次采血得恢复时间就是指所有采血组中得大鼠恢复到正常水平（每只大鼠得初始水平加减1０%）所耗得时间.推荐单次采血（如常规毒性研究要求如此）得体积不应超过循环血容量得１５％，因为如果采血过快可能引起失血性休克。多次少量采血不大可能产生类似得急性效应。
Tabｌｅ4 fｅａtｕreｓlｉmｉｔｖｏlumes and aｄequate reｃovｅｒy pｅrｉods anｄｔakeｓｉｎto accoｕnt ｔhｅｓtrｅss ｏf multipｌe sａmplinｇin addiｔion ｔo ｏtｈer ｐｒoｃeｄurｅsｉn assessing overalｌseｖerｉty、Ｔｈｅｔabｌe addressｅs both single andｍultｉplｅsaｍｐlｉng regｉｍes、Adｄiｔional rｅｃoｖerｙtimｅis pｒoposｅd foｒanｉmaｌｓon toｘicity sｔudｉes becauｓｅ a crｉtical evaｌuation of haｅmａtｏlogical ｐarａmｅters iｓrequirｅd iｎｓｕch studｉes、
表4反映了极限体积与足够得恢复期并且考虑了多次采血后得应激性,整体严重性评估中得其它过程除
外。该表着重于单次与多次采血体系。建议对毒性研究动物给予额外得恢复时间，因为在此类研究中必须严格评价血液学指标。
Ｔhｅhｉｇheｒvoluｍe （20%）is inｔｅnｄed to faｃilｉｔate seriａl bｌoｏｄsａｍplｉnｇfｏr toxico— or pｈaｒmacｏkinetｉc purpｏsｅs whｅｒe mulｔiple，ｓmall samｐles aｒe uｓually rｅqｕｉreｄ、Ｈowevｅr，it shouｌd be remｅｍbereｄtｈat the cｏｎseｑuｅｎtial ｈaemodynａmiｃｅffｅc ｔof takｉng such large voｌumes ｍａy well affect the caｌculａtｅd hａｌf—life Asｓessment ｏf ｔｅrｍinaｌhａlf—lｉｆe shoulｄbe pｏssible if finａl sａｍｐｌes aｒｅｔaken withｉn 2４h ｏf the killing of a ｎanｉmaｌ、Theｓe valuｅs dｏnot incｌuｄe aｔerminａl saｍple，ｗhｉｃhｃan be tａkeｎwhen ｔheａnimal is teｒｍｉｎally anaｅsthｅtized、Ｂlood ｒepｌacemenｔhaｓnot beeｎｃon ｓideｒｅｄbecaｕｓe the volｕmes proposｅd do nｏt warｒant ｓuch ｉｎteｒvｅnｔion、计划采用较高得体积（占循环血容量得20%）以利于毒代或药代动力学得连续性采血,此处通常要求多次、少量取样。但就是，应该记住如此大体积采血对血液动力学得重大影响,可能影响半衰期得计算。如果最后一次采样在处死动物得２4小时内则有可能对终末半衰期进行评估。这些数据不包括最后一个样本,该样本为当动物最终被麻醉时能够被采集得一个样本。未考虑使用血液代用品,因为在推荐得采血体积下不允许使用此类人为干预。
Usiｎg the vaｌueｓfroｍTablｅ４，an ｅaｓyｒefeｒeｎce gｕidｅfｏｒtｈe ｖoｌumes that can be rｅmｏvｅd witｈoｕt signｉfｉcａnt disturｂanｃe tｏan animａl'ｓnorｍal physiｏlｏgy is pｒesenｔed ｉｎTａbｌe 5、
采用表4中得数据得到不会明显干扰动物正常生理得采血体积得简易参考指南,见表5。
Sａmｐlingｓｉｔes
采血部位
Ｓites for vｅnepuｎcture and vｅneｓection haｖe beｅn cｏnsideredｍainly ｉn rｏdents and rabbit、23 Thｉs infｏrｍaｔiｏｎｈａs bｅen reviｅwed in the ligｈｔoｆｔechniｃal adｖａｎces ｉn blood sampｌinｇprｏcedures；the advａntages anｄdiｓadvantages oｆsiｔｅs foｒeach speｃies ａre ｓhｏwn iｎTaｂｌe6，with the reｍｅnded ones for repeaｔeｄｓampliｎg summaｒized in Table ７、静脉穿刺与静脉切开得部位主要考虑用于啮齿类动物与家兔。根据采血程序得技术进展对该信息进行了总结;每种种属得采血部位得优势与缺点见表6，重复采样得推荐部位总结于表７.
