寿光鸡中禽网状内皮组织增生病毒的分离鉴定

09-SOP-046-01 禽网状内皮组织增生症病毒检验操作规程

1.目的 制定禽网状内皮组织增生症病毒检验操作规程，确保禽网状内皮组织增生症病毒检验操作正常进行。 2.适用范围 适用于禽源细胞、胚及用禽源细胞、胚生产的禽源制品的禽网状内皮组织增生症病毒检验，目前公司涉及产品有： 1.鸡胚细胞生产的种毒、活疫苗； 2.鸡胚生产的种毒、活疫苗； 3.定义和缩略词 CEF：鸡胚成纤维细胞 4.角色与职责 QC经理和主检人负责相关操作人员培训，确保操作按照规程进行。 5.健康与安全 无。 6.材料 CO2培养箱（设定温度37.0℃，设定二氧化碳浓度为5.0%） 电热恒温水浴锅（设定温度37.0℃） 倒置荧光显微镜（OLYMPUS） 37℃恒温培养箱 低温高速离心机（2～8℃） 海尔冰箱（2～8℃，-15℃以下） FITC标记的兔抗鸡IgG（SIGMA） 无水甲醇（北京化工厂） 吐温-20（国药集团） 病毒特异性抗血清

禽网状内皮组织增生症病毒阳性种毒（中国兽医药品监察所） 禽网状内皮组织增生症病毒特异性抗体（中国兽医药品监察所） 100～1000μL单道移液器及配套枪头 20～200μL移液器及配套枪头 0.8μm、0.45μm、0.22μm、0.1μm滤芯 1.5mL离心管及离心管架，4.5mL离心管及离心管架 50～300μL移液器及配套枪头 10mL、5mL一次性吸管 10mL一次性试管 10mL一次性注射器 25cm2一次性细胞瓶 加样槽 500mL蓝盖玻璃瓶 电动移液枪 80～90%CEF单层 1倍M199 10倍M199 新生牛血清 青链霉素双抗（10万IU/mL） 无菌注射水 0.05%胰酶-EDTA（GIBCO或同等资质供货商） 7.程序 7.1.细胞传代 在收获禽白血病第1代细胞时，取0.6mL细胞液加入到含2mL M199营养液的4.5mL 离心管中，混合均匀。 取1个48孔细胞板，按下图进行标注。 写上样品名称（疫苗批号/REV/（-））、传代日期。 用1000μL移液器吸取样品按下图接种，每个样品接种4孔，0.5mL/孔。

鸡网状内皮增生

禽网状内皮组织增生病病毒分子生物学特性与免疫 抑制＊ 马春霞，郑世民* (东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030) 摘要：禽网状内皮组织增生病病毒为反转录病毒科禽类C型反转录病毒。禽网状内皮组织增生病病毒感染后主要引起感染家禽免疫功能抑制和慢性肿瘤，该病的控制对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重大影响。文章对禽网状内皮组织增生病病毒的生物学特性与引起免疫抑制机制的研究新进展进行了简要综述。 关键词：禽网状内皮组织增生病病毒；生物学特性；免疫抑制 禽网状内皮组织增生病是由反转录病毒科禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus，REV)引起的鸡、鸭、鹅、火鸡和其他禽类发生的一种病理综合征，是严重危害禽类的传染性肿瘤病之一，包括急性网状细胞肿瘤、矮小综合征、淋巴和其他组织的慢性肿瘤。REV最早是1958年从患内脏型淋巴瘤的火鸡脾脏中分离，经过火鸡和鸡300次连续传代而获得的病毒。由于该病毒所引起的肿瘤以网状内皮组织增生为特征，故称为“网状内皮组织增生病”，并将该病毒命名为REV-T，即T株[1]。目前，美国、英格兰、以色列、澳大利亚、德国、南非和日本等国家已先后分离到不同毒株。REVs主要包括REV-T株、鸡合胞体病毒(Chick syncytia virus，CS)、脾坏死病毒(Spleen necrosis virus，SNV)、鸭传染性贫血病毒(Duck infectious anaemia，DIA)及C45株(宇文延清等，2003年)，不同毒株的抗原相关性已被确定，而且都能引起禽类免疫抑制。 禽网状内皮组织增生病在我国家禽中的感染率已达20%～30%[2]，REV感染不仅能引起肿瘤，还可以引起感染鸡胸腺、法氏囊等免疫器官萎缩，使鸡的免疫功能下降、甚至丧失，导致免疫抑制，使感染鸡极易继发感染其他病毒病和细菌病。研究表明[3]，马立克病病毒(Marek’s disease virus，MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia，CAV)和REV等免疫抑制性病毒在生产鸡群中的混合感染是导致当前养禽业生产性能下降的重要因素之一。 1REV分子生物学特性 ＊收稿日期：2006-12-26 作者简介：马春霞(1980－)，女，黑龙江富锦人，硕士研究生，主要从事禽病免疫病理学研究。*通讯作者