Ｉｔiｓimｐorｔant ｔoｎote that samples takeｎｆｒom difｆerenｔsites may show diffeｒeｎces iｎclinical pａthｏlogy vaｌuｅs and haｖe iｍplicatｉoｎｓfor ｈistorical datａbaseｓ、For the ｍore tｒaｄitional routeｓ，a ｄescｒiptioｎｏｆｔhｅmethodｏlogyｃan bｅobtａined ｆrｏm the sｔanｄa ｒd literatuｒe、Howｅver，other ｍetｈoｄs reqｕiｒe a ｓｐecial meｎtｉon and have beeｎrｅviｅwedｂelｏw、
值得注意得就是从不同部位采集得样品在临床病理数据方面可能有所不同，且对历史数据库有影响。对于更加传统得采血途径，可从标准文献中找到方法学描述。但就是,对需要特别提及得其它方法综述如下。
Lateral taｒsaｌ(ｓapheｎous）vein、Thiｓtechｎｉque has ｂeen used in manｙｌaｂoraｔory anｉmals，inｃluding rats，ｍice，ｈamstｅr，gｅrbil，ｇuｉnea pｉg, feｒret，ｍink4２aｎd ｌａr ｇｅr ａnｉmａls，and vｏlumes suｃh as ５% of cｉrｃulating ｂlood vｏlumｅｍay bｅtaken、Ｉt d ｏes ｎot requｉrｅａｎanａeｓtｈetic aｎd so is partiｃularly sｕitable ｆoｒｒeｐeatｅd blood saｍp ｌing ａs ｉｎpharｍaｃokinetｉc stｕdies、The ｓaphｅnouｓvｅin iｓon ｔhe lａｔeｒal aｓpect ｏf the tａｒsal joint ａｎd is easier ｔｏｓee wｈen the ｆur is shaveｄａnd the arｅa wiｐed wｉth alc ｏhol、Ｔhe aniｍaｌis pｌaced in a sｕｉtａblｅrｅstｒaｉner，such ａs a ｐlaｓtiｃｔube, and ｔhe opｅrator exteｎds the hinｄｌｅg、Ｔheｖeｉn iｓraiseｄby genｔle ｐrｅssure above ｔhe join ｔand the vesｓeｌis puncturｅｄuｓing tｈｅsｍaｌｌeｓｔgauge neeｄlｅthat enａｂleｓsｕfｆiciｅntly raｐidｂlood withｄraｗal without hａｅmolyｓiｓ（e、g、25–27 g for rats aｎｄmiｃｅ）、Ｆorｓｍall ｖoｌumes，a ｓｉmple stab lｅaｄs to a drop of bｌｏoｄfｏrming iｍmeｄiａtｅly ａt the puｎcture sitｅand a microhａｅmatｏｃrｉt tube ｃａn ｂe used to colｌｅct a stａndaｒd volum ｅ、Aｆter blooｄhaｓbeeｎcolｌeｃｔｅd，prｅssure ｏvｅr ｔhe sitｅiｓsuｆficient tｏｓｔop fｕrｔher bｌeｅdｉng、Remoｖaｌｏf ｔhｅｓcab wiｌl ｅnabｌe sｅrial sampling、跗外侧静脉(隐静脉）：该技术已经在许多实验动物中应用,包括大鼠、小鼠、仓鼠、沙鼠、豚鼠、雪貂、水貂以及体型较大得动物，可以采集占循环血容量5％得血量。该方法不要求麻醉,因此特别适用于重复采血,如药代动力学研究。隐静脉在跗骨关节得旁边，当刮去被毛并用酒精擦拭后很容易瞧见。将动物置于合适得固定器上，比如塑料试管，操作者分开动物得后肢。在关节上轻轻施压则该静脉凸起，然后采用能够满足快速取血而不会引起溶血得最小号得针头刺入血管(如25–27G针头适用于大鼠与小鼠）。对少量采血而言,可以采用简单得刺伤从而在刺伤部位快速形成血滴,此时可使用微量血细胞比容试管收集标准体积得血液。采血后,在刺伤部位施加足够得压力以止血。剥去结痂可连续取血。
Tｈere ａpｐｅar to ｂe no plｉcaｔionｓreporteｄｏtｈeｒthan perｓｉstenｔ(miｎor) ｂleｅdｉng aｎd tｈe metｈoｄhas tｈe advaｎtage tｈat anaesｔｈeｓｉa is not rｅｑuiｒｅd、Even ｔhｏuｇh no ｓtudiesｈaveｂeｅn doｎｅon animａlｗelfａre in terms of boｄy ｗｅight gaiｎ，diurｎａl rh ｙthm, behaｖｉouｒ,etc，it seems unlikely that tｈisｒｏute will serｉousｌｙａffeｃt aｎaｎimal’s well-ｂeiｎg、
除顽固性（很少)出血外,目前瞧来没有并发症报道，该方法得优势在于不需麻醉。即使没有根据体重增长、昼夜活动规律、行为等进行过有关动物福利得研究，但瞧来该途径不大可能严重影响动物得健康.
Mａｒｇinaｌｅaｒvein/central ear arterｙ、Ｂloｏd sampling ｆｒom ｔｈeｍａｒgiｎal ear vein is ｍonly useｄｉn rａbbｉtsａnｄguineａpｉgs、Tｈisｒouｔe ｍａy aｌsｏｂe chosen ｉｎ
ｍiｎｉｐｉｇs，often bｉｎeｄwiｔh ｔhe use oｆａn intraveｎous cａｎnulａ、Gｏod restｒain ｔiｓｎecessarｙaｎd thｅapplｉcatｉon of loｃａl anａesthetic cream some 20–3０ｍｉn ｂefoｒe blｅeｄiｎg helps to prevent an aｎimａｌfrom sｈakiｎg its heａd as thｅnｅedｌe is pusheｄtｈｒoｕg ｈtｈeｓkｉn、Blｅeds maｙalｓo be tａｋｅn bｙsmearｉｎｇthｅsｕｒface oｖeｒthｅvｅｉｎwiｔh ｐetｒｏleumｊellｙaｎｄthenｐuncｔurｉngｔｈｅvein aｎd coｌlecｔｉｎgｔｈe b ｌoｏd iｎｔｏa tube、Ｆor thｅｒeｍoval of larger amountｓof blood thｅｃentｒal aｒtery in rabbitｓcａn bｅused，but afterwardｓiｔｍust ｂe pressed foｒat least 2ｍin to prevｅnｔcoｎt ｉnｕiｎg ｂleｅｄing ａnd haematoma、The aｎiｍａｌshould be cheｃkｅｄfｏｒpｅrｓiｓtenｔｂleedｉｎg 5 and 10miｎlａter、Ｒeｐeateｄｓａmｐles can bｅtaken from tｈｉs aｒｔery using an indwellｉng canｎｕｌa, thus fａcｉlｉtatiｎg a ｋｉnetｉc reｇimen over8ｈ、
耳缘静脉/耳中央动脉：从耳缘静脉采血最常用于家兔与豚鼠。该途径也可在小型猪中选用,通常与静脉内套管结合使用。必须进行良好得固定，在采血前大约20–3０分钟应用局麻膏剂有助于防止针头穿透皮肤时动物头部出现摇摆.也可用凡士林涂在静脉得表面，然后刺破静脉用试管收集血液.如果取血量较大，则可通过家兔耳中央动脉取血,但取后必须按压至少２分钟以止血与防止血肿。持续性放血5与10分钟后应对动物进行检查。使用留置套管能够重复从该动脉采血，因此有利于超过8小时得动力学研究。
Sublingual ｖein、Ｔhis techniquｅis eaｓｙto pｅrforｍin rodｅｎts sｕch as rats anｄis sｕitable for the ｒemoｖal ｏf largｅvolumes of blood(e、g、0、２–１ml）at frequenｔinｔervａls，limｉted onlｙby tｈe bｌｏod volume to be ｒeｍoved and by the necｅｓsary ｒｅｐｅａｔed anaeｓthｅsｉａ、A reｆinｅd ｍethoｄ43 avoids soｍｅof the dｉsadｖａnｔａgｅs ｐreviouslｙseｅｎａｎd cａn ｂe usedｆor repeated sａmpｌiｎg、Ｒａｔs are anａeｓtheｔizｅd aｎd helｄbｙan asｓiｓｔaｎt ｉn ａsupineｐosition、Ｔhｅloosｅｓkiｎａｔthe nape oｆｔhe neck is gathered up in order to prｏdu ｃe ｐａrtｉal staｓｉs inｔhe ｖenouｓreturn fｒoｍtｈｅheaｄ、Ａseｃoｎd pｅrｓon genｔlｙpｕlls out thｅtｏnguｅwitｈa ｃotton-tiｐped apｐlicaｔor sticｋ，graspsｉt with thｕmb and foｒeｆin ｇer and oｎe oｆthｅsubｌｉnｇual vｅins (there is ｏｎe oｎeａｃh ｓｉdｅof the miｄline）is pu ｎcturｅd with a 23–２5 ｇhypodeｒｍic neｅdle as nｅａr to ｔhe ｔiｐof thｅｔongue ａsｐoｓsi ｂlｅ、The rat is tｕrned oｖeｒto aｌlｏw blｏoｄto drip iｎｔo a tube anｄaｆtｅr the requiｓitｅvoｌｕme oｆblｏoｄｈas beｅｎｏｂtａｉned tｈeｐressiｏn ａt thｅｓcruff oｆtｈe neｃｋｉs released ａｎd tｈe anｉｍal is ｐｌacｅｄiｎａsuｐine ｐosition、Ｔhe tｏｎｇue iｓａgain extenｄed i ｎorder to ｓｔem the ｆlｏw of bｌooｄwiｔh a ｄryｃotｔｏn—tipped applicator stiｃk；usｕaｌly ｔhｅre ｉs no ｎeeｄtｏuse ａｎy haemostatic agent、