鸡主要症状与病变

主要症状与病变 可能有关的疾病 出现神经症状 鸡新城疫、马立克氏病、鸡传染性脑脊髓炎、维生素E和硒缺乏症、大肠杆菌病（脑炎型）、肉毒中毒、食盐中毒、叶酸缺乏症、维生素B1缺乏症 鸡冠和面部肿胀 鸡霍乱、禽流感、鸡痘、大肠杆菌病、鸡传染性鼻炎、鸡衣原体病、鸡败血霉形体病、肿头综合症 皮肤出血、坏死等 大肠杆菌病、葡萄球菌病、马立克氏病、鸡痘、维生素PP缺乏症、维生素H缺乏症、泛酸缺乏症、锌缺乏症 呼吸困难 鸡新城疫、鸡传染性鼻炎、鸡败血霉形体病、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、鸡痘 出现肝炎及肝脏病变 鸡霍乱、鸡白痢、鸡伤寒、鸡副伤寒、大肠杆菌病、鸡结核病、鸡弯曲菌肝炎、组织滴虫病、包涵体肝炎、鸡淋巴白血病、马立克氏病、鸡网状内皮组织增生病、鸡败血霉形体病、鸡曲霉菌病 肺脏及气囊病变 鸡白痢、鸡败血霉形体病、鸡大肠杆菌病、鸡结核病、鸡曲霉菌病 肾脏出现肿胀和花斑病变 鸡传染性法氏囊炎、鸡传染性支气管炎、痛风、鸡病毒性肾炎 产畸形蛋、软皮蛋 新城疫、鸡传染性支气管炎、减蛋综合症（1976）、鸡白痢、鸡伤寒、鸡副伤寒、鸡蛔虫病、鸡绦虫病、笼养蛋鸡疲劳症、维生素D缺乏症、锰缺乏症 引起关节肿胀、腿骨发育异常等运动障碍 大肠杆菌病、葡萄球菌病、滑液囊霉形体病、病毒性关节炎、关节痛风、胆碱缺乏症、叶酸缺乏症、锰缺乏症、维生素PP缺乏症、锌缺乏症 肠炎、下痢 鸡新城疫、禽流感鸡传染性法氏囊炎、禽轮状病毒感染、鸡结核病、大肠杆菌病、坏死性肠炎、鸡组织滴虫病、鸡球虫病、鸡白细胞原虫病、鸡白痢、鸡伤寒、溃疡性肠炎、链球菌病、绿脓杆菌病

（二）鸡病快速诊断指南 1、 引起神经症状的疾病 病 名 相似点 区别点 鸡新城疫 （肺脑型） 四肢进行性麻痹，共济失调；因肌肉痉挛和震颤，常引起转圈运动。 有呼吸道症状，剖检见十二指肠降支、卵黄蒂后3-4厘米、回肠前1-3厘米处淋巴滤泡肿胀、出血、溃疡；腺胃乳头顶端出血或溃疡；各年龄段均可发病。 马立克氏病 （神经型） 轻者共济性失调，步态异常；重者瘫痪，呈“劈叉”病症。 特征性“劈叉”姿势；剖检见腰荐神经丛、臂神经丛、坐骨神经均呈单侧性肿胀，色灰白或淡黄；多发于青年鸡。 病 名 相似点 区别点 鸡传染性脑脊髓炎 共济性失调，走路前后摇晃，步态不稳，或以跗关节和翅膀支撑前行。 头颈部震颤，尤其在受惊或将鸡倒提起时，震颤加强；剖检见脑水肿、充血，但无出血现