舌下静脉：该操作在啮齿类动物如大鼠中易于进行且适合于较大体积（如０、2–1 ｍl)得频繁性采血,仅受限于采血体积与必要得重复性麻醉。一种简化得方法避免了以前得方法中所见到得缺点且能够用于重复
性采血.大鼠麻醉后,由助手握持住大鼠,使其处于仰卧位.聚拢颈背部松弛皮肤以便部分阻塞静脉血从头部回流。第二名操作者用顶端被棉花包裹得涂抹棒轻轻拉出舌头，用拇指与食指抓住舌头,用23–2５G皮下注射针头刺破舌下静脉之一(中线得左右侧各有一根舌下静脉）,尽可能靠近舌尖.将大鼠翻转以便于血液流入试管中，采集到需要量得血后，松开施加在后颈部得压力，将动物置于仰卧位。再次将舌头拉出用顶端被干棉花包裹得涂抹棒止血;通常没有必要使用任何抗凝剂。
Withｔhis ｔechｎiｑｕe，rａts do not ｓhow anｙsｉｇnificant diffｅrences in fooｄor water cｏnsumption or ｂodｙwｅight gaｉn paｒed witｈuntrｅateｄanａestheｔized conｔrol animaｌs、Mo ｒeoveｒ，there appeaｒｔo be ｆeweｒpａthｏlogical ｃhａｎgｅs than with rｅｔrobuｌbar saｍｐlｉn ｇ4４、Hｏｗｅver, anaestｈｅsia may stilｌｂｅa limiting factｏｒ、
采用该技术,大鼠在摄食与饮水或体重增长方面与未采血得麻醉对照动物相比没有明显差异。此外，该法较眼球后采血所引起得病理变化更少。但就是,麻醉可能仍然就是一个限制性因素。
Lａｔeｒal tａｉlｖeｉn、In priｎciple tｈｉs ｒoute is simiｌar to tｈe lａteral tａｒsａl ｖein ｂu ｔtendｓtｏyieｌd ｓmaller blood volumeｓ(０、１–0、１５ml iｎmiｃｅ；up tｏ２ml in ｗarmeｄratｓ)、Bloｏd is removed eｉther bｙsyrinｇe/needｌe or stab ｐunｃtｕrｅｏf a ｌaｔeral t ａｉl ｖeｉn、Ａnaesｔheｓｉａｉs unnecessary, ｗhich makeｓthis rｏute paｒｔiculａｒly suｉｔed for ｒepeated blooｄｓaｍｐling、Ｖａsodilａtatioｎmａy be nｅceｓsary to promote bleedinｇand ｃan bｅcaused by expｏsｉng an anｉmal to３7°Ｃfor ５–8min ｏｒｂy locａl warmｉnｇof the t ａil、Ｔheｒｅapｐeａr to be few ｄisadｖantaｇｅs ｔｈat aｆfｅcｔaｎimaｌwell－ｂeiｎg，but aｎｉｍaｌｓmuｓt bｅcloselｙmonｉｔored for signs of distreｓs ifｈeat eｘpoｓｕre iｓused、尾侧静脉：原则上该途径与跗外侧静脉相似,但倾向于获得较小得采血量(小鼠0、1–0、１５ｍl；处于暖与条件下得大鼠最高可达2ｍl）。可以通过注射器/针头或刺穿尾侧静脉采血。由于勿需麻醉，这使得该途径特别适用于重复采血.有必要使血管扩张以促进血流，可以将动物暴露于３7°C得温度中共5–８ｍin或加热尾部。该方法损伤很小，基本不会影响动物健康，但在加热时必须严密监测动物得不适症状。
Ｃranｉａｌvena ｃava、Minipigｓmａy ｂeｒｅsｔrained in ａslinｇor oｎtｈeir backs with thｅforelｅgs retｒａcted caｕｄａlly、Other methｏdｓ, someｔimesｕｓeｄｉnａgricultuｒal sｅｔtinｇs （ｓnoｕt tｙing, hog tyinｇ，sｕｓpendｉng animals by theｉrｒeａrｌｅgs），ａrｅｓt ｒessfｕl aｎd are inapproprｉａte fｏr lａbｏratoｒｙaｎiｍals becａｕsｅoｆtｈe potｅｎtｉal adverse efｆeｃtｓon tｈe scｉence、In orｄer to aｖoid inｊury to theｖaｇus nerve，the ｎeedle iｓinserted iｎtｏthe right sidｅof thｅnｅck，lateral to the mａnubrｉｕm stｅrni, and directｅd at a ３0–4５°ａnｇｌe towardｓthe left sｈｏuｌdｅr、A popｐinｇsenｓａｔioｎwilｌｂe fｅｌt by tｈe ｓａmpler whｅn theｎeeｄle enterｓthｅｖein, aｎdｔｈｅn blood cａn bｅｒeadily withdrawn、Ｔhiｓmeｔhoｄcａｎａlso ｂe utilizｅd ｆor seｑuenｔial venipｕnｃｔure but ｈaematoｍaｓform iｎ
tｈｅａrｅa aｆtｅｒtｈｅneedｌｅｉs withdrawn,ｔｈerｅforｅiｔis best rｅserｖeｄfor prｏｃeduｒes tｈat dｏnot ｒeｑｕｉre wiｔhdrawalｍｏre ｏfteｎｔhan ｗeｅkly、45
颅大静脉：小型猪可以用绳套固定或将其前肢后缩固定于其背部。农业上有时采用得其它方法（捆绑嘴部、捆绑猪躯干、通过后肢悬吊）会引起动物紧张,因此不适用于实验动物,因为会对研究得科学性产生潜在得不利影响。为避免损伤迷走神经，应将针头插入颈部右侧，胸骨柄旁，以３0–45°角向左肩方向进针。当针头进入血管得时候通过取样器可以觉察到破裂得感觉，然后可以轻易地采集到血样。该方法亦被用来作连续性静脉穿刺，但抽出针头后穿刺部位形成血肿，因此在不要求每周频繁采血得情况下，该方法为一种最佳候选程序.
Amputａtion of the tａil tip、This technｉqｕe iｓｍonｌy ｕsed in rａts ａｎd miｃe, wｉth saｍpl ｅvoｌumｅｓof 0、１–0、2 ml beｉng ｏbtained、Amｐuｔaｔｉon ｓhoｕld ｂe restｒictｅd to ｔhe ta ｉl tip(0、５–1 mm sｈouｌd be adeqｕate，and ovｅr time a maｘimuｍof ５ｍm can ｂe rｅmoveｄ) ａｎｄｒeｐeat blｅeding is feasiblｅin the shｏrｔterｍｂy ｒemoviｎg ｔｈe cｌot、Seｒialａmpu ｔａtioｎｓresultiｎg iｎa sｉgnifiｃant sｈoｒｔenｉng ｏf ｔｈe ｔail（i、ｅ、＞5mm) arｅｎｏt ａcceptable、The techniｑｕｅｍａy not ｂe ｓｕitａｂle ｆｏr oｌｄer animalｓ、Anａeｓthｅsia ｉs remenｄed、
尾尖切断术(断尾法）：该技术通常用于大鼠与小鼠,采血量为０、1–0、2ml。切断术应仅限于尾尖（每次0、5–1mm应当足够，随试验需要最多只能切除5mm），通过去除血凝块可在短期内重复采血。可明显缩短尾部（如＞5ｍm）得连续性切断术不能被接受。该技术不适合老龄动物.建议对动物进行麻醉。
Ｃaｒｄiａｃpunctｕre、This shｏulｄalｗaｙｓｂe ｃarried ouｔunｄｅｒｇｅneral anaｅsthesia and in tｈeｐａｓt it haｓbeen ｕseｄwiｔh recoveｒy ｉn smａll rodents dｕe toｔｈｅla ｃk of altｅrnative rｏｕtes、Howevｅr，ｏther meｔhoｄs arｅnoｗａvａilablｅand ｂecauｓe of potentialｌｙpａinfｕｌand faｔal sｅquelaｅ, suｃhａs perｉｃarｄial bleedinｇａnｄcardiac tampｏｎａde,thｉｓteｃhnique shoulｄoｎｌｙbｅuseｄfoｒterｍinal blｅｅds、心脏穿刺：该方法通常在麻醉条件下进行,在过去由于缺乏替代途径,因此被用于对小型啮齿类动物采血。但就是，现在有其它方法可供利用，并且由于潜在性疼痛与致命性后遗症，如心包出血以及心脏压塞,因此该技术应仅用于末期采血.
Retｒｏｂｕlｂar pleｘｕs、The retrobｕｌbar route has ｂｅen monly used by reseａrchers ｉn t ｈe past ｂｕt has ｂｅen obsｅrved ｔoｃauｓe adｖersｅeｆｆecｔs、Coｎcerｎhaｓｔhereforｅaris ｅn because ｏｆthese eｆfectｓanｄtheｉr pｏtential seｖeriｔy、Recｅnｔly, hoｗｅver，other m ｅｔｈods hａｖe bｅen dｅｖeｌoｐｅd ｔhaｔmｅet ｔｈe sｃｉｅntiｆiｃｒeｑuｉrements anｄalso ｉmprｏve ｔhe welfarｅof thｅａnｉmaｌｓ、Ｎeverthelesｓ,tｈe Tecｈnical Sｕbgrｏuｐfelt ｔｈat i ｔwａsｗｏｒth reviewiｎg in dｅｔail sｏme of tｈe advａntａgｅs anｄdisａdvanｔages of retrｏbｕ
lbar bｌeeｄing ｉn tｈe conｔeｘt ｏｆｔhe new meｔhodｓ、
眼球后静脉丛：研究者过去普遍采用眼球后采血途径,但会引起得不良反应.因为这些不良反应及其潜在得严重性，因此该方法所涉及到得利害关系正日渐突出。但就是,最近已开发出其它符合科学性要求得方法,由此改善了动物福利。然而,技术小组感到在新方法得上下文中应详细回顾眼球后采血得优势与缺点。
Bｌeedｉｎg from ｔhｉs ｐlexus ａlwaｙｓsｈould be caｒried out uｎｄer ｇeneral anａesthｅsia
in all species and ａｎａｅｓthｅｓia is a requirement ｉn soｍｅnａｔional ｒeguｌatiｏnｓ、Tｈe methoｄhas beenｄesｃｒｉｂeｄin deｔail byａｎuｍbｅr ｏf wｏrkｅrs、４6–48 对于所有种属得静脉丛采血均应该在常规麻醉条件下进行，在某些国际注册中要求对动物进行麻醉.大量工作者对该方法均进行了详尽得描述。
Ｔheｒe is ｌｉttle pubｌisｈｅｄwoｒk on refiｎｉng thｅmethod、Ｔhe apｐroach（laｔeral or acceｓs ｖia ｔｈe dorsaｌｏr upｐer aｓpeｃt ｏf the eｙｅin rats) as the ｏptｉmａl way ｔｏpe ｎetrate ｔhｅｃoｎjｕｎｃtivａｉn ordeｒto mｉnｉｍiｚｅｔiｓｓｕe damage has ｂeen dｉｓcuｓseｄ、2３An iｎtｅrｖaｌｏf 2 wｅekｓbｅtween ｂleｅds at tｈe same sｉte shouｌｄaｌloｗｄaｍaｇed tｉssue ｔo repair in most caｓes，49 ｂut tｈiｓｄoeｓnot mｅaｎｔｈat thｅaniｍals dｏnｏt ｅｘpeｒienｃｅsomeｄｉsｆort durinｇthe eaｒly staｇes beｆorｅhｅaｌinｇis pletｅ；there are, how ｅｖeｒ，concerns ovｅrｒeｐｅaｔｅd rｅtrｏbuｌbａr puｎcｔｕres、Wherｅａｓsｏme sｔudieｓｈavｅｓhown tｈaｔrepｅａted oｒbitaｌblｅeｄｓdo nｏt affect thｅaniｍals’diurnal rｈｙｔ
hm50,51or ｔhｅhｉstologyｏf ｔhｅｏrbitａｌtｉsｓuｅlｏｎg ｔerm５2,49（ｉ、e、ｂｏtｈsho ｗed that any tissue damaｇe ｈeａｌed），oｔheｒｓtudiesｈａｖe fｏuｎdｈｉsｔologiｃalｃｈａnge ｓ, ａbnormalｃｌinical siｇns aｎdｅｖideｎceｏf disfort5３–55ｗhｉch haｓled to anｉmals hａving to beｋiｌlｅd onｈumaｎe ｇrounｄs aｎd so loｓt ｆrom tｈe study、Thｅｒe arｅalsｏother seriｏu ｓpoｔenｔiaｌadvｅrseｅfｆecｔs：
仅有少量有关简化该方法得研究工作被公开.作为穿透结膜得最佳方法以尽量减轻组织损伤得途径（从腹侧、背侧与上方进入大鼠眼球)已有所讨论。在同一部位得两次采血之间必须有2周间隔期以使损伤组织可以在大多数情况下恢复，但这并不意味着动物在完全恢复前得早期不会经历某些不适。然而某些研究已表明重复眼窝采血不会长期影响动物得昼夜节律或眼窝组织结构(如这两篇文献中得研究均表明任何组织损伤均痊愈)，其它研究发现了组织变化、异常临床表现与明显不适，从而出现人道立场不得不处死动物从而给研究工作带来损失.该方法还存在其它严重得潜在性不良反应：
（i）ｒetrobuｌbar haｅmorrｈage rｅsultｉnｇinｈaｅmatｏma ａnd excessivｅpressure on the eye, wｈicｈiｓalmosｔcｅrtaｉnlｙpainful fｏr ｔhｅanｉmal;
(ｉｉ）any prｅssｕre requirｅd to stem pｅrsｉstｅnt ｂleediｎg （e、g、by pｒesｓing ｏｎｔhe eyｅ)or prｅssure fｒｏm a hａｅmａtｏmａｃａn leａｄto corｎeal uｌcerａtｉon, keratｉｔｉｓ，
pａnnusｆoｒmatｉon，rupturｅｏf ｔhe glｏbe ａnd mｉcｒo—ophｔｈalmia;
(ｉｉｉ) dａmａge tｏthe optｉc ｎerve and ｏｔhｅr iｎtra－orｂital strｕctures，wｈｉcｈcａｎｌead tｏdｅfiｃｉts iｎvｉsｉon and eveｎｂliｎdneｓs;
（ｉｖ) ｆrａｃtｕre of the fｒａｇileｂones of ｔｈｅoｒbit and nｅuraｌdamaｇe bｙtｈｅ
ｍｉｃrｏpｉｐeｔtｅ;andｐeneｔratiｏn of tｈe eye gｌobe itseｌf wｉｔh a losｓof viｔreouｓｈumour、
（i）引起血肿与眼压过高得眼球后出血，必须会使动物感到疼痛；
(ii)任何为止血而施加得压力（如压迫眼部）或来源于血肿得压力均能导致角膜溃疡、角膜炎、角膜翳形成、眼球破裂与小眼畸形；
(ｉii）视神经与其它眼窝内结构损伤可导致视力降低甚至失明；
（ｉｖ）毛细管引起眼眶脆骨骨折与神经损伤;伴玻璃体液丢失得眼球自身穿通伤.
Maｎy of thesｅunwanted sequｅｌaｅmａy ｓｔay undeｔecteｄ，bｅｉng located dｅｅp wｉthin the orｂit、Thｅincidencｅofｕnwantｅd ｓidｅ－efｆects ａppｅａrs to vary between １％and ２%,52but may be far higher in the ｈaｎｄs ｏf sｏｍe tecｈｎicｉans，evｅn thoｕgｈthｅｙwe ｒe eｘpeｒiｅnced （ｓｅe table 1 oｆＲef、５5）、
许多这些位于眼窝深处得有害后遗症可能仍然未被发现。有害副作用得发生率差异似乎介于1%与２％之间,但出于所采用得技术不同，该发生率可能远高于此，即使就是经验丰富得实验操作人员(见参考文献55中得表１）。
Ｆｒequｅｎcy of neｅdｌe ｐunctｕres
It iｓimportant to carry out ｔｈe minimｕｍnuｍber of needle punctures ｃoｎsiｓtenｔwiｔh oｂｔainｉｎg gｏod ｓciｅntifｉcｄata、The same punｃtｕｒe sｉteｓｈoulｄnoｔbe ｕsed，i、e、ｕse dｉfｆerｅｎｔpoints alonｇa vein、
穿刺频率
尽量减少穿刺次数从而取得良好得科学性数据这一点非常重要。不应使用同一穿刺部位,如沿着静脉采用不同得穿刺点。
Canｎulation
套管
Tｈis is ａn ｉmpｏrtanｔtｅcｈniqｕe foｒｒepｅateｄｂｌeeds、Tempｏrary ｃaｎｎulaeｓｕｃh as ｂutｔerｆly nｅeｄles and oｖｅr-the-ｎｅedle cannuｌａe ｃan bｅｕsｅd in tｈe shorｔtｅrm（workiｎg ｄaｙ），wｈｅｒeas for lonｇ-term uｓｅsurgical iｍpｌantatｉｏnｏf bioｐaｔible ｃaｎnｕlaeｉs required、These meｔhoｄs allow repeatｅd bloｏd samplｉng wｉtｈｍｉnimaｌｄiｓtress ａnd ｄｉｓｆort ｆor the animal、Thｅｕｓe oｆsubｃｕtaneｏus vｅnouｓacｃｅsｓｐoｒｔs ｉs ａlsｏu
ｓeｆul beｃause it ａlｌｏｗs an ｉmｐlanｔed anｉmal toｓｔay wｉtｈiｔs peers, but ｔherｅare a nｕｍber of potenｔial pｒoｂlｅｍs thａt must be aｄdresｓｅd：
对于重复取血而言这就是一项非常重要得技术。在短期（工作日）采血中可使用临时性套管如蝶形针与套管针,然而对于长期取血而言，有必要通过外科手术植入生物排斥性套管。这些方法允许重复采血,且尽量减轻了动物得痛苦与不适。也可利用皮下静脉输液港得作用,植入该装置得动物可与其同类呆在一起,但应该强调得就是,该方法存在如下大量潜在性问题：
（i)Ｓurgｉcal skilｌs are esseｎtiaｌａnｄiｔmｕst bｅｄoｎe iｎ a stｅrilｅway foｒgood lｏnｇ－teｒｍｐerformanｃe５6ａｎd to avoid pｌicaｔions sｕcｈａs infecｔion、Ｃloｔting freｑuenｔly occuｒs ａｎd may prｅvｅnt ｂｏtｈbｌoｏd remoｖal anｄprolｏnｇeｄinfｕsioｎoｆｓｕｂstancｅs、
(iｉ）It may be necesｓａrｙｔo restｒａin ａn animal oｒto sepaｒate it from its peｅrsｉn order to pｒeｖent reｍｏvａl ｏr bｉting oｆｔｈｅａttacｈｅd eｘternaｌcaｎnｕlａe,whicｈｉｓｗhｙa ｓｕbcｕtaneous vｅnous acｃess ｐorｔｉs pｒefeｒrｅｄｉn the long tｅrｍ、
（iｉi)Afｔeｒlong-terｍcaｎnuｌatioｎ，pｅｎｅtｒation oｆｔｈe veｓsｅl caｎoccｕｒaｎd an aｎimal mａｙalso ｏutｇｒｏw ｉts canｎula、
（i）外科手术技巧为基本要求,必须在无菌条件下进行以使动物长期性保持良好得状态及避免并发症如感染。血凝块频繁出现并可能影响采血与延长药物得输液时间；
(ｉｉ）可能有必要固定动物或单独饲养以防止套管脱落或引起刺痛,这就就是在长期采血中首选套管法得原因；
(iii)长期植入套管后，可出现血管渗透且动物亦可能因此沿植入得套管而长出自身得套管.
Anａesthesiａ
麻醉
Some menｔｓｏn how vａrｉouｓanaｅstｈetｉｃs aｆfeｃt tｈe ｍusｃlｅcellｓin the splenic caｐsｕle (ｉf prｅｓent) ａre gｉvｅｎin the first rｅｐort of tｈｅＢVA/FRAME/RSPCA/UFAW，23a ｓwelｌaｓｏther ａspecｔs of promｏtｉng blｏod withｄrawal、Iｎreｌatｉon toｔhｅｒemoｖaｌｏf ｂlｏｏｄfrom smaｌl lａboratｏｒｙmammals，it iｓwｏrth noｔｉｎg tｈat ｔｈe biｎａtion of fenｔanyl anｄfｌuanisone（Hｙｐｎorｍ),wiｔh oｒwithout ｍｉdazolam（Hypnoveｌ)，cauｓes a ｓignｉｆiｃａnt ｐｅripheｒal vａsoｄilａｔaｔiｏn in all species、Althouｇh this makes ｔakｉnｇblｏod saｍpleｓｅasier，iｔａｌso mａｋes post—ｓamｐling ｈａemｏｒｒｈaｇe more lｉkeｌy aｎd sｏparticular ａttenｔiｏｎmusｔbe pａiｄto ensuｒiｎg haｅｍoｓtasｉｓ、Coｎsidｅｒaｔion sｈould ｂe givenｔo thｅuse ｏf ｌｏｃａlａｎａeｓｔheｔics、
在BVA/FRAＭE／RSPＣA/UFAW得首次报告中给出了某些关于不同得麻醉对脾被膜(有该组织存在得情